中国生物化学与分子生物学报

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α淀粉酶与糖化酶的共固定化研究

郭桥，罗贵民，孙启安，黄仲立，马林

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(03): 259-263.

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以纤维素为载体用重氮化法同时固定了糖化酶和α淀粉酶，确定了共固定化的最适条件，研究了共固定化酶的性质，发现共固定化酶较固定化单酶能更好地发挥协同效应，能在较低温度下将淀粉一步水解为葡萄糖。共固定化酶在３０℃下的操作半寿期可达９２０小时。

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免疫球蛋白变区基因的体外扩增及人－鼠嵌合抗体的表达

刘健，潘志美，郭虹汾，王斌，田培坤

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(03): 264-269.

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应用聚合酶链反应法体外扩增抗人小细胞肺癌单克隆抗体的变区基因，经核苷酸序列分析，轻链变区基因为３２４ｂｐ，编码１０８个氨基酸；重链变区基因为３５１ｂｐ，编码１１７个氨基酸。将重链变区基因克隆至ｐＳＶ_２△ＨｇｐｔＨｕγ_３质粒，经一系列克隆、筛选，得一插入方向正确的表达人－鼠嵌合重链抗体的载体－ｐＳＶ_２△Ｈｇｐｔ２Ｆ７ＶＨＨｕγ_３。用电穿孔方法将该质粒导入鼠源骨髓瘤细胞Ｊ５５８Ｌ，用霉酚酸进行初步筛选，最终用兔抗人免疫球蛋白ＩｇＧＦｃ片段的抗体筛选得七株阳性克隆，免疫印迹法结果表明在与人ＩｇＧ相同位置上有一阳性条带。

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大鼠脑神经元特异性烯醇化酶基因的cDNA克隆及序列分析

赵崇，王立斌，宋学文，张镜宇

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(03): 270-273.

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用ＲＴ－ＰＣＲ方法快速克隆了Ｗｉｓｔａｒ大鼠脑神经元特异性烯醇化酶（ＮＳＥ）的ｃＤＮＡ，将此包括编码全长ＮＳＥ４３３个氨基醚的ＤＮＡ片段重组入ｐＵＣ质粒，并用ＰＣＲ方法测定了全部顺序，经重复实验，发现Ｗｉｓｔａｒ大鼠与Ｆｏｒｓｓ－Ｐｅｔｔｅｒ报导的ＳＤ大鼠ＮＳＥ基因顺序，有两外单碱基的差别，其中一个涉及氨基酸的改变。同时还对ＲＮＡ的提取及长片段ＤＮＡ的ＲＴ－ＰＣＲ扩增进行了方法学的探讨。

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HFRSV内影像型抗独特型人单抗重链可变区基因克隆

高磊，陈苏民，陈南春，赵忠良，刘新平，杨萍，杨安钢，米力，崔运昌

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(03): 274-278.

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利用反转录－ＰＣＲ方法，从分泌肾综合症出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）内影像型抗独特型人单抗杂交瘤细胞系（Ｃ８）中，成功地克隆了抗ＨＦＲＳＶ１ｄ人单抗重链可变区基因，并将此基因重组入Ｍ１３噬菌体ＤＮＡ中，测定了此重链可变区基因全序列。经计算机分析，基因全长共３５１ｂｐ、编码１１７个氨基酸，氨基酸序列同源性分析发现所推得的该单抗ＣＤＲ２区与ＨＦＲＳＶＧ２蛋白Ｃ端有同源区，此区可能具有较强的抗原性。

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人血红细胞蛋白质酪氨酸磷酸酶（PTPP）的研究──Ⅲ．胞浆PTPP与红细胞膜的结合及其结合后的主要性质

朱茂祥，吴国利

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(03): 279-284.

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用部分纯化的胞浆ＰＴＰＰ分别与去ＰＴＰＰ活性的红细胞血影（ｄＰＴＰＰ－Ｇｈｏｓｔ）和内向外翻红细胞膜（ｄＰＴＰＰ－ＩＯＶ）结合，结果发现：胞浆ＰＴＰＰ不仅能与红细胞膜结合，而且与ｄＰＴＰＰ－ＩＯＶ的结合能力强于与ｄＰＴＰＰ－Ｇｈｏｓｔ的结合。很多因素，诸如：温度，ｐＨ，离子强度，结合时间及某些试剂等不仅对ＰＴＰＰ与膜的结合有影响，且对ＰＴＰＰ与ｄＰＴＰＰ－１０Ｖ结合的影响比与ｄＰＴＰＰ－Ｇｈｏｓｔ结合的影响更为显著。当胞浆ＰＴＰＰ与红细胞膜结合后，其性质发生变化，这主要表现在稳定性增强；Ｋｍ减小；Ｚｎ￣（２＋）、ＶＯ等的抑制作用及ＥＤＴＡ、甘油等的激活作用都明显减弱，甚至向相反的作用转化。此外，红细胞膜的磷酸化／脱磷酸化对ＰＴＰＰ的结合有影响，这暗示磷醚化作用对此可能具有调节意义。

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两种新的激活γ珠蛋白基因的中药──盐酸山莨菪碱（654－2）和三尖杉酯碱

杨克恭，何平，陈松森，贾佩臣，梁植权

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(03): 285-290.

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检测了３７种中药对Ｋ５６２细胞生长及血红蛋白合成的影响，发现盐酸山莨菪碱（６５４－２）和三尖杉酯碱可以使Ｋ５６２细胞的血红蛋白细胞增加３倍，细胞平均血红蛋白含量增加４倍，γ珠蛋白ｍＲＮＡ的表达分别增加５０％和４０％。电泳结果显示ＨｂＦ和γ珠蛋白肽链。

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雌激素拮抗剂对胎盘EGF受体及其基因表达的影响

贺师鹏，黄天贵，郭淑英，黄力新，李伟雄

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(03): 291-295.

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中期孕鼠在他莫昔芬作用下，其颌下腺，血清中ＥＧＦ含量下降，胎盘中ＥＧＦ受体结合位点数下降以及它的ｍＲＮＡ表达受到抑制，再次证实了他莫昔芬抑制雌激素诱导ＥＧＦ受体ｍＲＮＡ的表达。从而使ＥＧＦ受体结合位点数减少，因此，他莫昔芬对孕鼠胚胎生长发育有不可忽视的影响。

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化学诱变抗体模拟谷胱甘肽过氧化物酶

丁兰，朱振齐，罗贵民，孙启安，杨同书，沈家骢

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(03): 296-299.

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用诱变剂苯甲基磺酰氟（ＰＭＳＦ）活化兔抗人ＩｇＭ（Ｆｃμ）片段上特殊活性部位的丝氨酸（Ｓｅｒ）残基，经硒化氢（Ｈ_２Ｓｅ）处理，则将丝氨酸转变成硒代半胱氨酸（ＳｅＣｙｓ）。诱变后的抗体具有谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）活性，其活性为世界最好的ＧＳＨ－Ｐｘ模拟物ＰＺ５１的７０多倍。抗体效价为１：８，与没诱变的抗体相似。

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不同磷脂和糖脂对莱氏衣原体膜上Mg~（2＋）－ATPase活性的影响

胡燎原，陈建文，黄芬

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(03): 300-304.

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莱氏衣原体膜上Ｍｇ~（２＋）－ＡＴＰａｓｅ用ＤＯＣ溶解后，经Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ－６Ｂ和ＤＥＡＥ－ＣｅｌｌｕｌｏｓｅＤＥ－５２离子交换柱，得到了部分纯化的Ｍｇ~（２＋）ＡＴＰａｓｅ，并将此ＡＴＰａｓｅ与不同极性头部的磷脂和膜糖脂重组，研究了不同的极性头部的磷脂和膜糖脂对ＡＴＰａｓｅ活性的影响。此酶的活性不依赖酸性磷脂，ＰＧ、ＤＰＧ、大豆磷脂等明显抑制酶活性，中性磷脂ＤＭＰＣ、ＰＥ、ＰＣ则能增加酶活性，其中尤以非双层脂ＰＥ的作用最为明显。从莱氏衣原体膜上提取的糖脂（ＭＧＤＧ，ＤＧＤＧ）单独和ＡＴＰａｓｅ重组时，酶活性增加并不明显，当ＭＧＤＧ和ＤＧＤＧ以等比例混合时，能大大地增加酶活性。这表明Ｍｇ~（２＋）－ＡＴＰａｓｅ的活性很大程度上与磷脂的表面电荷及磷脂的组成相关。

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碱提水溶小皮伞多糖B_3的研究

白日霞，张翼伸

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(03): 305-307.

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用ＧＣ，ＩＲ，ＮＭＲ，ＧＣ－ＭＳ及高碘酸氧化，Ｓｍｉｔｈ降解，甲基化分析，部分酸水解等方法确定了一个新的碱提水溶小皮伞多糖的一级结构：分子主链α－Ｄ－（１→２）Ｍａｎ，支链α－（１→４），α－（ａ→６）Ｇｌｃ，且均连在主链的０─６上。

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氰类和酯类取代基水溶金属卟啉与DNA相互作用的共振拉曼研究

赵晓杰，江山，陆冬生，黄素秋，李再光

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(03): 308-312.

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用共振拉曼和紫外－可见吸收光谱研究了水溶金属卟啉４－Ｎ－乙酸乙酯基－吡啶基铜卟啉和镍卟啉［简称Ｃｕ（ＮＥＡＥ）和Ｎｉ（ＮＥＡＥ）］及４－Ｎ－乙腈基－吡啶基铜卟啉［简称Ｃｕ（ＮＡＣＮ）］与小牛胸腺ＤＮＡ的相互作用。分析表明Ｃｕ（ＮＥＡＥ）、Ｎｉ（ＮＥＡＥ）和Ｃｕ（ＮＡＣＮ）分别以外部键联、部分插入和沟槽方式与ＤＮＡ作用；卟啉插入ＤＮＡ时吡啶基团向卟啉环平面转动但不可能转成与之共面；而以非插入方式作用时吡啶基团会向垂直于或者平行于卟啉环平面转动。吡啶取代基的大小和空间位阻是影响相互作用方式的关键因素之一。

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蟾蜍血清梭曼水解酶（somanase）的纯化及性质的研究

慕邵峰，肖美珍，王菲

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(03): 313-318.

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从蟾蜍血清中发现并纯化出了一种与血清载脂蛋白有关的可催化神经性军用毒剂梭曼（０－１，２，２－ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｐｒｏｐｙｌｍｅｔｈｙｌｐｈｏｓｐｈｏｆｌｕｏｒｉｄａｔｅ，ｓｏｍａｎ）的水解酶，此酶全部与高密度脂蛋白（ＨＤＬ）以复合形式存在于血清中。我们经过多种纯化手段，从ＨＤＬ中分离纯化出了酯酶的最小分子量组分，得到了高活性、高纯度的酶蛋白，在ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳及等电聚焦电泳中呈单一区带，分子量４２ｋＤ，等电点ｐＨ５．２，并证明此酶不是ＨＤＬ中的任何一种已知载脂蛋白，也不是磷脂酶Ａ_２和磷脂酶Ｃ以及存在于ＨＤＬ中的卵磷脂胆固醇酰基转移酶（ＬＣＡＴ）。它是与ＨＤＬ中的主要载脂蛋白ａｐｏＡ_１比较牢固地连接在一起并含量甚微的一种酶蛋白，水解梭曼的Ｋｍ值ｐＨ７．２、３７℃时为３．１３ｍｍｏｌ／Ｌ。可被对氯汞苯甲酸、ＨＣｌ－胍和ＥＤＴＡ－Ｎａ_２所抑制，二硫苏糖醇对酶活性有恢复作用。

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重组人骨形态发生蛋白－2成熟肽在大肠杆菌中的表达及其诱导成骨活性

赵明，王会信，周廷冲

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(03): 319-324.

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报告了人骨形态发生蛋白－２（ＢＭＰ－２）成熟肽的基因克隆，及其在大肠杆菌中的表达。用ＡｆｌⅡ酶剪除ＢＭＰ－２ｃＤＮＡ中的信号肽及前肽部分的序列，将编码成熟肽的ｃＤＮＡ３′端０．３６ｋｂ基因片段克隆于大肠杆菌表达载体ｐＭＸ－１质粒的ＡＴＧ下游，受控于ＰＬＰＲ启动子。重组子以大肠杆菌ＤＨ５α为宿主细胞进行温度诱导表达。工程菌经４２℃６ｈ诱导后，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上出现一条新蛋白带，分子量约为１２ｋＤ，约占菌体总蛋白的２０％。主要以包涵体形式存在的表达产物经初步纯化后，可获得纯度较高的重组人骨形态发生蛋白－２成熟肽（ｒｈＢＭＰ－２ｍ）。小鼠肌肉植入试验发现。ｒｈＢＭＰ－２ｍ植入后的不同时间，在局部出现间质细胞的聚集和增生、软骨细胞及软骨基质的生成和硬质骨的形成，证明ｒｈＢＭＰ－２ｍ具有明显的诱导新骨形成的作用。

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抗癌药物ADM与DNA相互作用的紫外共振拉曼光谱的研究

赵晓杰，江山，陆冬生，范永昌，李再光

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(03): 325-329.

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用紫外共振拉曼光谱研究了ＡＤＭ与小牛胸腺ＤＮＡ相互作用，分析表明：ＡＤＭ插入ＤＮＡ的ＧＣ－ＣＧ位置；ＡＤＭ与ＤＮＡ之间的主要相互作用是蒽环π电子与碱基Ｇ和Ｃ的π电子形成的π－π电子相互作用，并通过碱基Ｇ、Ｃ的ＮＨ＿２的氨的孤对Ｐ电子与ＡＤＭ的π电子形成的π－Ｐ电子相互作用以及ＡＤＭ和ＤＮＡ碱基Ｇ、Ｃ和ＰＯ＿２之间形成的氢键使相互作用加强；ＡＤＭ插入ＤＮＡ使其构象产生一定变化，但未破坏ＤＮＡ碱基对间的氢键。

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钙离子对江浙蝮蛇毒酸性磷脂酶A_2结构与功能的影响

张翔，郑乐，林南琴，阮康成，周元聪

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(03): 330-334.

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钙离子在江浙蝮蛇毒酸性磷脂酶Ａ_２中的作用是多方面的。它不仅能够引起酸性磷脂酶Ａ_２在溶液中构象的变化，而且对该酶活性有较大的影响。Ｃａ~（２＋）为酶活力所必需，当Ｃａ~（２＋）浓度达到０．０６ｍｍｏｌ／Ｌ时，酶表现出很高的活力；Ｃａ~（２＋）浓度超过０．５ｍｍｏｌ／Ｌ时，催化反应出现一个明显的延滞期。化学修饰表明Ｈｉｓ_（４７）在表现活力方面起重要作用，Ｃａ~（２＋）的存在可降低其修饰反应的速度，提示这是由于Ｃａ~（２＋）引起构象发生变化而造成的。

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对氨基苯甲酸酯同系物形成细胞色素P_（450）代谢中间体络合物的定量结构与活性关系

傅旭春，刘志强，蒋惠娣

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(03): 335-339.

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细胞色素Ｐ４５０（Ｐ４５０，Ｅｃ１．１４．１４．１）是一种十分重要的催化氧化反应的酶。本文测定了１２个对氨基苯甲酸酯同系物与Ｐ４５０相互作用而形成Ｐ４５０代谢中间体络合物的活性，用半经验分子轨道法ＭＮＤＯ－ＰＭ３计算得到了这些同系物的分子轨道指数，并用逐步多元回归分析法导出了活性与分子轨道指数及正辛醇／水分配系数的对数值（ＬｏｇＰ）之间的定量结构与活性关系（ＱＳＡＲ）。结果表明：对氨基苯甲酸脂同系物形成Ｐ４５０代谢中间体络合物的活性与原子净电荷的绝对值之和（∑Ｑ）和ＬｏｇＰ均具有很好的抛物线型相务性，同时，ＬｏｇＰ与∑Ｑ之间也存在相当好的相关性。

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单纯性生长激素缺乏症（IGHD）病人生长激素基因5’端顺序研究

王亚新，于丽莉，盛青，孟诚卫，孙婕，陈诗书

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(03): 340-343.

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人生长激素（ｈＧＨ）基因大片段缺失是单纯性生长激素缺乏症原因之一，但大多数单纯性生长激素缺乏症病因不明。为探查这些病人的发病机理，用ＰＣＲ技术扩增克隆了三例病人ｈＧＨ基因５’端顺序，并检测了核苷酸序列。发现一例病人序列正常，但另二例病人均出现二种序列，一种是呈多态的正常顺序，另一种则有４个碱基的变异，发生在－１，＋３，＋１６，＋２５位核苷酸，揭示这些变异位点可能对转录翻译有影响。但这些变异顺序与生长激素缺乏症的确切关系还有待进一步的研究。

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青山羊（Capra，hircus）小肠凝集素的分离、纯化及性质研究

于智勇，王海仁

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(03): 344-349.

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报道了青山羊小肠凝集素的分离、纯化及性质研究。青山羊小肠先经过含有巯基乙醇的磷酸缓冲液抽提，然后上Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ６Ｂ柱及ＤＥＡＥ－Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ－２３柱，得到纯化的青山羊小肠凝集素。采用ＳＤＳ电泳法测得其分子量在６６１００左右，而且该凝集素不含糖，对人Ｂ型血球有专一性凝集作用。半抗原抑制实验表明它对半乳糖（乳糖）有亲和性。其中酸性氨基酸含量较高，组氨酸、蛋氨酸含量较低。该凝集素在胚胎期出现，出生后几个月达到高峰然后逐渐下降，最后消失。

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氧化修饰极低密度脂蛋白增强其致动脉粥样硬化作用

赖祥进，冯宗忱，王式平

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(03): 350-356.

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研究了氧化修饰极低密度脂蛋白（ｏｘ－ＶＬＤＬ）对小白鼠腹腔巨噬细胞内脂质堆积作用及其机制。经Ｃｕ~（２＋）修饰后ＶＬＤＬ的电泳迁移率及脂质过氧化物含量均显著增加。ｏｘ－ＶＬＤＬ更易导致小鼠腹腔巨噬细胞内脂质堆积。以相同浓度（３００μｇＴＧ／ｍＬ）或不同浓度（２００─５００μｇＴＧ／ｍＬ）的ｏｘ－ＶＬＤＬ及正常ＶＬＤＬ（ｎ－ＶＬＤＬ）与巨噬细胞温育２４ｈ，前者使巨噬细胞内ＴＧ堆积均比后者显著（Ｐ＜０．０１）。同时，随ｏｘ－ＶＬＤＬ的脂质过氧化物含量（ＴＢＡＲＳ水平）增加，巨噬细胞内ＴＧ含量的百分率相应增加。以５０μｇ蛋白／ｍＬ的ｎ－ＬＤＬ，ｏｘ－ＬＤＬ，ｎ－ＶＬＤＬ及ｏｘ－ＶＬＤＬ与巨噬细胞温育６０ｈ。细胞内ＣＥ堆积中氧化组均比正常组高（Ｐ＜０．０１）。巨噬细胞对~（１２５）Ｉ－ｎ－ＶＬＤＬ与~（１２５）Ｉ－ｏｘ－ＶＬＤＬ的结合、降曲线均有饱和趋势。两结合曲线无明显差异，但细胞对后者降解的量比前者多。结合的竞争实验表明，ｎ－ＶＬＤＬ能抑制大部分~（１２５）Ｉ－ｏｘ－ＶＬＤＬ与细胞结合，而Ａｃ－ＬＤＬ只能抑制小部分。结果表明ｏｘ－ＶＬＤＬ主要通过受体途径：大部分经过ｎ－ＶＬＤＬ受体，小部分经过清道夫受体被巨噬细胞摄

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UV辐射所致HL－60细胞DNA不均一修复的研究

严涛，崔立斌，孙丽亚，魏康，方允中

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(03): 357-362.

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在特定基因水平检测了ＵＶ照射后ＨＬ－６０细胞的ＤＮＡ修复。结果显示活性转录的ｃ－ｍｙｃ基因的修复水平明显高于非活性转录的β珠蛋白基因和全基因组。而进一步应用链专一性ＲＮＡ探针检测，发现ｃ－ｍｙｃ基因中的转录链和非转录链的修复效率没有明显差异。上述结果表明，ＨＬ－６０细胞能够对活跃表达基因的损伤进行选择性高效修复，但不能对活跃表达基因中的转录链进行进一步的选择性修复。

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两亲分子解除乙醇对内切葡聚糖酶的抑制作用

冯雁，邢辉，曹淑桂，程玉华

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(03): 363-366.

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乙醇（１０％Ｖ／Ｖ）对内切葡聚糖酶存在抑制作用，一定浓度的ＢＲＩＪ３５、Ｔｗｅｅｎ８０、Ｔｗｅｅｎ２０可以部分或基本解除乙醇的抑制，而ＳＤＳ不能解除乙醇对酶的抑制。从荧光光谱可见，乙醇使酶分子的生色团埋藏于分子内部，两亲分子则反之。圆二色谱揭示了酶分子α螺旋结构为活性所必需。两亲分子结构不同，解除乙醇对酶抑制的能力也不同。

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菜心溶菌酶的提纯及酶学性质

周泽文，李明启

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(03): 367-370.

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菜心（ＢｒａｓｓｉｃａｃａｍｐｅｓｔｒｉｓＬ．ｓｓｐ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓｖａｒ．ｕｔｉｌｉｓ）叶子高速捣碎后，滤液经酸碱处理，硫酸铵分步沉淀，凝胶柱层析等步骤分离纯化溶菌酶，酶比活力达３４１４．６Ｕ／ｍｇ，纯化倍数为１９７．４。菜心溶菌酶在较宽的温度或ｐＨ值范围均有活性，最适温度为６０℃，最适ｐＨ值为５．８，底物Ｋｍ值为８７μｇ／ｍＬ。该酶对热和酸碱的稳定性较高，巯基和酪氨酸残基不是该酶活性中心的必需基团。

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蛋白激酶C对大鼠缺血海马突触体谷氨酸摄取的调控作用

卢步峰，鲁友明，黄诒森

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(03): 371-375.

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采用大鼠海马脑片体外缺血模型，观察海马突触体内蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）活性的变化，以及这种变化对突触体谷氨酸（ＧＬＵ）摄取的影响。结果显示：海马脑片体外“缺血”１０ｍｉｎ，其突触体内ＰＫＣ活性基本不变，而缺血３０ｍｉｎ，突触体内ＰＫＣ活性显著上升（Ｐ＜０．０１，ｎ＝６）；非Ｎ－甲基－Ｄ－天门冬氨酸（ＮＭＤＡ）受体拮抗剂ＤＮＱＸ有效地抑制ＰＫＣ活性的同时，可降低胞外ＧＬＵ的堆积，而ＮＭＤＡ受体阻断剂ＡＰ＿５无作用。进一步实验证明，ＰＫＣ激动剂ＰＤＢ浓度依赖性地抑制突触体对３Ｈ－ＧＬＵ的摄取（ＩＣ５０＝１３１±１０μｍｏｌ／Ｌ），此抑制作用可由ＰＫＣ抑制剂Ｈ－７（１００μｍｏｌ／Ｌ）抵消。提示脑缺血诱发ＧＬＵ堆积的作用机理可能是：脑缺血引发钙内流导致ＧＬＵ过量释放，ＧＬＵ又通过突触前非ＮＭＤＡ受体激活ＰＫＣ，抑制其自身摄取，正反馈性加重胞外ＧＬＵ的堆积。

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重组白细胞介素2体外折叠的实验研究

徐明波，孟文华，马贤凯

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(03): 376-381.

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包涵体中的重组蛋白抽提后可以在变性状态下纯化，而纯化后的体外折叠（即复性）是基因工程下游处埋中的重要环节。荧光光谱研究表明，ＩＬ－２分子折叠过程中荧光强度逐渐减小，最大发射峰由３１６ｎｍ红移到３４８ｎｍ。以Ｔｒｐ残基的暴露程度反映分子的折叠状态。ＧＭ－ＣＳＦ在折叠过程中的荧光强度有类似变化；凝胶排阻ＨＰＬＣ可以检测折叠过程中的聚合体；而反相ＨＰＬＣ可以将ＩＬ－２分成三个相互独立的异构体色谱峰。据此可以计算出ＩＬ－２分子的正确折叠率。常用的稀释复性方法，随着ＩＬ－２浓度的增高，它的正确折叠率逐渐降低，蛋白浓度的对数与正确折叠率之间大致呈线性关系。当ＩＬ－２浓度为１ｍｇ／ｍＬ时，其正确折叠率仅为３０％，而采取较低的蛋白浓度进行复性会因大量的样品体积导致后期纯化的困难。

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