中国生物化学与分子生物学报

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刘士辉，黄培堂，徐秀英，朱恒奇，黄翠芬

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(06): 625-630.

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为了获得半衰期延长，特异活性提高及具有ＰＡＬ－１抗性的新型ｔ－ＰＡ溶栓剂，利用基因重组及定位突变技术构建了ｔ－ＰＡ的Ｋ１、Ｋ２区糖基化位点消除，ＰＡＩ－１结合位点缺失，Ｆ与Ｅ区连接序列Ｈｉｓ４４～Ｓｅｒ５０置换为纤粘蛋白Ⅰ型Ｆ区间连接序列ＧｌｕＳｅｒＬｙｓＰｒｏＧｌｕＡｌａＧｌｕＧｌｕ的ｔ－ＰＡ组合突变体ＦｒＧＧＩ，并在中国仓鼠卵巢细胞中获得了高效表达。对表达产物的生物学特性分析表明，ＦｒＧＧＩ在大鼠血浆中的半衰期延长了１５倍，并获得了ＰＡＩ－１抗性，是一株很有希望的新型溶栓剂候选株。

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蛇毒蛋白Echistatin的C端突变基因的构建，表达及其活性研究

李洪超，李雄彪，胡美浩

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(06): 631-635.

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通过ＰＣＲ定点突变的技术，将蛇毒蛋白Ｅｃｈｉｓｔａｔｉｎ基因的Ｃ端进行了突变（Ａｌａ４８→Ａｒｇ４８→，Ｔｈｒ４９→Ｖａｌ４９），模拟纤维蛋白Ｎ端的四肽（Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－Ｖａｌ），以期增加Ｅｃｓ（Ｅｃｈｉｓｔａｔｉｎ）的活性。突变的基因重组到表达质粒ｐＪＣ２６４上，经ＩＰＴＧ诱导，以ＣｈｅＹ－Ｅｃｓ融合蛋白方式进行了表达，表达量占菌体总蛋白的１５～２０％。ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５初步纯化该融合蛋白，然后用ＣＮＢｒ裂解，透析，冻干，反相ＨＰＬＣ纯化Ｃ端突变体Ｅｃｓ蛇毒蛋白，Ｎ端十个氨基酸分析与天然的相符，在ＰＲＰ（ｐｌａｔｅｌｅｔ－ｒｉｃｈｐｌａｓｍａ）测活体系中，１０μｍｏｌ／Ｌ的ＡＤＰ诱导，Ｃ端突变体Ｅｃｓ抑制血小板凝聚的活性约为野生型４倍。得到了Ｅｃｓ的Ｃ端突变后使Ｅｃｓ抑制血小板凝聚的活性提高的结果。

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人胰岛素原基因在大肠杆菌中高效外分泌表达

陈燕，李金照，夏令朝，张瑛，李强

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(06): 636-641.

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将胰岛素原基因融合到金色葡萄球菌蛋白Ａ的基因上，构建成大肠杆菌中基因融合的外分泌表达载体。它能高效表达且有效地分泌表达产物。利用亲和层析能方便地从培养液中分离出融合蛋白。融合蛋白经ＣＮＢｒ裂解后，经反相ＨＰＬＣ分析，分离得到具有天然结构的胰岛素原并进行了鉴定。

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应用PCR重组技术构建大肠杆菌分泌型表达载体

黄仪秀，陈杰鹏，毕群，李斯明，张磊，朱圣庚

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(06): 642-645.

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应用ＰＣＲ重组技术，对大肠杆菌分泌型表达载体ｐＩＮ－ⅢｏｍｐＡ进行改建，除去原载体的ＨｉｎｄⅢ位点，将信号肽序列末端两个密码子ＣＡＧＧＣＣ改为ＣＡＡＧＣＴ，从而引入一个新的ＨｉｎｄⅢ位点，并在其下游接上一段多克隆位点序列。改建后的载体可用于直接插入外源ＤＮＡ编码序列，表达产物在分泌过程中被切除信号肽而成为天然有活性的蛋白质，操作十分简便。

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应用痘苗病毒为载体表达人白细胞介素4的研究

李季，陈慰峰

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(06): 646-653.

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在真核细胞中表达近似于人类天然糖基化的白细胞介素４（ｈＩＬ－４），为重要的研究课题。利用基因工程技术，以痘苗病毒作为载体，使之在真核细胞中表达ｈＩＬ－４，为生产糖基化的ｈＩＬ－４开辟新的可能途径。在痘苗病毒表达载体ｐＪ１２０质粒的基础上，组建了含有ｈＩＬ－４基因的ｐＪｌ２０／ｈＩＬ－４重组质粒，该质粒以痘苗病毒的胸腺嘧啶核苷激酶（ＴＫ）基因为侧翼序列，中间插入痘苗病毒的Ｐ１１和Ｐ２５两个转录方向相反的启动子，Ｐ２５的下游连接β－半乳糖苷酶（ＬａｃＺ）基因，ｈＩＬ－４基因在痘苗病毒启动子Ｐ１１控制下进行表达，将ＰＪ１２０／ｈＩＬ－４质粒ＤＮＡ用脂质体转染法导入ＴＫ阴性的骨髓瘤细胞（ＴＫ１４３细胞），与预先感染的痘苗病毒在细胞内进行同源序列重组，并且用病毒的核酸杂交鉴定证实，ｈＩＬ－４基因已重组到痘苗病毒基因组中，用ｈＩＬ－４应答细胞株检测病毒感染细胞上清，发现重组病毒感染的细胞上清中含有高滴度的ｈＩＬ－４活性，并对此种情况下ｈＩＬ－４产生的条件进行了动态观察。

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恶性疟原虫杂合多肽抗原融合基因的克隆和表达

夏东翔，马清钧，李杰之，曹诚，张京生，石成华

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(06): 654-659.

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合成了５对寡核苷酸片段，分别连接在两种恶性疟原虫杂合多肽（４５肽和５８肽）抗原基因片段（ＨＰＦＧＡ和ＨＰＦＧＢ）的头部和尾部，将这两种片段分别与霍乱毒素Ｂ亚单位（ＣＴ－Ｂ）基因末端融合。两种杂合多肽抗原分别含有数个红内期和红外期有代表性的、并能被Ｔ或Ｂ淋巴细胞识别的保护性抗原表位，ＣＴ－Ｂ基因前端具有促使分泌的信号肽序列。将这两种融合基因的不同重组质粒分别转化大肠杆菌，对转化菌的培养上清检测表明融合蛋白被分泌性表达，既具有恶性疟原虫和ＣＴ－Ｂ抗原性，又保持了ＣＴ－Ｂ与其受体神经节苷脂ＣＭ１结合的生物学活性。

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一例性反转畸形SRY基因片段的扩增、克隆和核苷酸序列分析

马素参，黄秉仁，陈虹，史轶蘩

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(06): 660-663.

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在哺乳动物中，位于Ｙ染色体上的指导雄性性别分化的基因被命名为睾丸决定因子（Ｔｅｓｔｉｓ－ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｆａｃｔｏｒ，ＴＤＦ）１９９０年６月分离获得的ＳＲＹ基因（Ｓｅｘ－ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｒｅｇｉｏｎｏｆｔｈｅＹ）被认为是ＴＤＦ基因最好的候选者［１－４］。ＳＲＹ基因为单拷贝，位于Ｙ染色体短臂末端１Ａ１Ａ区，靠近假常染色体配对区（ＰＡＰＲ）的交界处，其部分顺序编码８０个保守性氨基酸组成的多肽。本实验使用与ＳＲＹ基因相应的引物，利用ＰＣＲ技术以一例性反转畸形病人的基因组ＤＮＡ为模板分离ＳＲＹ基因保守区顺序，并将特异扩增出的此ＳＲＹ基因片段重组到质粒ｐＵＣ１２中，得到含有ＳＲＹ基因片段的克隆。经测序表明其ＳＲＹ基因保守顺序上有Ｔ→Ｃ（Ｓｅｒ→Ｐｒｏ）突变。ＳＲＹ基因的存在及其突变可能是导致性反转畸形发病的原因。

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膀胱癌中内皮素作用的研究

于昕，许民，周爱儒

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(06): 664-668.

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应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交技术及放射免疫方法对人膀胱移行细胞癌组织中内皮素－１ｍＲＮＡ及内皮素活性分子的表达水平进行检测，研究了佛波酯对人膀胱移行细胞癌ＢＩＵ－８７细胞中内皮素活性分子表达水平的调节作用，并探讨了内皮素抗血清及内皮素Ａ型受体竞争性拮抗剂ＢＱ_（１２３）对ＢＩＵ－８７细胞ＤＮＡ合成的影响。结果表明，人膀胱移行细胞癌组织中内皮素－ｌｍＲＮＡ及内皮素活性分子的表达水平明显高于相应的癌旁组织，佛波酯可促进ＢＩＵ－８７细胞合成和分泌内皮素，内皮素抗血清及ＢＱ_（１２３）可抑制ＢＩＵ－８７细胞合成ＤＮＡ。提示内皮素在膀胱癌发展及ＢＩＵ－８７细胞恶性增殖中可能起重要作用。

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用微机多媒体技术处理分析蛋白质双向电泳图谱搜寻T型细胞质雄性不育系小麦的特异蛋白

张弦，滕晓月，严衍禄

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(06): 669-672.

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介绍了一个用多媒体微机对蛋白质双向电泳图谱进行分析处理的系统，并给出用该系统分析小麦Ｔ型细胞质雄性不育系及其保持系蛋白组分比较研究的结果。

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兼具SOD和GPX活力的双功能酶的制备及性质研究

刘卫华，孙启安，罗贵民，朱振齐，丁兰，杨同书

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(06): 673-678.

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用苯甲基磺酰氟（ＰＭＳＦ）和Ｈ_２Ｓｅ相继处理铜锌超氧化物岐化酶（Ｃｕ，Ｚｎ－ＳＯＤ），将酶分子中的丝氨酸（Ｓｅｒ）转化为硒代半胱氨酸（ＳｅＣｙｓ），从而引入了谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＰＸ）的催化基团，使其在ＳＯＤ酶活性大部分保留的情况下，具有ＧＰＸ活性，其ＧＰＸ活力是ＰＺ５１活力的３０倍。研究了双功能酶的最佳制备条件，包括ＰＭＳＦ的剂量、反应最适温度及Ｈ_２Ｓｅ处理时间等，并用电子能谱、ＤＴＮＢ等方法测定了双功能酶的硒含量；测定了双功能酶对不同底物的米氏常数及双功能酶的荧光光谱、紫外吸收光谱及稳定性。

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大鼠大脑皮层中钙调神经磷酸酶活力的时空变化

闫力君，李大海，魏群

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(06): 679-683.

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以ＰＮＰＰ为底物测定了超离心制备的大鼠出生后早期和成年大脑皮层亚细胞各组分中钙调神经磷酸酶的活力。实验结果表明：（ｌ）钙调神经磷酸酶活力广泛地存在于胞液和突触部分，并且各亚细胞组分有明显差异。成年大鼠大脑皮层中ＣａＮ活力相对最高水平是在突触体，突触质，胞液，重的和轻的突触膜部分。（２）大鼠大脑皮层突触体中ＣａＮ活力在出生后第２周和第３周出现高峰的平台期，这与突触发生的高峰期是一致的。在胞液和重的突触膜中ＣａＮ活力最高水平是在出生后的第７ｄ，而在突触质和轻的突触膜中是在第２０ｄ。总之，这些发现证实，在脑发育期间，ＣａＮ活力是依照区域和时间性控制的，提示ＣａＮ可能参与了突触功能作用。

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去血红素细胞色素c的制备及其结构研究

胡建中，周颂，孙自勇，朱龙根，朱德煦

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(06): 684-688.

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在酸性条件下用硫酸银断裂马心细胞色素ｃ（以下简称ｃｙｔ．ｃ）的肽链与血红素相连的硫醚键，通过酸性丙酮抽提，硫基乙醇处理及超速离心等步骤纯化得去血红素的ｃｙｔ．ｃ（以下简称Ａｐｏ－ｃｙｔ．ｃ）。Ａｐｏ－ｃｙｔ．ｃ与天然ｃｙｔ．ｃ相比，其酸性电泳迁移率明显降低，紫外－可见光谱在１９０～２２０ｎｍ处吸收上升，荧光光谱的最大发射峰波长产生红移，同时ＣＤ谱中α螺旋的特征峰完全消失，这说明在ｃｙｔ．ｃ去血红素的过程中，蛋白质已由原来的紧密球状结构变成了较为松散、伸展的无规卷曲构象。因此，血红素对ｃｙｔ．ｃ天然构象的维持有着重要作用。

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外源性GM_3／GD_3对人肝癌培养细胞蛋白激酶活性的影响

何伟，刘银坤，张夏英，宋家

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(06): 689-692.

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ＧＭ_３／ＧＤ_３在体外对部分纯化的酪氨酸蛋白激酶（ＴＰＫ）和蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）都有激活作用。ＧＭ_３处理细胞４ｄ后，完整细胞ＴＰＫ活性未出现大改变，而ＰＫＣ的活性则大幅度上升，为对照组的８８倍；同样条件下经ＧＤ_３处理后，ＴＰＫ的活性下降，为对照组的０．６６倍，而ＰＫＣ活性则上升，为对照组的４３倍。上述结果表明，ＧＭ_３／ＧＤ_３对不同蛋白激酶活性的影响互不相同，对同一蛋白激酶在不同条件下的影响也互不相同。

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多天线糖链对运铁蛋白与受体结合及内吞的研究

蒋波，顾建新

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(06): 693-696.

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应用系列凝集素柱层析法（伴刀豆球蛋白，小扁豆凝集素，欧曼陀罗凝集素）分别从正常人血清及孕妇血清中提纯含有二天线无核心岩藻糖复杂型糖链的运铁蛋白及含有多天线无核心岩藻糖复杂型糖链的运铁蛋白。与正常的含有二天线糖链的运铁蛋白相比，含有多天线糖链的运铁蛋白与ＳＭＭＣ－７７２１细胞膜表面的运铁蛋白受体的亲和力下降，但最大结合量不变，此外，其在内吞过程中于细胞膜上的停留时间延长。结果表明糖链结构改变对运铁蛋白的功能有影响。

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小鼠抗天花粉蛋白IgE型单抗的酶解及其Fab的制备

何贤辉，柯一保，孙汛，蔡迎春，季永镛，聂慧玲

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(06): 697-701.

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研究了Ｐａｐａｉｎ及Ｔｒｙｐｓｉｎ裂解小鼠抗天花粉蛋白ＩｇＥ单抗的条件及Ｆａｂ的制备。Ｐａｐａｉｎ和Ｔｒｙｐｓｉｎ两者都可产生Ｆ（ａｂ′）_２，分子量在１５０～１６０ｋＤ左右；经Ｐａｐａｉｎ裂解的主要产物中还有Ｆａｂ，分子量７２ｋＤ，可通过凝胶过滤获得纯的Ｆａｂ。而Ｔｒｙｐｓｉｎ裂解物经ＤＴＴ还原、碘乙酰胺烷化虽然也可得到Ｆａｂ′（ｔ），但不易纯化；可见，要制备Ｆａｂ以采用Ｐａｐａｉｎ裂解为好，而制备Ｆ（ａｂ′）_２则可采用Ｔｒｙｐｓｉｎ裂解。这二个酶的裂解速度是Ｔｒｙｐｓｉｎ大于Ｐａｐａｉｎ。

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辣根过氧化物酶在水相胶束中的动力学

刘晓辉，刘伟，王金堆，周永亮，马林，付学奇，李铁津

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(06): 702-705.

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研究了辣根过氧化物酶在三种表面活性剂（ＳＤＳ，ＴｒｉｔｏｎＸ－１００及ＣＴＡＢ）的水相胶束中催化联苯胺聚合反应的动力学。结果表明水相胶束体系有利于反应的进行。辣根过氧化物酶在水相胶束体系中遵循米氏反应，Ｋ_ｍ在ＳＤＳ、ＴｒｉｔｏｎＸ－１００及ＣＴＡＢ三种体系中分别为３．０１４×１０~（－４）ｍｏｌ／Ｌ、１．７２８×１０~（－４）ｍｏｌ／Ｌ和５．６６４×１０~（－５）ｍｏｌ／Ｌ。由于微环境的不同，ＨＲＰ在三种体系中表现出不同的最适反应温度和最适ｐＨ。

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丙型肝炎病毒核心重组抗原C_（27）的纯化

张庶民，祁自柏，李河民

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(06): 706-710.

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高效表达了ＨＣＶ核心区基因抗原之后，对表达蛋白Ｃ_（２７）进行了纯化。经研究，重组蛋白是以包涵体形式存在于宿主菌内的。Ｃ_（２７）重组蛋白分别经过包涵体洗涤、ＤＥＡＥ阴离子交换层析和Ｓ－２００分子筛两步柱层析纯化之后，纯度大于９５％，纯化得率为５３．２％，总回收率为１７．９％。纯化工艺流程简单、得率高，适合向规模化生产发展。

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癫痫大鼠与正常大鼠脑中钙调神经磷酸酶及其底物的研究

王春华，汪志伟，魏群

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(06): 711-716.

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报道了听源性癫痫大鼠发作后其脑内钙调神经磷酸酶（Ｃａｌｃｉｎｅｕｒｉｎ，ＣａＮ）及其底物蛋白磷酸化水平的改变。以ＰＮＰＰ为底物测ＣａＮ的活力，用间接ＥＬＩＳＡ测ＣａＮ的含量，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和２－Ｄ－ＰＡＧＥ并放射自显影的方法研究脑内蛋白质磷酸化水平，发现与正常大鼠相比，听源性癫痫大鼠发作后，脑内ＣａＮ的含量并没有改变，但比活力下降，其底物的磷酸化状态也有改变，其中一个３０ｋＤ蛋白磷酸化程度明显降低。实验结果提示，大鼠听源性癫痫与ＣａＮ及其调控的底物有相关性。

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牛胰多肽（BPP）二级结构的红外光谱和圆二色谱分析

宋占军，姜厚理，公衍道，杨丽，聂松青

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(06): 717-720.

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牛胰多肽（ｂｏｖｉｎｅｐａｎｃｒｅａｔｉｃｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ，ＢＰＰ）是胰脏分泌的一种含有３６个氨基酸的多肽［１］，ＢＰＰ能预防和治疗由胆酸盐诱发的大鼠急性胰腺炎，具有细胞保护作用。本文用傅里叶变换红外光谱（ＦＴ－ＩＲ）和圆二色谱（ＣＤ），对ＢＰＰ在水溶液中的二级结构进行了研究。两种方法的分析结果互相补充，进一步确定了ＢＰＰ在溶液状态的二级结构。本研究为进一步探讨ＢＰＰ抑制膜融合的机理打下了基础。

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反应介质对脂肪酶稳定性的影响

宗敏华，刘耘，尹顺义，姚汝华

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(06): 721-725.

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脂肪酶Ｌｉｐｏｚｙｍｅ~（ＩＭ）在有机溶剂中的热稳定性显著提高。在水溶液中，热处理温度高于５０℃后，其催化甘油三酯水解的活力迅速下降。温度升到６０℃时，水解活力仅残存１３．６％。温度高于７０℃该酶完全失活。而在有机溶剂正庚烷中，温度高达８５℃仍表现出较高的活性。反应介质的疏水性越强，酶抗超声辐射变性作用的能力越强。经同样的超声辐射处理后，正己烷中Ｌｉｐｏｚｙｍｅ~（ＩＭ）的酯水解活力仅损失ｌｌ．８％，而在水溶液中其活力却损失了９５．９％。

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多头绒泡菌肌球蛋白的纯化及性质的研究

董志扬，阎隆飞

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(06): 726-730.

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从多头绒泡菌中纯化了肌球蛋白，并对其亚基组成及ＡＴＰ酶性质进行了研究。该肌球蛋白是由一种重链（２２５ｋＤ）和两种轻链（２０ｋＤ，１７．５ｋＤ）组成的大分子，其亚基之比为ＨＣ：ＬＣ１：ＬＣ２＝２：４：２。兔肌Ｆ－肌动蛋白能较大激活粘菌肌球蛋白ＡＴＰ酶活性，Ｃａ~（２＋）离子也能提高其活性，Ｍｇ~（２＋）离子无明显影响。钒酸盐，碘乙酸，对氯汞苯甲酸对其ＡＴＰ酶活性有显著抑制作用。

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猪肾胆绿素还原酶的反应机制研究

吴志平，张楚富

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(06): 731-733.

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猪肾胆绿素还原酶的反应机制研究吴志平，张楚富（武汉大学生命科学院，武汉４３００７２）在哺乳动物中，胆绿素还原酶（ＥＣ１．３．１．２４）催化血红素降解的最后一步反应，该酶利用ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ将胆绿素转变成胆红素。Ｍａｉｎｅｓ等人￣［１］和Ｒｉｇｎｅｙ等人...

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C_3H_（10）T~（1／2）细胞转化前后酪氨酸蛋白质磷酸化作用的变化

夏英，颜卉君，吴国利

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(06): 734-736.

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Ｃ_３Ｈ_（１０）Ｔ~（１／２）细胞转化前后酪氨酸蛋白质磷酸化作用的变化夏英，颜卉君，吴国利（北京师范大学生物化学与分子生物学研究室，北京１００８７５）自从８０年代初发现某些癌基因的转化产物具有酪氨酸蛋白激酶（ＴＰＫ）活性以来，人们对酪氨酸蛋白磷酸化作?..

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苦瓜凝集素的制备及部分性质研究

王海仁，孙晓阳，王庆华，徐誉泰，田少敏

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(06): 737-739.

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苦瓜凝集素的制备及部分性质研究王海仁，孙晓阳，王庆华，徐誉泰，田少敏（山东大学生物系，济南２５０１００）１９７２年，Ｔｏｍｉｔａ~［１］等人首先报道了从苦瓜中分离到具有凝集Ｏ型人红细胞，并为Ｄ－半乳糖抑制的苦瓜凝集素（ＭｏｍｏｒｄｉｃａＣｈａｒａｎｔ?..

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酵母醇脱氢酶在反向胶团中的某些特性

张强，袁静明，赵葆华

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(06): 740-742.

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酵母醇脱氢酶在反向胶团中的某些特性张强，袁静明，赵葆华（山西大学分子科学研究所，太原０３０００６）反向胶团酶催化是酶学研究的新领域，已涉及到水解酶、转移酶、氧化还原酶等的研究~［１］。醇脱氢酶是糖代谢路线中重要的氧化还原酶之一，但不同来源的醇脱氢酶分?..

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小葱凝集素的纯化和部分性质研究

林玉满

中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(06): 743-744.

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小葱凝集素的纯化和部分性质研究林玉满（福建师范大学实验中心生化室，福州３５０００７）凝集素具有众多的生物学性质~［１－４］。自从发现凝集素至今已一百多年，人们已从植物种子或根、茎、叶、韧皮纯化的凝集素有百数十种~［３，５］，但对蔬菜凝集素的研究不多，有...

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