中国生物化学与分子生物学报

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徐浩大,茹炳根,张龙翔

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(03): 193-198.

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以猪血清为材料,通过磷酸乙醇胺—琼脂糖亲和层析,Sepharose 4B柱层析和Sephacryl—S300凝胶过滤,获得了猪C—反应蛋白的结晶。猪C—反应蛋白可与肺炎球菌壁C多糖发生特异的沉淀反应,这种结合是依赖钙离子的。EDTA和一些磷脂代谢产物如磷酸胆碱,磷酸乙醇胺等,能抑制猪C—反应蛋白与C多糖的结合。在SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳及梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳中,猪C—反应蛋白表现出与人C—反应蛋白相同的行为,亚基是一条分子量为23.5kD的肽链,全分子的表观分子量为150kD。猪C—反应蛋白与兔抗人C—反应的蛋白的抗血清能发生免疫交叉反应。

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肝癌大鼠异常凝血酶原的研究

张普民,李茂深

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(03): 199-203.

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用灵敏的凝血酶原蛇毒激活测定法,观察二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌过程中,血浆异常凝血酶原及肝组织内凝血酶原前体含量的变化。血浆异常凝血酶原从诱癌第4周开始持续上升至第13周;第15周有所下降,第20周又开始回升。而在此过程中,肝组织内凝血酶原前体含量变化不明显,而在诱癌20周的肝癌结节内,凝血酶原前体显著堆积。同时,还研究了肝再生过程中大鼠血桨异常凝血酶原及肝内凝血酶原前体的变化。华法令处理的大鼠作为阳性对照。

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溶葡球菌酶的比色测定及某些性质的研究

周润琦,陈石根,Recsci,A.Paul

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(03): 204-208.

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溶葡球菌酶是一种专一地溶解葡萄球菌的溶菌酶。和蛋清溶菌酶一样,通常采用比浊法进行测定,底物或为葡萄球菌、或为该菌的细胞壁、或为该菌细胞壁的肽聚糖。本文报道一种简便灵敏的溶葡球菌酶比色测定法,以偶联了KNR艳蓝染料的葡萄球菌(死)细胞或偶联了KNR艳蓝染料的该菌细胞壁肽聚糖为色源底物,根据酶作用后释放出的可溶性KNR生成物计算酶活性。本文采用该比色测定法检定了溶葡球菌酶的某些动力学性质。

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三乙醇胺基强碱性聚苯乙烯树脂共价固定胰酶的研究

周会,查晓,李惟,沈家(马总),何琦

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(03): 209-213.

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用多孔强碱型三乙醇胺基聚苯乙烯阴离子交换树脂做为载体,用CNBr与载体上的多羟基作用共价偶联了胰酶。红外光谱表明:其共价偶联反应机理与用CNBr活化多糖类载体并接酶的机理相类似。最适偶联条件研究表明:CNBr用量增多,酶蛋白载量增加。但比活下降。偶联pH为10时,固定化酶有适宜的载量和较高的比活。由于胰酶水解蛋白反应释放出H~+质子,这些质子在载体内积累,使微环境内H~+质子浓度增加,进而使得固定化胰酶的pH—活性曲线在pH9～11范围内未出现下降。在变温和60℃恒温下对固定化酶的热稳定性测试表明:固相酶的热稳定性比天然酶的热稳定性有所提高。

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化学诱导的B95-8细胞中TK酶的分离和性质研究

高漫,谭润生

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(03): 214-218.

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巴豆油和正丁酸钠(nSB)诱导Raji和B95-8细胞株生成胸腺嘧啶核苷激酶(TK),其粗提液,经DEAE—纤维素柱层析,可分成两个性质不同的TK活性峰—峰Ⅰ和峰Ⅱ:(1)峰Ⅰ是穿过峰,峰Ⅱ为洗脱峰,在120mMol/L从K_2HPO_4缓冲液时洗脱下来;(2)峰Ⅱ含量在病毒生产性细胞B95-8中高于非生产性的Raji细胞;(3)B95-8细胞经联合诱导48小时后,峰Ⅱ比活性最高;(4)TTP对峰Ⅰ和峰Ⅱ的抑制效应不同,两峰利用GTP能力也不同;(5)PAGE结果表明:峰Ⅰ的Rm值为0.044,峰Ⅱ呈现两条带,Rm值分别为0.015和0.276;(6)峰Ⅰ的Km值为0.86μMol/L,峰ⅡKm值为0.29μMol/L。根据以上的结果,我们认为:峰Ⅰ是细胞TK(C-TK),而峰Ⅱ具有许多疱疹病毒TK的特性,因此,峰Ⅱ是EB病毒相关TK(EBV-TK)。

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人脑原发性肺瘤癌基因的研究——Southern吸印杂交分析

文一,陈俊杰,廖文满,邬卫华,孙芝琳

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(03): 219-223.

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用c-myc、Ha-ras、v-sis及v-erbB四种癌基因为分子探针,对8例人脑原发性肿瘤和两例正常人脑DNA进行Southern吸印杂交分析。结果显示:以c-myc基因为探针进行分子杂交时,所有被检测肿瘤和正常对照都可见一条相同的10.0kb(HindⅢ酶切)人c-myc基因区带。其中一例室管膜瘤和一例脑膜瘤还出现另一条异常的7.0kb(HindⅢ酶切)c-myc基因区带。斑点杂交结果表明,上述两例肿瘤中有c-myc基因的扩增(2—8倍),同时还具有erbB基因的扩增(8倍)。Ha-ras及v-sis基因杂交,未见异常区带。上述结果提示室管膜瘤和脑膜瘤的发生可能与c-myc基因的激活有关;c-myc基因的异常变化与erbB基因扩增同时出现,可能为癌基因之间的协同作用提供证据。

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红细胞膜ConA受体糖组分的年龄特点

唐传业,李世民,岳江,潘硕红,郑集

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(03): 224-228.

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本文报道了红细胞膜ConA受体的糖组分随细胞年龄而产生的变化,其中以唾液酸含量的改变最为显著。

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富硒大蒜含硒蛋白的分离、鉴定和生物活性研究

王卫真,唐家骏,彭安

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(03): 229-234.

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本文报道了富硒大蒜含硒蛋白的分离、鉴定和生物活性研究。富硒大蒜水溶性蛋白多为酸性蛋白。通过Sephadex G—200柱层析和聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳分离出两种分子量约为30,000和33,000的酸性含硒蛋白。大蒜含硒蛋白和亚硒酸钠一样,具有提高含硒谷胱甘肽过氧化物酶(SeGSHpx)活性,促进软骨细胞生长的生理效应。实验结果提示,富硒大蒜有可能成为良好的补硒来源。

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亚硒酸钠对AH_(22)小鼠腹水型肝癌细胞中组织特异酶CPSⅠ的诱导及对细胞增殖酶ACT的抑制

鲁先平,李士谔,于树玉

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(03): 235-239.

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通过连续四天腹腔给硒(1μgNa_2SeO_3/克体重)后,腹水型肝癌细胞中与细胞分化相关的CPS_(ase)Ⅰ活性显著上升,同时与细胞增殖相关的ACT_(ase)活性明显下降。而在正常鼠肝中,按相同方式给硒的结果是ACT_(ase)活性明显增高,CPS_(ase)Ⅰ活性则略有下降。该结果表明硒可能涉及对细胞分化与增殖的调控。

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用DNA介导的基因转移法提高XP细胞对紫外辐射损伤的修复能力

章扬培,白晓彬,陈月能,夏寿萱

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(03): 240-244.

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本文用两种DNA介导的基因转移法(DNA—磷酸钙共沉淀法和电脉冲刺激法),将具有切除修复功能的人HeLaS3细胞的DNA,植入切除修复缺陷的着色性干皮症(XP)细胞中。实验结果表明:植入HeLaS3 DNA后,可以部份恢复XP细胞DNA切除修复的功能,提高其对紫外线辐射损伤的抗性。表现为转化细胞在UV_(254)照射后存活率的显著升高和非周期DNA合成能力的增强。

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大黄蒽醌衍生物与环核苷酸磷酸二酯酶、钙调素相互作用的研究

陈少林,胡卓逸,孙阳,郝志奇,陈琼华

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(03): 245-250.

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大黄蒽醌衍生物是中药大黄的主要成份。该类衍生物与钙调素(calmo-dulin,CaM)依赖的磷酸二酯酶(PDE)的相互作用表明:它们可作用子钙调素。其中,大黄酸结合CaM并抑制CaM依赖的磷酸二酯酶(CaM-PDE);而大黄素、大黄酚和芦荟大黄素既刺激CaM-PDE的活力,又刺激PDE的基础活力,其作用机制尚待阐明;当有Ca~(2+)或无Ca~(2+)条件下测定时,大黄酸对PDE基础活力均无影响。表明:象其它的CaM拮抗剂一样,大黄酸能抑制钙调素依赖的PDE的活力。

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胃泌素C-端四肽的N-乙酰化和糖化及其对泌酸活性的影响

陈钧辉,王新昌,罗喜牛,白云,殷建东

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(03): 251-254.

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本文报道了胃泌素C—端四肽N—乙酰化和糖化的方法,并用大白鼠胃灌流技术研究了它们对泌酸活性的影响。结果表明,乙酰化和糖化均可提高其泌酸活性,其中葡萄糖—1—脱氧果糖四肽(Glc—1—deoxyfru—Trp—Met—Asp—Phe—NH_2)的泌酸活性超过了商品五肽胃泌素(Boc—α—Ala—Trp—Met—Asp—Phe—NH_2)

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脂蛋白脂肪酶在巨噬细胞代谢正常极低密度脂蛋白中的作用

冯友梅,王式平,吴万生,王淳本,安承仁,江卫国,冯宗忱

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(03): 255-259.

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家兔正常极低密度脂蛋白(N—VLDL)可使体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞内甘油三酯(TG)增加6～16倍。加入脂蛋白脂肪酶(LPL)抑制剂苯硼酸(BBA)可使培养液内游离脂酸(FFA)水平降低,N—VLDL—TG含量升高、细胞内TG堆积被明显甚至完全抑制。证明了LPL在巨噬细胞摄取N—VLDL—TG中起主要作用。

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Hb_(广州-杭州)的氧平衡特征

刘誉,宁子祯,任邦哲

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(03): 260-264.

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Hb_(广州—杭州)(HbGH)是我国广州和杭州先后发现的一种异常血红蛋白新品种。经DEAE—葡聚糖凝胶柱层析分离纯化后,在0.05mol/L Tris-HCl,0.1mol/LNaCl,30℃和不同pH(pH7.0—7.8)的条件下,分别测定它的氧平衡曲线,并以纯化HbA作对照。结果发现HbGH的氧亲和力比HbA的高,但它的Bohr效应和亚基间协同作用正常,而且对2,3—DPG仍有正常效应。本文还扼要讨论了HbGH的结构与功能关系。

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金属螯合亲和层析法纯化猪红细胞超氧化物歧化酶

周立,樊开明,郑远旗

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(03): 265-269.

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本文报道以Sephadex G-200为基质的金属螯合亲和层析法纯化SOD、其比活为4508U/mg蛋白,收率为90.4％,经酸、碱、SDS-PAGE、考马斯亮兰染色均呈一条带,特异性的SOD活性染色呈阳性。分子量为34,000,氨基酸组成测定表明Tyr含量少,Gly含量高,紫外吸收光谱最大吸收在258nm处,园二色谱结果表明SOD空间结构为β—折迭及无规态,含极少量或几乎不含α—螺旋,等电聚焦电泳测定SOD有微不均一性,等电点分别为5.25,5.35和5.65。

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小鼠鳞癌细胞培养液中溶骨因子的分离纯化

杜国光,Gino V.Segre,F.Richard Bringhurst

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(03): 270-274.

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以7、12,二甲基(α)苯基蒽诱导建立了小鼠鳞癌细胞株,接种至裸鼠中可致高血钙。其细胞培养液经超滤浓缩100倍后,通过DEAE层析、Ultrogel AcA54层析、麦胚凝集素琼脂糖层析及HPLC(C_(18))。初步分离纯化了溶骨因子。这一溶骨因子在体外可显著刺激小鼠颅骨片中~(45)Ca的释出,伴有PGE2的生成及腺苷酸环化酶活性的增高,其分子量约15,000道尔顿。

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竹红菌甲素敏化嘌呤和嘧啶碱的光氧化作用及其影响因素

贾弘(礻是),董苍玉,吴耀南

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(03): 275-280.

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本工作利用光吸收和高效液相色谱(HPLC)技术研究了甲素对DNA分子中四种碱基A、G、C和T光氧化的敏化作用,发现在反应体系的pH为9.0、甲素浓度为3×10~(-5)mol/L、光照40分钟时,G和T紫外吸收明显降低;HPLC分析发现甲素敏化的G光氧化体系比对照体系多出现一组分峰(滞留时间0.927分钟),该峰用475nm波长检测比260nm波长检测灵敏。根据反应机制推测是G环破裂产物。在反应条件固定时,甲素敏化G的光氧化作用受pH、光照时间及甲素浓度影响极大。单线态氧淬灭剂——叠氮钠浓度在40—110mmol/L可部分抑制甲素敏化G的光氧化作用,>110mmol/L时反应完全被阻断,提示甲素对G光氧化的敏化作用主要通过单线态氧(~1O_2)即Ⅱ型机制起作用。本文还讨论了G光氧化的可能途径。

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大鼠肾脏γ-谷氨酰转肽酶的纯化及某些性质的初步研究

张廼哲,边立军,付宏杰

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(03): 281-283.

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<正> γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)属于质膜结合酶,广泛分布于哺乳动物各脏器组织,以肾脏含量最高。国外已有报道从许多正常组织及肝癌组织制备出高纯度的γ-GT制品。我们参照有关方法,结合本实验室条件成功地建成了大鼠肾脏γ-GT纯化制备方法,并对该制备物的某些特性进行了初步研究,报道如下:

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单克隆抗体的纯化

李振甫,吴健,董志伟

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(03): 284-286.

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<正> 作者采用Bio-Rad公司的单克隆抗体(MoAb)纯化仪(MAPS-100),对两种不同亚类的MoAbs进行了分离纯化,其纯度及免疫学活性均较满意。

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麻黄中抑制补体溶血物质的作用

凌敏,蒋文娟

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(03): 287-288.

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<正> 大部份急性肾炎的发病过程是由免疫复合物引起补体活化,释放出化学趋化因子和过敏毒素,吸引白细胞,破坏肾小球基底膜和细胞,可见急性肾炎与补体活化有很大关系,祖国医学用中药治疗急性肾炎积累了丰富的经验,对近十余年发表的中医治疗急性肾炎的有效方剂分析,发现许多方剂都有麻黄,实验证明麻黄中有强烈抑制补体溶血活性的物质存在;其可能机制之一是抑制C_3转化酶EAC142形成;这一物质不是麻黄硷,是一种在pH8.5沉淀,于pH7.0溶解的物质。

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