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  • 1991年, 7卷, 第03期
    刊出日期:1991-06-20
      

    论文

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    论文
  • 郭洋,林忠平,崔澂
    中国生物化学与分子生物学报. 1991, 7(03): 257-261.
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    本文报道了胡萝卜愈伤组织伸展蛋白的柱色谱纯化,电泳性质,氨基酸组成及其电镜观察结果。用CM-cellulose柱色谱纯化胡萝卜愈伤组织伸展蛋白时,仅发现有一个组分;它的电泳性质与胡萝卜根产生的第一种类型伸展蛋白相同;它的羟脯氨酸/絲氨酸克分子数比例大约为4/1(羟脯氨酸,42.1mol%;丝氨酸,12.8mol%);此外,在电子显微镜下观察,伸展蛋白具有典型棒状分子结构。
  • 王德心,TamJ.P.,柯晓红
    中国生物化学与分子生物学报. 1991, 7(03): 262-268.
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    本文用手动逐步法,以Boc-Ala-OCH_2-Pam树脂为载体,Boc保护的α-氨基酸为原料合成了十一个hTGF-α(人体转化生长因子-α)类似物。经过HF裂解、透析、二硫键配对合环及HPLC纯化,得到平均收率为2.9%的纯品,其氨基酸组成分析及质谱数据均符合要求。在构效关系研究中,将合成的hTGF-α类似物进行与A431细胞膜上的EGF受体竞争性结合的试验。以半抑制浓度(IC-50)为指标,发现Tyr~(38)及Arg~(42)二个残基对hTGF-α竞争性与EGF受体结合的活性具有突出的作用。
  • 沈志民,冷晓华,冯佑民
    中国生物化学与分子生物学报. 1991, 7(03): 269-274.
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    1.白鲢鱼与黄鳝血清转铁蛋白在分离纯化上的差异。2.用SDS-PAGE测定分子量,白鲢鱼血清转铁蛋白有两个组份,分子量分别为77kD和70kD;黄鳝血清转铁蛋白为单一组份,分子量为68.1 kD。3.白鲢鱼与黄鳝血清转铁蛋白都含糖,但都不与ConA-Sepharose柱结合。4.白鲢鱼与黄鳝血清转铁蛋白氨基酸组成的测定和比较。5.白鲢鱼与黄鳝血清转铁蛋白用胰蛋白酶在相同条件下进行酶解,白鲢鱼能得到分子量在37kD左右的二个片段,而黄鳝则几乎不能被胰蛋白酶酶解。6.白鲢鱼血清转铁蛋白在404.5nm处有一特异吸收峰,而黄鳝则在407.5nm处。
  • 袁勤生,邓碧玉,杨曜中,李文杰
    中国生物化学与分子生物学报. 1991, 7(03): 275-278.
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    用电子顺磁共振EPR技术研究铜锌超氧化物歧化酶(Cu·Zn-SOD)与底物(O_2~(·-)反应达到平衡态时铜离子的EPR波谱表明,在平衡态时的铜离子处于还原态。用还原剂H_2O_2、NaBH_4处理Cu·Zn-SOD后,酶活力变化不同,电泳行为也不同。用NaBH_4处理SOD其活性及电泳行为接近天然酶,但经H_2O_2还原后的酶活性损失严重,电泳后出现多条色带。
  • 邓碧玉,袁勤生,金新根,李文杰
    中国生物化学与分子生物学报. 1991, 7(03): 279-283.
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    溶液介电常数对天然酶和修饰酶的活性影响不同,天然酶随介电常数增加而酶活性下降,修饰酶则反之,这表明静电相互作用在铜锌超氧化物歧化酶(Cu·Zn-SOD)与超氧阴离子(-O_2~(·-))反应过程中起着重要作用,酶分子活性中心附近ε-NH_3~+为O_2~(·-)进入活性中心提供静电吸引力。在有机溶剂中,SOD的构象会发生变化,从而导致酶活性降低。实验还表明,Cl~-对SOD有明显的抑制作用。
  • 茹炳根,潘爱华,王正新,张龙翔
    中国生物化学与分子生物学报. 1991, 7(03): 284-290.
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    由健康小鼠通过皮下注射一定量的氯化镉,取肝脏匀浆,离心,经SephadexG-50和DEAE-Sephadex A-50柱层析分离,即可获得MT-Ⅰ和MT-Ⅱ两种金属硫蛋白。经鉴定:两个分子各含18个巯基,结合4个Cd原子和3个Zn原子,无金属蛋白质Thionein的分子量约为6kD,半胱氨酸含量约占氨基酸总量的28%,所提取到的MT-Ⅰ和MT-Ⅱ经氨基酸组成,HPLC和PAGE分析皆证明为高度均一的,且与有关文献报道基本相符。其中MT-Ⅱ已获得晶体。
  • 钟良玮,张祖珣,单鸿仁
    中国生物化学与分子生物学报. 1991, 7(03): 291-296.
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    从双胸蚓组织中分离出水解胶原的酶(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)。其中酶Ⅱ是一不具亚基结构的大分子糖蛋白,酸性氨基酸含量高于碱性氨基酸,缺乏胱氨酸。最适pH6~7,最适温度35~45℃,80℃10分钟酶失活。Ca~(++)、Mg~(++)、Ba~(++)、Mn~(++)促进酶活性,Co~(++)、Hg~(++)、EDTA、巯基化合物及正常人血浆抑制酶活性。胶原酶解产物在PAGE图谱上表现为泳动较快的新带。
  • 杨鲁,徐文安,周秀贞,宋文凤,汪宁
    中国生物化学与分子生物学报. 1991, 7(03): 297-300.
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    作者在云南白族中发现一例快泳异常血红蛋白(Hb)。经化学结构分析,确认这例快泳血红蛋白的β链第59位的赖氨酸被天冬酰胺取代,为Hb J-Lome,此为云南白族中首次发现。
  • 陈清西,颜恩旭
    中国生物化学与分子生物学报. 1991, 7(03): 301-307.
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    发现CBZ-Lys·pNP能有效地被菓菠萝蛋白酶(Fruit Bromelain E.C.3.4.22.5)作用,测得Km为4.167×10~(-4)mol/L,k_(cat)为742min~(-1)。以荧光和紫外差示光谱为监测手段,对酶分子构象变化进行研究。酶的荧光强度随胍浓度增大而逐渐下降,4mol/L胍变性时,发射峰自332nm红移到353nm,并在310nm处出现新的发射峰。酶的荧光强度都因SDS存在而下降,SDS浓度大于3.47mmol/L有所回升,并出现红移,同时在315nm处出现新的发射肩;紫外差示光谱显示在236nm有一个较显著的员峰,此峰与β-螺旋结构变化有关,278、286和295nm出现三个负峰,260nm有较小正峰,说明酶分子中Tyr、Trp和Phe的微环境发生了明显的变化。测定酶在不同浓度胍和SDS中的变性和失活速度常数,对酶构象变化及催化活力的关系作了比较研究,酶的失活速度均大于变性速度。
  • 叶玲,黄如衡
    中国生物化学与分子生物学报. 1991, 7(03): 308-312.
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    本文报道利用亚硝酸钠(NaNo_2)穿透红细胞膜与血红蛋白(Hb)作用生成高铁血红蛋白(MetHb),测定MetHb可作为红细胞膜通透性的指标,研究在红细胞悬液中补充葡萄糖,萄葡糖-6-磷酸(G-6-P),3-磷酸甘油(3-PG),ATP后红细胞膜通透性的变化。萄葡糖,G-6-P,ATP均可不同程度地提高通透性,而3-PG有一定的抑制作用,可改善由血卟啉衍生物或γ-线(1000 rad)照射小鼠后引起的红血球通透性增加的作用,使恢复到接近正常水平。
  • 张劲翼,陈苏民,张德震,王成济,沈利群,金伯泉,黄传书
    中国生物化学与分子生物学报. 1991, 7(03): 313-315.
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    人α-型肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor,TNF-α)可以在体内或体外特异地杀伤多种肿瘤细胞,并同时具有抗病毒感染及免疫调节活性,是一种非常有前途的抗肿瘤及抗病毒生物制剂。最近,国外用基因工程技术将TNF-α基因克隆并在大肠杆菌及酵母细胞中表达成功。目前,人们正致力于提高其在大肠杆菌中表达产量的研究。据此,我们构建了P_L启动子控制的TNF-α cDNA表达载体,使其在大肠杆菌中获得了高水平表达。
  • 王民生,胡有谷,陈培勋
    中国生物化学与分子生物学报. 1991, 7(03): 316-320.
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    本工作测定了椎间盘的髓核和纤维环中的生化成份,结果提示在退变的椎间盘中,糖醛酸,总己糖胺、半乳糖胺均明显下降,而羟脯氨酸的含量明显增加。在退变的纤维环中尚有组成硫酸角质素的主要成份葡萄糖胺量的明显下降。在退变的髓核和纤维环中,总蛋白质含量呈增加趋势,水的含量呈下降趋势。提示退变椎间盘中蛋白多糖含量降低,组成改变及胶原蛋白的增加可能是诱发椎间盘突出症的物质基础。
  • 陈华堂,王晓琴
    中国生物化学与分子生物学报. 1991, 7(03): 321-326.
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    应用ELISA定量结合试验和ELISA定量抑制试验,测定出三株鼠抗人B血型物质单克隆抗体3-3-D9(IgGl),3-5-D12(IgGl)和6-1-G11(IgA)结合部位的结构和特异性。研究发现三株抗B血型单克隆抗体仅结合B血型物质,而不结合A,H和L_e~a血型物质,表现出对B血型的高度特异性。同时这些单抗对B血型物质TijⅡ phenol-insoluble有较高亲和力,与另一B血型物质Beach phenol-insoluble亲和力较低,尽管Beach phenol-insoluble是6-1-G11免疫用抗原。3-3-D9和3-5-D12结合部位互补于含有双分子岩藻糖残基的。这一发现在世界上尚属首次。6-1-G11结合部位互补于含有单分子岩藻糖残基的02E.Glα1。这些单克隆抗体结合部位结构和特异性的揭示,为在临床血液分型试验中广泛应用这些抗B血型单克隆抗体,取代沿用已久的人多克隆抗血清奠定了基础。
  • 夏初临,陈惠黎
    中国生物化学与分子生物学报. 1991, 7(03): 327-332.
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    用1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亚胺(EDC),2.4.6.三硝基苯磺酸(TNBS)和丁二酮(DIC)分别修饰人胎盘型谷胱甘肽S-转移酶(GST-π)的羧基、氨基和胍基,研究了酶的失活动力学,发现引起一分子酶亚基全部失活所需抑制剂的分子数分别为1.0、1.08和0.98,提示每亚基只有一个羧基、氨基和胍基参与酶的活性中心。底物及其类似物谷胱甘肽,S-己烷或S-辛烷谷胱甘肽可保护GST-π免受上述抑制剂的修饰,使假一级反应速度常数k_1明显降低,说明羧基、氨基和胍基是GST-π和GSH结合部位的组成基团。作者曾证明GST-π中的一个快反应巯基也参与酶与GSH的结合,故至少有四个不同的基团是酶亚基的结合基团,本文还对TNBS对氨基修饰的特异性作了验证,并讨论了GST-π与GSH结合时形成离子键的情况。
  • 张俊武,吴冠芸,赵艳君,陈松森,刘体超,邱泽风,邓小林
    中国生物化学与分子生物学报. 1991, 7(03): 333-338.
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    我们分子鉴别了一个缺失型中国(A_γδβ)°-地贫家系。先证者为这一缺失的纯合子,具有中度贫血症状。家系的另五个成员均为这一缺失的杂合子,其胎儿血红蛋白(HbF)为16—21%,接近或达到HPFH杂合子的HbF水平,并且几乎不表现贫血症状。限制性内切酶图谱分析证明了β-珠蛋白基因簇内的DNA顺序缺失,缺失的5′端点位于Aγ基因IVSⅡ内,3′端点在β-珠蛋白基因下游区远端,距HPFH-2的3′缺失端点上游区约11kb。缺失的总长度约为80kb。本文讨论了这一缺失导致胎儿血红蛋白在成人中持续活跃表达的可能机制。
  • 葛世军,张龙翔
    中国生物化学与分子生物学报. 1991, 7(03): 339-343.
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    聚苯乙烯阴离子交换树脂(GM201)经预处理除去杂质后先与戊二醛(2—6%)反应,再与胰蛋白酶(5000u/mg,8—10mg/mL,pH 8.0)反应即制得固定化胰蛋白酶。此法得到的固定化胰蛋白酶具有良好的热稳定性,贮藏稳定性和操作稳定性,可用于工业化目的。脱脂豆粉经萃取(PH9.0)后,稀释4倍,在pH5.0下沉淀分离出大豆球蛋白,然后用酸性水(pH5.0)洗涤两次,并进行碱溶与酸沉淀两次,即可将大豆分离蛋白质的STI残留降低到1.85%,比活性降到1u/mg以下。最后再用固定化胰蛋白酶亲和层析,就可以除去大豆分离蛋白质中残留的STI。
  • 袁恬莹,杨友云,陈汉春,王吉伟,Albert Deisseroth
    中国生物化学与分子生物学报. 1991, 7(03): 344-348.
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    用12种限制性核酸内切酶分别对4至104条人类染色体进行酶谱分析,以寻找Hu-1基因附近的限制性酶切多态位点,仅发现了Bg 1Ⅱ酶的一个多态性位点。表现为Bg 1Ⅱ酶谱中除3.6kb片段外,杂合子型尚具6.3及6.6kb两种片段,而纯合子型则只有6.3或6.6kb一种片段。在所检查的104条染色体中6.6kb片段出现的频率为3.88%,而6.3kb片段出现的频率为96.12%。经统计分析,计算出Hu-1基因及其附近的核苷酸变异率为0.0017,大体上与人β珠蛋白基因簇及人α-1-抗胰蛋白酶基因的核苷酸变异率相似。文中对本工作的意义进行了初步讨论。
  • 杨士珍,钮经义
    中国生物化学与分子生物学报. 1991, 7(03): 349-354.
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    通过Bpoc·Ser(tBu)·Asp·OtBu的β-羧基上树脂和依次用Fmoc·Gly·Gly·OHFmoc·Gln·ONP,Fmoc.Ser(tBu).OH,Fmoc.Lys(Boc)·OH,Fmos·Ala·OH及pGlu·OH伸长,接着氨解和酸解的策略,我们用固相方法合成了血清胸腺因子(FTS,Thymulin),pGlu·Ala·Lys·Ser·Gln·Gly·Gly·Ser·Asn;制备了具有最大生物活性的该因子和Zn~(2+)的复合物,FTS-Zn;用该复合物与牛血清白蛋白(BSA)结合所形成的免疫原免疫家兔,获得了抗FTS-Zn~(++)的抗血清,通过酶联免疫吸附分析法(ELISA)测得其滴度高达1:12800。
  • 丁晓华,赵文先,扬平,伍欣星,戴天力
    中国生物化学与分子生物学报. 1991, 7(03): 355-358.
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    用聚合酶链反应放大技术扩增宫颈癌e-Ha-ras癌基因第一外显子的基因片段,反应终产物与5′末端标记的特异寡核苷酸探针杂交,在18例宫颈癌DNA样品中,发现有6例存在e-Ha-ras癌基因第12位密码子的G-T突变,突变率为33%。推测第12位密码子的点突变是宫颈癌Ha-ras基因的活化途径之一。
  • 贾成禹,陈家任,古明选
    中国生物化学与分子生物学报. 1991, 7(03): 359-364.
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    把魔芋葡甘露聚糖(KGM)制备成强度高稳定性好的不溶性载体,通过钛活化固定化葡萄糖淀粉酶,检验固定化效果。偶联酶蛋白量通常是30~40mg/g载体,固定化酶的活性保持在50%以上,并且结合过酶的载体可以反复再生固定化酶。将自由酶和固定化酶进行比较,最适pH从4.0变到4.0~4.4,最适温度从50变成50~55℃,K_m从0.16%变为0.28%淀粉液。在45℃连续柱式运转反应,DE值平均98.62%,半衰期151天。结果表明本报道的主要优点是成本低廉、效果显著、操作简单和安全无毒。
  • 陈刚,陈震华,沈荣森,何季平
    中国生物化学与分子生物学报. 1991, 7(03): 365-370.
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    本文报导了从猪肝中提取二氢蝶啶还原酶[Ecl.6.99.7]的方法,提取百分率达30%左右。以DMPH_4为底物,分别以NADH和NADPH为辅酶,测定了该酶的动力学,发现它对NADH具有一定的特异性[Km(NADH)Vmax(NADPH)]。不同的金属离子对该酶活性影响的程度有很大的差异。
  • 王槐春,吴加金,唐佩弦
    中国生物化学与分子生物学报. 1991, 7(03): 371-380.
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    将EB病毒蛋白质BARF-1和EC-LF4与NBRF蛋白质库的序列进行局部同源性检索以及与已知的Ig V或C功能区相关分子进行对准比较,检查了同源性积分的统计学意义,并进行了二级结构预测和疏水性分析,确定了BARF-1的第13-124位和第126-221位残基片段分别与V和C样功能区类似,EC-LF4的第20-135位残基片段与V样功能区相似,BARF-1是非膜蛋白,EC-LF4是膜整合蛋白,其胞外部分近膜侧有一个类似于Ig绞链区的序列。因此,BARF-1与Ig轻链结构相似,EC-LF4与CD8抗原的第一条链相似。根据Ig超族分子的一般功能(即介导细胞粘附和细胞识别),推测EC-LF4可能作为一种粘附分子与淋巴细胞表面的Ig相关分子结合而促进EB病毒对淋巴细胞的感染。BARF-1因已知与病毒复制有关,与Ig超族的一般功能无关。EC-LF4和BARF-1的Ig样功能区可能来源于EB病毒对宿主细胞Ig基因的整合。
  • 胡兰荣,齐晓峰,郑昌学,吴健,董志伟
    中国生物化学与分子生物学报. 1991, 7(03): 381-383.
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    <正> 许多药物,特别是大多数抗癌药物,缺乏组织和细胞专一性是影响它们治疗效果的重要因素,十几年来,寻求药物靶向输送的努力一直在许多实验室进行,并且已经取得可喜进展。在脂质体的脂双层中插入专一靶细胞表面抗原的单克隆抗体做成的免疫脂质体作为药物载体,既具有载药量大,在体内滞留时间长,又具有靶细胞专一性等优点,是当前极受科学家重视,也最有前途的药物靶向输送系统。