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  • 1996年, 12卷, 第04期
    刊出日期:1996-08-20
      

    论文

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    论文
  • 白龙川,袁建刚,陈菊凤,屠郑,强伯勤
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(04): 381-385.
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    不同免疫缺陷病毒(HIV-1,HIV-2和SIV)的Tat均有3个高度保守的结构域:Cys富集域、核心域和碱性氨基酸富集域,用PCR定点突变法在HIV-1Tat蛋白的这些区域引入单氨基酸或多氨基酸突变;构建了以HIV-1LTR-158到+8O区域为启动子,含有不同突变点的突变Tat基因表达质粒;以荧光酶基因为报告基因,瞬时共转染Jurkat细胞:分析不同氨基酸突变对Tat的反式激活作用的影响。结果发现,突变后的Tat蛋白的活性均极大地降低或丧失,表明这些序列内的氨基酸的确定性对Tat的活性至关重要。
  • 张符光,刘佃辛,宋农,王新为,张兆山,马清钧
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(04): 386-390.
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    采用基因工程方法制取人胸腺素α原获得成功。用20ug/ml植物血球凝集素(PHA)和500U/ml重组人白细胞介素2(IL-2)联合刺激人胎儿胸腺细胞,从中提取总RNA,经反转录PCR获得了人胸腺素α原cDNA;将之克隆入pUC19中,序列测定表明与已报道序列一致,进一步将之亚克隆入原核表达载体pBV220,转化大肠杆菌DH5a.观察到在不改变氨基酸编码的前提下,增加胸腺素a原上游引物中A、T含量,可以明显提高胸腺素α原的表达量,同时,不同培养基对它的表达也有影响。胸腺素α原在大肠杆菌中以可溶形式表达,不需复性。初步活性测定显示,它可明显刺激人外周血淋巴细胞E-玫瑰花结形成率。重组人胸腺素α原在大肠杆菌中表达,为其临床应用及基础研究奠定了基础。
  • 毛积芳,刘葆璎
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(04): 391-395.
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    大鼠20α羟类固醇脱氢酶(20α-Hydroxysteroiddehydrogenase,20αHSD)cDNA片段,被插入杆状病毒(BacuIovirus)的转移载体pBlueBacⅢ,经野生型病毒DNA的共转染,从被转染的昆虫细胞中获得重组病毒。Northernblot分析,重组病毒感染细胞有20αHSD基因表达。感染细胞裂解液的Western印迹法分析,37kD的蛋白带被20αHSD抗体识别.体外酶活性测定发现,感染细胞裂解液中含有20αHSD酶促活性以上结果提示,大鼠20αHSD在杆状病毒昆虫表达系统成功地获得表达,为今后大量制备和纯化20αHSD创造条件。
  • 高崇峰,吕有勇
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(04): 396-399.
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    用Southern杂交技术检查了32例胃癌组织和4株胃癌细胞系中原癌基因met、erbB2、EGFR、AKT-2、Ras和myc的扩增,发现met基因扩增6例,EGFR扩增1例、缺失2例,AKT-2扩增2例,没有发现Ras基因和myc基因的扩增.有癌基因异常的病例多为低分化、临床分期为Ⅲ、Ⅳ期的个体,提示癌基因扩增是肿瘤发展的晚期事件。
  • 赵春华,罗道春,许纯孝,张虞毅,刘贤锡
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(04): 400-403.
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    从人良性增生前列腺组织中经硫酸铵沉淀和肝素-琼脂糖凝胶层析纯化出人前列腺生长因子(hPGF),纯化倍数约1000倍,SDS-PAGE和等电聚焦电泳示分子量约为17kD、等电点同标准bFGF,利用分离培养的人前列腺间质成纤维细胞进行活性鉴定,发现以1.3~1.7mol/LNaCl洗脱部分为hPGF,活性最高,对间质成纤维细胞有显著刺激增殖作用。
  • 张子连,陈珈,张大鹏
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(04): 404-408.
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    葡萄果实微粒体上存在高亲和力的脱落酸(ABA)结合位点,这些位点与ABA的结合具有饱和性,高亲和力及低容量,胰蛋白酶或DTT处理可以使该位点的特异结合活性下降约90%,表明此结合位点是一种蛋白质,故称为ABA结合蛋白,它含有维系蛋白质特定构象的二硫键,该蛋白与ABA反应的最适pH为6.0,说明与配基结合部位可能存在带有正电荷的氨基酸残基,结合活性在25℃高于0℃,结合反应达到动态平衡需要30min,30min以后结合活性随时间延长而下降。该蛋白与ABA结合反应的平衡解离常数为17.5nmol/L,最大结合容量(Bmax)为98.4fmol/mgprotein。
  • 王建华,吴英杰,吴显荣
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(04): 409-412.
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    对纯化的玉米花粉低分子量ATP酶-38kD蛋白的部分理化及药理学性质进行了研究。该酶与植物细胞中现已发现的马达蛋白(动蛋白及dynamin)存在较大差异。紫外吸收光谱在278nm处有最大吸收。圆二色谱分析表明该蛋白呈现典型球蛋白特征。最适pH为8.0,对ATP的Km为8×10-4mol/L,Vmax为3.5μmolPi每min每mg蛋白质。对NTP底物专一性为CTP>ATP≥GTP>ITP>UTP,药理学研究表明:该酶对0.1mmol/LNa3VO4、2.4mmol/LNaF及0.1mmol/LNEM均非常敏感。
  • 赵鸿娟,朱玉贤
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(04): 413-417.
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    外源钙调蛋白(Calmodulin,CaM)对胡萝卜悬浮细胞增殖具明显促进作用,不同浓度CaM的促进程度不同,7ug/ml时促进作用最大。CaM抑制剂TFP(Trifluoper-azine)则明显抑制该悬浮细胞的增殖,TFP浓度越高则抑制作用越强。另外,外源CaM可以加快珍珠梅花粉第二次有丝分裂,改变生殖细胞有丝分裂各期花粉管的比例,说明外源CaM对植物体细胞和性细胞的增殖和分裂均有促进作用。
  • 王海林,颜子颖,夏宁邵,侯云德,金冬雁
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(04): 418-422.
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    首先利用固相多肽合成技术对HCV多蛋白中可能含有优势抗原表位的14个肽段进行了化学合成,并用合成肽作包被抗原进行间接ELLSA试验来分析它们的抗原性,结果表明,所有合成肽中除NS3区的P7、P8和NS5区的P13无抗原性外,其余肽段均具有抗原活性,其中C区的P1,NS4区和P9和NS5区的P12三个肽段的抗原性较好,与相应的重组蛋白C22,C100和NS5A比较,它们之间的抗原性比较接近,随后选择抗原性较好的几个肽段合成了含八分支的多抗原肽(MAP)MP1、MP2、MP3、MP10和嵌合多肽CP15等工程肽抗原,前者不仅保持了相应单体肽的抗原性,而且与抗体反应的敏感性有显著提高;后者含双表位改善了常规合成肽抗原表位单一的缺陷,为研究HCV工程肽抗原进行了有益的尝试。
  • 程琦,程启坤,李名君
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(04): 423-426.
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    采用自制的壳聚糖为载体对单宁酶(TA)固定化,TA与壳聚糖配比1:2.5,30℃固定2h,活力回收达23.6%~33.1%;偶联效率为84.9%~88.0%。固定化单宁酶(ITA)的表观Km值(以没食子酸丙酯为底物)为22.2×10-6mol/L,TA的Km值(以没食子酸丙酯为底物)为10×10-6mol/L,TA和ITA的最适反应温度分别为40℃和50℃;60℃处理15min,残存活性分别为13.6%和60.3%。TA和ITA的最适pH值分别为5.8和6.4;TA在pH4.8~7.8活力稳定,而ITA活力稳定范围在pH4.8~6.8.ITA作用于EGCG的半衰期为78.7h,EGCG水解率达90.3%。对茶多酚提取物进行水解,其所含的酯型儿茶素EGCG和ECG水解率分别为96.4%和96.8%,非酯型儿茶素EGC和EC的含量显著增加。
  • 袁凌云,徐从贞,陈华堂,王晓琴
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(04): 427-431.
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    应用杂交瘤技术,以A型红细胞,A1血型物质MSM(A1)和A-RBC+MSM(A1)为免疫原,制备了一组抗人A血型单克隆抗体:A1218,B57,DE923-G8,D286-E12经Takatsy微量血细胞凝集试验证明:这组单抗仅能凝集A1,A2及AB型红细胞,不能凝集B,O型红细胞.采用ELISA定量抑制试验法,精确测定了它们抗原结合部位的结构,互补于A活性寡糖。A1218互补于具有双岩藻糖结构的A活性五糖(A-Penta);B57,DE923-G8互补于具有单岩藻糖结构的A活性六糖(A-Hexa);而D286-E12则互补于具有单岩藻糖的A活性四糖(A-Tetra).结果表明:血凝特异性相同的抗A单抗,其抗原结合部位的结构可呈现多样性。即A活性寡糖的糖基组成数目和含有岩藻糖数目均可不相同,各种抑制剂对不同单抗的抑制作用强弱也不相同。
  • 李平风,谭薇琦,张建民,杜国光
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(04): 432-435.
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    Forskolin(FSK)是一种植物二萜类化合物,为腺苷酸环化酶的特异激活剂,实验发现:FSK和作为参照的诱导分化剂维甲酸(RA)单独或联合应用均可升高胞浆蛋白激酶C(PKC)活性,并降低膜PKC活性,FSK可使表皮生长因子(EGF)诱导的细胞内三磷酸肌醇(IP3-1,4,5)水平降低至对照组的44.4%至67%;FSK与RA合用可显著降低成骨样细胞特征蛋白碱性磷酸酶(AKP)的活性。以上结果表明,FSK对成骨样细胞内磷脂酰肌醇信息传递体系有深刻影响,可能与其调节细胞的增殖分化有关。
  • 凌启阆,李翠凤,尚克进,向红军,董湘文
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(04): 436-439.
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    NAD激酶在光合作用等植物生理过程中起重要作用。NAD激酶的激活依赖于钙离子和钙调素(CalmOdulin,CaM).从植物中分离得到的一种新的CaM结合蛋白CaMBP-10(BP-10)明显抑制NAD激酶的激活活性,抑制作用可被CaM所克服.动力学研究表明,抑制效应是BP-10与CaM之间特异性相互作用的结果。实验证实BP-10对NAD激酶活性起着重要调节作用.
  • 潘继承,汪劲松,邵锦震,潘济文
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(04): 440-444.
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    经过硫酸铵30%~50%分级沉淀、二步柱层析可获聚丙烯酰胺凝胶电泳均一的粘质赛氏菌胞外蛋白酶制品,收率可达53%,并制备了酶的结晶,该酶以SephadexG100柱层析及SDS-PAGE测得分子量约为81000,该酶的最适pH为7.0,最适温度为45℃,Zn2+、Mn2+、Fe2+、Cu2+、Co2+等重金属离子不同程度地抑制酶活性。
  • 常远,唐微,郑仲承,刘新垣
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(04): 445-449.
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    用自制的氨基PEG化试剂rIL-2进行化学修饰,研究了试剂浓度,溶液pH,反应时间等与PEca-rIL-2产率及IL-2活性保持之间的关系,建立了一套获得稳定修饰度的PEG-rIL-2的方法。研究发现,反应时间跟修饰度关系不大;溶液pH对修饰度有一定的影响,中性pH以上反应都可进行;而试剂浓度直接决定修饰度的高低,过量越多,修饰度越高,而生物活性保留也越低;但低度修饰,对活性几乎没有影响,可保留活性在95%左右。
  • 邢辉,李健学,冯雁,孙旭东,杨同书
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(04): 450-454.
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    探讨了研制的具有谷胱甘肽过氧化物酶活力的含硒抗体酶(GPX-abzyme)对于受损心肌线粒体的保护作用,利用牛的心肌线粒体为实验材料,通过线粒体的膨胀度、脂质过氧化物含量、CCO活力变化及电镜观察等几个方面证明GPX-abzyme能抵抗XO/HX系统产生的自由基的损伤作用,ESR研究也表明GPX-abzyme能明显降低XO/HX损伤系统中的自由基含量。
  • 董元舒,赵西林,孙宝勇,陈德风
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(04): 455-458.
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    通过改变核酶体外反应的各种条件,对针对点突变癌基因T24-ras转录物的核酶R8的性质进行了系统研究,结果表明:R8切割底物反应的最适pH值约为8.2,最适温度为50℃,反应必须有镁离子参加,生理环境中常见的阴离子对反应没有影响,一些变性剂能够促进反应的进行,R8切割底物的反应为二级反应。
  • 黄河清,张风章,许良树,曾定
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(04): 459-463.
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    N-甲基甲酰胺碱度是提取高质量固氮酶铁钼辅基的关键因素之一。过量的亚甲蓝能氧化并分解铁铜铺基为含双相铁硫簇和铁硫簇固氮酶铁钼辅基和在紫外可见光谱区中均无特征吸收峰,而在320nm处却呈弱吸收峰,棕色固氮菌固氮酶和该菌的突变菌侏UW45固氮酶(缺铁钼辅基)中的非含钼的铁硫簇在紫外可见光谱区320nm和405nm处均含有特征吸收峰.
  • 沈静娴,罗时文,李金生,邹国林
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(04): 464-469.
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    用硫酸铵分级沉淀、DEAE-纤维素离子交换层析、免疫亲和层析、SephadexG100凝胶柱层析从人胃组织中提取出腺苷脱氨酶,酶纯化19324倍,比活力为5797U/mg蛋白.提取酶液经PAGE、SDS-PAGE和等电聚焦只呈现一条区带。测得该酶的分子量为41.2kD,等电点为pH4.8.氨基酸组成分析表明该酶由388个氨基酸残基组成,N端氨基酸为精氨酸。酶的最适pH为6.5,pH小于5.0或大于9.0时不稳定;最适温度为37℃,对热不太稳定,以腺苷及2-脱氧腺苷作为底物,其Km分别为87μmol/L和41μmol/L。
  • 杨国君,张琪,丁金凤
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(04): 470-475.
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    通过培养的人主动脉平滑肌细胞(hASMC)及脐静脉内皮细胞(hUVEC),应用3H-TdR参入、Northernblot分析、逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)、放射免疫分析(RIA)、和紫外比色法等技术观察了人主动脉中硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG)对hASMC和hUVECDNA合成的作用及对血小板源生长因子(PDGF)、PDGF受体、转化生长因子β(TGF-β)、内皮素-1(ET-1)或碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因表达和肾素-血管紧张系统(RAS)的影响,结果显示,HSPG明显抑制培养的hASMC基础的DNA合成(cpm值为:10385±3263vs,25541±6421,P<0.01)及外源性PDGF诱导的DNA合成(cpm值为:9878±1947vs.13481±44l0,P<0.05);抑制PDGFA链、TGF-Bp和ET-1mRNA表达,提高PDGFa和β受体mRNA的表达;显著降低hASMC培养液中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的浓度和血管紧张素转换酶(ACE)的活性,推测HSPG抑制PDGFA链、TGF-β及ET-1mRNA表达,降低ACE活性及AngⅡ浓度是其抑制hASMC增殖的重要机
  • 段耀奎,董晓敏,苏雅娴,林克椿,姜厚理
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(04): 476-482.
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    用傅里叶变换红外光谱技术研究Cl-通过完整红细胞、红细胞血影、重组带Ⅲ蛋白脂质体三种体系中的膜带Ⅲ蛋白时的二级结构变化。结果证明:Cl~-通过膜带Ⅲ蛋白,导致其a-螺旋增加,β-结构减少,以扫描隧道显微术直接观察到Cl~-通过前后、膜带Ⅲ蛋白的分子形态有改变。
  • 黄文栋,钱凯先,李文铸
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(04): 483-487.
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    用人红细胞膜作实验材料,研究了巴氏碳球C_(60)对红细胞膜的光敏作用。结果发现,C_(60)光激发后对膜蛋白质几种重要氨基酸有明显破坏作用,并氧化膜蛋白巯基和膜不饱和脂肪酸,采用NaN3和SOD作抑制剂探明了C_(60)的光敏作用存在氧自由基的影响,并在C_(60)光激发后的电子顺磁共振(ESR)研究中得到进一步证实。
  • 郭桂云,刘晓瑞,贾媛,王树林
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(04): 488-490.
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    采用在大鼠脑室内注入促甲状腺激素释放激素(Thyrotropinreleasinghormone,TRH),并利用31P-核磁共振法测定活体大鼠肝脏中的含磷化学物质,并观察TRH对肝脏无机磷代谢的影响,研究证明,TRH通过中枢神经影响肝脏中无机磷的代谢。由侧脑室注入TRH,使肝脏无机磷含量发生显著增加,此作用由于副交感神经的阻断剂阿托品的加入而消失,由此可以认为,TRH是经由副交感神经而影响肝脏的代谢。
  • 司伊康,沈宏略,孔漫,贺文义,韩锐
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(04): 491-495.
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    HL-60细胞是目前研究诱导分化药物的常用细胞株,应用核磁共振~(31)P谱,观察HL-60细胞经分化诱导剂全反式维甲酸和新维甲类化合物SLM9123作用前后的代谢改变,发现分化后的细胞对ATP能量的需求明显增高,膜磷脂的合成前体──磷酸单酯也有明显增加,另外还发现分化后的细胞内pH值有从偏碱性转为偏酸性的趋势,文中对这些改变的可能机制作了探讨。
  • 常远,唐微,郑仲承,刘新垣
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(04): 496-500.
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    分别用氰脲酰氯法及N-羟基丁二酰亚胺活性酯法合成了蛋白质的氨基PEG化试剂mPEGcc和mPEG-GS,并研究了它们对蛋白质的修饰作用。在合成过程中,通过分析反应体系中微量水分的存在对mPEGcc合成效率的影响,及溶剂中小分子可活化杂质成分对mPEG-GS合成产物质量的影响,发现去水剂的存在,可使mPEGce产率提高7倍;二氧六环优于DMF,且二氧六环的预处理也很重要。同时,为了测定活化PEG修饰蛋白质的效能,首次以BSA为模型蛋白,建立起一种测定活化PEG修饰能力的方法,应用此方法能直观而又准确地比较各种方法活化的PEG对蛋白质的修饰能力,具有普遍的意义。
  • 李连之,李荣昌,王夔
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(04): 501-505.
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    顺铂(DDP)和顺式二水二氨合铂(Ⅱ)(AAP)与人红细胞膜的相互作用已经用荧光及SDSPAGE法研究,实验结果表明,DDP和AAP与人红细胞膜蛋白相互作用属双阶段一级反应动力学,而且AAP的反应速率比DDP大。SDS-PAGE研究表明,DDP和AAP不仅可引起膜蛋白的交联或聚合,形成新带,也能使某些膜蛋白降解。对于DDP,各膜蛋白带结合铂量首先随反应时间增加而下降,而后增加,最后达到饱和结合;AAP与DDP不同,各膜蛋白带结合铂量与反应时间的关系呈现复杂的变化,但长时间反应导致铂结合量降低。