中国生物化学与分子生物学报

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Egr-1基因调控序列连接OSM cDNA表达质粒的构建及其在黑色素瘤细胞中的表达

吕星,邢瑞云,孙志贤,裴雪涛,吴祖泽

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(01): 1-5.

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ＯＳＭ是一种对黑色素瘤细胞显示抑制作用的细胞因子．为进行ＯＳＭ针对黑色素瘤的基因－放射治疗研究，构建了小鼠Ｅｇｒ－１基因调控序列引导入ＯＳＭｃＤＮＡ真核表达质粒（ｐＥＯ），ｐＥＯ质粒转染小鼠Ｂ－１６黑色素瘤细胞，经Ｇ４１８和抗人ＯＳＭ抗体的筛选，获得了稳定表达ＯＳＭ的克隆细胞（ｐＥＯ－１细胞），ＯＳＭ表达量可达５．９７ｎｇ每１０５细胞天，分子量为３２ｋＤ．ｐＥＯ－１细胞用一定浓度Ｈ２Ｏ２处理后ＯＳＭ表达量可提高６２％，表明ｐＥＯ重组质粒可在氧自由基的刺激作用下增强ＯＳＭ表达

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野生型p53基因对内皮细胞细胞间粘附分子-1表达的影响

林勇,高存记,黎健,汪钟

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(01): 6-9.

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细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）是介导白细胞与内皮细胞粘附的重要粘附分子．为研究野生型ｐ５３基因对内皮细胞ＩＣＡＭ－１表达的影响，分别采用流式细胞术和ＲＴ－ＰＣＲ／ＨＰＬＣ方法测定ＩＣＡＭ－１蛋白及ｍＲＮＡ水平．静息状态的内皮细胞表面结构性地表达有少量的ＩＣＡＭ－１，在肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα，１０～１０００Ｕ／ｍｌ）诱导下，其表达呈剂量依赖性增加．将ｐ５３基因导入内皮细胞，则显著抑制ＴＮＦα诱导的内皮细胞表面ＩＣＡＭ－１的表达．ｐ５３基因的导入对静息状态内皮细胞表面结构性表达的ＩＣＡＭ－１影响较小．ｐ５３基因主要通过降低ＩＣＡＭ－１的ｍＲＮＡ水平而抑制内皮细胞表面ＩＣＡＭ－１的表达，但对蛋白的抑制程度小于对ｍＲＮＡ的抑制程度．提示：ｐ５３基因对内皮细胞ＩＣＡＭ－１表达的影响除转录水平控制外，还存在转录后水平的调控

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猪脾铁蛋白电子隧道特性及释放铁途径的研究

黄河清,林庆梅,张凤章,陈中,雒占波,许良树

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(01): 10-14.

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维生素Ｃ和连二亚硫酸钠混合后只能加速猪脾铁蛋白释放铁的速率，并不能使铁蛋白释放铁的动力学途径由复杂转化为简单．而单独维生素Ｃ却能利用蛋白壳上的电子隧道传递电子，迫使铁蛋白以二分之一的反应级数方式释放整体铁核的铁并起着抗磷酸盐阻遏释放铁速率的作用，简化释放铁的途径．对维生素Ｃ参与铁蛋白释放铁的机理进行了讨论．

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人G-CSF转基因鼠的稳定遗传与表达

卢一凡,邓继先,肖成祖,马清钧

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(01): 15-18.

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利用人粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）基因组基因作为目的片段，将其受控于２．６ｋｂ的小鼠乳清酸蛋白（ＷＡＰ）基因的调控区下，通过显微注射法获得了两只整合有人Ｇ－ＣＳＦ转基因小鼠，通过繁殖建立了稳定的转基因系．一些表型参数测定表明转基因鼠与正常鼠无明显差别．通过ＲＴ－ＰＣＲ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ检测，在乳腺表达出人Ｇ－ＣＳＦ，为乳腺表达外源蛋白质及今后大动物研究奠定了基础．

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重组人血小板生成素在大肠杆菌中表达的研究

赵东,卢柏松,陈琳,柳晓兰,黄培堂

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(01): 19-23.

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采用化学法全合成了编码人血小板生成素（ｔｈｒｏｍｂｏｐｏｉｅｔｉｎ，ＴＰＯ）成熟肽Ｎ端１５３氨基酸的基因序列，构建基于该合成基因的表达质粒，结果以谷胱甘肽转硫酶－ＴＰＯ１５３（ＧＳＴ－ＴＰＯ１５３）融合蛋白的方式获得了占全菌蛋白４０％的高效表达．进一步采用ＰＣＲ方法分别对ＴＰＯ合成基因及ＴＰＯｃＤＮＡ的翻译起始区（ＴＩＲ）序列进行定点突变，以降低这一区域的Ｇ－Ｃ含量．将突变序列分别插入到ｐＢＶ２２０表达载体中，重组质粒在转化大肠杆菌ＪＭ１０９后，均获得了表达，其中ＴＩＲ区突变后的合成基因表达产物约占全菌蛋白的１５％．为研究基因下游结构对表达的影响，在不改变氨基酸组成的基础上，构建了ＴＰＯ合成基因与ＴＰＯｃＤＮＡ的杂合序列表达质粒．研究结果表明翻译起始效率是影响ｒｈ－ＴＰＯ在大肠杆菌中表达的重要因素之一，同时基因下游序列的组成对表达水平也会产生影响．

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醋酸杆菌α-乙酰乳酸脱羧酶基因克隆、表达及在啤酒发酵中的作用

尹东,卢大宁,曾庆华,黄百渠,李彦舫

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(01): 24-26.

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根据α－乙酰乳酸脱羧酶（α－ａｃｅｔｏｌａｃｔａｔｅｄｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ，α－ＡＬＤＣ）基因的碱基序列，用ＰＣＲ方法从醋酸杆菌（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒａｃｅｔｉ）中克隆出了０．９９ｋｂ的ＤＮＡ片段，经ＤＮＡ测序后证明该片段是α－乙酰乳酸脱羧酶基因．将该基因重组到质粒ｐＢＶ２２０中，转化大肠杆菌，筛选获得具有α－ＡＬＤＣ活性的重组子菌株．酶活检测表明，重组子细胞表达的α－ＡＬＤＣ活性是供体菌的１１００倍．将得到的α－ＡＬＤＣ粗提后用于啤酒发酵试验，降低了啤酒中双乙酰的含量

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p16抑癌基因定点突变及其在大肠杆菌中的表达与纯化

黄长晖,覃林花,傅继梁

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(01): 27-31.

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为了研究错义突变对ｐ１６功能的影响，应用ＰＣＲ体外定点突变方法对ｐ１６ｃＤＮＡ进行体外定点突变，并将野生型和突变型ｐ１６ｃＤＮＡ克隆于ｐＧＥＸ－５Ｔ载体，在大肠杆菌中经ＩＰＴＧ诱导表达，Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹鉴定确证表达．而后用谷胱甘肽－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析纯化野生型和突变型ｐ１６融合蛋白．得到了第４８位密码子ＣＣＧ（Ｐｒｏ）→ＣＴＧ（Ｌｅｕ）突变的ｐ１６－Ｐ４８突变体，并在大肠杆菌中表达了４２ｋＤ的ＧＳＴ－ｐ１６和ＧＳＴ－ｐ１６Ｐ４８Ｌ融合蛋白．最后经纯化得到了野生和Ｐ４８Ｌ突变的ｐ１６融合蛋白

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σ~(38)识别的启动子-35区核酸序列特征研究

丁清泉,戴顺英

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(01): 32-35.

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依据部分资料假定大肠杆菌ＲＮＡ聚合酶的σ３８亚单位在特异启动子的－３５区识别的保守序列是－ＴＣＴＣＣＣ－，合成用其它碱基分别取代这一区域每一个碱基的引物，以ｏｓｍＹ基因片段为模板，通过ＰＣＲ扩增成－３５区含不同碱基序列的转录模板，用体外重组的由σ３８和核心酶（Ｅ）组成的全酶（Ｅσ３８）对这些启动子进行体外转录．结果显示含－ＴＣＴＣＣＣ－序列的启动子的转录水平既低于原始的ｏｓｍＹ启动子，又低于经ＰＣＲ扩增的其它序列．综合研究结果推测，这一区域的保守序列是－ＴＣＴＣＴＣ－．

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复制缺陷型腺病毒载体介导的人凝血因子Ⅷ基因在体内外的高效转移和表达

姜志龙,卢健,陈诗书

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(01): 36-41.

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为了构建含人凝血因子Ⅷ基因的重组腺病毒载体系统，首先构建了含ＦⅧ（Ｂ结构域缺失型）的载体质粒ｐＡｄ－ｈＦⅧ和插入内含子结构的ｐＡｄＩ－ｈＦⅧ，经脂质体介导，证明两质粒的目的基因均能在ＣＯＳ－７细胞中表达有凝血活性的ＦⅧ因子，其中经纯化的载体质粒ｐＡｄ－ｈＦⅧ与ｐＢＨＧ１０经脂质体介导，共转染至２９３包装细胞，经同源重组和Ｅ１蛋白反式互补，形成Ｅ１／Ｅ３缺失型重组腺病毒载体颗粒Ａｄ－ｈＦⅧ．ＰＣＲ检则到病理２９３培养液上清的病毒ＤＮＡ中具有目的基因扩增片段，证明病毒ＤＮＡ含有ＦⅧ基因．经扩增、纯化、滴度测定，用于感染离体细胞ＣＯＳ－７、Ａ５４９、Ｌ９２９、２９３．证实该病毒能在上述细胞中高效转移和表达目的基因，其表达量具有一定范围内的剂量依赖性．ＣＯＳ－７细胞中，ＭＯＩ＞１０００时，有细胞毒效应，表达量反而下降．经耳缘静脉注射Ａｄ－ｈＦⅧ至家兔后，１～４周能测到一定水平的ＦⅧ蛋白，１周内升至最高峰．免疫组化研究表明感染的离体细胞和家兔肝等组织均有ＦⅧ表达，其中肝脏表达最高．为甲型血友病的基因治疗开辟了新途径

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GDNF重组腺病毒的构建及促进多巴胺能神经元存活的研究

徐国恒,凌雁,万有,王晓民,韩济生

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(01): 42-47.

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利用体内同源重组原理，构建了能介导ＧＤＮＦ基因转移和表达的复制缺陷型重组腺病毒ＡｄＣＭＶｇｄｎｆ，其中ＧＤＮＦｃＤＮＡ插入腺病毒基因组的Ｅ１区并由ＣＭＶ启动子控制在人２９３细胞内通过同源重组包装生成重组腺病毒后，用形态学方法、病毒ＤＮＡ酶切分析、ＰＣＲ和ＲＴ－ＰＣＲ等方法进行鉴定正确．经测定病毒滴度达到１０１０ｐｆｕ／ｍｌ．用免疫沉淀方法从重组腺病毒感染的２９３细胞及其培养基上清中均检测到大量ＧＤＮＦ蛋白．用重组腺病毒直接感染或者用其条件培养基处理，分别使胚胎大鼠中脑原代多巴胺能神经元的数目增加８８．２％和９６．４％，明显增加多巴胺能神经元存活，对帕金森氏病基因治疗具有重要意义

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小鼠白细胞介素12双顺反子真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达

唐展云,赖冠华,陈诗书

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(01): 48-53.

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克隆小鼠白细胞介素１２（ＩＬ－１２）ｐ４０及ｐ３５ｃＤＮＡ，并构建同时含ｍＩＬ－１２ｐ４０和ｐ３５ｃＤＮＡ的双顺反子真核表达载体及其在哺乳动物细胞中的表达．白细胞介素１２是由巨噬细胞，树突状细胞等抗原提呈细胞产生的一种异二聚体细胞因子，对机体的细胞免疫功能起着重要的调节作用．利用脂多糖（１００ｐｇ／ｍｌ）和小鼠重组干扰素（ＩＦＮ－γ５００Ｕ／ｍｌ）体外联合刺激小鼠腹腔巨噬细胞，从中提取总ＲＮＡ，经ＲＴ－ＰＣＲ扩增出含信号肽的小鼠白细胞介素１２（ｍＩＬ－１２）ｐ４０及ｐ３５全长ｃＤ－ＮＡ．ＰＣＲ产物经酶切后，分别克隆至ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＳＫ载体中，序列测定结果与文献报道序列一致．然后利用脊髓灰质炎（Ｐｏｌｉｏ）病毒内核糖体进入位点（ＩＲＥＳ）连接ｍＩＬ－１２ｐ４０及ｐ３５ｃＤＮＡ，亚克隆至ｐｃＤＮＡ３载体中，构建成含ｍＩＬ－１２ｐ４０及ｐ３５ｃＤＮＡ双顺反子真核表达载体，即ｐｃＤＮＡ３／ｍＩＬ－１２，ｐ４０及ｐ３５ｃＤＮＡ同时受ｐｃＤＮＡ３中ｈＣＭＶ启动子驱动，将ｐ４０及ｐ３５转录至同一ｍＲ－ＮＡ上．通过ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ将ｐｃＤＮＡ３／ｍＩＬ－１２转染ＣＯＳ－７细胞，７２ｈ收集培养上清，测定ｍ

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人癌胚抗原-重组痘苗病毒的构建和制备

杨洁,罗超权,卢方安,杨英浩,伍新尧

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(01): 54-57.

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痘苗病毒的基因组庞大，结构复杂而特殊，不可能将外源基因直接插入它的基因组，必须利用一种特殊的痘苗病毒质粒，才能构建成功重组痘苗病毒．在分析了痘苗病毒质粒ｐＪ１２０〔含有我国天花疫苗－痘苗病毒天坛株７６１的启动子和胸苷激酶（ｔｈｙｍｉｄｉｎｅｋｉｎａｓｅ，简称ＴＫ基因），及含有人癌胚抗原（ｃａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｙｎｉｃａｎｔｉｇｅｎ，简称ＣＥＡ）ｃＤＮＡ全序列的质粒ｐ９１０２３Ｂ－ｃｅａ－１７结构的基础上，设计出三步法构建了重组疫苗病毒质粒ｐＪ－ＣＥＡ．经酶切及ＰＣＲ鉴定ｐＪ－ＣＥＡ中ＣＥＡｃＤ－ＮＡ的存在，进一步用同源重组方法构建了表达人ＣＥＡ的重组痘苗病毒，并以人体成纤维细胞作为宿主细胞，对ＣＥＡ－重组痘苗病毒进行了大量培养．再次证实痘苗病毒是良好的真核表达载体，可以高效而准确地表达细胞膜糖蛋白ＣＥＡ．

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抗人黑色素瘤单链抗体基因的克隆和分泌型表达

王字玲,邓健蓓,韩骅,陈萍,药立波,苏成芝

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(01): 58-62.

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应用ＲＴ－ＰＣＲ技术从分泌抗人黑色素瘤单克隆抗体的杂交瘤细胞ＨＢ８７６０中克隆了抗体轻、重链可变区基因，然后用（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３连接肽基因将ＶＨ、ＶＬ连接成ＳｃＦｖ基因，并进行了序列测定．计算机分析表明ＶＨ，ＶＬ均符合小鼠抗体可变区的特征，为功能性重排的抗体可变区基因．ＶＨ、ＶＬ、ｌｉｎｋｅｒ拼接正确．ＳｃＦｖ基因全长７２９ｂｐ，其中ＶＨ基因长３６０ｂｐ，编码１２０个氨基酸，ＶＬ基因长３２４ｂｐ，编码１０８个氨基酸．在噬菌粒表达载体ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｅ中表达了可溶性的ＳｃＦｖ蛋白，表达产物经流式细胞仪检测可特异地与黑色素瘤细胞结合，不与肝癌、胃癌及良性黑痣细胞结合

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人亲环素B基因的克隆表达及重组蛋白的生物活性

赵权,李芳秋,陈英剑,虞伟,武建国

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(01): 63-66.

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应用ＲＴ－ＰＣＲ方法从人淋巴细胞中扩增出亲环素Ｂ（ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎＢ，ＣｙＰＢ）基因，克隆入ｐＥＴ－２８ａ载体中表达．表达产物以包涵体形式存在，占细菌可溶性蛋白的１５％．经Ｎｉ－ＮＴＡ树脂金属螯合亲和层析和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０柱层析纯化，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测呈单一条带，毛细管电泳为单一色谱峰，纯度达９５％．经复性处理，表达产物显示肽基脯氨基顺反异构酶活性

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红树DNA的十六烷基三甲基溴化铵法提取及其随机扩增多态DNA反应

吴多桂,林栖凤,李冠一

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(01): 67-70.

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采用ＣＴＡＢ法提取了耐盐植物红树ＤＮＡ，所得ＤＮＡ样品的紫外吸收Ａ２５８／Ａ２８０比值为１．８９，纯度能符合限制性内切酶酶切、ＰＣＲ反应以及ＤＮＡ重组克隆等分子生物学操作的要求．方法简便，容易掌握，较普通的酚－氯仿法有明显的优点．还探讨了以ＣＴＡＢ法制备的红树ＤＮＡ为模板进行ＲＡＰＤ反应参数的优化组合

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重组蓖麻毒素A链与几种天然单链核糖体失活蛋白的活性研究

裴武红,王润华,郑硕,沈倍奋

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(01): 71-74.

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采用ｐＥｘＳｅｃⅠ载体系统进行了蓖麻毒素Ａ链的原核表达，经ＣＭ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ一步纯化后，获得了纯度约８０％的重组蓖麻毒素Ａ链．将其与几种天然单链核糖体失活蛋白进行了超螺旋ＤＮＡ裂解研究和无细胞体系中蛋白合成抑制试验，结果表明，重组蓖麻毒素Ａ链具有类似于天然单链核糖体失活蛋白的活性，但两种测活方法之间没有明显的相关性

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电鳐电器官的蝮蛇突触前神经毒素结合蛋白的一些结合性质

沈国光,张新妹,王银,徐科,杜晓燕,周元聪

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(01): 75-78.

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电鳐（Ｔｏｒｐｅｄｏｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ）的电器官是一种富含突触的组织．将这种电器官的粗制膜悬液与同位素１２５Ｉ标记的β－蝮蛇神经毒素进行结合实验，结果表明这种电器官中存在相对含量较高的毒素结合位点，Ｂｍａｘ为１１５０ｆｍｏｌ／ｍｇ，ＫＤ为２．８×１０－８ｍｏｌ／Ｌ．响尾蛇神经毒素和β－银环蛇神经毒素对其结合作用的抑制实验显示，前者与β－蝮蛇神经毒素有共同的结合位点，后者的作用位点则不同．提示β－蝮蛇神经毒素结合位点可能涉及一种新的参与突触前递质释放机制的功能蛋白

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枯草芽孢杆菌中性β-甘露聚糖酶的纯化及性质研究

马建华,高扬,牛秀田,邹俊,毕汝昌,崔福绵

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(01): 79-82.

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经硫酸铵分级沉淀、超滤浓缩、阴离子交换层析和凝胶过滤层析，由枯草芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＢＭ９６０２培养滤液得到了常规凝胶电泳一条带的中性β－甘露聚糖酶．该酶具有与其它已知同类酶相类似的性质，但用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得该酶分子量为３７ｋＤ；用聚丙烯酰胺等电聚焦电泳测得等电点ｐＩ为４．９．

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巨噬细胞源成纤维细胞生长因子的分离纯化

蔡国平,史景熙,李玉瑞

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(01): 83-87.

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为探讨二氧化硅在大鼠肺内引发的一系列纤维增生反应，试图寻找一种关键的细胞增生因子，采用高压液相色谱技术，包括凝胶过滤柱层析、离子交换柱层析以及反相Ｃ４高压液相色谱柱层析，获得一种新的巨噬细胞源成纤维细胞生长因子（ａｌｖｅｏｌａｒｍａｃｒｏｐｈａｇｅ－ｄｅｒｉｖｅｄｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃ－ｔｏｒ，ＡＭＤＧＦ），ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果表明它已达到均一的纯度，其分子量为５８０００，ｐＩ为４．７．该因子的分子量与ＭΦ在体外接受石英粉尘刺激分泌的因子的分子量明显不同．Ｎ端序列测定结果显示它与已知蛋白序列的同源性小于５０％，其刺激成纤维细胞增殖的最适浓度范围为２．０～６．０μｇ／ｍｌ，推测ＡＭＤＧＦ是矽肺纤维化病变发生、发展过程中调节成纤维细胞增殖的重要因子之一

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一个新的蛋白质剪切系统及其剪切条件的研究

石亚伟,范俊虎,李卓玉,袁静明,徐明群,仲少荣

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(01): 88-91.

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将含麦芽糖结合蛋白－内蛋白子－几丁质结合区（简称ＭＹＢ）基因的重组质粒ｐＭＹＢ１２９转入Ｅ．ｃｏｌｉ２４２６，在ＬＢ培养基中发酵，ＩＰＴＧ低温诱导表达，菌体超声破碎，离心，上清液经直链淀粉糖亲和层析，获得ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳纯的前体蛋白ＭＹＢ．ＭＹＢ中内蛋白子的Ｎ端可被还原剂ＣｙＳＨ、ＤＴＴ、β－巯基乙醇等诱导发生剪切反应．结果表明，三种还原剂中以ＤＴＴ为最佳．同时对剪切过程中温度、ｐＨ值等影响进行了研究

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鸡心脱辅基细胞色素c自发折叠的进一步研究

韩学海,易萍,童俊超,杨福愉

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(01): 92-97.

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将野生型鸡心脱辅基细胞色素ｃ及其突变体Ｖ９２Ａ的１７位半胱氨酸残基突变为丝氨酸，再将表达纯化的Ｖ９２Ａ／Ｃ１７Ｓ和Ｗ／Ｃ１７Ｓ用荧光探针ＩＡＥＤＡＮＳ标记．通过测量ＡＥＤＡＮＳ－Ｃｙｓ－１４的荧光光谱、荧光寿命以及ＡＥＤＡＮＳ与Ｔｒｐ－５９之间的荧光共振能量转移效率、比较了Ｖ９２Ａ与野生型鸡心脱辅基细胞色素ｃ因折叠状态不同引起的Ｎ端构象状态及肽链间相互作用的差异．结果显示Ａｐｏ．ｃ无论在低盐浓度下的无规卷曲状态还是高盐浓度下的融球态，Ｖ９２Ａ都较野生型处于更松散的折叠状态，此外，在鸡心脱辅基细胞色素ｃ的自发折叠中Ｎ端肽段并不起主要作用

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抗坏血酸对酵母蔗糖酶的激活动力学研究

范业鹏,杜鹏,吴衍昌,姜玉梅,杨歌德,王淑娟

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(01): 98-101.

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采用甲苯自溶法从鲜酵母中提取了蔗糖酶，并用乙醇分级及ＤＥＡＥ－纤维素柱层析进行了纯化，用ＰＡＧ凝胶电泳作了纯度鉴定，在ｐＨ５．０，３０℃条件下进行了酶反应，用双倒数作图法测出其Ｋｍ＝２．１×１０－２ｍｏｌ／Ｌ，Ｖｍａｘ＝０．２６（每分钟的光密度值）．在此系统中，加入不同浓度的抗坏血酸（Ｖｉｔ．Ｃ），发现其具有激活作用并存在量效关系．双倒数作图显示：酶的表观Ｖｍａｘ（Ｖｐ）随抗坏血酸浓度的增加而增大，但其表观Ｋｍ（Ｋｐ）不变（Ｋｐ＝Ｋｍ）．经实验结果分析，推论出抗坏血酸激活作用的酶促反应方程式，并推导出反应速度公式

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2-位硒桥联β-环糊精的合成及催化性质

刘俊秋,高姝娟,罗贵民,阎岗林,姜明守,沈家骢

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(01): 102-104.

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将β－环糊精（β－ＣＤ）２位羟基选择性磺酰化后，再用ＮａＨＳｅ处理使谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＰＸ）的催化基团－ＳｅＨ引入β－ＣＤ的２位上，经空气氧化得到了ＧＰＸ模拟物双硒桥联β－环糊精．利用元素分析、核磁共振、红外光谱对此模拟物进行了表征．Ｘ光电子能谱技术测定了模拟物中硒的价态和含量．测活结果表明模拟物的ＧＰＸ活性是ＰＺ５１的７．５倍

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N-糖链合成抑制剂对NIH3T3细胞粘附作用和整合蛋白表达的影响

贺建宇,曹立环,查锡良

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(01): 105-108.

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研究了Ｎ－糖链合成抑制剂——Ｄｅｏｘｙｍａｎｎｏｊｉｒｉｍｙｃｉｎ（ＤＭＭ）和衣霉素（ＴＭ）对ＮＩＨ３Ｔ３细胞粘附作用和细胞表面α５β１整合蛋白含量的影响．研究结果发现甘露糖苷酶Ⅰ抑制剂－ＤＭＭ处理ＮＩＨ３Ｔ３细胞后，３Ｈ－甘露糖（３Ｈ－Ｍａｎ）参入ＮＩＨ３Ｔ３细胞较对照细胞增加一倍，多天线复杂型糖链增加１８％，而细胞表面α５β１整合蛋白与纤连蛋白粘附能力却下降１７％，但对膜整合蛋白α５和β１亚基表达量无明显影响，提示不成熟的糖链对整合蛋白参与的细胞粘附功能有一定影响，但不影响糖蛋白运输及整合到膜上．十四糖二磷酸长萜醇合成抑制剂——ＴＭ为０．５μｇ／ｍｌ时，Ｎ－糖链合成显著抑制，３Ｈ－Ｍａｎ参入减少了５２％，细胞粘附能力下降了３７％，细胞表面膜整合蛋白α５亚基下降了２２％，而β１亚基无明显变化，提示ＴＭ的脱糖基化作用可引起α５亚基转运至细胞膜表面下降，以至影响了细胞的粘附能力．此外，脱糖整合蛋白与纤连蛋白（ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ，Ｆｎ）的结合力下降也是原因之一．

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应用FTIR和NMR研究短梗霉多糖分子结构

方宣钧,张英,洪少良

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(01): 109-113.

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短梗霉多糖是出芽短梗霉产生的一种胞外多糖，具有极好的成膜、成纤维、阻气、粘接、易加工、无毒性等特性，是微生物多糖中最令人瞩目的多糖之一．本研究应用ＦＴＩＲ和ＮＭＲ技术对由出芽短梗霉胞外产生的短梗霉多糖进行了分析．短梗霉多糖的红外光谱（４０００～４００ｃｍ－１），具有明显的多糖特征吸收峰，证明多糖是由α－Ｄ－吡喃葡萄糖残基组成．应用先进的一维和二维核磁共振技术，在绝对温度３４３Ｋ下获得短梗霉多糖１Ｈ－ＮＭＲ谱和１３Ｃ－ＮＭＲ谱，确证短梗霉多糖的结构单元是α－１，４麦芽三糖，归属了短梗霉多糖的１Ｈ和１３Ｃ的全部化学位移

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甲状旁腺素对成骨样细胞增殖的调节作用

白秀英,俞文华,周爱儒,杜国光

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(01): 114-117.

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甲状旁腺素（ＰＴＨ）是调节钙磷代谢的经典激素，有报道ＰＴＨ对其靶细胞－成骨细胞有促增殖分化作用。经多层次、多水平的实验研究证实，ＰＴＨ对成骨样细胞ＲＯＳ１７／２．８确有促增殖作用。（１）细胞计数、ＭＴＴ［３－（４，５－ｄｉｍｅｔｈｙｌｔｈｉａ－ｚｏｌ－ｚ－ｙｉ）２，５－ｄｉｐｈｅｎｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍｂｒｏｍｉｄｅ］测定及ＳＲＢ（ｓｏｄｉｕｍｒｈｏｄａｍｉｎｅＢ，ＳＲＢ）染色均显示经ＰＴＨ（１０－９ｍｏｌ／Ｌ）处理的细胞，其数目明显增加；（２）３Ｈ－ＴｄＲ参入增加；（３）与增殖相关的原癌基因（ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ、ｃ－ｋｉ－ｒａｓ和ｃ－ｍｙｃ）的表达增强；（４）成骨细胞特征性蛋白－碱性磷酸酶活性降低．这些结果不仅表明该激素具有非经典样作用，同时意味着激素也参与其靶细胞增殖分化的调节作用

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Yunnanese(~Aγδβ)~0-地贫缺失桥片段的克隆及缺失连接区的序列测定

张俊武,张雪青,赵艳君

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(01): 118-122.

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为研究导致Ｙｕｎｎａｎｅｓｅ（Ａγδβ）０－地贫缺失事件的分子机制，并从３′并入序列中搜寻增强子类序列，使用ＥＭＢＬ３为载体构建了一例缺失杂合子的基因组文库，筛选到来源于异常染色体１１并包含Ｇγ珠蛋白基因区６．７ｋｂ序列以及１１．５ｋｂ３′并入序列（即缺失桥片段）的克隆．此１１．５ｋｂ序列在正常染色体中位于β珠蛋白基因约下游６６～７８ｋｂ区域．详细分析了这一区域的限制性内切酶图谱．分析了围绕缺失连接区的ＤＮＡ序列，精确定位缺失的５′端点发生在Ａγ珠蛋白基因上游－１１６～－１１７碱基之间．确定缺失的３′端点处于一个Ｌ１序列内，位于β珠蛋白基因下游～６６ｋｂ，距离Ｃｈｉｎｅｓｅ（Ａγδβ）０－地贫缺失３′端点上游～１２．２ｋｂ的一个ＥｃｏＲⅠ位点上游４１３ｂｐ．围绕５′和３′端点的序列之间无明显同源性，说明这一缺失代表了体内的非同源重组事件．这一重组事件可能由Ｌ１序列介导．缺失３′端点下游序列的克隆分离也为进一步从中搜寻加强子类序列奠定了基础

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蛋白磷酸酯酶对Alzheimer神经原纤维缠结的松解作用

王建枝,龚成新

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(01): 123-127.

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神经原纤维缠结是Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ患者的特征性脑病理损伤，其形成机制至今不明．根据神经原纤维缠结的基本组分是异常磷酸化ｔａｕ蛋白的聚集形式双螺旋丝（ｐａｉｒｅｄｈｅｌｉｃａｌｆｉｌａｍｅｎｔｓ，ＰＨＦ）的研究结果，推测蛋白磷酸酯酶与蛋白激酶的失衡可能与ＰＨＦ的形成有关．将蛋白磷酸酯酶ＰＰ－２Ａ和ＰＰ－２Ｂ与ＰＨＦ一起在３７℃保温３０ｍｉｎ可使ＰＨＦ缠结结构松解，成为单个ＰＨＦ原纤维，延长去磷酸化反应时间至３ｈ可使ＰＨＦ结构进一步松解，释放一些游离ＰＨＦ原纤维片段．放免印迹定量分析结果表明：ＰＰ－２Ａ处理的ＰＨＦ样品比对照者释放游离ｔａｕ蛋白的量增加２５％．此外，ＰＰ－２Ａ和ＰＰ－２Ｂ去磷酸化的ＰＨＦ对脑中钙激活的中性蛋白水解酶的抗性降低．这些研究资料从结构上显示了Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病脑病理损伤的可逆性，为Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病治疗的可能性提供了实验依据

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GDNF重组腺病毒增加MN9D细胞多巴胺合成与释放

凌雁,徐国恒,万有,王晓民,韩济生

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(01): 128-131.

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有表达ＧＤＮＦ的重组腺病毒直接感染中脑多巴胺能神经元来源的ＭＮ９Ｄ细胞并经神经毒素ＭＰＰ＋处理．感染３６ｈ分别收获细胞及其培养基，用反相高效液相色谱方法测定多巴胺含量．结果显示，经ＧＤＮＦ重组腺病毒感染的ＭＮ９Ｄ细胞内及其培养基中的多巴胺水平分别增加５０．７％和５３．５％．给予神经毒素ＭＰＰ＋损伤后，细胞内多巴胺含量降低５３．５％，但同时给予ＧＤＮＦ腺病毒则可抑制这种降低，并使多巴胺水平增加１４１．３％．以上结果提示ＧＤＮＦ腺病毒可提高细胞内的多巴胺水平并促进其释放，同时还具有对抗神经毒素ＭＰＰ＋损伤作用，表明ＧＤＮＦ重组腺病毒用于帕金森氏病基因治疗具有良好的前景．

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一株受四环素及其衍生物诱导表达的Tet-on鼻咽癌细胞系

廖伟,易红,顾焕华,苏涛,曹亚

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(01): 132-135.

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Ｔｅｔ－ｏｎ基因表达系统是新近发展的一种真核生物体外表达系统．该系统利用四环素及其衍生物对所感兴趣基因进行诱导表达．这种诱导表达具有严密、高效、可控性强、表达泄露小等优点．对于研究一些致死基因及毒性强的基因在细胞或体内的表达提供了极好的工具．利用Ｔｅｔ－ｏｎ基因表达系统，构建了一株鼻咽癌细胞系，该细胞系的建立为进一步研究一些鼻咽癌发病相关基因，如ＥＢ病毒潜伏膜蛋白基因、瘤基因、抑瘤基因等与鼻咽癌的相关性，提供了理想的细胞模型．

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孤生受体的相互作用对视黄酸应答元件的影响

吴乔,张晓坤

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(01): 136-141.

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孤生受体ＣＯＵＰ－ＴＦ和ｎｕｒ７７的功能及其作用机理仍未阐明．以ＤＮＡ瞬时转染和测定氯霉素乙酰转移酶（ＣＡＴ）活性，以及凝胶阻抑测定，分析ＣＯＵＰ－ＴＦ和ｎｕｒ７７的相互作用对视黄酸应答元件（ＲＡＲＥｓ）的影响．实验表明，ＣＯＵＰ－ＴＦ通过降低ＲＡＲＥｓ的基础活性，来增强ＲＡＲＥ对视黄酸（ＲＡ）的敏感性，而ｎｕｒ７７则拮抗ＣＯＵＰ－ＴＦ的作用．ｎｕｒ７７能够加强不同ＲＡＲＥｓ的转录活性，并且与ＲＡ的诱导无关．结果证实，ｎｕｒ７７通过与ＣＯＵＰ－ＴＦ的直接作用而对ＲＡＲＥｓ产生影响，从而抑制ＣＯＵＰ－ＴＦ与ＲＡＲＥｓ结合和ＣＯＵＰ－ＴＦ的转录活性

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红桂木凝集素的纯化与性质研究

张成禄,周素芳,吴耀生,邓勇,周德义

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(01): 142-144.

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红桂木（Ａｒｔｏｃａｒｐｕｓｌｉｎｇｎａｎｅｎｓｉｓ）、俗名胭脂，属桑科桂木属，为亚热带、热带植物．红桂木种子含丰富的红桂木凝集素（Ａｒｔｏｃａｒｐｕｓｌｉｎｇｎａｎｅｎｓｉｓｌｅｃｔｉｎ，ＡＬＬ），但迄今国内外均未见关于它的报道．我们采用Ｇａｌ－Ｓ...

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非水溶性甲胺磷降解酶的检测

钞亚鹏,赵永芳,王银善,成汇,谢裕敏

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(01): 145-147.

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甲胺磷农药是一种水溶性广谱、剧毒杀虫剂，化学名称：Ｏ，Ｓ－二甲基胺基硫代磷酸酯．目前，它在我国的生产和使用量已相当可观，并由此造成了严重的生态破坏和环境污染［１］．近几年，作者针对上述问题，结合国内外对甲胺磷代谢和有关酶知识缺乏了解的实际［２］，开展...

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在AOT/异辛烷反相胶束体系中酶法合成RGD前体二肽

陈育新,张学忠,陈松明,吴晓霞

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(01): 148-150.

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近十年来，在有机相中利用酶法合成短肽技术取得了长足的发展．但对于在有机相中合成含有亲水氨基酸的短肽，仍然是一个难题．利用反相胶束可以解决亲水氨基酸在有机相中的低溶解性问题［１］．Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ（ＲＧＤ）是近年来发现的一种具有粘合细胞作用的三肽...

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有机相中超声辐照对脂肪酶活性的影响

刘耘,宗敏华,黄秋月,李峰

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(01): 151-153.

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酶在有机相中的催化作用是８０年代以来酶工程学研究的热点之一．虽然酶在有机相中的催化反应有许多优点［１］，但在工业生产上的应用却很有限，这主要是有机相中的酶促反应速度太慢，反应周期太长之故．１９９１年Ｖｕｌｆｓｏｎ等报道了超声辐照对有机相中枯草蛋白酶催...

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erbB-2表达抑制与EGF对p21、p53基因转录活性的促进

姜琨,高琳,童坦君

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(01): 154-156.

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原癌基因ｅｒｂＢ－２的异常表达存在于人类多种肿瘤中，与肿瘤的发生、发展密切相关［１］．我们曾构建了反义ｅｒｂＢ－２逆转录病毒重组载体，将其转染存在该基因异常表达的人胃癌细胞系ＢＧＣ－８２３，达到了特异抑制ｅｒｂＢ－２表达、抑制瘤细胞恶性增殖并部分阻断...

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应用反义RNA技术降低肿瘤细胞的耐药性

季守平,吴英,侯春梅,由英,毛宁,章扬培

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(01): 157-158.

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细胞内的Ｏ６－甲基鸟嘌呤－ＤＮＡ甲基转移酶（ＭＧＭＴ）能够修复亚硝脲药物造成的ＤＮＡ损伤，阻止亚硝脲药物对肿瘤的杀伤作用，使细胞对亚硝脲药物产生耐药性．我们曾经构建了三个表达ＭＧＭＴ反义ＲＮＡ的逆转录病毒载体，导入对亚硝脲呈抗性的ＨｅＬａＳ３细胞，并...

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钙调素高表达对NRK细胞中DG-PKC和cAMP-PKA水平的影响

张伟,柳惠图,王端顺

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(01): 159-161.

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钙调素（ＣａＭ）作为Ｃａ２＋的主要受体，对细胞增殖起重要调节作用，而且在转化细胞中ＣａＭ的水平明显高于正常细胞．ｃＡＭＰ作为一种第二信使，起着将细胞外刺激信号转化为细胞内各种生理活动的媒介作用．蛋白激酶Ａ（ＰＫＡ）则是这种转化过程中的关键激酶．蛋白激...

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巯基修饰对中华仓鼠二氢叶酸还原酶的激活

范映辛,李震宇,周筠梅

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(01): 162-164.

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脊椎动物二氢叶酸还原酶（ＤＨＦＲ，Ｅ．Ｃ．１．５．１．３）可被多种因素激活，如中性无机盐［１］、蛋白质变性剂［１～４］、巯基修饰剂［１，４～７］等．来源于鸡肝［５］、猪肝［６］、鼠肝［７］及鼠Ｌ１２１０细胞［４］二氢叶酸还原酶的巯基修饰激活已有报道．...

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萌发百合花粉中一种低分子量鸟苷三磷酸酶的研究

任东涛,韩生成,阎隆飞

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(01): 165-168.

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研究表明，鸟苷三磷酸酶（ＧＴＰ酶）超家族是细胞中一类重要的酶类．其功能之一是水解ＧＴＰ或ＡＴＰ，提供细胞生存和运动所需要的能量，如已发现的具ＧＴＰ酶活性的微管相关马达蛋白、动蛋白和力蛋白等，在微管系统相关运动中提供所需的动力，其分子量一般较大，在１０...

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巨大芽孢杆菌青霉素酰化酶在枯草杆菌中的表达及其分离纯化

黄艳红,袁中一,王应睐

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(01): 169-171.

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青霉素酰化酶（ＰＧＡ）在医药工业起着重要的作用，它能够水解青霉素Ｇ产生６－氨基青霉烷酸（６－ＡＰＡ）和苯乙酸，６－ＡＰＡ是半合成青霉素的关键中间体．该酶广泛存在于各种微生物中如真菌和细菌中．国际上对Ｅ．ｃｏｌｉ、Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒｖｉｓｃｏｓｕ...

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大鼠肾硫酸基转移酶基因的cDNA克隆及序列分析

李向荣

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(01): 172-174.

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在许多激素、神经递质、药物和异生化合物的生物转化中，硫酸酯化反应是一重要的代谢途径［１，２］．这些化合物的硫酸酯化通常导致其生物活性的降低及尿排泄量的增加．硫酸酯化是把３′－磷酸腺苷－５′磷酸硫酸（ＰＡＰＳ）的活性硫酸根转移到某一底物（如Ｒ－ＯＨ）．...

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