中国生物化学与分子生物学报

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张锋任景怡陈红

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(1): 1-6.

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血管紧张素-(1-7)［angiotensin(1-7), Ang-(1-7) ］是肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin system, RAS)的新成员之一. 与血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)比较，Ang-(1-7)在高血压及动脉粥样硬化等疾病中发挥着心血管保护作用. 最新研究发现,Ang-(1-7)在平滑肌细胞增殖及迁移、内皮细胞功能、脂质代谢的这些动脉粥样硬化相关病理发展过程中起着重要作用，能够抑制动脉粥样硬化斑块的形成及加强斑块的稳定性. 本文就Ang-(1-7)与动脉粥样硬化疾病相关的最新研究进展进行综述，讨论Ang-(1-7)在动脉粥样硬化中的作用机制，也为Ang-(1-7)相关的ACE2/Ang -(1-7)/Mas轴作为未来临床治疗途径提供思路.

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Nox和氧化应激与糖尿病

吴垣辕刘东方

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(1): 7-12.

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Nox(phagocyte-like NADPH oxidase)是吞噬细胞NADPH氧化酶催化亚基 gp91phox的一系列同源物，广泛分布于体内多种非吞噬细胞.与NADPH氧化酶类似， Nox激活后可产生ROS，Nox产生的ROS是线粒体外ROS的主要来源.Nox产生的ROS，在控制新陈代谢，调节葡萄糖刺激的胰岛素分泌(glucose-stimulated insulin secretion，GSIS)，促使胰岛β细胞凋亡、胰岛功能障碍和糖尿病及其并发症的发生、发展中，发挥着重要作用.调节Nox的活性，改善机体内氧化应激水平，有望成为治疗糖尿病及其并发症的有效新途径.

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MicroRNA对动脉粥样硬化发生的调控作用及其临床应用

宋翠珠郭韧张毕奎

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(1): 13-18.

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MicroRNA（miRNA）是新发现的基因表达调控因子，由长约21～25个核苷酸的单链RNA分子构成，是非编码小RNA. 它可以通过与特定mRNA的3′非翻译区（3′- untranslated region，3′UTR）相结合,抑制mRNA编码蛋白质的翻译过程来调控基因表达. 动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)是一种慢性炎症性疾病，是多种心血管疾病的病理基础.最近,研究发现多个miRNA与动脉粥样硬化的发生发展有关, 且其在血液和体液中稳定存在并高度保守. 本文主要综述了miRNA对动脉粥样硬化进程的调节作用及以其为靶点的相关临床研究，旨在阐明miRNA成为动脉粥样硬化诊断与治疗新靶点的重要意义.

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假互补肽核酸及其分子生物学效应

季明辉欧青叶顾大勇

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(1): 19-24.

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假互补肽核酸（pseudocomplementary peptide nucleic acids，pcPNAs）是肽核酸（peptide nucleic acids，PNA）的一种衍生物，通过碱基修饰可以使pcPNAs 同时与双链DNA两条链中相应的靶序列结合；而在pcPNAs识别靶序列并结合时，pcPNAs自身两条链间由于空间位阻作用，不会自身互补结合. pcPNAs与DNA、RNA甚至肽核酸相比具有独特的杂交特性，因此具有非常广泛的分子生物学效应.本文就pcPNAs寡聚体的结构、与核酸杂交的特点及杂交模式，分子生物学效应以及应用等方面进行介绍.

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水生无脊椎动物中的免疫球蛋白超家族

王志平韩彦军

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(1): 25-32.

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适应性免疫一直被认为是脊椎动物特有的免疫机制，然而近年来许多研究表明，无脊椎动物体内也存在许多在结构或功能上与脊椎动物适应性免疫分子类似的免疫成分. 免疫球蛋白超家族是适应性免疫的重要组成部分，本文主要综述近年来关于水生无脊椎动物中肌联蛋白、唐氏综合症细胞黏着分子、特异性凝集素、几丁质结合蛋白和185/133基因家族以及含有V和C结构域的蛋白等免疫球蛋白超家族成员研究进展，这有助于深入理解无脊椎动物的免疫系统并揭示脊椎动物适应性免疫起源与进化.

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CDC25B蛋白亚细胞定位调控小鼠1-细胞期受精卵发育

肖建英刘超孙小涵于秉治

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(1): 33-41.

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为探讨小鼠细胞分裂周期25B（CDC25B）蛋白149位丝氨酸磷酸化状态对小鼠1 细胞期受精卵中CDC25B的亚细胞定位和发育的影响，应用定制的CDC25B-pS149位的磷酸化和非磷酸化抗体检测小鼠1-细胞期受精卵各细胞时期的磷酸化和非磷酸化状态；应用免疫荧光观察各期受精卵中CDC25B蛋白的定位情况；将质粒pEGFP-CDC25B -WT、pEGFP-CDC25B-S149A和pEGFP-CDC25B-S149D融合质粒及空载体质粒显微注射入 G1期受精卵中，观察不同显微注射组小鼠1-细胞期受精卵中外源性CDC25B蛋白亚细胞定位．结果显示,CDC25B-S149位丝氨酸在G1和S期被磷酸化，在G2和M期去磷酸化．1-细胞期受精卵从G2向M期的转换过程中，发生了CDC25B向细胞核区的移位，到2- 细胞初期，部分CDC25B蛋白又从细胞核回到细胞浆．实验结果提示，小鼠1-细胞期受精卵G2/M期转换过程中，CDC25B 的S149位点磷酸化修饰可能是对CDC25B细胞内定位及其活性的精确调节方式．

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RAN1基因过表达抑制嗜热四膜虫大核无丝分裂

梁海霞许静王伟

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(1): 42-48.

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Ran GTPase通过RanGTP/RanGDP循环的形式，参与调控多种细胞增殖方式：包括有丝分裂和减数分裂.敲减RAN1基因可导致嗜热四膜虫大核内微管组装紊乱，从而抑制大核无丝分裂.为进一步分析Ran1在无丝分裂中的功能，本研究将野生型Ran1以及模拟GTP（Ran1Q70L）和GDP（Ran1T25N）锁定形式的Ran1突变体在嗜热四膜虫中过量表达，均导致四膜虫细胞增殖速率下降，并引起大核无丝分裂异常，且这种核异常细胞比率与Ran1过表达量呈正相关.免疫荧光定位结果显示，过表达的HA-Ran1在整个细胞中弥散分布，破坏了正常的Ran1分布形式；而过表达的HA-Ran1Q70L明显集中在大核核膜和胞质中，HA-Ran1T25N则主要定位在大核和小核内，分别与Ran1GTP/Ran1GDP循环的辅助调节因子定位模式一致.以上结果表明，过表达Ran1及其突变体可能影响嗜热四膜虫细胞中正常的Ran1GTP/Ran1GDP循环，进而导致大核无丝分裂异常.

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BMP9经JNK激酶途径调控间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化

赵艳芳刘跃亮宋涛罗进勇

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(1): 49-55.

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为了证实JNK激酶在骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic proteins 9,BMP9) 诱导间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化中的作用,利用重组腺病毒将BMP9导入间充质干细胞C3H10T1/2. 通过碱性磷酸酶(ALP)活性测定、钙盐沉积实验、荧光素酶报告基因检测、Western印迹和组织化学染色等方法，检测BMP9是否可经JNK激酶途径调控间充质干细胞C3H10T1/2向成骨分化.动物实验验证在RNA沉默JNK蛋白激酶后，对BMP9诱导间充质干细胞C3H10T1/2向成骨分化的影响．结果发现，BMP9可以增强JNK 激酶的磷酸化；利用JNK抑制剂SP600125抑制JNK激酶活性后，BMP9诱导的间充质干细胞C3H10T1/2的早期成骨指标ALP活性和晚期指标钙盐沉积均受到抑制，而且经典SMAD信号的活化也相应受到抑制；RNA干扰沉默JNK基因表达后，同样也可抑制BMP9 诱导的C3H10T1/2细胞的ALP活性和裸鼠皮下异位成骨．因此表明，BMP9可活化JNK激酶途径从而诱导间充质干细胞C3H10T1/2向成骨分化．

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过表达RBP4抑制体外培养的猪前体脂肪细胞分化

程佳杨浩蒲蕾郑加盟张振宇杨公社

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(1): 56-62.

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为研究视黄醇结合蛋白4(retinol binding protein 4,RBP4)对猪前体脂肪细胞分化的影响，实验构建了RBP4重组腺病毒表达载体，包装并感染猪前体细胞，采用油红O染色和Real-time PCR等方法，检测了过表达RBP4对成脂分化的作用. 研究结果显示，重组腺病毒RBP4载体构建成功，转染猪前体脂肪细胞后，使RBP4的mRNA水平和蛋白水平分别增加了约400倍和20倍. 过表达RBP4能减少脂肪细胞的脂质积累，降低成脂关键基因过氧化物酶体增生物激活受体γ (peroxisome proliferator-activated receptor gamma, PPARγ)和脂肪酸结合蛋白2 (adipocyte protein 2, aP2)的表达. 结果表明，RBP4对猪前体脂肪细胞分化有抑制作用，为进一步研究RBP4对猪前体脂肪细胞分化的作用机制奠定基础.

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PXR基因外显子3甲基化与肠癌细胞对5氟尿嘧啶的耐药性相关

赵嵘胡丽孔繁强左爱军

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(1): 63-69.

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孕烷X受体（pregnane X receptor, PXR）可通过调节细胞色素P450同工酶3A4 -CYP3A4的表达而影响肿瘤细胞对化疗的敏感性，而其表达水平则会受到自身基因甲基化的影响.本文研究了结肠癌组织中pxr基因甲基化的分布情况及其对pxr, cyp3a4表达的影响，并在多种结肠癌细胞系中分析了pxr基因甲基化是否与5-氟尿嘧啶 (5-FU)耐药性相关.收集结肠癌病灶区、癌旁区及正常结肠组织样本，分别提取基因组DNA及RNA.PCR限制性酶切分析检测pxr基因外显子3甲基化；real-time PCR检测pxr及cyp3a4基因的表达.鉴定LOVO、LS180、LS174T、HT29、HCT116等5种结肠癌细胞中pxr外显子3甲基化与pxr, cyp3a4表达的相关性并分别筛选出PXR高/低表达的细胞株进行5-FU耐药性分析.结果显示，结肠癌病灶组织中pxr外显子3甲基化频率显著增加，伴有pxr,cyp3a4表达的增强.在结肠组织及结肠癌细胞系中,pxr与cyp3a4的表达均密切相关，且均与pxr甲基化程度相关.PXR高表达细胞株LS180对5-FU的耐药性显著升高，以siRNA分别下调pxr及cyp3a4的表达，均可增加LS180对5 -FU的敏感性.结果提示，pxr基因外显子3区甲基化与PXR及CYP3A4的高表达密切相关，并与结肠癌细胞对5-FU的抗药性相关.

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二甲双胍降低肥胖大鼠海马内PPARγ、IDE表达伴随TNF-α和Aβ42表达上调

杨思思姜腾张木勋

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(1): 70-75.

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二甲双胍（metformin，MET）常用于肥胖胰岛素抵抗患者改善胰岛素抵抗降低血糖，但MET可增加脑内β-淀粉肽（β-amyloid,Aβ）表达，目前机制不清.Aβ沉积作为阿尔茨海默病（Alzheimer's disease, AD)始发病理生理学改变，在AD中发挥重要作用. 为研究MET对脑内Aβ表达的影响及机制，采用饮食诱导肥胖大鼠模型（OB组）予MET灌胃4 W后（MET组），观察海马内Aβ42及相关因子肿瘤坏死因子α （TNF-α）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor γ, PPARγ)、胰岛素降解酶（insulin degrading enzyme, IDE）的表达. 结果显示，OB组大鼠血糖水平较对照组（CTL组）无明显差异，胰岛素含量明显升高（P<0.01), 并存在胰岛素抵抗；OB组大鼠海马内TNF-α、 Aβ42 水平较CTL组上调，PPARγ、IDE表达下降(P<0.05). MET组胰岛素及胰岛素抵抗均较OB组降低(P<0.05)，海马内TNF-α、Aβ42表达增加(P<0.01)；PPARγ，IDE表达较OB组减少(P<0.01). 上述结果提示，二甲双胍作为治疗肥胖胰岛素抵抗的一线用药，可改善胰岛素抵抗，但增加海马内炎性因子TNF-α表达、减少PPARγ水平，降低其调控IDE转录作用，使IDE表达减少，伴随Aβ42降解减少沉积增加，从而可能增加AD发病风险.

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布鲁氏菌ery操纵子突变株生物学特性分析

桂丹张辉孟仁孟茹张豫孙志华蒋攀文李天森陈创夫

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(1): 76-83.

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布鲁氏菌ery操纵子参与赤藓醇代谢. 赤藓醇能够促进布鲁氏菌的生长.为进一步研究布鲁氏菌引发宿主流产的分子机制，采用基因重组技术构建布鲁氏菌ery操纵子启动子缺失株（△ery），通过体内外实验探讨布鲁氏菌ery操纵子的生物学功能. 研究结果显示,获得了布鲁氏菌ery操纵子缺失株；布鲁氏菌ery操纵子缺失株侵染胚胎滋养层细胞脱落较亲本株明显下降；巨噬细胞CFU计数缺失株作用组和亲本株作用组差异显著（P<0.05）.试管凝集和虎红平板实验结果显示均出现凝集现象；检测血清中细胞因子IL-10和TNF-α的表达水平，△ery诱导机体产生的IL-10和TNF-α明显低于亲本株（P<0.05）.小鼠脾脏细菌CFU计数结果显示，△ery较亲本株毒力明显下降.本研究表明，布鲁氏菌ery操纵子启动子缺失株毒力较亲本株明显下降，为进一步揭示布鲁氏菌引起流产的致病机制提供了一定的理论依据.

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双向电泳结合质谱分析长双歧杆菌XY01分泌蛋白质图谱

尚伟邹大阳王思淼袁静廖祥儒

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(1): 84-90.

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菌体的分泌蛋白质在宿主和菌体的相互作用之间起着重要的作用. 本研究采用双向凝胶电泳的方法建立了长双歧杆菌XY01分泌蛋白质图谱，通过MALDI-TOF/TOF质谱鉴定和数据库搜索，对鉴定到的分泌蛋白进行了分析. 共检测到21个蛋白质点，成功鉴定18个蛋白质点，分别代表14个不同的蛋白质，等电点分布在4.5～7.0之间，分子质量分布在20 ～65 kD之间；通过COGs分类和功能分析，信号肽和细胞定位及KEGG代谢通路分析. 结果表明，这些蛋白质对菌体细胞壁/膜的形成、生物信号传导和物质代谢等起着重要作用. 研究结果为长双歧杆菌蛋白质组学和基因组学的研究提供了参考.

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陆生植物鲨烯合酶适应性进化正选择位点分析

刘镛吴耀生胡艳玲晁耐霞唐银琳蒋东

中国生物化学与分子生物学报. 2013, 29(1): 91-97.

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鲨烯合酶是三萜类皂苷生物合成途径中的关键酶，其活性的高低决定了三萜皂苷、植物甾醇等后续次生代谢物的含量．对鲨烯合酶进行正选择位点分析，可为识别重要的功能位点提供有意义的信息．本研究在克隆获得五加科三七、葫芦科绞股蓝鲨烯合酶cDNA的基础上，结合GenBank中所登载的植物鲨烯合酶cDNA序列信息，利用位点模型检测并分析了38种陆生植物鲨烯合酶的适应性进化．结果显示，进化上相对保守的鲨烯合酶受到正选择作用，检测到的21个正选择位点大部分集中于第2跨膜区及其两侧，其中189S、194S、196S、265I、389P、390T、408A、410R和414N等9 个位点很可能与鲨烯合酶的活性有关．本研究从分子进化角度为调控三萜类化合物的生物合成提供了一个新的思路．

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