中国生物化学与分子生物学报

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吴争, 刘佳, 张楠, 崔玉影, 邹伟

中国生物化学与分子生物学报. 2011, 27(1): 1-5.

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胞膜窖（caveolae）是细胞质膜内陷形成的凹陷小窝，参与细胞内多种重要的生理活动的调节.近年研究表明，电压门控钾离子通道、钙离子激活的电压门控钾离子通道和ATP敏感的钾离子通道等多种钾离子通道家族成员的功能调节与胞膜窖有关.本文概括介绍了胞膜窖和钾离子通道调节关系的研究进展．

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Hedgehog信号通路与脂肪细胞发育育

陈婧文, 汤其群

中国生物化学与分子生物学报. 2011, 27(1): 6-10.

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TGFβ、Wnt、FGF和Hedgehog（Hh)等信号通路是参与胚胎发育的关键信号通路.从果蝇到人类，Hh信号通路广泛存在并高度保守，在多种器官的发育过程中发挥重要作用. 脂肪细胞发育的过程包括多潜能干细胞向前脂肪细胞定向和脂肪细胞终末分化两个阶段.近年来,Hh信号通路在脂肪细胞发育过程中的作用逐渐成为研究热点.越来越多的研究表明,Hh信号通路抑制脂肪细胞发育.本文将对Hh信号通路抑制脂肪细胞发育的作用以及其发挥作用的阶段进行综述，并分析将该信号通路作为靶点治疗肥胖症及相关疾病的可行性.

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SRA的RNA和蛋白质均有转录辅激活功能

孙欢欢, 孙乐乐, 周鲁明, 庞秋香*

中国生物化学与分子生物学报. 2011, 27(1): 11-16.

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类固醇受体激活物（steroid receptor activator, SRA）是一种类固醇受体辅激活物.最初的研究认为,SRA只存在RNA形式，不存在蛋白质形式.但是后来的研究发现，SRA是在RNA和蛋白质两个水平上发挥功能的分子,其cDNA序列存在687 bp保守的核心区域，该核心区域对其发挥转录共激活活性是必需的.SRA的RNA形式主要参与核受体的转录共激活作用，其表达与乳腺癌的发生有很大关系，SRA的蛋白质形式（steroid receptor activator protein ，SRAP）也具有类似的功能.但是不同于RNA形式， SRAP可结合到特定基因的启动子区域，并起到阻遏物的作用.本文对SRA的特点、表达及功能等方面的最新研究进展及其可能的作用机制与作用形式进行概述.

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物种形成基因及其功能

邢光磊, 邢万金, 王昆, 王标

中国生物化学与分子生物学报. 2011, 27(1): 17-21.

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什么是物种?新物种是如何形成的？这些问题是生命科学研究的重大问题.物种的形成是在生殖隔离的基础上某些新的生物学性状的形成和保留，是生物进化的最基本过程，其实质是基因结构突变的积累与功能的分化. 地理隔离使群体中的基因不能交流,基因突变也会影响个体间交配趣向，从而造成交配隔离或者交配后杂合体的基因组不亲和、杂交不育甚至杂交不活，使不同的群体逐渐分化为新物种. 随着分子生物学与基因组学的飞速发展，进化生物学家已经发现一些与物种形成有关的基因—物种形成基因（speciation genes），鉴定并了解这些基因的功能,不仅能使我们在分子水平上理解新物种形成的实质和规律、而且对于我们突破种间屏障进行远缘杂交育种也有重要的理论指导意义.本文综述了目前对几个物种形成基因及其功能的研究进展,为该领域的进一步研究提供资料.

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几种热激蛋白在细胞凋亡信号通路中的调控作用

武斌, 李宗芸, 杨素春, 张迪

中国生物化学与分子生物学报. 2011, 27(1): 22-31.

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热激蛋白(heat shock proteins, HSPs)作为进化保守的蛋白家族之一，普遍存在于各种生物体中，并在生物体内发挥着重要的生理功能.大量的实验证据表明，热激蛋白与细胞凋亡密切相关，参与细胞凋亡信号通路的多个环节. 近年来有关该领域的研究已获得了重要的突破与进展.一方面，热激蛋白主要起着抑制细胞凋亡、促进细胞存活的作用；另一方面，某些热激蛋白又能够作为凋亡蛋白的分子伴侣，促进细胞凋亡，比如HSP70 能够激活DNase来促使细胞凋亡，线粒体内HSP60能够促进caspase依赖的细胞凋亡途径.本文在阐明细胞凋亡信号通路的基础上，综述了近年来几种不同热激蛋白家族（HSP90、 HSP70 、HSP60和小分子HSPs）在细胞凋亡调控中作用的研究进展，重点阐述了几种主要热激蛋白与细胞凋亡信号通路上相关因子的相互作用，并绘制了热激蛋白在细胞凋亡信号通路中的调控图，为进一步完善细胞凋亡调控网络研究提供一定的参考.

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重组新城疫病毒Anhinga株与TRAIL蛋白协同杀伤肿瘤细胞

郝景波, 王文飞, 吴云舟, 刘铭瑶, 高振秋, 张巧, 颜世君, 李德山

中国生物化学与分子生物学报. 2011, 27(1): 32-39.

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将新城疫病毒（Newscastle disease virus, NDV）Anhinga株的全长基因组cDNA克隆质粒、pTM1-L、pTM1-P、pTM1-NP表达质粒共转染稳定表达T7 RNA聚合酶的BSRT7/5细胞，得到拯救NDV病毒．通过PCR、酶切法、测序证明拯救病毒中存在引入的分子标签.通过血凝实验、蚀斑测定证明成功拯救病毒.并研究了该重组病毒对4种不同人肿瘤细胞的体外杀伤效果．首次证明重组Anhinga株对SMMC-7721细胞、A549细胞、HepG2细胞和SH-SY5Y 细胞均有杀伤作用．该重组病毒主要诱导SMMC-7721细胞和A549细胞凋亡，诱导HepG2细胞和SH-SY5Y细胞坏死．TNF家族成员TRAIL蛋白可以显著增强 NDV杀伤肿瘤细胞的效果.本实验为进一步研究重组NDV用于肿瘤治疗奠定基础．

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基于16S-23S rDNA 间隔区序列（ITS）、REP序列的基因指纹图谱及UPGMA聚类法的拟诺卡菌属分类方法

石楠张利平张晓

中国生物化学与分子生物学报. 2011, 27(1): 40-47.

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拟诺卡菌属（Nocardiopsis）是拟诺卡菌科（Nocardiopsaceae）的唯一属．该属内进行物种鉴别时通常是在多相分类方法基础上，以全基因组杂交同源性在70%以下的为不同物种，此为国际公认的定种标准；但在进行大量菌株的比对时操作比较复杂，于是多种基于DNA的基因图谱技术发展起来．本实验利用适宜引物，对拟诺卡菌属15株基准株基因组DNA的16S -23S rDNA 间隔区序列（ITS）和REP序列进行了扩增，获得了两种基因指纹图谱，同时根据UPGMA聚类法构建了相应的进化距离树图．结果表明，对于拟诺卡菌属中不同物种的区分，两种基因图谱技术的分辨力相当，均可以较好的呈现物种间差异，可以作为拟诺卡菌属菌株多相分类的组成部分，应用于物种水平的分类与鉴定．

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嗜中性粒细胞是人抵抗素表达的主要细胞

高振秋, 张巧, 徐彤, 田辉, 任桂萍, 李璐, 刘向宇, 李德山

中国生物化学与分子生物学报. 2011, 27(1): 48-54.

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抵抗素(resistin)是小鼠白色脂肪组织大量表达的富含半胱氨酸的分泌型蛋白.近年研究发现,人与啮齿类动物的抵抗素组织表达分布存在很大差异．小鼠抵抗素主要在白色脂肪组织表达，而人抵抗素主要在单核细胞/巨噬细胞表达，且在骨髓组织中大量表达，但目前骨髓中的细胞定位还不清楚．本研究的目的是明确成人骨髓及外周血白细胞中抵抗素表达细胞的类型．免疫荧光法检测骨髓中抵抗素表达细胞，结果显示,抵抗素主要表达在细胞核呈杆状和分叶核状的成熟粒细胞中，其中杆状核粒细胞表达较高，分叶核粒细胞表达减弱．Anti-hresistin IgG-Biotin-PE单色荧光流式细胞术分选外周血白细胞中抵抗素表达细胞后经瑞氏化学染色，结果显示,抵抗素表达细胞主要为杆状和分叶核状的嗜中性粒细胞，还有少量嗜酸性粒细胞，且抵抗素蛋白分布在细胞质中. RT-qPCR结果在RNA水平上证明, 人抵抗素在嗜中性粒细胞中大量表达．Anti-hresistin IgG-FITC和anti- HNL IgG-Biotin-PE 双色荧光流式细胞术进一步证明,抵抗素的主要表达细胞为成熟的嗜中性粒细胞．嗜中性粒细胞在机体免疫防御中起重要作用，人骨髓及外周血中抵抗素主要在成熟嗜中性粒细胞中表达，这一研究结论为人抵抗素与炎症反应的关联性及其功能的进一步研究奠定了基础.

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鸡akirin同源基因的克隆与组织表达分析

满朝来, 李响, 曹敏

中国生物化学与分子生物学报. 2011, 27(1): 55-61.

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Akirin是最近被发现的，在果蝇和小鼠的免疫炎症反应和调控肌肉发生再生中起着重要作用的新基因．本实验采用电子克隆技术成功克隆获得了海兰褐鸡Akirin基因的全长编码序列.利用生物信息学方法对Akirin 基因进行序列分析和预测，并利用半定量RT-PCR技术对雏鸡和成鸡的 Akirin基因进行组织表达谱分析．结果表明,鸡Akirin同源基因可读框长 576 bp，进化保守高，编码蛋白的氨基酸序列存在PFAM、RGS、TOP1Bc、 UTG、HMG和low complexity sequence几种结构域，和蛋白激酶C磷酸化位点、酪氨酸激酶磷酸化位点和 N端豆蔻酰化位点3个功能位点，同时在鸡 Akirin的3′ 非翻译区预测到1个microRNA靶位点．Akirin在鸡的心、脾、脑等多种组织中广泛表达，推测鸡Akirin基因是一个可能具有多种功能作用的新基因．本研究将为深入研究鸡Akirin基因功能作用奠定基础．

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条斑紫菜藻红、藻蓝蛋白α和β亚基基因序列测定及分析

蔡春尔, 贾睿, 李春霞, 陆秀芬, 张璐, 何培民

中国生物化学与分子生物学报. 2011, 27(1): 62-68.

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为了获得江苏吕泗的条斑紫菜藻红蛋白α(Pea)和β(Peb)亚基、藻蓝蛋白α(Pca)和β(Pcb)亚基基因的DNA序列，本文对其基因进行了克隆、序列测定及分析.根据已发表的基因序列(DQ666487.1)设计引物，对提取自条斑紫菜叶状体的DNA进行PCR和电泳鉴定，产物经测序证实获得藻红蛋白序列1 357 bp (HM008263.1)和藻蓝蛋白序列1 335 bp (HM008262.1).上述两段序列与已报道的条斑紫菜相关序列(DQ666487.1)同源性均为99％，与其它几种紫菜相关序列同源性为88％～98％.两段序列均采用多顺反子转录策略，排布顺序为5′Untranslated Regions(UTR)- Peb -间隔区- Pea -3 ′UTR 和 5′UTR- Pcb -间隔区- Pca -3′UTR.文中对基因翻译所得氨基酸序列做了理化参数、功能位点及空间构型的预测.基于对序列开放阅读框、启动子、Shine-Dalgarno (SD)序列的分析，本文对条斑紫菜分类地位进行了讨论.

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甘蓝型油菜BnCOP1基因编码区全长cDNA的克隆与功能研究

彭丹, 周波, 赵小英, 黄星群, 贺热情, 宋丽丽, 唐冬英, 刘选明

中国生物化学与分子生物学报. 2011, 27(1): 69-77.

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通过分析拟南芥、豌豆、番茄和水稻的COP1 (constitutively photomorphogenic 1) 的cDNA序列, 运用RT-PCR和改进的基因组步行 (genome walking) 技术相结合的方法, 首次从甘蓝型油菜中克隆到油菜 BnCOP1编码区cDNA的全长序列, 其全长2 034 bp, 编码677个氨基酸. 同源性分析表明, 其编码的氨基酸序列与拟南芥的同源性高达94%. 对BnCOP1编码序列（cDNA）演绎出的氨基酸序列分析表明, 其编码的蛋白包含有N端的环形锌指结合域(ring finger zinc binding domain, RING)、中间的卷曲螺旋形结构域(coiled-coil domain, coiled-coil ), 7个C端的WD-40重复序列(WD-40 repeats, WD-40)的功能域. 半定量RT-PCR和实时荧光定量PCR 分析该基因在油菜中的表达模式,结果显示, BnCOP1在甘蓝型油菜的各个组织器官中均有表达,其中在花中的表达明显高于在根、叶、茎、果荚及子叶和胚轴中,暗示该蛋白可能与开花途径相关. 过表达BnCOP1的转基因拟南芥植株在高度、主茎的直径和叶片大小上都呈现出比野生型弱小的表型, 表明BnCOP1抑制了拟南芥光形态建成从而影响了植物的生长发育.

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过表达bFGF促进大鼠急性缺血心肌的毛细血管生成

王雅梅, 刘冰, 孙丽翠, 祁雅慧, 司杨, 闫豫东, 郑少鹏

中国生物化学与分子生物学报. 2011, 27(1): 78-83.

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研究过表达人碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor, bFGF）在大鼠急性心肌缺血模型中的表达及其对心肌血管再生的影响. 将含人bFGF质粒pcDNA/b转染人脐带静脉内皮细胞（HUVEC），进行MTT检测. pcDNA/b转染人肾细胞293细胞系，进行G418稳定筛选， Western 印迹检测.建立大鼠急性心肌梗死模型，分别将生理盐水、空质粒 pcDNA3.1(+)和pcDNA/b分3点注射于梗死交界处心肌内4周后取材，做常规 HE 染色和Masson 染色，测量各组微血管数量和梗死面积. 经免疫组织化学染色鉴定和电镜观察,过表达外源bFGF可以促进HUVEC（细胞）生长； pcDNA/b能在293细胞中高效表达外源bFGF基因. pcDNA/b注射组梗死交界处可见大量新生血管，毛细血管总数明显大于对照组，梗死面积明显小于对照组. pcDNA/b组在梗死交界区有bFGF阳性表达.电镜观察显示,在梗死交界处心肌细胞间有毛细血管增生，分化成2个血管腔.本实验证明,过表达bFGF 具有促进大鼠急性缺血心肌的毛细血管生成的作用，为bFGF基因治疗缺血性心肌病的研究提供实验基础.

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过表达人端粒酶逆转录酶促进人脐静脉血管内皮细胞增殖

林若芸, 黎丹戎, 钟艳平, 王琪, 李力

中国生物化学与分子生物学报. 2011, 27(1): 84-89.

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人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase, hTERT)是端粒酶的催化亚基，专司在染色体末端添加端粒重复序列，与维持端粒长度与功能有关.为探索hTERT的生物学功能，本研究以人脐静脉血管内皮细胞(hUVEC)为研究对象，观察了hTERT基因过表达对hUVEC细胞增殖作用和端粒酶活性的影响.利用构建的pEGFP-C1-hTERT融合基因表达载体转染hUVEC，结果显示,转染后的细胞可见GFP表达，提示转染细胞有GFP- hTERT融合蛋白表达.RT-PCR、免疫组化和TRAP-PCR-ELISA 法显示，与未转染细胞比较，转染细胞的hTERT mRNA、蛋白质表达水平明显升高，端粒酶活性明显增强.MTT实验显示，转染hTERT 基因的细胞在72 h后细胞增殖速率明显大于未转染细胞及空载体转染细胞.结果提示,过表达hTERT基因可提高血管内皮细胞端粒酶的活性和增殖能力.实验结果证明，端粒酶活性与细胞增殖活性密切相关.

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黑豆种子中一种耐热型胰蛋白酶抑制剂的分离及性质表征

邵彪, 汪少芸, 饶平凡

中国生物化学与分子生物学报. 2011, 27(1): 90-95.

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应用硫酸铵分级沉降、弱阳交换色谱CM-Sephadex C-50、凝胶过滤色谱Sephacryl S-200HR、强阳离子高效液相色谱POROS HS-20，从黑豆种子中分离纯化一种耐热型蛋白酶抑制剂，命名为TSTI.该蛋白的Ｎ末端序列为DEYSKPCCDLCMCTRRCPPQ，与豆科植物Bowman-Birk型胰蛋白酶抑制剂具有高度同源性，推测其属于Bowman-Birk型胰蛋白酶抑制剂.SDS－PAGE和IEF 测出TSTI分子量和等电点分别为23.9 kD 和6.2.TSTI对胰蛋白酶有很强的抑制作用，当二者摩尔比达到1时，胰蛋白酶活力被完全抑制.此外，该蛋白酶抑制剂具有很强的热稳定性和pH稳定性，在高达100 ℃温度及pH2-12 范围内处理，其活性均不会受到太大影响.TSTI对植物致病菌苹果轮纹病菌、瓜果腐霉病菌、白菜黑斑病菌、甜瓜枯萎病菌和葡萄灰霉病菌具有抑制作用.

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上槽泄露导致双向电泳凝胶高分子量区域垂直拖尾

沈立明, 兰子尧, 任小虎, 刘琼

中国生物化学与分子生物学报. 2011, 27(1): 96-100.

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本文探讨了电泳系统上槽泄露引起双向电泳凝胶蛋白点纵向拖尾问题.上槽泄露导致上槽SDS损耗，电流增大以及局部温度升高从而导致双向电泳凝胶高分子量区域蛋白点纵向拖尾.上槽泄露与上槽设计存在不足，使用者不适当操作以及上槽维护不良有关.对Ettan DALT six电泳系统而言，一旦出现上槽泄漏问题，建议更换改良后的新版上槽.电泳过程中应避免上槽泄露，SDS的不足或损耗，电流过大和电泳液温度过高.

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