中国生物化学与分子生物学报

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桑伟伟, 张红胜

中国生物化学与分子生物学报. 2010, 26(11): 975-980.

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Tat蛋白在HIV的转录复制中起重要作用.它能反式激活HIV的转录,促进HIV长末端重复序列(HIV LTR)的转录和延长. Tat蛋白是去乙酰化酶SIRT1的一种重要底物.Tat的乙酰化与非乙酰化状态在激活转录过程中受高度精密调控.如果Tat乙酰化状态在转录过程中受到干扰，随后其促使的HIV转录也将受到干扰.近来发现,组蛋白去乙酰化酶SIRT1在Tat蛋白介导的反式激活HIV转录过程中起重要的调控作用.SIRT1能对乙酰化的Tat进行去乙酰化，使其能在促使HIV转录的过程中循环利用.同时Tat与SIRT1的结合也会使核转录因子NF-κB的p65亚基处于超乙酰化状态，致使病毒基因组表达.研究SIRT1与Tat的相互关系为治疗HIV提供了新的方向.

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影响动物细胞有丝分裂方向的因素应力纤维在纺锤体定位中的作用

赵磊, 杨春, 庄逢源

中国生物化学与分子生物学报. 2010, 26(11): 981-987.

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细胞的有丝分裂与细胞的增殖、分化及胚胎发育、组织器官形成、损伤组织的修复和疾病的发生有关.各种物理因素、细胞所处的微环境(包括细胞外基质、细胞粘附)等，以及胞内的多种信号因子均能对细胞的有丝分裂方向产生影响.大量文献表明，应力纤维的排列为有丝分裂中心粒分离和定位提供轨道，最终影响纺锤体和有丝分裂的定向.本实验室的micro-pattern和静态单轴拉伸应变实验进一步提示了应力纤维的排布方式是影响有丝分裂方向的重要因素.本文围绕着应力纤维的排布对有丝分裂方向的影响这一研究观点，综述分析了整合素介导的细胞外粘附-黏着斑的组装-应力纤维的排布-有丝分裂纺锤体定向等一系列影响贴壁哺乳动物细胞有丝分裂定向的过程.并根据酵母模型,对哺乳动物细胞有丝分裂定向过程的分子机制进行了介绍；在该过程中肌球蛋白、动力蛋白和kar9等蛋白质起到重要作用.

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细胞自噬与肿瘤发生的关系

王宠, 张萍, 朱卫国

中国生物化学与分子生物学报. 2010, 26(11): 988-997.

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细胞自噬（autophagy）是将细胞内受损、变性或衰老的蛋白质以及细胞器运输到溶酶体进行消化降解的过程.正常生理情况下，细胞自噬利于细胞保持自稳状态；在发生应激时，细胞自噬防止有毒或致癌的损伤蛋白质和细胞器的累积，抑制细胞癌变；然而肿瘤一旦形成，细胞自噬为癌细胞提供更丰富的营养，促进肿瘤生长.因此，在肿瘤发生发展的过程中，细胞自噬的作用具有两面性.尽管大多数抑癌蛋白可以激活细胞自噬这一结论被广泛接受，但p53作为重要的抑癌蛋白，在细胞核和细胞浆不同的亚细胞定位中对细胞自噬有着截然相反的调控.对于细胞自噬和癌症发生之间关系亟待深入的研究，这将会有助于人类更好地认识并最终攻克癌症.本文将针对细胞自噬与肿瘤发生过程中主要的信号调节通路展开介绍.

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周期节律与肿瘤关系的分子机理

敖翔, 李淑晶, 伍会健

中国生物化学与分子生物学报. 2010, 26(11): 998-1002.

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周期节律是由内在时钟系统介导的多重生物过程的周期循环.周期节律系统是由位于大脑的视神经交叉上核的中央时钟系统和位于外周的几乎存在于所有细胞的外周时钟系统组成的.中央时钟与外周时钟都能够对生物体的生理过程进行调控，如激素的分泌、能量代谢、细胞增殖、DNA损伤修复等.而周期节律基因的表达失调,对其下游靶基因包括细胞周期相关基因的表达，以及细胞抗凋亡能力等产生重要的影响.而这一结果会导致细胞增殖加速及基因组不稳定，并可能促进肿瘤的发生.许多实验证据表明，肿瘤是一种节律相关的生理失调，在许多肿瘤中都发现周期节律遭到破坏，如乳腺癌、前列腺癌、子宫内膜癌等.本文将从周期节律对细胞周期进程及对细胞DNA损伤修复的影响来讨论分子水平上细胞的周期节律与肿瘤发生发展的关系.

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微细胞介导人14号染色体自A9细胞转移至DT40细胞

谢发展, 俞慧清, 陈建泉, 成国祥

中国生物化学与分子生物学报. 2010, 26(11): 1003-1008.

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为了获得含人14号染色体的DT40细胞，用于人抗体基因的表达研究.本研究利用微细胞介导的染色体转移技术，将A9细胞中的人14号染色体转移至DT40细胞中.首先，摸索秋水仙胺诱导A9细胞微核形成最佳浓度与最佳时间，以终浓度为10 mg/mL的细胞松驰素B破坏细胞骨架，离心分离微细胞，获得的微细胞依次经8 μm、5 μm、3 μm滤膜过滤后与受体细胞DT40融合，细胞铺板后加入G418筛选.然后，对长出的抗性克隆进行基因组DNA检测及FISH杂交，分析人14号染色体在DT40杂合细胞克隆中的存在情况.结果显示，成功获得含人14号染色体的DT40(#14)细胞，三轮试验共获得抗性克隆30个，人14号染色体有效转移率为1×10-6.实验结果表明，人14号染色体完整的自A9细胞转移至DT40细胞，获得的DT40(#14)细胞可用于制备含人抗体基因的人类人工染色体，用于人抗体基因的表达研究.

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全反式维甲酸下调肝癌细胞HepG2内AFP结合蛋白的表达

蒋卫, 李朝英, 王珊珊, 李慧, 刘忠民, 张超, 李刚

中国生物化学与分子生物学报. 2010, 26(11): 1009-1015.

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当成人肝细胞发生癌变,甲胎蛋白(alpha-fetoprotein，AFP)在血清中的含量会急剧增加.AFP可与细胞表面AFP结合蛋白（AFP binding protein, ABP）结合促使细胞增殖分化.全反式维甲酸(al1-trans retinoic acid, ATRA)通过与特异性维甲酸受体(retinoic acid receptor, RAR)结合发挥抑制肿瘤生长的作用.Western印迹检测肝癌细胞HepG2和HLE中ABP的表达.结果显示,ABP在HepG2细胞中高表达,在HLE细胞中无明显表达.这一结果与2种细胞AFP的表达情况一致.激光扫描共聚焦显微镜定位分析显示,ABP存在于HepG2细胞胞膜和胞浆，用80 μmol/L ATRA处理HepG2细胞4 h,可导致RAR入核增加.用不同浓度（20~160 μmol/L）ATRA处理HepG2细胞后培养36 h. Western印迹结果表明,细胞ABP的表达随着ATRA浓度的增高而越少,ATRA浓度达80 μmol/L时,HepG2细胞的ABP表达减少,ATRA浓度为160 μmol/L时,ABP几乎无表达; 加入80 μmol/L ATRA后,随着作用时间延长,HepG2细胞ABP表达逐渐减少,当作用时间为12 h时,ABP表达明显减少.结果表明,ABP的表达对ATRA的反应呈剂量和时间依赖性.免疫共沉淀结果表明,AFP、ABP及RAR这3种蛋白质具有互相结合的作用.这些结果为进一步深入研究AFP在肝癌发生过程中的作用机制提供了依据.

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青年羊驼耳部和背部皮肤组织中miRNA差异表达研究

赫晓燕, 郝欢庆, 刘丹丹, 范瑞文, 曹靖, 朱芷葳, 董彦君, 邢海权

中国生物化学与分子生物学报. 2010, 26(11): 1016-1022.

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羊驼是毛用型经济动物，其耳部和背部的毛发品质和生长速度存在差异.MicroRNA (miRNA) 是新发现的一类在转录后水平调控基因表达的非编码RNA分子，为比较miRNA在羊驼耳部和背部皮肤的表达差异，从而探讨miRNA在羊驼皮肤和毛囊发育过程中的调控作用，本实验提取羊驼皮肤总RNA，制备了羊驼皮肤miRNA芯片，通过与Affymetrix多物种miRNA芯片跨物种杂交对耳部和背部皮肤的miRNA进行筛选，并通过实时荧光定量PCR进行了验证，同时利用在线生物信息软件预测miRNA靶基因. 结果显示,羊驼耳部和背部皮肤中高表达差异2倍以上的miRNA有39个，实时荧光定量PCR检测let-7b和miR-24在2个部位皮肤中的差异表达量与miRNA基因芯片结果一致；预测到let-7b和miR-24的靶基因中包含有与毛囊生长发育和毛发品质相关的基因，提示这些miRNA可能参与羊驼皮肤和毛囊的生长发育、更新以及毛发品质的调控.

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反复饥饿对大鼠空间学习及海马神经元骨架蛋白磷酸化的影响

王群, 胡志红, 王建枝, 田青

中国生物化学与分子生物学报. 2010, 26(11): 1023-1027.

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为了进一步研究饥饿处理对大鼠空间学习、记忆的影响，通过饥饿2 d、恢复喂食3 d的方法，连续60 d，用Morris水迷宫检测大鼠的空间学习能力.免疫印迹检测神经元骨架蛋白—tau蛋白和神经细丝（Neurofilament, NF）磷酸化水平与分布变化，以及骨架蛋白磷酸化调节的关键酯酶磷酸酯酶PP-2A催化亚单位蛋白水平与分布.反复饥饿的大鼠空间学习能力明显差于对照组（P<0.05）， tau蛋白在Ser199/202位点和Ser396/404位点发生了过度磷酸化（P<0.05），NF磷酸化水平无明显改变，PP-2A的催化亚单位蛋白水平下调（P<0.05）.反复饥饿可以引起大鼠出现空间学习记忆障碍，下调PP-2A催化亚单位蛋白水平，PP-2A活性抑制及tau蛋白发生过度磷酸化.

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外源茉莉酸甲酯通过调节相关基因表达诱导光温敏雄性不育小麦BS366离体花药开裂

向群, 张立平, 赵昌平, 唐忠辉, 徐小芹, 苑少华

中国生物化学与分子生物学报. 2010, 26(11): 1028-1035.

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植物育性与花药开裂性状相关. 茉莉酮酸甲酯(methyl jasmonic acid, MeJA)是一种植物激素，广泛参与植物的胁迫应答和生长发育过程. 植物体内存在6类基因所编码的酶共同维持茉莉酮酸(JA)代谢途径的畅通，并与植物花药开裂有关. 本研究以小麦光温敏不育系BS366为材料，于抽穗期—开花期进行穗部离体48 h的 MeJA外源处理. 分别于0、1、3、6、12、24和48 h时间点收集花药并进行RNA提取. 通过半定量RT-PCR分析发现,在内参基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3- phosphate dehydrogenase, GAPDH)表达基本一致的情况下，BS366的JA代谢途径中参与调控的6种基因均存在不同程度的诱导表达. 经MeJA 的48 h处理后的离体花药开裂程度明显增大. 本研究获得了BS366离体环境下JA代谢途径基因经MeJA诱导后表达水平的概况，并为诱导BS366花药开裂及人工调控育性，达到高效制种及繁种的目的提供了初步的理论依据.

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尖吻蝮蛇毒中一种具有抗补体活性金属蛋白酶的分离纯化及部分性质鉴定

汪晗, 孙黔云

中国生物化学与分子生物学报. 2010, 26(11): 1036-1043.

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通过离子交换和凝胶过滤层析从湖南产尖吻蝮蛇毒中分离纯化出1个抗补体活性蛋白AACI-I.还原与非还原SDS-PAGE测得其表观分子质量分别为26 kD和22 kD，等电聚焦电泳显示其等电点为pH 8.9.它能抑制补体经典途径和替代途径的溶血，且该作用具有量效和时效性.AACI-I可依次水解纤维蛋白原的Aα、Bβ、γ链，此活性能被 EDTA、EGTA和1，10-phenanthroline完全抑制，不受PMSF、SBTI作用影响.同时,该蛋白无精氨酸酯酶活性，提示AACI-I是金属蛋白酶. 另外，AACI-I具有azocasein水解活性和水肿活性，当0.01 μg/g AACI-I注射小鼠足趾，其诱导肿胀率约为（14.06±6.78）%，而小鼠皮下注射2.6 μg/g AACI-Ⅰ后没有发现其有出血毒活性.

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慢病毒载体pITA-HBP1的构建及感染效率的测定

陈月萍, 杜毅聪, 董威, 王维斌, 张晓伟

中国生物化学与分子生物学报. 2010, 26(11): 1044-1049.

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慢病毒载体是目前基因治疗中研究较多的载体, 与通常使用的逆转录病毒载体和腺病毒载体比较, 它有感染非分裂期细胞及容纳大片段外源性目的基因等优点.本文应用基因重组的方法，构建了1种新型的慢病毒载体，并将转录因子HBP1基因插入到这一载体上，成为pITA-HBP1.检测其在人的肿瘤细胞和正常细胞中的转染效率，发现转染效率明显增加，Western 印迹证实外源基因得到高效表达.这一结果，对今后实验室提高基因的转染效率、表达水平，以及研究基因的表达调控，都提供了重要的技术方案.

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利用酵母双杂交技术筛选与AtbZIP1相互作用的蛋白质

孙晓丽, 段小红, 才华, 李勇, 柏锡, 纪巍, 季佐军, 朱延明

中国生物化学与分子生物学报. 2010, 26(11): 1050-1058.

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碱性亮氨酸拉链bZIP类转录因子在植物的生长发育、光形态建成、光信号传导及非生物胁迫反应中发挥重要的作用. 为研究AtbZIP1基因的作用机理，本研究首先验证了该基因的自激活转录活性，通过缺失突变确定了该转录因子的转录激活结构域；以AtbZIP1缺失突变体AtbZ3为诱饵蛋白，采用Matchmaker Gold Yeast Two-Hybrid System (Clonetch)，共筛选获得5个与诱饵蛋白相互作用的蛋白质；并通过AbA (Aureobasidin A)抗生素标记基因，His营养缺陷和LacZ蓝白斑检测验证了阳性克隆. 亚细胞定位分析发现,AtbZIP1蛋白除了定位于细胞核外，还定位于叶绿体细胞. 通过分析这些靶蛋白的已知功能，为研究AtbZIP1蛋白的未知生物学功能提供重要信息.

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CCL2促进肝再生中细胞外基质的形成

邢雪琨, 张富春, 马纪, 徐存拴

中国生物化学与分子生物学报. 2010, 26(11): 1059-1067.

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为阐明CC趋化因子配体2〔chemokine （C-C motif） ligand 2，CCL2〕对肝再生（liver regeneration，LR）的影响，构建CCL2的表达载体CCL2-N1及其干涉载体CCL2 (255). 为确定合适的转基因时间，观测内外源性CCL2的表达高峰. Rat Genome 230 2.0芯片、实时定量PCR和Western印迹显示,内源性CCL2的表达高峰在部分肝切除（partial hepatectomy，PH）后72 h.与CCL2融合表达的绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）的表达和实时定量PCR显示,外源性CCL2的表达高峰在转基因后的24 h. 所以，为使内源性和外源性CCL2的作用叠加，选择PH后48 h进行转基因. 此时将CCL2-N1质粒转入大鼠体内，发现转基因后大鼠肝系数、增殖细胞核抗原（PCNA）表达量显著高于对照，透明质酸和层粘连蛋白含量显著升高. 相反，干涉质粒CCL2 (255)能降低肝系数，减少PCNA表达量，并且Ⅲ型前胶原肽、Ⅳ型胶原、透明质酸和层粘连蛋白含量与对照相比,有显著或极显著降低. 综上所述，CCL2是肝再生相关基因，它能提高肝系数，可能通过调节细胞外基质（extracellular matrix，ECM）合成而促进肝脏再生.

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标记减数分裂遗传重组的免疫荧光染色方法

蔡欣

中国生物化学与分子生物学报. 2010, 26(11): 1068-1071.

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联会复合体免疫荧光技术在全基因减数分裂遗传重组研究中具有精确和直观的优势.本研究通过免疫荧光染色方法制备小鼠精母细胞联会复合体, 研究其形态组成与遗传重组特征，展示雄性小鼠遗传重组图谱并分析其重组位点(MLH1位点)的分布特征.4只小鼠共145个精母细胞在平均每个细胞的MLH1位点数为23.3±2.4；在常染色体联会复合体中, 未发现有3个MLH1位点的联会复合体, 具有1个MLH1位点的联会复合体较多, 平均为14.2；无XY联会复合体的细胞占所有细胞的4.1%, XY联会复合体上有MLH1位点的细胞占30.2%；联会复合体上有裂缝的细胞占0.7%.通过联会复合体免疫荧光染色可以清晰地分辨出联会复合体(红色)、着丝粒(蓝色)和MLH1位点(绿色), 是遗传重组分析的一种强有力工具.

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深切怀念郑集先生

金由辛

中国生物化学与分子生物学报. 2010, 26(11): 1072-1073.

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7月28日收到南京大学朱长生教授电话，郑集先生病危。我心中为之一惊，但又心存一丝希望。希望他能像以前一样，转危为安。因为我是多么希望他能出现在8月23日在南京召开的《中国生物化学与分子生物学会第十届全国会员代表大会暨全国学术会议》上，全国生化与分子生物学家和同行们也都心怀敬意，期待着在这个盛会上为这位111岁老人祝寿。很不幸，7月29日我得知郑先生已离我们而去。当我满怀悲痛，在追悼会上听着郑先生的家人、肖信生教授、作为郑先生学生代表的中科院上海生科院生化与细胞所所长与国家千人计划入选者林安宁教授等人的悼辞时；在我最后一次看着可敬的老人那清瘦的脸庞，向他鞠躬时，追随郑先生学习和生活的场景顿时在我脑海中一幕幕闪过。这里，我特写此文，以深切怀念郑集先生，寄托学生对先生的无限哀思。　　我第一次知道郑先生，是我在高考前姐姐给我介绍南京大学情况的时候。姐姐讲，南京大学生物系有2个新兴的尖端学科，即生物物理学和生物化学。它们都是边缘科学。生物化学是生物学与化学间的边缘科学。但生物物理专业太尖端了，因此是下无立锥之地。而生化不同，它与医学、制药、农业等都有关系，因此非常有发展前途。当时全国只有3个大学被高等教育部批准开办生化专业，即北大、南大和复旦。南京大学生化专业有我国生化界的元老，一级教授郑集。可以说，我是冲着郑先生的大名，来到了南京大学生化专业的。 1961年秋入学后不久，南大生化教研组派到我们班当班主任的徐贤秀老师通知我们：郑集教授要见我们这些生化专业的新生。私下里她讲，郑先生对反右时期的知识分子政策有看法，因此很久都不愿与学生做这种交流活动。因为1960年底周总理在广州会议上讲到了要落实知识分子政策，郑先生心情舒畅了，所以主动提出要见你们。 .......

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