中国生物化学与分子生物学报

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许卫东,程振起,阎隆飞

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(03): 257-261.

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利用pUC19我们构建了高粱叶绿体基因文库,从库中我们筛选到4个含psbD基因的阳性克隆。Southern分析证明重组质粒由pUC19和高梁叶绿体DNA的Pst10片段组成。通过8种限制性内切酶酶切分析和Southern分析测出了重组质粒pSD_2Ⅱ的物理图谱,并确定了高梁psbD基因在重组质粒中的精确位置。通过构建pSAC_2质粒,可以将Pst10片段中非psbD部分去除,使psbD可以直接用EcoRⅠ从pSAC_2上切下,为研究高粱psbD基因的表达和序列分析奠定了基础。

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Ro、La的组成和相互关系

赵晓瑜,静天玉,刘建荣,王俊丽,原冀平

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(03): 262-266.

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本文证明,猪脾Ro和La不仅分布在细胞质中,也存在于细胞核内。Ro的抗原性多肽为60kD,La为45—47kD(二条)、26—29kD(三条)、Ro和La在细胞质中以复合形式存在,而在细胞核内则相互独立。

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亲和层析法分离人心脏特异性肌钙蛋白Ⅰ(CSTnⅠ)

唐新,李祥春,杨希震

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(03): 267-271.

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在Ca~(2+)存在下,肌钙蛋白C(TnC)和肌钙蛋白Ⅰ(TnⅠ)可于高浓度的尿素溶液中形成稳定的复合体,而该复合体又能被EGTA解离。并且TnC和TnⅠ的Ca~(2+)依赖性结合反应没有种间或者肌肉类型间的特异性。将提纯的兔快肌TnC和活化的琼脂糖凝胶进行偶联,制备TnC-Sepharose 4B亲和层析柱,用来从人心肌中直接提纯心脏特异性肌钙蛋白Ⅰ(CSTnⅠ)。SDS-PAGE测得其分子量为29kD左右。对其氨基酸组成亦进行了分析。

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简讯

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(03): 271-271.

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<正> 美国《化学文摘》(CA)是目前国际上化学化工领域最权威的大型检索工具。除此之外,其摘引的期刊还涉及物理、生物、医药、工程技术等领域。我国(含台湾)自1981——1990年中共有83种期刊先后被列入“CA千种表”中。

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HbF-新晋[~Gy~I119(GH2)Gly→Arg]一种新的不稳定胎儿血红蛋白变异体

光纬,马梅荪,钱渡

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(03): 272-277.

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1988年我室又发现一种新的慢泳异常胎儿血红蛋白(HbF)。先证者为一健康汉族女婴。醋纤膜电泳(pH8.6)示变异体区带位于HbF与Hb A_2之间,反相高效液相色谱(HPLC)示正常GγI峰前方出现一异常峰。异常Hb含量为Hb总量的16.8％。理化性质测定该变异体为一轻度不稳定Hb。结构分析证明该变异体为GγI链第119位(GH2)的甘氨酸(Gly)被精氨酸(Arg)取代。γ链GH2位于α_1γ_1接触面,此处的氨基酸置换可导致Hb的不稳定。此变异体被命名为HbF-新晋[~(GγI)119(GH2)Gly→Arg]。

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我国健康成人红细胞膜脂类的脂酸组成

唐建华,卢义钦,傅敏庄,黄志强

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(03): 278-282.

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本文采用双向簿层层析分离红细胞膜脂类,继以毛细管气相色谱法分析其脂酸含量,检测了15名我国健康成人红细胞膜脂类的脂酸摩尔百分组成。结果表明:各脂类中,脂酸的类别基本相同,但其含量组成相差甚远。如磷脂酰乙醇胺(PE)富含C_(20:4);磷脂酰胆碱(PC)富含C_(18:2);神经鞘磷脂(SM)主要含C_(16:0);磷脂酰丝氨酸(PS)主要含C_(18:0);而以红细胞糖苷脂(GL)中脂酸含量最少。膜总脂中饱和脂酸与不饱和脂酸的含量大致相等,胆碱磷脂(PC+SM)的脂酸饱和度则明显高于氨基磷脂(PE+PS)。

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葡萄糖衍生物的合成及其模拟SOD的活性研究

黄红卫 ,熊继敏 ,岳保珍 ,鲁纯素

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(03): 283-287.

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合成含有组氨酸的葡萄糖衍生物,其结构经IR、~1H-NMR及~(13)C-NMR分析得以确证,同时还测定了它们的超氧化物歧化酶(SOD)样活性。实验结果表明该衍生物与铜离子形成螯合物后,对超氧负离子自由基有清除作用(但远弱于天然SOD),并且对红细胞膜脂质过氧化有抑制功效。

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层粘连蛋白糖肽对实体型瘤细胞粘着于层粘连蛋白基质的影响

赵勇,周柔丽,兰丽

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(03): 288-292.

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本文报告由小鼠EHS瘤提取的层粘连蛋白(Laminin,LN)经链霉蛋白酶(Pronase)消化,再经Sephadex-G50层析分离得到LN总糖肽。它可显著抑制黑色素瘤细胞B16-MBK及S180肉瘤细胞与LN基质的识别及粘着,并具有明显剂量依赖性。与五肽(YIGSR),卵清蛋白及其糖肽,胎球蛋白及其糖肽比较,LN总糖肽的抑制效果显著高于YIGSR及胎球蛋白糖肽,而其它三者均无抑制作用。因而提示:LN分子中一定结构的糖链特异地参与了LN对肿瘤细胞表面LN受体的识别与结合。

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高糖膳食对大鼠载脂蛋白AⅠ、CⅡ和CⅢ基因表达的影响

彭腾,刘秉文,蓝天鹤

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(03): 293-297.

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我们以Sprague-Dawley大鼠为实验对象,研究高糖膳食对大鼠肝脏及小肠载脂蛋白(apo)AⅠ、CⅡ和CⅢmRNA相对含量的影响。摄取高糖膳食6天后,大鼠空腹血清TG含量和胰岛素水平均显著升高,cAMP含量则显著下降。同时,用RNA斑点杂交技术分析表明,摄取高糖膳食6天后,肝脏apoAⅠCⅡ和CⅢmRNA相对含量均显著下降(P<0.01,P<0.05);小肠apoAⅠ和CⅡmRNA相对含量也显著下降(P<0.05,P<0.01),但小肠apoCⅢmRNA相对含量无改变。

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雌激素对兔子宫内膜细胞EGF受体和细胞周期的调控

贺师鹏,郭淑英,黄天贵,刘旭,黄力新,张鹤莹,李潭,李伟雄

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(03): 298-301.

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由受体放射配基结合分析证明家兔子宫内膜细胞的EGF受体Kd值为0.53nmol/L,每个细胞的最大结合容量为1.11×10~4结合位点。10~(-10)mol/L雌二醇处理24h,细胞的最大结合容量增至2.75×10~4结合位点数/细胞,而Kd值无明显变化,可是,当10~(-5)mol/L雌二醇处理24h,细胞的EGF受体结合率,DNA合成速度率均下降。G_0/G_1期细胞比值明显下降,而G_2+M期和S期细胞明显上升。

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尼龙固定化木瓜蛋白酶及其应用研究

徐凤彩,李明启

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(03): 302-306.

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尼龙经CaCl_2和H_2O的甲醇溶液处理,稀HCl水解用戊二醛交联以制备固定化木瓜蛋白酶。在溶液酶浓度为1mg/mL pH7.5—8.0、4—15℃条件下固定3h,活力回收42.5％,相对活力46％,偶联效率52％,半衰期72天。溶液酶Km值和固定化酶K_m~(aPP)值(底物酪蛋白W/V,％)分别为0.28％和0.35％。溶液酶和固定化酶分别在pH6.5和pH8.0以下活力稳定;最适pH分别为7.0和8.0;在65℃处理30min活力分别为原有活力的89％和66％。当酪蛋白浓度为1.5％和2.5％以上活力分别受到抑制。固定化酶在6mol/L脲中连续浸洗5次共6h其活力稳定,仍有原活力的44.4％;用以处理啤酒浊度比对照下降了2-11倍;蛋白质含量下降了55％;冷藏(4℃)120天,无冷混浊发生;同时各项理化指标和风味不变。

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心磷脂-细胞色素C体系CD谱的研究

程昆蓉,程伯基,沈子威,林克椿

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(03): 307-310.

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线粒体内膜中含有特异的心磷脂是细胞色素C氧化酶活性的必需脂。本工作测定了心磷脂脂质体对细胞色素C溶液园二色(CD)谱的影响,发现心磷脂可引起血色素铁的氧化,并使其轴向配位场强的对称性下降。提示心磷脂可能参与酶和底物之间的电子转移过程。

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红细胞生成刺激素(EPO)的纯化

蔡辉国,马双,许静,汤晓培,王爱萍

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(03): 311-315.

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本文用中空纤维柱超滤浓缩尿,再经离子交换层析、聚焦层析、凝胶过滤和制备型聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)-层析等四步从15L再生障碍性贫血患者尿中获得约2mg EPO制品。比活性达10 300U/mg蛋白。该制品在分析型PAGE中呈一条区带。

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哺乳动物细胞中基因工程人生长激素的提纯和性质研究

李建民,翟兰敏,李建萍,杨启伦,马宝全,沈孝宙,杨卫民,彭红

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(03): 316-320.

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在哺乳动物细胞中克隆表达的人生长激素,经等电点和乙醇沉淀后,再用亲和层析法,获得产品。经对该产品的各项生化指标分析鉴定和活力测定,所得结果都与天然人生长激素相符合,证明其性质相同。

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猪胰脏细胞cDNA文库的构建

倪逸声,尹宝云,郭虹,张龙翔

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(03): 321-325.

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本文以新鲜猪胰脏为材料,采用异硫氰酸胍法和寡聚(dT)-纤维素亲和层析法,提取了Poly(A)~+RNA,经麦胚无细胞体系鉴定其体外翻译活性,~3H-Leu参入量为空白对照的5倍。参照Gubler和Hoffman等人的方法,以此poly(A~+)RNA为模板,合成总cDNA,并采用多聚物加尾法,与pUC19质粒重组,转化入感受态E.coliJM107,进行分子克隆,其转化率为3.6×10~4克隆子/μgcDNA。并对重组质粒DNA进行了酶切鉴定。

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用固定化方法研究超氧化物歧化酶的活性与结构的关系

袁勤生,邓碧玉,杨曜中,李文杰

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(03): 326-330.

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采用吸附、包埋、共价交联等方法固定化超氧化物歧化酶(SOD)所得固定化酶活力回收都不高,表明酶的催化反应速率受超氧阴离子自由基(O_2~-)扩散速率的控制。用海藻酸钠包埋SOD,固定化酶不表现活力,破固定化后所得的糊状物却有很高的活力。用戊二醛交联所得的固定化酶活力回收率也很低,表明ε-NH_3~+的正电荷是酶活力所必需。

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中国人肿瘤细胞中O~6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶活性与对嘧啶亚硝脲敏感性的关系

章扬培,藤元次郎,石崎宽治,贺涛,范国才,池永满生

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(03): 331-336.

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分析了20株中国人肿瘤细胞的O~6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(O~6-MT)活性及对嘧啶亚硝脲ACNU的敏感性,发现两者间有较好的线性关系,O~6-MT低,对ACNU敏感,提示O~6-MT可作为使用ACNU对肿瘤化疗时的一项予见性指标。

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蛋白激酶C的分离纯化及其性质研究

李华,谢山海,柳惠图

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(03): 337-341.

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本文由兔脑细胞质可溶部分分离纯化了蛋白激酶C,测得该酶分子量为79.2kD,最适pH为6.5,最适反应温度为20℃,热不稳定,即使在4℃下,24h就丧失活力50％,同时观察了蛋白激酶C的抑制剂H_7对酶活力的影响。

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用于聚合酶链式反应(PCR)引物设计的计算机程序

王槐春,朱元晓,王嘉玺,吴加金,张海鹰

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(03): 342-346.

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本文报道了两个用于PCR引物设计的计算机程序PCRDESN和PCRDESNA。PCRDESN程序主要从以下4个方面评价用户自己设计的一对引物的质量:(1)引物内的碱基反向重复或发夹结构,(2)两个引物之间的碱基互补配对,(3)两个引物之间的同源性,(4)引物的碱基组成及特点和T_m值计算。通过用多例文献发表的及本院有关实验室提供的引物对序列的验证,确定了程序的运算参数,证明该程序能较好地检验引物对的质量和解释某些PCR实验失败的原因。PCRDESNA程序采用逐级优化的方法和比PCRDESN所选用的更严紧的引物选择参数对用户提供的核酸序列进行快速检索,以确定所有可能的和合适的引物对。

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1,25-双羟胆钙化醇及其受体含量检测的实验研究

石育原,张培因,张梅,李亚娟,麦荫乔,于贵,仪明光,赵林阳

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(03): 347-352.

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建立了一种改良的血清1,25-双羟胆钙化醇(1,25-Dihydroxycholecalciferol,DHCC)超微量放射受体检测(RRA)技术。完成了灵敏度、精密度、准确度、稳定性及特异性等技术指标。报告了我国健康青年血清DHCC正常值;检测了先天性佝偻病、青春期佝偻病病人及患肾性骨病奶牛等血清DHCC水平。根据配体与受体相互结合的定量关系,建立了DHCCR(DHCC受体)检测技术。在游离与结合配基分离方面,除建立与比较了DCC(葡聚糖包埋的活性炭)及HAP(羟基磷灰石)方法外,还首次将IEF(等电聚焦电泳)应用于DHCCR分离技术。对佝偻病鸡小肠粘膜上皮细胞受体含量进行了检测并比较了鸡小肠、输卵管壳腺及肝组织DHCCR含量。

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由大肠杆菌中提取重组猪生长激素的研究

尹德钟,贾锋,张永清,高文玉,周顺伍,齐顺章

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(03): 353-357.

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本文通过研究提出了一种由大肠杆菌细胞中提取重组猪生长激素的方法。提取回收率为52.4％,纯度为94.1％,具有生物学活性。

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衰老过程中大白鼠脾细胞的DNA单链断裂与重接能力的变化

南新升,黄莉,张宗玉,张昌颖

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(03): 358-363.

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DNA被紫外线损伤后,由DNA切除修复酶切除嘧啶二聚体,随之以另一条正常的DNA链为模板修复合成DNA片段,最后由DNA连接酶将新合成的DNA片与原有的DNA链连接。本文用荧光法测定DNA修复过程中DNA单链的断裂及重接能力与衰老的关系。结果表明,不同年龄大鼠脾细胞均具有修复DNA单链断裂的能力,DNA单链断裂重接的能力与年龄有相关性,断乳鼠及青年鼠的脾细胞当保温至30min时,即开始了DNA链的重接,保温90min后则恢复到原有水平;而老年鼠脾细胞保温至90min时才开始DNA链的重接,保温150min,尚未恢复到原有水平。还发现,断乳鼠及老年鼠脾细胞的单链DNA含量高于青年鼠。

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疏水吸附法稳定糖化酶的研究

马林,罗贵民,黄仲立,程玉华

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(03): 364-367.

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本文提出了一种新的稳定糖化酶的方法。用带有疏水基团的亲水性多糖,可以方便有效地稳定糖化酶,明显提高了糖化酶的储存稳定性。实验结果表明,在含有芳香基右旋糖酐,钙离子,甘油的缓冲溶液中,糖化酶于室温放置5个月,酶活力没有损失,放置7个月,活力只损失15.7％。

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金黄色葡萄球菌A蛋白基因的克隆及序列分析

蔡仕英,姚志建,刘亚霞,强伯勤

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(03): 368-373.

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我们构建了金黄色葡萄球菌Cowan1株(CMCC26111)的染色体文库,转化大肠杆菌后筛选出一株protein A的阳性克隆。SDS-PAGE及Western-blot结果显示该克隆株表达的重组protein A的分子量为30 000,较天然protein A的小。该克隆中的protein A基因片段的序列分析表明,它含有天然protein A基因的启动子、信号肽以及至少四个与IgGFc段结合的结构域,而不含天然protein A的胞壁结合区,并发现其中有24个碱基对与Uhlen报告的protein A基因不同,由此导致三个编码的氨基酸发生变化,但这些差异并不影响该重组protein A与IgG Fc段的特异结合。

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胆石中胆红素钙的FTIR定量分析

宋惠芳,倪雪梅,陶海燕,付贤波,周孝思

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(03): 374-380.

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应用付立叶变换红外光谱(FT-IR)测定胆石中胆红素钙的含量,使用KBr压片法,吸收度是由积分法表示。胆红素钙在1622.3cm~(-1),1253.1cm~(-1)等处有特征吸收峰,在FT-IR减谱分析的基础上,选定1253.1cm~(-1)为定量吸收峰,它符合Beer-Lambert’s定律(r=0.998)而且共存物干扰小。标准工作曲线是使用胆红素为标准。胆石样品中胆红素钙含量用此法测定,其结果与化学法结果相似。应用FT-IR对混合物定量分析简单、迅速、准确。

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底物结合性洋姜菊粉酶的动力学性质研究

姚晓丹,赵宝昌,杜国忠,顾淑珍,欧阳启楣

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(03): 381-382.

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<正> 随着高果糖浆工业的发展,固定化葡糖异构酶的质量和成本逐渐成为影响产品商业化的突出问题。至今,国内外均从某些微生物中提取菊粉酶(Inulinase E、C、3.2.1.7),再去作用菊目植物中含有的菊粉,以此生产果糖。我们设想,如果能利用含天然底物和酶于一体的洋

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中药“固真方”对ROS17/2.8细胞株PTH受体结合率的影响

顾文聪,韩志芬,张建民,杜国光

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(03): 383-384.

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<正> 中药“固真方”是补肾益精方药“还精煎”的小复方,有延缓衰老的作用,其机理迄今未明。鉴于甲状旁腺素(PTH)为调节钙磷代谢的主要激素,而老年人由于肾功能衰退,尿排钙增高,脱钙是衰老的重要症状之一。大鼠成骨肉瘤细胞株ROS17/2.8含有PTH受体,本文观察了在活细胞培养过程中,中药“固真方”提取液对PTH受体结合率的影响。

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