中国生物化学与分子生物学报

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硒对心肌质膜(Ca~(2+)·Mg~(2+))-ATPase和肌浆网Ca~(2+)-ATPase活力的影响

毕坎华,申华,刘一仙,吴莲英,及惠芬,林治焕,杨福愉

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(04): 385-389.

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本文以豚鼠和大白鼠心肌肌浆网膜(SR)Ca~(2+)-ATPase的活力,心肌质膜(SL)(Ca~(2+)Mg~(2+))-ATPase的活力和电子显微镜的方法探索克山病病区粮中低硒与心肌细胞钙转运调控的共系,实验结果为硒对克山病有预防作用的观点提供了新的理论依据,并进一步支持了“克山病是一种心肌线粒体病”的观点。

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6_m2细胞转化与肌醇磷脂代谢相关性研究

吉爱玲,李华,杨晓红,柳惠图

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(04): 390-394.

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肌醇磷脂代谢与V-mos癌基因转化细胞的相关性,迄今为止未见报导。本文用6m2细胞(Moloney鼠类肉瘤病毒(含V-mos)温度敏感突变株(MoMuSVts110)转化的NRK细胞)为模型,探讨了肌醇磷脂代谢与细胞转化的相关性。在33℃ (转化型温度)时,细胞内PIP(磷脂酰肌醇-4-磷酸)含量明显高于39℃(正常型温度),显示出转化型6m2细胞中存在一个提高的PI激酶活性。同时可见DG(二酰甘油)和IP_3(肌醇三磷酸)含量和蛋白激酶C(PKC)活性均明显高于正常型细胞。当细胞由39℃转至33℃10min,PIP、DG、IP_3含量和PKC活性均明显增加,并伴随有PKC活性由胞质向质膜上的转移。实验结果表明肌醇磷脂代谢参与了6m2细胞转化过程。文中对其作用机理进行了讨论。

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核糖体单链失活蛋白在无细胞体系中的活性

王润华,郑硕,陈兴,沈倍奋

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(04): 395-399.

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核糖体单链失活蛋白是一类广泛分布于植物中的蛋白质,它能使真核细胞核糖体60S亚基失活。本文报道了一些核糖体单链失活蛋白的制备、纯化以及在兔网织红细胞裂解液中对蛋白质生物合成的抑制活性及它们对完整细胞的毒性。其中多数的核糖体单链失活蛋白是首次被分离纯化并对其毒性进行研究的。

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脲对果菠萝蛋白酶活力与构象的影响

陈清西,颜思旭

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(04): 400-404.

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本文用荧光光谱,紫外差示光谱和CD谱研究果菠萝蛋白酶在不同浓度的脲溶液中的构象及酶活力的变化情况。酶的荧光强度随脲浓度增大而明显增加,8mol/L脲使荧光强度增强65％,发射峰出现红移。差示谱表明在232nm和288nm出现二个正峰,它们均随脲浓度增大而加剧,前者与主链构象变化有关,而后者与生色基团(Trp、Tyr)的微环境变化相关。CD谱表明:天然酶在208nm和225nm处有二个负峰,脲变性后,225nm的负峰基本上不随脲浓度增大而变化,但208nm峰则明显发生变化并逐渐出现红移,6mol/L以上此峰则完全消失。

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人脑原发性肿瘤癌基因扩增和重排的研究

颜铯,文一,孙芝琳,周锐先,廖文满

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(04): 405-409.

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作者对52例人脑原发性肿瘤和5例正常人脑DNA中c-myc、L-myc、Nmyc、erbB、c-fos、sis及Ha-ras等七种癌基因的扩增和重排进行了研究,发现多数胶质瘤中有c-myc、L-myc、erbB及c-fos等癌基因的扩增,少数胶质瘤和脑膜瘤中发现myc家族癌基因的限制性酶切区带位置有多态性变化;同时还观察到原发性脑瘤中存在两种或两种以上癌基因的扩增和重排现象。作者对癌基因与人脑原发性肿瘤的关系进行了讨论。

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[B2-Lys]-胰岛素的制备与性质

徐明华,叶莺,张新堂,朱尚权

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(04): 410-413.

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本文报道了用化学半合成途径从天然猪胰岛素制备[B2-Lys]-胰岛素的过程。人胎盘细胞膜胰岛素受体结合试验表明:[B2-Lys]-胰岛素的受体结合能力只有天然胰岛素的80％,降兔血糖作用与时间关系的结果表明它没有长效作用。本文还对这些结果进行了讨论。

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Hb琼海的氧平衡特征与78K下的穆斯堡尔谱

廉英,任邦哲,曾玄圣

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(04): 414-417.

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经用Beneseh法检测发现,Hb琼海(β78(EF_2)Leu→Arg)的氧亲合力明显高于HbA,但其Bohr效应和亚基间协同作用却正常。Hb琼海的穆斯堡尔谱表明它颇不稳定,较易形成衍生物,本文讨论了Hb琼海的结构与功能及其稳定性之间的关系。

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交联琼脂糖珠固定化蛋白酶在纯化牛肺Kunitz抑制剂中的应用

徐浩大 ,姚仁杰,叶学海

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(04): 418-423.

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本文介绍了珠状交联琼脂糖及以此作为载体,经氯代环氧丙烷活化后与蛋白酶(胰蛋白酶或糜蛋白酶)结合,制成固定化蛋白酶亲和吸附剂,进而用以亲和层析牛肺提取液中的Kunitz抑制剂的方法。纯化出的抑制剂在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳上呈现单一条带,与参照物Trasytol(商品Kunitz抑制剂)具有相对应的电泳迁移率,其分子量也相符。纯化产品每毫克蛋白的抑制活力相当于16 000胰蛋白酶BAEE单位。纯化效果为90倍,收率约85％。

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平滑肌肌球蛋白B的超沉淀与肌球蛋白轻链磷酸化

陈明,李爱媛

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(04): 424-428.

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本文报导了牛胃肌球蛋白B(天然肌动球蛋白)的超沉淀性质。当钙离子、钙调蛋白和ATP存在时,肌球蛋白B出现超沉淀,在pH6.8和7.5处,有两个峰值。Ca~(2+)(PCa值8-4)对超沉淀影响的浓度-反应曲线呈典型的S形,表明当Ca~(2+)浓度处于微摩尔水平时产生超沉淀。伴随超沉淀发生了肌球蛋白调节轻链磷酸化。这说明肌球蛋白轻链的Ca~(2+)-CaM依赖性磷酸化可能包含在脊椎动物平滑肌收缩活动的调节机制中。

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苦瓜素类似物的分离纯化及其性质研究

郑硕,李格娥,颜松民

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(04): 429-433.

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本文采用硫酸铵分级沉淀、亲和层析、凝胶过滤等方法,从苦瓜(Momordicacharantia)种仁分得苦瓜素Ⅰ、Ⅱ。它们在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和等电聚焦电泳上均呈现单一区带,其分子量分别为26 000和28 000,等电点8.3,含糖量1.6％和2.0％。苦瓜素Ⅰ对小鼠腹腔给药LD_(50)值为2.54mg/kg,苦瓜素Ⅱ的致死剂量范围是9-14mg/kg。它们对无细胞体系蛋白合成都有强烈的抑制活性,其IC_(50)均小于0.1ng/mL。我们将苦瓜素Ⅰ、Ⅱ与文献报道的苦瓜抑制剂(Momordica chanantiainhibitor,MCI)和α、β-momorcharin进行了比较,发现它们分别与MCI和α-momorcharin相似。由于苦瓜素Ⅱ的毒性较低,更适合于制备免疫毒素。

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N—磷酰氨基酸和二肽的自身活化成肽

李艳梅,马晓波,赵玉芬

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(04): 434-437.

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磷酰基的参与作用导致N-磷酰氨基酸和二肽自身活化,在无活化试剂的情况下能成肽和肽链延长。14种磷酸小肽或游离肽被分离并经各谱图证实,该研究对蛋白质前生物合成的探讨提供了重要线索。

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用甲酰胺提高多聚酶链式反应的特异性、灵敏度和效率的研究

黄超,毛裕民,唐榕

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(04): 438-442.

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在多聚酶链式反应体系中加入甲酰胺可以有效地抑制非特异性扩增,提高特异性扩增,并使反应的灵敏度提高一个数量级。

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用定位突变探讨胰蛋白酶的稳定性

倪逸声,陈洁,张龙翔

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(04): 443-447.

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应用定位突变的方法,对鼠胰蛋白酶分子中易自溶位点的氨基酸残基进行改造,以探索提高胰蛋白酶稳定性的可能。将鼠胰蛋白酶原cDNA从质粒pTRAP上切下,插入载体M13mp8,在E.coli JM 101菌株中转化、复制后用以转染RZ1032缺陷型菌株,利用含U模板,进行按实验目的设计寡聚核苷酸引物引导的定位突变,将易自溶位点Ary105改造为Leu或Gly。经酶切和序列测定,证明在设计位点发生了预期的碱基突变。为了检查活性方便,又将含突变型胰蛋白酶cDNA从pTRAP上切下,插入另一个表达载体pTN中,转化入E.coli SM 138宿主中进行表达,表达产物分泌到围膜间隙,作专一性底物TAME活性胶方法检测,证明改造后的表达产物具有胰蛋白酶活性。对突变与野生型胰蛋白酶进行了初步比较。

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重组人乙型肝炎病毒E抗原(HBeAg)的基因扩增与表达

智刚,王东,李波,安献禄,王军楼,王利兵,张迺蘅

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(04): 448-451.

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本文从两例临床确诊为乙型肝炎患者的2mg肝穿刺标本中利用基因扩增方法,设计扩增出缺失羧基端34个氨基酸的乙型肝炎病毒C抗原(HBcAg)基因的0.45kb基因片段,将此片段克隆入表达载体,导入大肠杆菌中表达,结果获得每毫升培养液含有100万酶联反应单位的HBgAg,也存在1万酶联反应单位的HBcAg。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示,其表达产物占菌体总蛋白的30～37％,分子量为155kD。HBeAg基因结构及表达形式有待进一步研究和探讨。

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克山病病区粮喂养大鼠后心肌细胞自由钙浓度变化与硒的作用

聂玉生,李力,刘晓丹,林治焕,杨福愉

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(04): 452-456.

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为了解克山病的发病机理,本文研究了低硒对心肌细胞钙转运的影响。用克山病病区粮喂养的大白鼠与用非病区粮喂养的大白鼠相比,心肌细胞胞浆自由钙的浓度高,心肌细胞膜流动性及Na~+,K~+-ATP酶活性也高,在病区粮中添加适量的硒,上述指标与用非病区粮喂养的大白鼠的差距缩小,说明低硒是引起心肌细胞钙转运失常从而使细胞浆自由钙浓度升高的重要因素但不是唯一的因素,文中讨论了细胞浆自由钙浓度与细胞膜流动性、Na~+,K~+-ATP酶活性及心肌线粒体功能的关系,以及低硒对它们的影响。

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玉米胚芽降血脂作用的研究

董文彦,马熙媛,张东平,于少梅,刘志青,郭永春,封丽水,朱振林

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(04): 457-461.

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玉米胚芽经提取精制得到粉状物(YF)。以含15％YF的饲料饲喂大、小鼠,可在短期内阻抑实验性高血脂大、小鼠血清总胆固醇(TC)的升高(P<0.01),并显著升高小鼠高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量(P<0.01),使TC-HDL-c/HDL-c显著降低(P<0.01)。对高血脂患者食用YF2个月的食疗观察表明,YF的降脂效果与动物实验一致,并且能使血浆卵磷脂酰基转移酶(LCAT)相对活性升高(P<0.05)。提示YF可能具有促进体内游离胆固醇(FC)转化为酯化胆固醇(EC),从而加速胆固醇从肝内移出的作用,对此尚需进一步研究。

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尼龙网固定化果胶酶的制备及其性质研究

张来群,高天慧

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(04): 462-467.

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用尼龙网作载体,经3-二甲氨基丙胺活化,用戊二醛将果胶酶固定化。所得固定化酶Km值与自然酶接近;对温度的稳定性有较大的提高,100℃保温30min才能使其失活。固定化酶在较宽的pH范围内能保持其正常活力,它对金属离子抑制剂的耐受性有较显著的提高,用0.5％果胶溶液作底物,重复使用10次后酶活力保留44％。固定化果胶酶与自然酶相比较,对不同果汁的澄清效果不同。固定化果胶酶在无保护剂存在的条件下,室温放置四个月活力不减少。

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人膀胱癌转化生长因子α的研究

葛正龙,胡征,周爱儒

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(04): 468-472.

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应用Northern印渍杂交和放射免疫分析技术证明了膀胱癌组织和细胞中TGFαmRNA的表达,并发现TPA能提高人膀胱移行上皮癌BIU-87细胞中TCFαmRNA和TGFα活性分子的水平,但对TGFα的功能受体(EGF受体)具有负调节作用。提示TGFα在膀胱肿瘤细胞的恶性增殖过程中起一定作用,蛋白激酶C的激活可能是调节TGFα基因表达的途径之一。

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2-氯汞-4-硝基苯酚对人肌肌酸激酶巯基的修饰

徐劲 ,侯立向 ,王希成 ,周海梦

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(04): 473-478.

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本文用含汞试剂MNP修饰人肌肌酸激酶,结果表明,人肌肌酸激酶有6个可反应巯基。MNP首先修饰了一对与活力无关的非必需巯基,增大MNP摩尔比,则进一步修饰另外四个与活性有关的巯基。修饰酶的差吸收光谱、荧光光谱表明这三对巯基的微环境各不相同。其中第二对巯基很可能是位于活性部位的必需巯基,而第三对巯基则是由于第二对巯基,也就是必需巯基,被修饰后,微区构象发生改变而暴露出来的。比较MNP修饰人肌肌酸激酶、鸡胸脯肌肌酸激酶、兔肌肌酸激酶的结果,探讨了MNP对肌酸激酶的修饰以及人肌肌酸激酶可反应巯基的化学微环境。

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磷酸吡哆醛修饰的蛇肌果糖1,6-二磷酸酯酶的时间分辨荧光分析

于振宝,李成勇,许根俊

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(04): 479-482.

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在别构抑制剂AMP或底物果糖1,6-二磷酸(FruP_2)存在下,磷酸吡哆醛(PLP)分别专一性地修饰在蛇肌果糖1,6-二磷酸酯酶(FruP_2ase,E.C.3.1.3.11.)的催化部位或别构部位。测得了修饰在催化部位或别构部位的PLP的荧光寿命及其连续分布。通过荧光寿命分布宽度的比较,认为该酶的活性部位柔性大于别构部位的柔性。

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减压病山羊纤维蛋白原肽链结构与空间构象的研究

王凤瑞,朱祥棋,张今,张学忠,程玉华

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(04): 483-487.

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本文报道了减压病山羊纤维蛋白原(FG)结构变化及减压病(DCS)气-血界面活性引起凝血反应的作用。雄性山羊15只,加压-减压发生Ⅰ或Ⅱ型DCS,采静脉血用冷乙醇提取血浆FG。经SDS-PG电泳和CM_(22)-色谱分离S-磺酸化FG,发现FG裂解肽段——带4和X、Y峰,(正常对照组无);经HPLC和组分分析发现FG含量和FG氨基酸残基数明显减少(P<0.05),表明FG参入凝血反应其肽链发生裂解。又经圆二色谱分析发现FG α-hilex％明显下降(P<0.01)。DCS山羊FG结构的改变,证实了气-血界面活性作用引起凝血反应。

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编码酵母丙氨酸tRNA两个半分子的DNA的克隆

刘建华,王德宝

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(04): 488-491.

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用DNA合成仪合成寡聚脱氧核苷酸。用T4-DNA连接酶把这些寡聚脱氧核苷酸重组成双链DNA。这两个双链DNA的上游是T7-启动子,下游分别编码酵母丙氨酸tRNA的5′半分子(1-35位核苷酸)和3′半分子(35-76位核苷酸)。再把这两个双链DNA克隆到PUC 12质粒中。经点杂交筛选和DNA顺序测定证明克隆是成功的。

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根霉葡萄糖淀粉酶的复性复活动力学研究

翟国堂,褚西宁,袁静明

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(04): 492-496.

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本文利用荧光、紫外差光谱研究了根霉葡萄糖淀粉酶在盐酸胍变性后的复性、复活动力学。结果表明,该酶在小于4mol/L盐酸胍中变性是可逆的,其复性过程遵循一级反应方程。酶复活过程是由两个一级反应组成的复合反应,构象变化速度与复活过程中较快的反应速度相差无几,这可能是在Trp及Tyr微区的构象变化基本完成之后,酶活力恢复还没有完成造成的。

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树舌水溶色素多糖CF_2的结构确定

梁忠岩,张翼伸,苗春艳

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(04): 497-499.

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<正> 我们曾对树舌中水溶性多糖进行系列研究,除从粗多糖中分离出无色多糖外也分离出含色素多糖CF_1,现对另一级份色素多糖CF_2的研究作简要报导。材料与方法一、材料树舌(Ganoderma applanatum)子实体与文献完全相同。

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肌钙蛋白C(Tropnin C)的提纯与鉴定

唐新,李祥春,杨希震

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(04): 500-502.

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<正> 肌钙蛋白C(TnC)是肌钙蛋白复合体的钙结合亚基,系骨骼肌和心肌收缩系统的触发因子。研究表明TnC与钙调素(CaM)类似,具有EF手结构和四个特殊的钙结合区。TnC与Ca~(2+)、Mg~(2+)等金属离子的结合可发生构型变化及由此导致的体内一系列酶活性等生理功能的变化。提纯TnC是进行其诸方面研究的基础。

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恒河猴心房利钠多肽的分离、纯化及活性研究

戴长柏,戴宗祥,许如君,赵石,杨志,陈植和,陈必羲

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(04): 503-505.

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<正> 1983年以来,人们相继从人和大鼠等动物的心房中分离到心房利钠多肽(ANP)。但对非人灵长类动物——恒河猴的ANP了解甚少。由于ANP对机体循环系统的调节起着重要作用,其强大的降压、利钠、利尿的生理功能,在心血管疾病的防治方面具有重要意义。我们曾报导过恒河猴心房肌细胞中存在着大量的ANP样物质,随后对此物质进行了分离、纯化及活性检测,现简报如下。

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对大鼠肝mRNP的研究

兰风华,徐铃,赵雨田

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(04): 506-508.

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<正> mRNA是基因表达的一个重要环节。早在二十多年前,Spirin等发现,在鱼卵细胞中存在着一种称为信息体(informosome)的mRNA-蛋白质复合体,它在鱼胚的早期发育中起着关键作用。现在知道,真核细胞mRNA并非完全裸露,而是普遍以mRNA-蛋白质复合体即mRNP(messenger ribonucleo-protein)的形式存在,并与mRNA的转运、分布、翻译调节、代谢等密切相关。将核糖体解离后,mRNP依然存在。在电镜下观察到,蛋

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重组白细胞介素-2纯化过程中影响活性的因素探讨

虞冠华,丁树标,许祥裕,施风霞,罗丽华

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(04): 509-512.

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<正> 白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)是一种重要的免疫调节剂,具有促进T细胞增殖和分化,调节NK细胞活性,诱导LAK等功能,在肿瘤治疗上有广泛的应用前景。我们的前文就重组菌中IL-2包含体的制备、性质及重组rIL-2的纯化进行了研究,本文就重组rIL-2纯化过程中影响其活性的有关因素进行了探讨。

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