中国生物化学与分子生物学报

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张丽萍,陈丽颖,张翼伸

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(01): 1-5.

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从刺五加果中抽提出水溶性粗多糖。经酸性乙醇分级及反复冻融得到多糖AS-2。AS-2经Sepharose CL-4B柱层析为单一对称峰,经醋酸纤维素膜电泳为一条带,冻融后高速离心无沉淀可证明其为均一级分。G.C分析表明,AS-2由Ara、Xyl、Rha、Gal、Glc组成,其单糖摩尔比为1.6:1.2:1.8:1.0:3.6。AS-2的分子量约为78kD,比旋光度[α]_D~(25)=+17°,特性粘度[η]=0.068。红外光谱分析含β型糖苷键。部分酸水解、酶解、高碘酸酸化、Smith降解、完全甲基化、G.C,G.C-M.S的分析结果表明,以β(1→3)Glc及β(1→4)Glc构成分子的主链。Glc的C_3上带有分支,约每4个己糖残基带有1个侧链。侧链上,Rha多以1→4苷键相连,部分残基C_2上有分支。Gal存在(1→6)及(1→3)连接方式,多数Glc以(1→6)苷键连结,少数Glc出现在分子非还原末端。位于分子末端的还有Ara与Xyl。

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一种同时纯化钙谓神经磷酸酶和钙调素的有效方法

魏群,吕照江,肖方祥,邢录洲,李大海

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(01): 6-10.

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本文报导了一种能同时纯化钙调神经磷酸酶和钙调素的有效方法。牛脑粗提液经DE-52纤维素层析分段洗脱:0.5mol/L NaCl缓冲液洗脱峰经phenyl-sepharose亲和柱和G75 sephadex制得电泳纯钙调素。0.18mol/L KCl缓冲液洗脱峰经Affigel-Blue层析,硫酸铵盐析,钙调素亲和层析,G-200 Sephadex凝胶过滤制得电泳纯钙调神经磷酸酶。

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从Staphylococcus simulans消除含有溶葡球菌酶基因质粒的研究

周润琦,陈石根,Recsei,A.Paul

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(01): 11-18.

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溶葡球菌酶是Staphylococcus simulans分泌的能分解葡萄球菌的酶,它的基因位于一个约40kb的质粒DNA上。为了探索用高拷贝质粒取代原有的质粒的可能性,本文首先进行了从该菌株中消除含有溶葡球菌酶基因质粒的实验研究,获得了相应的“消除”菌株。根据对目的菌株和原始菌株的比较分析,包括细胞蛋白质的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,Western blot分析,质粒DNA的琼脂糖胶电泳、Southern Blot分析,质粒DNA的限制性内切核酸酶酶切分析以及对溶葡球菌酶作用敏感性的分析,都表明该目的菌株确系Staphylococcus simulans的衍生菌株,只是清除了其中含有溶葡球菌酶基因的质粒。在此基础上,本文也进行了转化实验。

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硒对大鼠心、肝、肌、胰、肺和肾脏细胞线粒体~(45)Ca摄取的影响

赵君庸,贾锡安,王玉珍,侯建政,张平川

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(01): 19-25.

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用低硒饲料和该饲料补硒分别喂大鼠,对比观察硒对动物心、肝,肌、胰、肺和肾脏线粗体~(45)Ca摄取及心肌线粒体呼吸的影响。结果表明硒非常显著地刺激此六脏器细胞线粒体钙摄取,其中,对心、肝、肌的刺激强大而稳定;对胰、肺,在温育过程中逐渐增强;对肾则稍差。硒还非常显著地刺激心肌线粒体呼吸功能。提示硒对维持整体线粒体钙运转及心肌线粒体呼吸功能具重要作用。

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四氯合铂酸钾(K_2PtCl_4)与细胞色素c(Cyt·c)修饰体系的进一步研究

孙自勇,夏志成,杨至灏,唐雯霞,朱德煦

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(01): 26-31.

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从K_2PtCl_4与Cyt·c反应产物中分离得四个组分,SDS-PAGE及元素分析测定结果表明,它们分别对应于Cyt·c寡聚体、三聚体、二聚体及单体。这揭示了K_2PtCl_4对Cyt·c存在多位点修饰,南非如Kostic报道的Met-65为其唯一修饰位点。通过K_2PtCl_4与羧甲基化Cyt·c修饰产物的分析研究,证实了另一标记位点His-33的存在。对Cyt·c二聚体衍生物的还原电位、紫外一可見及红外光谱研究表明,Cyt·c血红素周围的电子环境仍保持完整,但其二级结构有较大的扰动。

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蛋白质中二硫键附近肽段识别规律研究

王玉宏,刘晓青,李惟,马速成

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(01): 32-36.

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本文对蛋白质中二硫键附近的残基进行了计算机统计分析,结果发现平行和反平行残基间存在着特异的配对规律。这种残基间的相互作用或识别,可能与蛋白质折叠过程中正确地形成二硫键有关。该结果有助于蛋白质工程设计。

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2'-'5-三腺苷酸对巨噬细胞腺苷酸环化酶和cAMP-磷酸二酯酶活性的影响

尹桂山,王桂香,刘静芳,冯仁青,张书岑,陈寅,周月芳,刘新垣

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(01): 37-41.

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1989年,我们曾首次证实干扰素作用介导物pppA2＇p5＇A2＇p5＇A(2＇-5＇-三腺苷酸,2＇-5＇P_3A_3)能引起巨噬细胞中cAMP,cGMP水平升高,表明这两种环核苷酸在传递干扰素信息中起着重要作用。在上述研究的基础上,本研究观察了2＇-5＇P_3A_3对腺苷酸环化酶(AC)和cAMP-磷酸二酯酶(cAMP-PDE)两种酶的活性影响,结果发现,1×10~(-6)mol/L的2＇-5＇P_3A_3可显著增加AC的活性,而对cAMP-PDE活性沒有显著影响,这说明2＇-5＇P_3A_3引起的细胞内cAMP水平的升高是由于激活AC而使其生成增多,而不是抑制cAMP-PDE而使其降解减少的结果。

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非水相中脂肪酶催化甘油三酯转酯反应动力学

苏正定,姚汝华

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(01): 42-46.

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本文研究了脂肪酶在己烷中催化甘油三丁酸酯与硬脂酸之间的转酯反应动力学。转酯反应分为二个连续的反应步骤:由酯生成的酰基酶复合物的水解和由酸生成的酰基酶复合物的醇解,整个反应符合乒乓反应机制,动力学参数为:K_m(酯)=3.2×10~(-2)mol/L,K_m(酸)=6.9×10~(-2)mol/L,V_m=1.7×10~(-4)mol/L·min。

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K-562细胞胰岛素受体酪氨酸蛋白激酶活性及内源性底物的研究

孙茜,王殿鸿,郑博,潘忠诚,陈日新

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(01): 47-50.

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本文对丁酸钠诱导分化的人白血病细胞株K-562细胞的胰岛素受体酪氨酸蛋白激酶性及细胞内源性底物进行了研究。结果表明,诱导分化后的细胞酪氨酸蛋白激活酶活性降低,胰岛素受体数量减少,酪氨酸蛋白激酶的一底物蛋白在分化后消失。该研究结果及其在该方面的进一步研究有可能为白血病发病机制的阐明以及为临床治疗白血病开辟靳途径提供一些有价值的线索。

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恶性转化的成纤维细胞表皮生长因子受体的研究

彭勇,童坦君,张昌颖

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(01): 51-55.

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本文用受体的放射性配基结合分析方法观察了C_3H小鼠胚胎成纤维细胞C_3H_(10)T1/2 CL8(简称NC_3H_(10))和~3H-TdR恶性转化的C_3H_(10)T1/2CL8(简称TC_3H_(10))的表皮生长因子受体(EGFR)。结果表明细胞恶性转化前后的EGFR都存在高亲和力和低亲和力两种结合位点,细胞恶性转化后能结合表皮生长因子的EGFR结合位点减少,Western blotting和受体的亲和交联分析表明EGFR的分子量为170kD,是单链多肽。

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大鼠出生后脑内钙调神经磷酸酶的研究

王健勇,曾菲菲,魏群

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(01): 56-59.

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本文用BA-ELISA.immunoblotting及酶活力测定等方法,研究了大鼠脑中钙调神经磷酸酶在大鼠出生后的变化情况。结果表明,钙调神经磷酸酶的含量在大鼠出生后第二周和第三周显著增加,其活力也在出生后第二周达到顶峰。钙调神经磷酸酶这种有规律的变化与脑中突触形成在时间上是一致的,暗示钙调神经磷酸酶可能参与突触功能的调节。

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米曲霉氨基酰化酶的双水相萃取研究

谢志东,何炳林,姜坪

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(01): 60-64.

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本文利用聚乙二醇和磷酸盐组成的水溶液双相系统,从米曲霉(Aspergillus oryzae)中提取氨基酰化酶。通过实验对影响氨基酰化酶分配的各参数进行了研究,确定了最适体系:PEC-1540 10％(W/V),K_2HPO_418％(W/V),pH8.5;PEG-154010％(W/V),K_2HPO_412％(W/V),NaCl 0.5mol/L,pH8.5。二步萃取收率90％,纯化倍数9。为实验室和工业上采用双水相系统萃取氨基酰化酶提供了一个新方法。

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实验性石棉肺病变中Ⅰ型及Ⅲ型胶原基因表达的研究

陈亚萍,李玉瑞

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(01): 65-69.

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以斑点杂交法测定染溫石棉尘后30天与60天大鼠肺组织中前胶原mRNA的水平,即proα_1(Ⅰ)、proα_2(Ⅰ)、proα_1(Ⅲ)mRNA的水平,并与正常大鼠肺组织对比,结果显示,染石棉尘的肺组织中这三种mRNA显著地高于正常对照组。在染尘后60天时Ⅰ型胶原的两种mRNA仍呈上升趋势,而Ⅲ型胶原的mRNA则呈稳定状态。体外实验的结果表明溫石棉及青石棉纤维都可以刺激2BS细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原基因的表达。矽肺组织来源的致纤维化因子与石棉纤维都具有促进胶原基因表达的作用,其共同作用效果更強。证明这两种因素都参与调节石棉肺的纤维化作用。

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抗人小细胞肺癌单克隆抗体的重链变区基因的体外扩增、克隆和序列分析

刘健,吴文书,王斌,潘志美,田培坤,黄震宇,洪锦心

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(01): 70-75.

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本文从抗人小细胞肺癌单克隆抗体杂交瘤细胞中抽提总RNA,合成第一链cDNA,直接用PCR技术(polymerase chain reaction)扩增出351bp的重链变区基因(V_H),克隆至pUCV_(NP)-PCR载体上,经筛选得一批插入片段为351bp的阳性克隆,经核苷酸序列分析研究,证实已获得了该单克隆抗体的重链可变区基因。

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脂质体包裹增加了阿霉素的体内抑瘤作用

胡兰荣,翟原,董志伟,郑昌学

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(01): 76-80.

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我们用超声法制备了内部包裹阿霉素,表面带有抗人胃癌细胞M85的单克隆抗体3Hll的阿霉素靶向脂质体,研究了这些脂质体经腹腔注射入荷瘤裸鼠之后的组织分布和抑瘤效果.结果表明,靶向脂质体组阿霉素在肿瘤组织的含量明显高于游离阿霉素组,而在心脏中的含量,前者则比后者有所降低。分别在接种M85细胞后5天、13天和25天,按4mg/kg的剂量注射阿霉素靶向脂质体和游离阿霉素,在40天时观察结果。我们发现,无论在动物存活数、肿瘤发生率还是在肿瘤生长速度方面,阿霉素靶向脂质体的抑瘤能力都明显地优于游离阿霉素。

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硒对T-2毒素引起培养软骨细胞超微结构与功能改变的拮抗作用

李生广,吴莲英,孙珊,洪杰,及惠芬,鲁崎唔,林治焕,杨福愉

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(01): 81-86.

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当培养液中存在0.01ppmT-2毒素时,可引起离体培养鸡胚软骨细胞胞外基质胶原微原纤维和质膜P面膜内蛋白颗粒明显减少,线粒体内膜细胞色素c氧化酶活力和H~+-ATP酶活力及其对OIigomycin敏感性明显下降。在0.01ppmT-2毒素存在下,加入1ppm Na_2SeO_3到培养液中,则胶原微原纤维和质膜膜内蛋白颗粒的减少不再呈现,细胞色素c氧化酶活力和H~+-ATP酶活力及其对Oligomycin敏感性的下降幅度明显减小。这些结果表明硒能够显著的拮抗T-2毒素引起的软骨细胞超微结构和功能的改变。从亚细胞水平和分子水平为阐明缺硒是大骨节病发病的重要条件和硒在预防大骨节病中的作用机理提供了依据。

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八肽胆囊收缩素的结构与活性关系

黄晓明,陈钧辉,王新昌

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(01): 87-92.

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本文采用液相多肽合成法制备了八肽胆囊收缩素(CCK_8)的六种类似物,并测定了它们诱导离体的豚鼠胆囊收缩的生物学活性。发现CCK_8的N-端乙酰化不改变其生物活性,脱去N-端氨基的CCK_8类似物即Suc-CCK_7与母体CCK_8相比,其活性明显增加。在Boc-CCK_7中,Met被NIe取代活性可完全保留,Gly~(29)被D-Ala取代后仍保留相当的活性,但Gly~(29)被β-Ala取代后则失去胆囊收缩活性;在Met~(28)-Gly~(29)区域引入刚性的r-内酰胺环作为构象限制,也导致活性完全丧失。

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在中国壮族家系中发现的一例-α~T/-α~Q复合β~0β~0珠蛋白基因型

陈松森,张慕洁,杨克恭,黄明学,张桂莲,温平诚,杜诗库,贾佩臣,梁植权,T.H.J.Huisman

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(01): 93-98.

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本文报道在我国广西隆林壮族中发现一个罕見的HbQ复合α,β地中海贫血家系。先证者女,18岁,贫血面容,肝脾肿大。化学结构分析确证本Hb变异体为HbQ Thailand[α74(EF3)Asp→His]。血红蛋白组成以及α和β珠蛋白基因分析结果表明,先证者的珠蛋白基因型为-α~Q/-α~T复合β°/β°(IVSI-1G→T/Codon17A→T);先证者父的基因型为-‘α~Q/-复合β~O/β~A(IVSI-1G→T/β~A);先证母的基因型为-α~T/αα复合β~O/β~A(Codon17A→T/β~A)。

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大鼠脑突触质膜糖皮质激素受体的纯化

傅红,郭佐,徐仁宝,陈宜张

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(01): 99-103.

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本文利用抗大鼠肝细胞内糖皮质激素受体的单克隆抗体制备的免疫亲和层析柱,将大鼠脑突触质膜糖皮质激素受体纯化了约1150倍,SDS聚丙烯酰胺簿层梯度凝胶电泳显示,在约67kD处有一较明显的染色条带。

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巴豆毒蛋白的分离、结晶及其性质研究

陈明晃,潘克桢

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(01): 104-108.

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巴豆种子用PBS抽提,多次低溫离心去除大量油脂,经硫酸铵沉淀,从Sophadex G-75柱分离出巴豆毒蛋白Ⅰ和Ⅱ(CrotinⅠ,Ⅱ)SDS-PAGB测得其分子量为40kD和15kD;等电点分别为8.0和6.7,并测定了它们的氨基酸组成。巴豆毒蛋白Ⅱ用汽相扩散悬滴法获得结晶,蛙卵试验表明它具有较强的抑制蛋白质合成的活性。

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伯氏疟原虫氯喹敏感株和抗性株感染红细胞精脒合成酶体内观察

常惠玲,孙惠良,王琴美,王聚君

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(01): 109-112.

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给伯氏疟原虫氯喹敏感株(CS)和抗氯喹株(CR)感染鼠腹腔注入~3H-丁二胺(0.74MB_q/鼠),4h后用荧光法与液闪法测定CS、CR感染RBC中产生的~3H-精脒量,以示精脒合成酶的活力(以dpra/10~9感染RBC表示),并观察了氯喹对酶活力的影响。两株感染RBC的酶活力在治疗前接近,CS为59 987.9±17403(16),CR为53818.4±15565(13)。氯喹治疗20h后CS与CR分别为20033±3260(8)与65304±20176(11)即CS酶活力降低66.6％,CR的活力不变,推测氯喹对两株疟原虫感染RBC精脒抑制的差异点是在精眯合成酶环节。

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20种蛇毒膜毒素同源蛋白质等电点的理论确定

冯晓勇,郝军山,袁静明

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(01): 113-116.

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本文根据蛇毒膜毒素(MT)蛋白的一级结构,采用一个数学模型并辅以自行设计的计算机程序,从理论上确定20种MT的等电点。经同源性分析结果表明,这些蛋白质在一级结构上越相似,其等电点也愈接近。

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见于我国人群的一例St~a血型糖蛋白

卢义钦,卢维敏,成光杰,王力飞

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(01): 117-121.

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在我国人群中筛查出一例疑似St~a血型糖蛋白(GP)变种。先证者为黎族男青年,属杂合子。家系调查表明,其遗传变异来自母亲。現借助限制性核酸內切酶图谱及一系列序列重叠的寡核苷酸探针,完成了其基因结构的鉴定,确证为見于我国的首例St~aGP变种。在其(δ-α)杂化基因的交叉点,δGP基因断裂于26号氨基酸残基附近,而αGP基因断裂则位于59号氨基酸残基附近。

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内皮素cDNA片段的分离及测序

温进坤,姜玲玲,贾根深,魏素珍

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(01): 122-124.

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<正> 自从Yanagisawa等报道内皮素(Endothelin, ET)是体内最强的缩血管多肽以来,ET的生物学意义及其表达调控机制日益引起人们的重视。已发现,组织缺血缺氧、循环儿茶酚胺浓度升高以及血管紧张素Ⅱ、加压素和钙离子载体等多种使细胞内Ca~(2+)浓度增加的因素均

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灵芝凝集素分离纯化及部分性质研究

张万庆,王勤,印明善,马秀贞,徐炜虹

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(01): 125-128.

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<正> 灵芝药理作用的研究已取得很大成就,但对其具有血凝活性组分的研究还未见报道。我们以工人培养的灵芝菌丝体为材料,分离出一种具有血凝活性的蛋白组分,并对其部分理化性质及生物活性做了初步测定。这对于探讨灵芝中不同活性成份的药理作用,系统阐明其生物学作用,扩大临床应用范围都具有重要意义。

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