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  • 1995年, 11卷, 第02期
    刊出日期:1995-04-20
      

    论文

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    论文
  • 朱运峰,石成华,曹诚
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(02): 117-121.
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    乙肝前S2(HBVPreS2)肽段由55个氨基酸组成,其N端肽段含Th和B细胞抗原决定簇,为增强PreS2的抗原性,本实验采用将化学合成的PreS2epitope(120-145)基因以串联方式与HBcAg的基因进行了融合,融合基因在大肠杆菌中获得表达,并通过ELISA比较研究了融合蛋白中PreS_2epitope单体及串联体的抗原性差异。
  • 汤震宇,何飚,周海梦
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(02): 122-126.
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    应用荧光发射光谱,圆二色光谱,二阶导数光谱和紫外差吸收光谱等监测手段,研究了酵母乙醇脱氢酶在胍溶液中的去折叠。比较不同盐酸胍浓度下酵母乙醇脱氢酶的失活与构象变化,实验表明酶的失活先于构象变化:在低浓度胍溶液中,构象尚未发生明显变化时,酶活几乎已经完全丧失。由上述结果可见,含有辅基金属离子Zn~(2+)酶的活性部位较酶分子的整体结构也具有柔性。
  • 李生广,谢小松
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(02): 127-134.
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    Se_3~(2-)对牛脑V型质子转运ATP酶复合体活力呈现明显的抑制作用。这种抑制作用具有对剂量和预保温时间的依赖关系,且不被稀释效应所恢复,但过量的DTT可去除这种抑制作用。半胱氨酸对这种抑制作用呈双功能效应。低浓度时促进抑制作用,高浓度时部分恢复抑制作用。还原型谷胱甘肽与半胱氨酸有类似效应。但促进抑制作用没有半胱氨酸强,而恢复抑制作用却较半胱氨酸强。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和放射自显影图谱表明,SeO_3~(2-)和半脱氨酸优先结合在70kD亚基上。并且验证了ATP酶复合体的-SH基和SeO_3~(2-)及半胱氨酸的-SH基以-S-Se-S-键相连接。根据上述结果,讨论了70kD亚基的-SH基及其相关的结构域涉及到ATP酶的活性中心,70kD亚基可能是ATP酶复合体的水解活性亚基。
  • 张符光
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(02): 135-140.
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    降钙素基因相关肽(CGRP)为37肽,它在体内主要分布于神经系统和心血管系统,是较强的扩张血管物质。人们已认识到脑部的CGRP最多,由于新鲜猪脑来源丰富,故我们选用猪脑为材料来纯化CGRP受体。以期为该受体的深入研究提供足够的材料和奠定基础,纯化的受体将用于制备抗CGRP受体的单克隆抗体,为了从猪脑中纯化CRRP受体,首先用含有胆盐的磷酸盐缓冲液将该受体从猪脑细胞膜上解离下来,解离下来的受体量较多,而杂蛋白较少,且受体活性可保持较长时间不降低。以离子交换柱层析(QAE-Sephadex-A-25)进行初步分离纯化,再用化学合成的CGRP与活化的琼脂糖(Affi-Gel-10,Bio-Rad公司产品)制备的亲和层析柱进行亲和层析,取得的纯化受体保留了与125I-CaGRP结合的能力,而与降钙素(Calcitonin)神经肽Y(NeuropeptideY)和Katacalcin等无交叉反应,但与有46%氨基酸序列同源性的Amylin有一定交叉反应。纯化的受体经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和高压液相色谱(HPLC)鉴定呈现单一蛋白条带或蛋白峰,其位置对应分子量为66kD。
  • 王恩多,陆身楠,王应睐
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(02): 141-145.
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    用聚合酶链反应(PCR)以大肠杆菌JM83基因组DNA为模板,扩增了精氨酰-tRNA合成酶(ArgRS)基因。将该基因重组到载体pUC18上转化到大肠杆菌TG1中,得到在转化子中ArgRS的高表达。粗抽液中ArgRS的氨酰化活力,TG1和TG1转化子分别为1.65U/mg和210U/mg,后者为前者的127倍。DNA顺序测定表明,与从大肠杆菌JA200中克隆到的ArgRS基因相比913位碱基为A而不为C,这种变化使ArgRS的305位氨基酸残基由Gln变为Lys,但这种改变不影响酶的活力。
  • 叶棋浓,苏国富,徐永强,黄翠芬
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(02): 146-149.
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    将编码人单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的基因亚克隆到大肠杆菌表达载体pEX31A中,在大肠杆菌中表达出MS2/MCP-1融合蛋0白,该表达产物约占菌体总蛋白的15%左右,Westernblot检测表明,表达产物可与MCP-1抗体特异反应。采用琼脂糖平板法进行活性测定表明,表达产物具有明显的单核细胞趋化活性,说明N端融合一段细菌蛋白对MCP-1有无趋化活性可能没有影响。
  • 陈尊,孔维,周慧,李惟,沈家聪
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(02): 150-154.
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    合成了淀粉接枝丙烯腈及丙烯酰胺的两亲性高分子化合物,并以此为载体,用物理吸附方法固定化了糖化酶。最适偶联条件研究表明:缓冲液的浓度,pH值及吸附时间和加酶量都对固定化酶活力,比活有一定的影响。在最适固定化条件下,固定化酶的活力为1500U/g干胶,蛋白载量为25mg/g干胶,比活为60U/mg蛋白,比天然酶的比活(8.0U/mg蛋白)提高6倍。最适反应温度比天然酶提高10℃(天然酶最适反应温度为50℃).无底物存在下,固定化酶在55℃的半衰期为24h,而天然酶只有1h;有底物存在下,固定化酶在55℃的半衰期为220h,45℃的操作半衰期由外推法算得为69天,而且该载体对糖化酶有一定的保护作用,当固定化酶在低于55℃热处理一段时间后,对酶活力有激活作用,酶活力最大可提高40%。该载体合成简单,固定化方法简单,步骤少,因而为工业上应用提供了一种新的可能性。
  • 李顺意,梁宋平
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(02): 155-160.
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    用分子筛(岛津DIOL-150柱)和阳离子交换(岛津WCX-1柱)高效液相色谱从虎纹捕鸟蛛(Selenocosmiahuwena)毒液中分离提纯透明质酸酶(Hyaluronidase,EC3.2.1.35).经等电聚焦电泳为一条带,pI=7.2.经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得分子量为40kD,经凝胶过滤测得分子量为40.7kD。以透明质酸为底物时在pH3.5─5.5范围内有较大活性,最适pH值为4.0;在pH4.5─6.0范围内稳定,在反应温度为30─60℃时有较大活性,最适温度为50℃;对热稳定,0.15mol/L的NaCl对酶活性有一定的稳定作用.3%的肝素、500μmol/L的Hg~(2+)、Fe~(2+)、Cu~(2+)对酶活性有明显的抑制作用。
  • 周慧萍,蒋巡天,王淑如,陈琼华
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(02): 161-165.
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    浒苔多糖剂量150mg/kg可使高胆固醇血症小鼠血清胆固醇下降22%,剂量168mg/kg可使高脂血症大鼠TCH和TG分别降低58%和61%,HDL升高27%,剂量250mg/kg可分别提高血清、脑和肝SOD活力33%、118%和224%,剂量168mg/kg对高血脂大鼠血清和心脏LPO含量降低35%和46%。
  • 张昌颖,王克维,卢景
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(02): 166-170.
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    用马来酰亚胺及5恶唑氮氧自由基硬脂酸分别标记晶状体细胞膜中蛋白质及脂类,以电子自旋共振方法研究在三硝基甲苯、亚硒酸钠、半乳糖、平阳霉素及紫外线等白内障诱发剂作用下,晶状体细胞膜的氧化损伤变化。结果发现当晶状体细胞暴露于空气中时,晶状体细胞膜脂类氧化早于蛋白质的氧化;在五种白内障诱发剂作用下,均是如此.这说明白内障的形成首先是由膜中脂类氧化所引起。
  • 王敏,汪晓鹏,贾维红,张昌颖
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(02): 171-174.
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    大鼠皮下注射TNT,以HPLC分析其在晶状体内的代谢过程,并检测晶状体谷胱甘肽过氧化物酶、谷胱甘肽还原酶及超氧化物歧化酶的活性变化。发现在注射TNT后2h即可在晶状体内检测到为量极少的TNT及其代谢产物,第12h一氨基二硝基甲苯含量达最高峰。鼠龄较小的大鼠晶状体内TNT及其代谢产物高于鼠龄较大的大鼠.多剂量注射TNT时大鼠晶状体内一氨基二硝基甲苯于第2天达到高峰,TNT于第5天达饱和状态,第18天一氨基二硝基甲苯含量与TNT含量相近。谷胱甘肽过氧化物酶、谷胱甘肽还原酶及超氧化物歧化酶活性在注射TNT的第2天均有不同程度的升高,在第5天和第18天维持在低活性状态。实验表明TNT在晶状体内是通过硝基还原而代谢的.TNT进入晶状体后初期可诱发晶状体抗氧化相关酶活性的增高,后期则导致晶状体抗氧化相关酶活性的降低。
  • 刘士辉,黄培堂,黄翠芬
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(02): 175-179.
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    已经从melanoma细胞系中成功地获得了人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)cDNA,在此基础上用双脱氧终止法测定了t-PAcDNA编码区全序列及3′非编码区部分序列,并发现与Pennica等发表的t-PAcDNA序列相比,有两处差异,其一是第1725位核苷酸残基为C而非A,并使此处序列与Pennica序列相比新产生一个StyI切点,但由于差异发生在密码子第三位,没有引起编码的氨基酸变化;其二是第1777位核苷酸残基(终止密码子后第4位核苷酸残基)为T而非G,使与终止密码子相隔3个核苷酸残基处产生了一个新的TGA,与Pennica序列相比此处的BstNI切点也消失了。
  • 史瀛仙,张玉廉,沈玉,于建康
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(02): 180-183.
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    通过显微注射法把小鼠MT启动子与人生长激素的融合基因(MT-hGH)导入红龙睛金鱼受精卵内,共注射1506个卵子,获得800多尾成鱼。经斑点和Southernblot分子杂交表明,导入的MT-hGH基因与部分受体鱼的染色体DNA发生了整合,整合率为22%,转基因鱼血清中的生长激素含量平均高于对照组,平均生长速度高于对照组。导入的MT-hGH基因可以遗传给后代。
  • 刘明富,梁布锋,陈东,胡志红
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(02): 184-188.
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    将油桐尺蠖(Buzurasuppressaria)核多角体病毒晚期基因──多角体蛋白基因启动子及5′端编码区,以两种不同方式置于缺乏启动子的氯霉素乙酰基转移酶(CAT)基因上游,使其分别终止在不同翻译终止位点,其宿主菌具有明显不同的氯霉素抗性,最高达200mg/L LB培养基以上,表明昆虫病毒启动子能启动原核基因表达。对多角体蛋白基因启动子能在大肠杆菌中有效工作的原因进行了讨论。
  • 陶勇,冉永禄
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(02): 189-194.
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    经SephadexG-75凝胶过滤,QAE-SephadexA-50和CM-SephadexC-25离子交换层析的步骤,从湖南产尖吻蝮(Dienagkistrodonacutus)蛇毒中纯化出两个出血毒素(DaHT-1和DaHT-2).SDS-PAGE测得分子量均为23.5kD,IEF-PAGE测得等电点分别为5.6和5.2,两者具有相似的氨基酸组成,其中酸性氨基酸(Asx,Glx)分别占23%和24%,DaHT-1和DaHT-2的最小出血剂量(MHD)分别为0.5μg和0.8μg。都具蛋白水解酶活性,无对TAME,BAEE的水解活性和PLA2酶活性.两者的蛋白水解酶活力与出血活性并非正相关.DaHT-1和DaHT-2的最适温度分别为35℃和40℃,最适pH为6-9,对热均不稳定,温度高于60℃活性完全丧失。金属离子的分析显示每摩尔毒素蛋白约含0.5mol的Zn,1mol的Ca,较多的Na、K、Mg,不含Co。
  • 陶勇,冉永禄
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(02): 195-200.
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    用远紫外CD谱研究了湖南产尖吻蝮蛇毒的两个出血毒素(DaHT-1、DaHT-2)的溶液构象,计算得DaHT-1的α螺旋、β折叠、无规卷曲的含量分别为36.9%、35.5%、27.6%;DaHT-2的α螺旋、β折叠、无规卷曲分别为23.4%、31.3%、45.3%。随pH的增大或减小,峰位蓝移,酸性条件下的变化比碱性条件下的变化大。构象单元含量计算表明:α螺旋减少,无规卷曲增多,β折叠基本未变。温度和pH对CD谱的影响相似,50℃时峰位蓝移,α螺旋减少,无规卷曲增多.EDTA对CD谱影响显著,0.02mol/LEDTA便导致两个出血毒素呈极度的无序状态。EDTA完全抑制,半胱氨酸部分抑制,胰蛋白酶不影响它们的出血活性。
  • 王玉洁,刘持标,白光月,褚莹,吴子生,张河哲
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(02): 201-204.
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    以乙基纤维素作膜材,用液中干燥法使过氧化氢酶微胶囊化。研究了微胶囊化操作条件对酶活性的影响。通过测定微胶囊化酶的释放曲线,证明微胶囊膜对过氧化氢酶具有较好的固定性能力。固定化酶用于催化底物过氧化氢分解,测定米氏常数为0.55mol/L。
  • 史永昶,姜涌明,吴燕
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(02): 205-209.
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    用荧光光谱,紫外差示光谱和CD谱研究了一些理化因子对枯草芽孢杆菌86315α淀粉酶的构象与活力的影响,实验表明,酸变性和碱变性所引起的酶构象变化是不同的;乙醇不降低α淀粉酶活力,但使其构象发生较大变化,α螺旋度从天然酶的26,1%降到21.8%,其构象变化不引起活性中心的改变;酶在70℃处理10min后,由原来紧密构象变为松散构象,α螺旋度从26.1%降到9.0%,酶活性完全丧失;而在0.02mol/LCaCl_2和0.02mol/LNaCl的共同存在下,70℃处理10min,酶活性不变,其荧光光谱和CD谱接近于天然酶,所以,CaC_l2和NaCl能保护α淀粉酶的构象,使之不受热变性。
  • 徐蘅,裘奇,胡梅清,魏涌
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(02): 210-213.
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    经硫酸铵分级沉淀,离子交换层析和凝胶过滤等步骤,从人肝中获得了PAGE单一条带的谷胱甘肽过氧化物酶,比活提高120倍,得率为25%。凝胶过滤法测得分子量为90980,SDS-PAGE测定亚基分子量为22423.原子吸收法测得每分子酶含有四个硒原子。等电聚焦显示该酶等电点为5.0.酶活力的最适pH为8.5,最适温度为37℃。动力学实验提示该酶作用机理属于乒乓机制型。
  • 王勤,杨金波,沈剑敏,文永均,胡晓愚
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(02): 214-218.
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    报道了胸腺肽α_1活性片段Thymosinα_1[Lys(23)](23-27)OH和其自旋标记衍生物的合成及对实验动物免疫功能的影响。其氨基酸序列分别为H_2N-Lys-Glu-Glu-Ala-Glu-OH,用Thyα_1[Lys~(23)]表示,修饰物为Glu-OH),用Thyα_1[Lys~(23)]·R表示。HPLC测得该肽的纯度在90%以上,ESR谱测定自旋标记衍生物给出氮氧自由基信号,氨基酸组成与预期值相符。实验小鼠腹腔连续注射剂量为0.1、1、10、100和1000μg/kg的该肽10天后,发现腹腔巨噬细胞吞噬功能、ERFC阳性率及血清溶血素含量明显升高,且最佳剂量在0.1-10μg/kg范围。实验结果表明人工合成胸腺肽α_1活性片段及其自旋标记衍生物具有显著的免疫促进活性。
  • 赵晓瑜,静天玉,戴燕,刘建荣
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(02): 219-223.
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    编码纤维蛋白β链N末端七肽(β七肽)的寡核苷酸片段,通过基因重组技术插入到金葡核酸酶(P-1蛋白)基因的5′端。在P_RP_L启动子的调控下,β七肽以融合蛋白(β七肽·P-1)的形式在E.colfi细胞中得到高效表达。以纯化的融合蛋白为免疫原,制备出抗β七肽抗体;纤维蛋白原(FG,4g/L抑制实验证明,该抗体对纤维蛋白(FP)有特异性反应。
  • 张学忠,宋伦,王群,吴晓霞,唐锌进
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(02): 224-226.
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    以淀粉珠为载体的亲和层析法分离纯化高温α淀粉酶张学忠,宋伦,王群,吴晓霞,唐锌进(吉林大学酶工程国家重点实验室,长春130023;南京师范大学生物系,南京210024)金凤燮等人从酒曲中筛选出高产热稳定α淀粉酶的菌株,命名为Bacillussp-JF...
  • 张保林,黄辉,朱凌燕,岳晟,唐雯霞
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(02): 227-230.
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    Bi(Ⅲ)与金属硫蛋白作用性质研究张保林,黄辉,朱凌燕,岳晟,唐雯霞(南京大学配位化学研究所,配位化学国家重点实验室,南京210093)如何降低顺铂或其它抗癌铂的毒性,一直是癌症化疗中的重要课题之一,最近研究发现预先给大鼠或肺癌病人服用铋盐,可以极大...
  • 吕灿群,蔡镇潮
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(02): 231-234.
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    豚鼠不同组织亚细胞组分中缩醛磷脂酶活性的比较研究吕灿群蔡镇潮(皖南医学院生物化学教研室,芜湖241001)(加拿大玛尼托巴大学医学院生物化学与分子生物学系)缩醛磷脂(Plasmanogen)是存在于哺乳动物组织内含有烯醚键(Vinyletherbon...
  • 张新堂,徐明华,王楠,朱尚权,郭春生
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(02): 235-238.
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    溪七鳃鳗肌肉细胞膜胰岛素受体的研究张新堂,徐明华,王楠,朱尚权(中国科学院上海生物化学研究所,上海200031)郭春生(哈尔滨师范大学生化学研究所,哈尔滨150080)七鳃鳗是现存的最原始的圆口类无颌脊推动物之一,它的形态学和生理学特性已有详细研究和...
  • 郭胜清,赵华月
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(02): 239-242.
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    两种CNBr活化Sepharose固定化胆碱酯酶方法的研究郭胜清,赵华月(防化研究院,北京102205)根据黄姑鱼肌肉胆碱酯(EC.3.1.1.7ACHE)被有机磷化合物抑制的灵敏度高,来源容易,含量丰富等特点,我们将其做成固定化酶应用于含磷毒物监测...