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  • 1995年, 11卷, 第04期
    刊出日期:1995-08-20
      

    论文

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    论文
  • 张宏权,王允玲,周廷冲,王会信,刘农乐,蒋滋慧
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(04): 371-376.
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    采用PCR技术从E.coli基因组片段中克隆出碱性磷酸酯酶(PhoA)的启动子和信号肽序列.在PhoA启动予5'端设计了EcoRⅠ酶切位点,在信号肽编码序列3'端设计了HindⅢ酶切位点.将PCR产物酶切后EcoRⅠ-HindⅢ片段克隆至pBR322的EcoRⅠ-HindⅢ位点,组构出含有PhoA启动子和信号肽序列的分泌表达载体pBM-Pho-1.之后将人表皮生长因子的成熟肽基因克隆至该载体,使之在E.coli中获得分泌表达,另采用pINⅢ载体系统以分泌方式表达了人表皮生长因子。
  • 岳军明,张宏权,王允玲,任宏波,周廷冲,王会信,崔青山,殷震
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(04): 377-380.
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    将大鼠β乳酪蛋白的调控序列克隆于pGEM-4Z,用SP6、T7正反向引物进行序列分析,证实其正确之后将该调控序列克隆于真核表达载体pSVL中,构建成功了乳腺定位表达载体。同时在其下游插入了荧光素酶报道基因,用于在乳腺细胞表达调控的研究。
  • 曹亚,孙毅,黄周琪,李晓艳,顾唤华,祝和成,姚开泰
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(04): 381-385.
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    运用杂交组化及Northern法,对中国人鼻咽癌细胞株恶性转化基因Tx的表达进行了初步研究。结果表明该基因在鼻咽癌细胞株中表达1.3kbmRNA,但表达强度较低,在HPV阳性或阴性人宫颈癌细胞中均无表达,EBV阴性的B淋巴细胞系及HTLV-1阳性的T细胞系中为阴性,而在EBV阳性的B95-8及Raji细胞中Tx基因表达强烈,从而提示HPV及HTLV-1不增强Tx的表达水平,而EBV可能使Tx基因活化.这为进一步研究EBV与Tx等瘤基因协同作用提供了新的依据。
  • 董家新,沈倍奋,任蕴芳,朱诚,阮力
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(04): 386-391.
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    人IL-6受体是一个在各种细胞上广泛表达的跨膜糖蛋白分子,是IL-6发挥细胞效应所必需的。本文通过将IL-6RcDNA重组到痘苗病毒的TK基因中构建成重组痘苗病毒VIL6R。细胞原位杂交和APAAP染色结果表明,感染VIL6R后的Vero细胞中,IL-6R在mRNA和蛋白水平上均呈现较强的表达。Westernblot分析所表达的分子量为80kD,表明所表达的产物是糖基化的。IL-6结合试验表明,表达的膜IL-6R能够结合rIL-6,说明它是有功能的。利用VIL6R免疫小鼠后,能够刺激较强的抗体产生。从而为进一步研究IL-6R的信号传导和构效关系提供了基础。
  • 赵崇,宋学文,张连英,邓彤,张镜宇
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(04): 392-395.
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    使用RT-PCR方法克隆了Wistar大鼠脑α_1型甲状腺激素受体的cDNA,得到包含起始及终止密码子共1233bp、编码409个氨基酸的受体全长编码序列.酶切分析后,将此特异DNA片段重组入质粒pUC系统,得重组质粒pTRA.双脱氧末端终止法测定了全部核苷酸顺序,结果与文献报导的SD大鼠的结果一致,同时对长片段DNA的RT-PCR扩增进行了方法学的探讨。
  • 龙建银,张宏权,王会信,虞冠华
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(04): 396-400.
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    在测定了TGFβ1全长序列的基础上,构建了两个TGFβ1的表达载体pCMVβ和pSVLβ;分别从转录水平和翻译水平检测了这两个载体在COS-7细胞中的表达。同时利用COS-7短暂表达系统,建立了TGFβ1的生物测活法;并分别研究了上清收获时间、表达载体、转染方法对TGFβ1表达的影响
  • 管考梅,柳惠图,谭薇琦
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(04): 401-405.
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    毛喉萜(forskolin)对人胄癌细胞BGC-823增殖有明显抑制作用,具药物剂量和作用时间之依赖性。剂量为2×10~(-5)mol/L之毛喉萜使胃癌细胞在软琼脂中形成集落的能力显著降低;癌基因c-Ha-ras之表达明显被抑制,细胞核中与ras基因上游调控区2.5kb片段结合的三种蛋白结合能力下降。联系到以同样浓度药物处理胃癌细胞72h,细胞质、膜与细胞核中蛋白激酶C(PKC)活性均下降的现象,可能PKC活性下降与Ha-ras基因上游片段2.5kb结合蛋白之结合能力下降存在相关性,PKC可能通过影响DNA结合蛋白的磷酸化作用,导致了Ha-ras基因表达之被阻抑。而ras基因表达下降可能是毛喉萜抑制胃癌细胞增殖的一个重要分子事件。
  • 刘彬,丁卫,谷静丽,葛韵琴,杜国光
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(04): 406-411.
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    应用3H-TdR参入,流式细胞技术和Northernblot等方法,观察了EGF和IGF-Ⅰ对UMR106细胞增殖及β微管蛋白表达的影响。结果显示,两种生长因子分别处理UMR106细胞12h,在促进细胞DNA合成的同时,β微管蛋白mRNA的表达量明显提高。运用间接免疫荧光技术及Westernblotting方法,研究发现两种生长因子可使微管聚合及微管蛋白的表达有所增加。提示β微管蛋白的合成及聚合与细胞增殖间可能存在着一定的相互联系.
  • 周平坤,项晓琼,刘学英,夏寿萱
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(04): 412-416.
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    用脉冲电场凝胶电泳和双标记基因质粒DNA转染技术研究辐射敏感的毛细血管扩张性共济失调症患者皮肤成纤维细胞(AT5BIVA)和正常辐射抗性的人宫颈癌细胞(HeLaS3)DNA双链断裂重接修复率及其忠实性。结果表明γ射线照射诱发DNA双链断裂的产额和重接修复率,在两株细胞间无差别.而AT细胞对导入的限制性内切酶EcoRV产生双链断裂质粒DNA的重接修复忠实性显著低于HelaS3te胞,表明AT细胞易发生DNA错误修复,这很可能就是AT细胞高度辐射敏感性的主要原因。
  • 陈飞,刘华英,李桂源
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(04): 417-420.
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    DNaseⅠ超敏感位点的研究能够发现潜在的调控基因转录活化的位点,比较正常人外周血有核细胞,淋巴瘤细胞株P3HR1和人鼻咽癌低分化磷癌细胞株HOnE1和HNE2中Ha-ras-1瘤基因的DNaseⅠ超敏感位点发现,只有HONE1和HNE2细胞基因组中存在一个DNaseⅠ超敏感位点,位于第一个外显子上游0.37kb处,上述结果提示正常白细胞和P3HR1细胞中Ha-ras-1基因处于失活状态,而在鼻咽癌细胞基因组中则处于活化状态,它的活化可能与0.37kb处的DNA序列有密切的关系。
  • 李兴海,陈曼玲,蓝天鹤
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(04): 421-424.
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    用纯化的嗜麦芽假单胞菌(以下简称细菌)hCG结合蛋白制备多克隆抗体。间接免疫沉淀实验证明,该抗体能识别细菌hCG结合蛋白-[(125)~Ⅰ]hCG复合物;配体印迹分析及免疫印迹分析发现,该蛋白能与[(125)~Ⅰ]hCG发生特异的结合,其结合位置与抗体识别位置一致,为70kD蛋白带;同时,该抗体不能特异地抑制细菌hCG结合蛋白、大鼠睾丸或卵巢组织细胞膜制剂与[(125)~Ⅰ]hCG结合。
  • 卢明,童坦君,何洛文,赵敏
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(04): 425-429.
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    利用改进的葡聚糖活性炭饱和分析法(DCC法),对卵巢切除大鼠注射雌二醇(E组)或同时注射雌二醇和三苯氧胺(E+T组)后6h至64d,进行子宫ER含量测定,发现,E+T组比E组的ER值小并且增加缓慢;E组的ER值在注射后30d达到最大值而且数值超过对照组(C组)。计算机曲线拟合E组或E+T组与C组的ER比值求得:E组开始注射雌二醇时ER水平为C组的2.033倍,即=2.033,恢复过程的时间常数τ'为51.55d,3 ̄H-雌二醇与ER结合过程的时间常数τ为13.0d;E+T组的=1.315,τ'=38.76d,τ=21.55d,说明同时给予三苯氧胺和雌二醇情况下,三苯氧胺有抑制雌二醇诱导ER水平升高的作用,并减缓3 ̄H-雌二醇与ER的结合过程。另外,还求得E+T组中三苯氧胺和ER和结合率约占43.7%,表明三苯氧胺与雌二醇对ER有竞争性结合作用。
  • 王润华,沈培奋,李钰云
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(04): 430-433.
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    建立了一种简单快速微量的无细胞体系检测蛋白质合成的方法,在总体积55μl的体系中加20μl兔网织红细胞裂解液,在37℃培养30min能使其中的3H-Leu参入量达到最大,运用该方法可以筛选出植物组织中对真核细胞蛋白质生物合成具有强烈抑制作用的单链核糖体失活蛋白(单链毒素)。
  • 梁忠岩,苗春艳,张翼伸,张丽萍
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(04): 434-436.
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    树舌多糖CF2a经15mmol/L104h选择氧化,继以次氯酸氧化、得修饰树舌多糖CF2am,其结构分析表明侧链氧化率为65%,以J-500C圆二色性仪比较测定CF2a,CF2a一刚果红复合物及CF2am在不同pHT的CD谱,结果表明紫外区中性多糖CF2a缺少结构信息,而修饰后的CF2am在pH2.0时有很强的有序结构信息,CF2a分子整体修饰、即其与刚果红形成复合物时,除提供很强的外源Cotton效应外也提供了一些有序结构信息.
  • 王建华,吴显荣
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(04): 437-441.
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    用奎吖咽(quinacrine)作荧光指标剂,测定玉米(ZeamaysL.)根尖微粒体(MIC)膜囊泡的H~+-泵活性,结果表明1mmol/LNaN_3仅抑制该泵活性约8%,而0.8mmol/L钒酸盐(Van)则可抑制其活性达80%,说明MIC制剂中H~+-泵活性主要由质膜(PM)H~+-ATPase产生。此泵活性严格需要Mg~(2+),二价阳离子作用大小的顺序为Mg~(2+)>Mn~(2+)>Zn~(2+)>Ca~(2+)=0;阴离子作用大小的1顺序为Br~->Cl~->NO_3~->SO_4~(2-),并初步证实当质膜同侧发生电子传递时,没有跨膜H~+梯度(△μH~+)生成。
  • 白龙川,郭双立,吴会云,颜卉君,吴国利
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(04): 442-445.
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    对RA、HHT和WB_(652)诱导HL-60细胞过程中,细胞浆和膜溶脱部分的蛋白质酪氨酸磷酸化水平变化进行了对比研究,结果发现,在胞浆部分主要有四种含有P-Tyr的蛋白,而且80kD蛋白酪氨酸磷酸化水平随着诱导发生变化。诱导前后内源性蛋白上P-Tyr百分含量也发生了改变。
  • 周立,李建吾,郑远旗,陈竟春
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(04): 446-451.
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    以A.niger来源的果胶酶为材料,经过CM-SephadexC-50及SephadexG-100两步骤分离纯化得到电泳均一的endo-PG1及endo-PG2,其亚基分子量分别为35kD及37kD,含糖量为11.22%及8.3%,最大紫外吸收峰分别在274nm及269nm处,氨基酸组成分析结果表明Gly含量较高,Met含量较低,不含Cys,并且酸性氨基酸含量高于碱性氨基酸,圆二色谱结果表明二级结构主要为α螺旋和β折叠,其中endo-PG1含α螺旋45.1%,β折叠24.9%;endo-PG2含α螺旋39.6%,β折叠36.5%。
  • 徐建兴,尚贺勇
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(04): 452-455.
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    研究了羧基修饰剂DCCD对泛醌结合蛋白QPs重组活力的影响;用0.1%TritonX-100增溶QPs后,用250mol/molQPs的DCCD于室温处理5min,处理后的QPs丧失约50%与琥珀酸脱氢酶的重组活力。先将QPs与琥珀酸脱氢酶重组再用DCCD处理没有发现重组的琥珀酸泛醌还原酶活性的降低。此结果说明QPs中存在重组活性必需的羧基。
  • 徐建兴,尚贺勇
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(04): 456-460.
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    用C14(DCCD)参入法确定了在泛醌结合蛋白QPs中有四个对重组活性必需的羧基,它们全部定位在24000亚基上。
  • 陈日炎,江黎明,覃燕梅,梁念慈
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(04): 461-464.
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    利用 ̄(32)P-NaH2PO4标记猪血小板,以蛋白激酶C的40kD底物为蛋白激活的标志.用血小板激动剂在聚集浓度范围内处理血小板,结果表明,除了不能使猪血小板聚集的肾上腺素外,凝血酶等激动剂都使血小板40kD底物蛋白磷酸化明显增加,同时38kD,26kD蛋白质磷酸化也明显增加,且40kD底物磷酸化与血小板聚集有平行增加关系.蛋白激酶C在血小板聚集中可能起着重要的调节作用。
  • 黄河清
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(04): 465-469.
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    在紫外可见光谱区内,固氮酶铁钼辅基〔(Mo_2Fe_(12)S_(12))4-〕均无特征吸收峰,不含高柠檬酸盐。含双钼的铁硫簇〔(Mo_2Fe_(6~12)S_(6~12))~(1~4)-〕的电荷数、颜色与该金属簇中的亚铁量成对应关系,并都有较高的生物重组活性.
  • 骆焕东,丘隆芳,崔大敷,张新堂,郑乐,阮康成,张友尚
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(04): 470-473.
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    去B链C端八肽胰岛素(DOI)与Gly-Phe-Trp-NH2通过胰蛋白酶催化缩合后,经分离纯化得到聚丙烯酰胺凝胶电泳均一的B25-Trp取代的去B链C端五肽胰岛素酰胺(〔B25-Try〕DPI-NH2).酶促缩合率大于85%,回收率为36.2%。用小白鼠惊厥法测得〔B25-Trp〕DPI-NH2的体内活力约为天然胰岛素的70%,用人胎盘细胞膜测得的其胰岛素受体结合能力为天然胰岛素的72.5±2.4%;利用色氨酸和酪氨酸的内源荧光研究了此类似物的溶液构象.
  • 何忠效,顾郁,饶泓,白坚石,马晴
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(04): 474-477.
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    以5-氮-2'-脱氧胞苷(5-aza-CdR)为诱导物,在0.5μmol/L的最佳浓度下,可诱导HL-60细胞分化达15%左右。同时,用[ ̄3H]-methyl-s-adenosylmethionine( ̄3H-SAM)为底物,通过同位素参入法,测定了不同浓度诱导物对HL-60细胞DNA甲基化酶活力的影响,发现在最佳诱导物浓度下,可使HL-60细胞DNA甲基化酶活力明显下降,此外,也比较了不同分化水平的HL-60细胞中具有不同甲基化水平的DNA在体外接受甲基的能力,从而证明5-aza-CdR诱导HL-60细胞分化与其DNA甲基化状态密切相关。
  • 张彤,周海梦
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(04): 478-482.
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    氨基酰化酶在阴离子去圬剂十二烷基硫酸锂(LDS)溶液中的失活与去折叠的研究结果表明,在低浓度的LDS溶液(0.6mmol/L)中变性时,以荧光和紫外差吸收方法监测的酶分子构象尚未发生明显变化。而酶的活力已经大部分或几乎全部丧失。当LDS浓度达1.6mmol/L时,此时酶分子的构象变化才达到最大程度,在实验使用的LDS的浓度范围内,用远紫外CD光谱监测的二级结构没有发生明显的变化。从上述研究结果,可以认为含锌氨基酰化酶的活性部位也具有相对的柔性。
  • 陈敏,时宇,史凌云,李潭,赵玲
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(04): 483-486.
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    观察了表皮生长因子(EGF),生长抑素(SS)对体外培养的人早孕绒毛膜促性腺激素(hCG)分泌及hCGβ-mRNA含量的影响。发现EGF可明显刺激绒毛分泌hCG,显著增加hCGβ-mRNA含量,生长抑素虽然对绒毛hCG分泌及hCG β-mRNA含量无明显影响,但可抑制EGF,GnRH刺激的hCG分泌及hCGβ-mRNA水平。提示EGF,SS在妊娠早期参与了hCG分泌的调节。
  • 董之海
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(04): 487-489.
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    大黄鱼肌肉胆碱酯酶的纯化董之海(北京防化研究院,北京102205)胆碱酯酶是神经系统中一种重要的水解酶[1]对有机磷化合物作用特异性强,灵敏度高[2],在军事分析化学、食品卫生、农业化学工业、环境检测等领域有着较为广泛的用途,日益受到人们的关注;胆碱...
  • 杨东丽,顾熊飞,马涧泉
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(04): 490-492.
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    应用正交法观察影响钙调素依赖环核苷酸磷酸二酯酶活性的因素杨东丽,顾熊飞,马涧泉(中山医科大学生化教研室,广州510089)(皖南医学院生化教研室,芜湖241001)钙调素(calmodulin,CaM)是一种广泛存在于生物界的重要钙受体蛋白,当它与C...
  • 李贤慧,石育原,甄红英
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(04): 493-494.
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    1,25二羟基维生素D_3对L929细胞神经生长因子的诱导作用李贤慧,石育原,甄红英(白求恩医科大学分子生物学中心实验室,长春130021)随着1,25-二羟基维生素D3(1,25-(OH)2-D3)及其受体(VDR)研究的深入,发现(1,25-(O?..
  • 黄才,梁念慈
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(04): 495-497.
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    磷酸-Tyr-Sepharose吸附法测定HL-60细胞中磷脂酰肌醇-3-激酶黄才,梁念慈(广东医学院医用生化研究所,湛江524023)磷脂酰肌醇-3-激酶(PI-3-K)催化磷脂酰肌醇(PI)和磷脂酰肌醇-4-磷酸(PI-4-P)的磷酸化分别生成磷...