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  • 1996年, 12卷, 第03期
    刊出日期:1996-06-20
      

    论文

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    论文
  • 何海鹰,王波,贾维红,梁康,张昌颖
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(03): 253-257.
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    观察了亚硒酸钠(Na2SeO3)在体外作用于大鼠晶状体上皮细胞(RLEcells)而造成的DNA单链断裂(singlestrandbreaks,SSB),并对其DNA损伤、修复动力学做了初步研究.发现SSB严重程度与亚硒酸钠的浓度呈线性相关,其SSB重接修复约在30~60min内完成.还作了有关非程序DNA合成(UDS)的检测,发现与SSB相比,UDS发生迟且持续时间更长,提示Na2SeO3可能在体外对大鼠晶状体上皮细胞除造成SSB以外,还可能造成其它种类的DNA损伤.
  • 王波,何海鹰,李显喜,张家萍,梁康,张昌颖
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(03): 258-261.
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    在大鼠晶状体器官培养的条件下,运用单细胞电泳法(SCG),对远在晶状体混浊之前的晶状体上皮细胞进行了有关TNT致其DNA损伤(SSB)与修复的初步观察,提示DNA损伤也是体外TNT性白内障中的早期变化.
  • 王易伦,张平武,戴建新,郭瀛军,陆德如
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(03): 262-266.
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    人粒-巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)是一种重要的造血生长因子.利用基因重组技术构建两个hGM-CSF的E.coli表达菌株,一个为在不改变氨基酸顺序的前提下,对mRNA翻译起始区核苷酸顺序进行优化突变(hGM-CSF(M)),另一个为未突变的对照(hGM-CSF(N)).经酶切电泳、DNA测序、SDS-PAGE和Westernblot等分析鉴定,证明两者均能表达特异性的14.6kDhGM-CSF,但hGM-CSF(M)的表达水平较hGM-CSF(N)提高了1.26倍,占菌体总蛋白的16.9%.mRNA翻译起始区二级结构预测分析表明,优化突变后生成自由能ΔG从原来的-10.2提高至-9.4Kcal,AUG从部分配对状态变为非配对状态.
  • 刘俊凡,卢义钦,夏晖,徐金耀
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(03): 267-273.
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    在114名青年人中筛查出的两例血型糖蛋白(GP)变种,携有MiⅢ基因特殊的变异片段.先证者均为海南省黎族男性,属杂合子.借助聚合酶链式反应(PCR)获得跨越MiⅢ基因外显子2~4的基因组序列,再进行被扩增DNA的直接测序,确证其基因结构属(δ-α-δ)杂化体.通过基因的微转换机理,δ基因的假外显子在其3'端同显示5'剪接信号的α基因外显子3及内含子3融合,前两者形成一组合外显子3.MiⅢ基因的近端(δ-α)断点(Breakpoint)在组合外显子3内(第825~850位核苷酸);而远端(α-δ)断点则在内含子3内(第904~968位核苷酸).
  • 王向阳,胡云英,柳惠图
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(03): 274-278.
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    采用自行构建的过表达PKCα亚类的正常人胚肺细胞模型,观察到细胞生长加速,血清依赖性明显下降,细胞形态发生变化,单层培养丧失接触抑制性,出现岛状生长,与对照组细胞相比,贴壁依赖性下降,在软琼脂中能形成小集落,细胞中微丝发生部分解聚,进一步检测观察到细胞中与转化密切相关的ras癌基因表达明显增强,抑癌基因p53表达下降.首次表明在正常人胚肺细胞中PKCα的过表达直接导致细胞增殖加速,并可诱导出现部分转化特征.因此,PKCα的过表达与活化可能在细胞多阶段致癌过程中发挥着重要作用,而癌基因表达的增强与抑癌基因表达减弱可能是其作用分子机理之一.
  • 胡申江,黄元伟,李英
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(03): 279-283.
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    观察自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞(VSMCs)的生长曲线、c-fos原癌基因表达和c-fos基因酶切图谱的情况,与对照组京都维斯特大鼠(WKY)进行对比.结果显示,在小牛血清作用下SHR的VSMCs生长速率和c-fos原癌基因表达明显大于WKY;c-fos原癌基因限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)分析表明,经BamHⅠ或EcoRⅠ酶切后的SHR和WKY的酶切图谱一致,同时也未发现SHR的fos基因扩增现象.提示,VSMCs的异常增殖和c-fos原癌基因的表达异常与高血压的形成有关,而c-fos原癌基因的过度表达可能是由于某些与基因转录调控有关的因素异常所致.
  • 朱振齐,刘进,马大龙,张颖妹,吴跃红
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(03): 284-288.
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    将人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和人血清白蛋白第三功能区(HAS-D3)的基因串联后,在E.coli中获高效表达,表达量占菌体蛋白的32.6%.利用TF-1体外细胞活性测定表明,GM-HSA的活性单位为1.04×10~6U/mg,虽然其比活性低于GM-CSF,但比后者具有更高的体外热稳定性和储藏稳定性.
  • 鞠文君,尹力,王端顺
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(03): 289-294.
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    利用微丝(microfilament,MF)解聚药物细胞松驰素B(cytochalasinB,CB)处理G_0期小鼠C_3H_(10)T_(1/2)成纤维细胞,对G_0至S期DNA合成,胸腺嘧啶核苷激酶(thymidinekinase,TK)活性、TK基因表达、钙调素(calmodulin,CaM)水平和一些细胞周期早期基因的表达进行了观察,G_0期细胞经3mg/LCB处理2h,促MF解聚增强了血清对S期细胞TK活性、TK基因表达和DNA合成的刺激作用,并促进细胞提前进入S期.血清刺激G_0期细胞进入晚G_1期和S期时,CaM水平明显升高,而CB预处理则使CaM含量进一步增加,特别是CB处理促使S期CaM增加向核内转移.CB处理明显增强血清对c-jun、c-fos和c-myc基因表达的刺激作用,而PKC抑制剂H_7则抑制CB处理对这些基因转录的刺激作用,说明CB使G_0期细胞MF解聚刺激c-jun、c-fos和c-myc的转录活性与PKC的作用有关.结果表明G_0至S期早期MF的重组可促进细胞进入S期,增强DNA合成.
  • 蒋红,朱玉贤,陈章良
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(03): 295-298.
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    以T7为启动子构建了蜘蛛杀虫肽基因的表达质粒pTHI9,转化大肠杆菌BAL31,在其对数生长期加入1mmol/LIPTG能诱导杀虫肽的产生,表达产物占菌体总蛋白的13.75%,并且表达的杀虫肽具有功能活性.
  • 杜国光,顾文聪,顾文霞,杨非易,李平风
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(03): 299-302.
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    促甲状腺素(TSH)通过甲状腺细胞膜上的TSH受体(TSHR),产生第二信使cAMP,从而激活cAMP反应性起动子,而使相应的基因获得表达.实验结果表明,在构建有TSHR和糖蛋白激素cAMP反应性起动子以及萤光素基因(Luc)的转染细胞中,经补肾益精中药固真方提取液(1×10~(-4)稀释)处理3~5d后,可下调TSHR基因的表达,并使TSHR数目减少.提示固真方可调整甲状腺细胞的功能,或许有利于调整甲状腺机能亢进.
  • 王佐仁,陈军松,吴卫甲,钱嵘,冯波,周元聪
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(03): 303-307.
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    经SephadexG-75凝胶过滤和FPLCMonoQ阴离子交换柱层析及Superose-12凝胶过滤,从竹叶青蛇的蛇毒中纯化到一个能诱导人血小板聚集的均一组分.经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其分子量为68000左右.等电点为4.3.测定了它的氨基酸组成,对它活化血小板的作用机理进行了初步研究,结果表明它是一种强的血小板激动剂.
  • 王丽华,崔肇春,屠亚平,杨福愉
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(03): 308-312.
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    研究了神经节苷脂GM_3参入肌质网膜后Ca~(2+)-ATP酶活力的变化,结果表明:GM_3参入肌质网膜后,对肌质网Ca~(2+)ATP酶活性(ATP水解活力与转运活力)有明显的激活作用.当参入的GM_3浓度为8μmol/L、参入时间为120min、温度为30℃时,对Ca~(2+)-ATP酶的激活作用最大.
  • 张金红,张晓辉,张毓琪,陈叙龙
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(03): 313-316.
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    三丁基锡(TBT)是人红细胞膜上Na~+,K~+-ATPase的一种抑制剂.该化合物对Na~+,K~+-ATPase有很强的抑制能力.在正常的反应体系中,TBT浓度仅为10μmol/L时,该酶的活性全部丧失;其抑制Na~+,K~+-ATPase的IC_(50)值为2.2μmol/L.K~+能增强TBT的这种抑制作用,TBT为K~+的反竞争性抑制剂.
  • 刘继林,燕秋,朱正美
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(03): 317-321.
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    为探讨肿瘤转移与细胞表面的糖结构的关系,对小鼠肝癌细胞的高、低淋巴道转移株Hca-F和Hca-P进行了蛋白质电泳及经蛋白质印迹术后的5种凝集素(ConA、WGA、UEA、SBA、PNA)结合糖蛋白谱的对比分析.结果表明:高、低转移两株细胞的SDS-PAGE谱基本相同;ConA特异结合糖蛋白共有5种(~72,80~90,~104,~150,~200kD);其中较明显的差异为~72kDConA特异结合糖蛋白,它在Hca-P细胞的表达明显高于Hca-F细胞.WGA特异结合糖蛋白1种(~150kD),在Hca-P细胞的表达略高于Hca-F细胞.此外,实验发现两种性质未明的蛋白质(~79,~130kD),后者在Hca-P细胞的含量明显高于Hca-P细胞.结果提示Hca-F和Hca-P细胞不同的转移表型可能与其糖蛋白的表达有一定的关联.
  • 康铁邦,黄才,梁念慈
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(03): 322-326.
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    槲皮素(Quercetin,Que)为天然的黄酮类化合物,具有广泛的药理作用,酪蛋白激酶Ⅱ(CKⅡ)在细胞的增殖和分化及血小板的活化过程中起重要作用.依次采用DEAE-纤维素和肝素-Sepharose4B层析法部分纯化了大鼠肝CKⅡ;发现槲皮素对CKⅡ活性有强烈的抑制作用,其IC_(50)为12.2μmol/L;Lineweaver-Burk双倒数作图表明:Que对CKⅡ的抑制作用与酪蛋白呈竞争性,而与ATP呈非竞争性抑制.这可能是槲皮素抑制血小板聚集的又一机制,也可能与槲皮素抑制癌细胞DNA合成有关.
  • 谢海春,许彩民,潘华珍
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(03): 327-331.
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    胰岛素介体──肌醇磷酸多糖,被认为是胰岛素的第二信使,存在于细胞膜上的糖肌醇磷脂是产生该介体的前体,经胰岛素或磷脂酰肌醇特异性的磷脂酶C(PIPLC)水解,产生介体和二酰甘油(DG).本实验以人红细胞为材料,用3 ̄H同位素标记、有机溶剂提取、薄层层析及放射性自动计数等方法,分析胰岛素或PIPLC作用于红细胞后前体和DG的变化情况,以推测介体的产生机制.结果显示:胰岛素使红细胞膜上及释放至胞外上清的前体量均较对照升高,且使体系中的DG量升高;PIPLC则使红细胞膜上的前体量下降,使释放至胞外上清的前体量升高,推测:胰岛素或PIPLC作用于完整细胞时,激活了某种酶,使前体先从膜上释放至胞外上清,再被水解为介体和DG,同时胰岛素还可能激活完整细胞内再合成前体的机制,而PLPLC却不能.
  • 朱宇,蔡海江
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(03): 332-335.
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    应用经PMA诱导衍生的THP-1巨噬细胞为模型,以单克隆抗体C7B封闭oxLDL上的LDL受体结合位点,结果发现,正常细胞在摄取oxLDL时LDL受体与清道夫受体起协同作用;但C7B作用于蓄积了脂质的THP-1巨噬细胞时,对细胞脂质蓄积程度无明显影响,清道夫受体活性不但不降低反而有所升高,说明由于脂质蓄积LDL受体的作用减弱.
  • 周红,曾仲奎,鲍锦库,鲍林
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(03): 336-340.
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    中药常春油麻藤种子中含有A型血专一性的凝集素(MSL).该凝集素可经盐析、离子交换及凝胶过滤进行纯化,当其浓度为0.49μg/ml时就能凝集人A型血细胞,对人类B、O型及兔红细胞无作用.Gal,GalNAc和胃粘蛋白对MSL的凝血活性有强抑制作用.MSL含中性糖5.7%,凝胶过滤测得分子量为131800,SDS-PAGE测得分子量为66000和33000,表明MSL可能由两个不同亚基组成.MSL还是一种促有丝分裂原,对人外周血中淋巴细胞的转化率可达76.2%.
  • 唐治华,罗丽华,虞冠华,施凤霞,丁树标,许祥裕
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(03): 341-343.
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    采用HPIEC应用CM交换柱分离纯化E.coli工程菌表达的rIL-2,与空气氧化复性相比较,又有1倍以上的变性rIL-2在色谱过程中得到复性,且溶液pH影响rIL-2的复性和纯化效果:pH7.0时rIL-2复性率高于pH8.0时,但纯度明显低于pH8.0时分离的rIL-2.
  • 周立,郑远旗,李建吾,蒋磊,贾成禹
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(03): 344-347.
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    以魔芋葡甘聚糖(KGM)凝胶作为铜金属螯合亲和层析的载体一步亲和纯化猪血SOD,得到电泳均一,比活为8622U/mg,纯化倍数为77.8倍的SOD,其回收率为85.4%.探讨了魔芋葡甘聚糖凝胶作为亲和载体的可能性及前景.
  • 卢顺舵,高向阳,徐凤彩
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(03): 348-351.
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    分别以不同浓度(A_(450nm)表示)的高压灭活白色葡萄球菌、大肠杆菌及水杨酸对萝卜溶菌酶进行不同时间的诱导.结果表明,诱导时间24h效果最好,白色葡萄球菌最适浓度A_(450nm)为0.94,酶的活力提高了2.34倍;大肠杆菌最适浓度是A_(450)nm为0.55,诱导酶活力提高了0.75倍,以0.2%的水杨酸为诱导物时,第4d和第8d的效果最好,酶活力分别提高了2.4和1.7倍.以酶作用产物进行田间叶面喷施和叶面喷施加根部灌施进行诱导,48h后酶活力提高2.16和3.66倍.
  • 江红,李清漪
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(03): 352-356.
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    大瓶螺蛋白腺经磷酸盐缓冲液抽提、硫酸铵分级沉淀、SephadexG-100和Sepharose4B凝胶过滤,可获得在不连续PAGE(pH4.3和pH8.9)上显示单一蛋白质染色带的大瓶螺凝集素(AGL).该凝集素对人血红细胞无血型专一性,但对A型血红细胞的凝集作用最强.AGL的血凝活力可被乳糖或半乳糖所抑制.AGL分子中的中性糖含量为0.24mg/mg蛋白质.用SDS-PAGE法测得其亚基分子量为15000,且只有一种亚基.AGL中Cys和Phe的含量较高,并较耐热.
  • 朱中良,龚为民,牛立文,滕脉坤
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(03): 357-359.
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    从皖南尖吻蝮蛇(Agkistrodonacutus)毒液中经DEAE-Sepharose和SephacrylS-200两步凝胶柱层析首次纯化出一种中分子量出血毒素(简称AaHⅣ).经SDS-PAGE和等电聚焦凝胶电泳测定其分子量为44kD,等电点为pH5.0.从500mg粗毒中可获得20mgAaHⅣ纯品.AaHⅣ有较强的出血活性,最小出血剂量(MHD)为0.4μg.
  • 马克里,朱正美,凌茂英,崔肇春
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(03): 360-364.
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    采用高效薄层层析(HPTLC)对两株具有不同淋巴道转移潜能的小鼠腹水型肝癌瘤株细胞膜鞘糖脂组分进行了比较分析.低转移的CL-A_2瘤株神经节苷脂以GM_3为主,高转移的CL-16A_3瘤株则以GM_2为主.两细胞株中性鞘糖脂各组分相对百分含量无较显著差异.脂结合唾液酸含量测定表明,CL-16A_3瘤株脂结合唾液酸含量约为CL-A_2瘤株的三倍.提示,具有不同淋巴道转移潜能的瘤细胞,其质膜鞘糖脂的组成也不同.
  • 马克里,刘彦,王左,崔肇春
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(03): 365-369.
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    神经节苷脂GM3诱导人单核样白血病J6-2细胞沿单核/巨噬细胞途径分化.在GM3诱导分化同时,J6-2细胞磷脂代谢发生了显著变化.采用((32)P)Pi、[GH3-3H]胆碱和[CH3-3H]SAM参入实验对GM3影响J6-2细胞PC代谢的机制进行了初步的探讨.GM3促进[(32)P]Pi参入J6-2细胞PC;抑制[CH3-3H]胆碱参入PC及PC合成的前体磷酸胆碱及CDP-胆碱;GM3促进[CH3-3H]SAM参入PC,但抑制[CH3-3H]SAM参入PC合成的前体胆碱、磷酸胆碱和CDP-胆碱.上述结果提示,GM3抑制J6-2细胞PC合成的CDP-胆碱途径,促进PC合成的PE甲基化途径.
  • 王石泉,汤国枝,张鹤云,李敏意,金以丰
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(03): 370-373.
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    人胰腺细胞培养及胰岛素的分泌王石泉,汤国枝,张鹤云,李敏意,金以丰(南京大学生物化学系,南京210093)胰岛β细胞的体外培养获得胰岛素已有报道,但大多采用新生大鼠胰腺,且β细胞成活率低,分泌量少,还处在研究阶段[1-4].本实验采用人胰腺细胞做较大...
  • 张尔贤,俞丽君,陈展科,肖湘
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(03): 374-376.
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    含酚基化合物抑制TBAS生成体系的抗氧化活性比较张尔贤,俞丽君,陈展科,肖湘(汕头大学理学院生物学系,汕头515063)Halliwell(1985)[1,2]设计了以2-脱氧-D-核糖(以下简称脱氧核糖)作为·OH自由基分子探针的反应系统,通过检测...
  • 杨红,曹淑桂,韩四平,黄仲丽,杨同书
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(03): 377-379.
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    微环境对脂肪酶催化拆分外消旋2-辛醇的影响       杨红,曹淑桂,韩四平,黄仲丽,杨同书(吉林大学酶工程国家重点实验室,长春130023)手性2-辛醇不仅是制备液晶材料不可缺少的重要手性原料,也是合成具有光学活性的医药和农药的重要手性中间体.本文...