DNA串联重复序列扩展是引起多种神经性疾病的一个重要因素。对重复序列形成的高级结构研究可为相关疾病的发病机制和治疗策略提供重要的理论基础。位于半胱氨酸蛋白酶抑制剂B（cystatin B, CSTB）基因启动子区的一段十二核苷酸重复序列d［CGCGGGGCGGGG］n的扩展是导致其表达异常，进而引起神经退行性疾病进行性肌阵挛癫痫（progressive myoclonus epilepsy，EPM1）的主要原因。但对其可能机制及高级结构的研究尚未见报道。本研究采用圆二色光谱法（circular dichroism spectroscopy, CD）和核磁共振波谱法（nuclear magnetic resonance spectroscopy, NMR），对含有多个重复单元的d［CGCGGGGCGGGG］n（n=2,4）形成的高级结构进行了解析。结果发现，含有2个重复单元的d［CGCGGGGCGGGG］2序列，可在1价阳离子K+诱导下，形成稳定的平行链G四链体结构。而含4个重复单元的d［CGCGGGGCGGGG］4序列，可在分子内形成串联G四链体堆叠排列。说明含多个重复单元的十二核苷酸重复序列，可形成分子内串联堆叠G四链体高级结构。这些结果为十二核苷酸重复序列扩展，导致CSTB基因表达异常的分子机制提供了一种可能的合理假说，并为后续寻找小分子配体识别十二核苷酸串联重复扩展序列，进而调控CSTB基因表达的EPM1治疗策略提供了理论基础。

苦皮藤素V是一种对昆虫具有毒杀活性的化合物，从植物苦皮藤（Celastrus angulatus Max）中分离出来。目前，已发现苦皮藤素V可与粘虫中肠液泡型ATP酶（V-ATPase）的H、B和a亚基结合，但是其具体作用机理还尚不清楚。本研究将大肠杆菌(Escherichia coli)中表达得到的东方粘虫中肠V-ATPase A亚基突变体TSCA和V-ATPase B亚基包涵体洗涤、溶解后进行复性，获得可溶性AB亚基复合物后采用亲和层析纯化。将纯化好的AB亚基复合物测定H+K+-ATPase活性，证明其有ATP水解活性。随后，测定苦皮藤素V对复合物ATPase的抑制活性，发现加入苦皮藤素后，复合物ATPase活性降低。因此，其可能是通过抑制了AB亚基复合物的ATPase活性，从而产生了杀虫效果，证明AB亚基复合物为苦皮藤素V的潜在靶点之一。这为了解苦皮藤素与VATPase相互作用机制打下了基础，也为进一步开发新型杀虫药物奠定了基础。

非转移性黑色素瘤糖蛋白b（glycoprotein non-metastatic melanoma protein b，GPNMB）及其同系物色素细胞特异性黑色素细胞蛋白（pigment cell-specific melanocyte protein，PMEL）对黑素体的形成和黑色素的生成具有重要的作用，而GPNMB和PMEL的功能还有待深入研究。本文旨在探索GPNMB和PMEL在不同毛色绵羊皮肤表达是否存在差异，确定紫外线b（UVB）对GPNMB和PMEL是否有影响。免疫组织化学结果表明，GPNMB在不同毛色绵羊皮肤的毛基质、内外毛根鞘、毛乳头等区域均有表达。Western印迹和qRT-PCR结果显示，黑色绵羊皮肤中GPNMB和PMEL表达量，高于白色绵羊皮肤。黑色素细胞经UVB照射后，GPNMB和PMEL的表达增高。UVB照射剂量为100 mJ/cm2时，黑色素细胞活性最高；单次UVB辐射后，GPNMB和PMEL mRNA表达量在72 h达到顶峰，两者的曲线变化趋势大致相同。UVB连续辐射后，GPNMB mRNA表达量在4 d达到顶峰，而PMEL mRNA表达量虽然在3 d升高，但且对GPNMB作用更明显。上述结果提示，GPNMB和PMEL在不同毛色绵羊皮肤存在差异性表达。UVB单次或者连续照射，均促进GPNMB和PMEL表达，且对GPNMB影响更显著。GPNMB和PMEL可能通过影响黑素体的成熟进而调节黑色素的生成。

已知Rho激酶抑制剂可调控细胞骨架重建，激活相关转录因子，进而促进细胞分化。然而，关于Rho激酶抑制剂对细胞骨架和成骨细胞分化的影响及两者之间关系尚未见报道。本研究旨在阐明Rho激酶抑制剂Y27632调控细胞骨架重建，促进成骨分化。取新生SD大鼠头盖骨组织体外培养细胞传至第3代，给予Rho激酶抑制剂Y-27632进行干预。采用罗丹明标记的鬼笔环肽对细胞骨架进行细胞化学染色。结果显示，培养1 d和2 d，Rho激酶抑制剂Y-27632处理的细胞呈现多角形，并伴有部分伪足形成。细胞培养4 d和7 d，Y-27632处理的细胞碱性磷酸酶（alkaline phosphatase, ALP）活性明显增加（P<0.01）。实时定量PCR揭示，加Y-27632处理细胞的骨分化相关基因Runx2、Alp、β-catenin(β-cat)、osteopontin(Opn)的mRNA表达水平均显著高于对照细胞（P<0.05或P<0.01）。以上结果证明，Rho激酶抑制剂Y27632能够影响大鼠成骨细胞的形态，并有促进其分化作用。本研究为骨代谢疾病及组织工程的研究提供了新的线索和启示。

Cct6a基因编码CCT（chaperonin containing tailless complex polypeptide）的ζ亚基，属Ⅱ型伴侣素，是一种广泛存在于细胞浆中的异型寡聚蛋白，在肌动蛋白、微管蛋白的组装和折叠中发挥着重要的作用. Cct6a在鸡性成熟和卵泡发育中发挥重要作用，然而其在卵泡发育中的分子机制尚不十分清楚. 本研究采用qRT-PCR分析了Cct6a在鸡卵泡细胞中的表达，结果表明，Cct6a在鸡卵泡膜细胞中高表达，并与卵泡体积的增大相关. 利用shRNA对鸡卵泡膜细胞中的Cct6a基因进行了敲低分析，转染48 h后鸡卵泡膜细胞中Bcl-2基因的表达量显著降低（P=0.0429），Caspase-3基因的表达无变化；过表达Cct6a后的鸡卵泡膜细胞中Bcl-2基因的mRNA表达量有增高趋势，Caspase-3基因的mRNA表达量呈下调趋势. 因此，在鸡卵泡膜细胞中Cct6a影响Bcl-2基因表达，是否Cct6a可影响Caspase-3基因表达尚需进一步实验证明.

含锚蛋白重复和IBR结构域蛋白1（ankyrin repeat and IBR domaincontaining protein 1，ANKIB1）属于RING-IBR-RING (RBR)蛋白家族，也是该家族中唯一含有泛素结合模体的成员，能促进某些蛋白的泛素化．几乎所有的RBR蛋白都具有泛素连接酶（E3）活性. ANKIB1也被推测为一种E3，但迄今尚未证实．RBR型E3能够与多种泛素结合酶（ubiquitin-conjugating enzyme，Ubc，统称E2）互作并发挥催化作用，其中最常见的是UbcH7，UbcH8和UbcH5B次之．为了筛选ANKIB1相关的E2，本研究在大肠杆菌BL21 (DE3)中分别表达了UbcH5B、UbcH7和UbcH8蛋白，并采用GST沉降（GST pull-down）实验验证3种E2与ANKIB1的相互作用. 实验结果表明,内源性及过表达的ANKIB1均能与UbcH5B、UbcH7或UbcH8相互作用，同时ANKIB1也是唯一能与这3种E2互作的RBR蛋白．本研究为ANKIB1可能是1种E3的假说提供了支持，并为后续研究ANKIB1的E3活性和催化机制提供了线索．

精子特异性乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH），又称乳酸脱氢酶C4（lactate dehydrogenase C4，LDH-C4），特异性地存在于哺乳动物发育成熟的睾丸组织中，与精子的生成、代谢、获能等有密切关系. 根据GenBank数据库中人LDH-C4氨基酸序列（P07864），利用PROSITE数据库预测人LDH-C4的功能基序|利用Clustalw2、TreeView1.6.6进行LDH-C4进化树的构建|利用I-TASSER软件预测人LDH-C4的二、三、四级结构以及功能位点. 结果表明：在190~196位有1个LDH活性位点，该位点为脊椎动物各亚型乳酸脱氢酶共有的催化位点，为进化中的1个保守序列|从进化树来看，LDHC和LDHB的亲缘关系比较近|人LDH-C4与小鼠LDH-C4的二级、三级结构具有很高的相似性|LDH-4属乳酸脱氢酶苹果酸脱氢酶（LDH-MDH）超家族中的LDH-(cd05293）家族的成员，属于NAD依赖性酶，拥有LDH-1家族具备的基本结构特点. 以上结果为研究LDH-C4基因突变对其功能的影响打下基础.

Sirt3是一种NAD+依赖性组蛋白去乙酰化酶,在肾脏、棕色脂肪、心脏和其它代谢活跃的组织中高表达. 多项研究表明，Sirt3在细胞能量代谢、衰老、肿瘤发生等方面起着重要的作用.为探讨Sirt3基因在不同热量饮食下的SD大鼠脂肪组织中的表达差异和意义，将60只3周龄,重量(60±5) g的断乳SD雄性大鼠，随机分为热量限制组、自由摄食组、高热量组，其中高热量组用于构建肥胖SD大鼠模型，喂养16周后处死，分别用Western印迹和real-time RT-PCR方法检测各组大鼠肾周脂肪组织中Sirt3基因的蛋白和mRNA的表达量.Western印迹检测与real-time RT-PCR检测结果一致: Sirt3基因的蛋白和mRNA在肥胖大鼠脂肪组织中的表达低于自由摄食组（P<0.05），在热量限制组大鼠脂肪中的表达高于自由摄食组(P<0.05).研究结果说明，Sirt3基因在不同热量饮食下的SD大鼠脂肪组织中的表达有差异，可能与能量代谢及肥胖有着密切关系.

microRNAs是一种小分子非编码RNA，广泛参与细胞的生长发育、分化和凋亡等生物学过程. microRNA-21(miR-21)是一个在实体肿瘤中高表达的miRNA，可促进癌细胞增殖. 为了研究miR-21在金华猪生长过程中的作用，本试验选取了金华猪80日龄胚胎的心、肝、脾、肺、肾、小肠、胰脏、皮脂组织，进行miR-21组织表达谱研究，结果发现miR-21在肝脏中的表达最高. 进一步以肝脏为对象，研究miR-21在金华猪不同生长阶段中的表达，结果显示胚胎80日龄的miR-21表达量最高（P<0.01），其次是胚胎期的60日龄和105日龄，出生后1至120日龄miR-21的表达量均维持在较低的水平且相互之间差异不显著(P>0.05). 利用KEGG软件对miR-21预测的靶基因进行通路归类分析表明miR-21参与细胞代谢、生长等过程，从中选择两个抑制细胞增殖的靶基因，增强子结合蛋白（CCAAT/enhancer binding protein，Cebpa) 和原肌球蛋白1基因（tropomyosin 1，Tpm1)，qRT-PCR检测二者在不同生长阶段的mRNA表达量，结果其表达趋势与miR-21相反，其中胚胎期80天表达量最低(P<0.05). 综上表明miR-21可能具有促进胚胎肝脏生长的作用.

 
干扰素(interferons, IFNs)是一类抗病毒、抗肿瘤、抗细胞增殖等作用的高活性、多功能诱生性糖蛋白.采用农杆菌介导法将含鸡γ干扰素 (chicken interferon-γ, ChIFN-γ) 基因的植物表达载体pSWNGN导入油菜下胚轴和子叶柄. 经筛选和分化,获得了62株抗性再生植株, 通过葡糖醛酸酶GUS (β-glucuronidase,GUS)活性检测、PCR检测及Southern杂交检测,确定获得2株单拷贝转ChIFN-γ 基因油菜. ELISA定量检测转基因植株中的ChIFN-γ 蛋白.结果表明,转基因植株ChIFN-γ 蛋白表达量最高可达1 120 pg/g鲜重.该研究为植物生物反应器生产ChIFN-γ 口服疫苗蛋白的开发及应用奠定了基础.

鲨烯合酶是三萜类皂苷生物合成途径中的关键酶，其活性的高低决定了三萜皂苷、植物甾醇等后续次生代谢物的含量．对鲨烯合酶进行正选择位点分析，可为识 别重要的功能位点提供有意义的信息．本研究在克隆获得五加科三七、葫芦科绞股蓝鲨烯合酶cDNA的基础上，结合GenBank中所登载的植物鲨烯合酶cDNA序列信息，利用位点模型检测并分析了38种陆生植物鲨烯合酶的适应性进化．结果显示，进化上相对保守的鲨烯合酶受到正选择作用，检测到的21个正选择位点大部分集中于第2跨膜区及其两侧，其中189S、194S、196S、265I、389P、390T、408A、410R和414N等9 个位点很可能与鲨烯合酶的活性有关．本研究从分子进化角度为调控三萜类化合物的生物合成提供了一个新的思路．

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，转移与复发是乳腺癌患者死亡的主要原因. 研究与乳腺癌细胞转移相关的分子靶点对预防乳腺癌术后复发、提高疗效有重要意义. 本研究以3组乳腺癌转移相关的基因表达谱数据(GSE2034, GSE2603, GSE12276)为分析材料，采用GeneSpring软件筛选乳腺癌原发瘤与转移瘤芯片数据的差异表达基因，结合生物信息学工具PATHER、STRING、pSTIING和文献挖掘工具iHOP对差异基因及其相互作用关系进行分析. 结果显示，共筛选出乳腺癌转移共同差异基因147个，其中表达上调93个，表达下调54个. 这些差异基因主要涉及细胞周期与增殖、细胞粘附、细胞迁移、血管形成及信号转导等生物通路和生物过程. 差异基因编码蛋白间的相互作用主要集中在14个蛋白，且在更为复杂的网络图谱中仍可见其中9个基因（CXCR4、MMP1、MMP2、MMP3、CTGF、COL1A1、MEF2C、PTGS2及SPARC）在重要的节点位置. 文献挖掘发现,COL1A1基因可能为新发现的乳腺癌转移候选基因，为乳腺癌转移的发病机制提供新的思路，也为转移性乳腺癌的分子诊断和个体化治疗奠定基础.

利用逆转录PCR和RACE技术获得建鲤2种Δ6脂肪酸去饱和酶（FADs6-a,FADs6-b）的全长cDNA序列. FADs6-a基因的cDNA总长为1 966 bp，开放阅读框为1 335 bp，编码444个氨基酸；FADs6-b基因的cDNA总长为1 931 bp，开放阅读框为1 335 bp，编码444个氨基酸.FADs6-a和FADs6-b基因都包括N端细胞色素b5结构域、3个富含组氨酸的结构域和2个推测的跨膜区，具有典型的Δ6脂肪酸去饱和酶结构特点.氨基酸同源性分析显示,建鲤FADs6-a和FADs6-b与斑马鱼的相似性较高，而与海水鱼类的相似性较低，与人类FADs6的相似性高于与FADs5的相似性.通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测该基因在建鲤幼鱼不同组织中的表达量, 发现2种Δ6 脂肪酸去饱和酶基因在建鲤肝脏的表达量最高，其次是肠、脑、肌肉、心和肾，而前肠高于后肠，FADs6-a的表达量高于FADs6-b.得到的结论是，建鲤具有2种类型的合成高度不饱和脂肪酸(HUFA)的关键酶—Δ6脂肪酸去饱和酶，在肝脏和肠道中的含量较多，且FADs6-a和FADs6-b在结构和组织的表达方面都存在差异，这为进一步研究建鲤HUFA的合成途径及调控机理奠定了基础.

已报道的家畜类胚胎干细胞(embryonic stem-like cell, ESC-like)均无法实现长期培养，这制约了家畜ESC的研究．通过检测本实验室建系的绵羊类胚胎干细胞oESC-like，探究导致oESC-like无法持续培养的原因，为以后的研究打下基础. 实验观察了oESC-like形态变化，检测了AKP的表达，使用免疫荧光技术检测了PCNA、Bcl-2、Bax、Sox-2、Oct-4蛋白的表达，并用软件Image-Pro Plus 60计算蛋白表达水平．结果显示，oESC-like在长期培养过程中其形态具备ESC的典型形态特征；AKP持续表达；Sox-2和Oct-4的表达有不同程度的提高，增殖能力无明显变化；Bax表达水平逐代提高，Bcl-2的表达水平在5、10代显著高于Bax的表达水平可抑制Bax的活化，而从15代开始Bcl-2表达水平下降，低于Bax的表达水平，不能有效地抑制Bax的活化；Bcl-2/Bax表达水平的比值逐代下降，说明oESC-like在长期培养过程中逐渐走向凋亡.为解决绵羊类胚胎干细胞能够体外长期培养的科学问题，针对本实验室已有研究成果和存在的问题，进行逆向思维找出突破口，为遗传育种、基因工程、医疗等方面在实践上提供理论基础.

绵羊基因组MHC段分为ClassⅠ、Class Ⅲ和ClassⅡ（含Ⅱa和Ⅱb两个亚区）3个区段，与另外2个区段相比，Class Ⅲ区的基因信息远少于ClassⅠ和ClassⅡ区.为丰富绵羊基因组 MHC Class Ⅲ 区段基因信息. 本研究用位于中国美利奴羊基因组BAC文库中 MHC ClassⅢ 区段4个BAC克隆的酶切片段制备32P 标记探针，继而采用噬菌斑原位杂交筛选法筛选中国美利奴羊混合组织cDNA 文库，并对分离到的cDNA 阳性克隆进行全序列测定及生物信息学分析.本实验共筛选出 31 个 cDNA 阳性克隆，对其序列进行了测定及分析，确定了序列在ClassⅢ 区段上的位置，并通过在NCBI中的同源检索对其功能做了初步鉴定.由实验可知，利用BAC 文库与 cDNA 文库杂交筛选法对较大区段基因的筛选和分离是有效的.同时，对分离到的表达序列结合生物信息学进行分析，这将有助于对该序列功能的深入研究.

几丁质酶作为木霉菌防治植物病虫害的主要因子，在生物防治和环境保护等领域发挥着重要的作用.为了研究棘孢木霉（Trichoderma asperellum）的生防机制并获得与其相关的功能基因，本研究通过RT-PCR、3′-RACE及5′-TAIL- PCR技术克隆了T. asperellum 1个几丁质酶基因Tachi1，对该基因进行了生物信息学分析，并利用毕赤酵母表达系统进行表达验证. Tachi1的DNA序列长1 635 bp，含有3个内含子，包含1 275 bp的开放阅读框，编码424个氨基酸；Tachi1属于糖基水解酶18家族内切几丁质酶，包含SIGGW底物结合位点和FDGIDXDWE活性中心位点，信号肽长度为22个氨基酸，成熟肽分子量为44 kD，二级结构以α-螺旋 、β-折叠和无规则卷曲为结构元件，三级结构为(α/β)8的圆桶形结构. 转Tachi1基因酵母工程菌可高效分泌表达几丁质酶Tachi1，甲醇诱导培养8 d几丁质酶酶活可达9.25 U/mL.

采用RT-PCR和RACE技术克隆了杜氏盐藻DsSTPK的1种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶基因（GenBank accession No.JN625213），命名为DsSTPK，并对其进行了生物信息学分析. 结果表明，盐藻DsSTPK基因的cDNA全长为3 129 bp，可阅读框为2 184 bp，编码727个氨基酸.该蛋白为亲水性蛋白，无信号肽，无跨膜区域，为非跨膜蛋白，且定位于细胞质基质，二级结构的主要元件为无规卷曲和α 螺旋，三维建模成功，在167~190位有1个蛋白激酶的ATP结合区、293~305位1个丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶活性区，存在多个潜在的磷酸化位点.进一步的进化分析表明，其与衣藻、团藻亲缘关系最近. 这些研究结果为进一步阐明DsSTPK的功能及作用机制奠定了基础.

以中华根瘤菌NP1（Sinorhizobium sp. NP1）为原始菌株，通过同源克隆的方法，获得了579 bp的腺苷酸激酶基因（adk）全长序列. 该基因编码192个氨基酸，其二级结构和三级结构与Sinorhizobium meliloti 1021 ADK的二级结构和三级结构相似. 以表达载体pET21b为原始载体，构建成NP1 adk原核表达载体pET21b-adk，转化E.coli BL21菌株， SDS-PAGE检测表明：adk基因获得高效表达. HPLC测定证实：重组表达菌中ATP含量约为对照的1.3倍. 上述结果证明本实验中所克隆的腺苷酸激酶基因具增强ATP合成的功能.

为探讨心肌细胞中Janus 激酶1（JAK1）在C反应蛋白（CRP）诱导的基质金属蛋白酶（MMP）-10活性上调过程中的作用，本研究以炎症细胞因子CRP诱导MMP-10上调的原代乳鼠心肌细胞为研究对象，使用JAK1的特异磷酸化抗体，用Western 印迹技术检查JAK1的磷酸化水平的激活情况.应用Western 印迹技术和酶谱法分别检测胞外信号调节激酶（ERK）的磷酸化水平和MMP-10的活性变化.实验分为4组：对照组，CRP组，CRP+抑制剂组和抑制剂组. 结果显示， 磷酸化的JAK1在CRP刺激后1/12 h即可出现，在1 h达到高峰，而总的JAK1不改变；JAK1抑制剂piceatannol可以使磷酸化的ERK水平减弱，也可以使MMP-10的活性明显降低（P <0.01）. 研究结果提示，JAK1是通过激活ERK，从而上调MMP-10的活性，为心力衰竭提供了一个可能的治疗靶点.

溶酶体跨膜蛋白9B (TMEM9B,c11orf15)是最近被发现的炎症信号通路中的关键因子，在NF-κB和MAPK信号途径起重要调控作用.本实验采用克隆技术成功获得了海兰褐鸡Tmem9B基因的全长编码序列，并利用生物信息学方法对Tmem9B进行序列分析和测序.结果表明,鸡Tmem9B同源基因编码序列全长570bp，进化高度保守，编码189个氨基酸的蛋白,序列上存在信号肽、Tmemb_9和跨膜序列等几种结构域，并含N端豆蔻酰化位点、N端糖基化位点、蛋白激酶C磷酸化位点、酪蛋白激酶II磷酸化位点等3种修饰位点.同时,在鸡Tmem9B基因的开放阅读框内预测到5个microRNA靶位点，Tmem9B在鸡的骨骼肌、肾、脑等多种组织中广泛表达，推测鸡Tmem9B基因可能具有多种功能.本研究将为深入研究鸡Tmem9B基因的功能奠定基础.

肥胖症是当今危急人类健康的一大难题.研究肥胖的机制，并达到防御和治疗肥胖症是研究的最终目的．自2001年以来，研究发现,黑色素浓集激素受体2（melanin-concentrating hormone receptor-2, MCHR2) 与肥胖间存在紧密联系.但研究进展缓慢，主要瓶颈是没找到合适的动物模型．本课题通过对多种动物的筛选，首次发现豚鼠大脑中存在MCHR2的高度表达，并运用RT-PCR、Northern印迹和Western 印迹等方法进行了验证.这一结果为将豚鼠作为MCHR2功能研究的动物模型提供了实验依据．

通过对比有无侧枝循环的冠心病患者冠脉内缺血（CAI）前后白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平的变化，并与反映冠脉缺血强度的量化指标-缺血积分之间进行相关性分析，探讨CAI后早期炎性反应与术后再狭窄的机制，以及侧支循环的作用与意义.73例冠心病患者（Ⅰ），分为CAI组（IA）47例，单纯造影组（IB）26例，CAI组再分为有侧支循环组（IAa）16例，无侧支循环组（IAb）31例. 参照Leaman冠脉积分系统，对CAI球囊阻断引起的冠脉缺血强度进行量化；检测正常对照组（Ⅱ）与冠心病组CAI手术前后的IL-6、TNF-α水平变化，并进行相关性分析.冠脉缺血性刺激前IL-6和TNF-α分别为9.601±1.789 pg·mL-1和27.014±1.970 pg·mL-1 ，在缺血刺激后4 h分别为26.998±1.890 pg·mL-1和79.052±1.555 pg·mL-1，呈显著性差异；有侧支循环组人均总缺血积分与人均最大缺血积分（分别为156.80±24.01与788.70±11.99），显著低于无侧支循环组（分别为341.78±30.58与1111.00±25.31）. IL-6、TNF-α是反映冠脉缺血后早期炎性反应的敏感指标，缺血积分可作为反映CAI术中缺血/再灌注损伤程度的的量化指标，侧支循环可减轻冠脉缺血后早期炎症反应，对冠脉缺血有重要代偿与保护作用.

大脑功能与脑内脂肪酸成分密切相关，分析研究老年时脑脂肪酸组成及含量有助于阐明不同类型脂肪酸在老年认知能力降低过程中的作用．采用Y型电迷宫测试老年组（22月龄）和青年组（3月龄）大鼠的学习记忆能力，表明老年组大鼠的学习记忆能力显著下降.用气相色谱的方法分析大鼠大脑皮质脂肪酸的组成及含量，显示老年组和青年组大脑皮质均含有16种脂肪酸．以C23∶0为内标对各种脂肪酸进行了定量，老年组总脂肪酸含量比青年组降低约15%，各脂肪酸中含量下降的脂肪酸有长链饱和脂肪酸（C14∶0、C16∶0、C18∶0）及多不饱和脂肪酸（C18∶3、C20∶4、C22∶4、C22∶6），含量升高的脂肪酸有单不饱和脂肪酸C20∶1、C24∶1．用峰面积归一法计算了各脂肪酸的相对含量，老年组相对含量下降的脂肪酸有C18∶0、C20∶4、C22∶6，相对含量升高的有极长链饱和脂肪酸（C20∶0、C24∶0）及单不饱和脂肪酸（C16∶1、C18∶1、C20∶1、C22∶1、C24∶1）．相关性分析显示,大鼠学习能力与脑皮质C22∶6、C22∶4、C20∶4水平呈正相关，与C20∶1、C24∶1水平呈负相关.上述结果为阐明不同脂肪酸在老年大脑认知功能障碍中的作用提供了实验依据．

精子特异性乳酸脱氢酶(乳酸脱氢酶C4,LDH-C4）是精子能量代谢的关键酶类之一．为了研究前期发现的1个LDH-C4基因突变（L178X）对LDH-C4功能的影响，在已构建的LDH-C4原核表达载体pET-28a(+)-hLDHC的基础上，利用PCR定点诱变技术，制备了L178X突变体的原核表达载体pET- 28a(+)-hLDHC/L178X,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS，诱导其表达．对该载体进行限制性酶切表明，插入的LDHC基因cDNA约1 000 bp；序列分析表明,该插入片段读框正确，带L178X突变．SDS-PAGE及免疫印迹显示，携带该载体的菌体可表达分子量约25 kD的蛋白质，后者可被兔抗LDH-C4血清特异识别．乳酸脱氢酶（LDH）活性测定及活性染色表明,所表达的产物没有LDH活性.本研究成功进行了LDH-C4的 1个突变体的原核表达，为研究LDHC基因突变对LDH-C4功能以及男性生育的影响奠定了基础.

miR-483是近年发现的一种编码于胰岛素样生长因子2（insulin-like growth factor 2, Igf 2）基因第2内含子的microRNA．研究表明，高脂饮食诱导的肥胖动物的心脏、肝脏及肝、肾肿瘤组织中miR-483表达异常，但其生物学功能尚待研究．建立稳定表达miR-483并能够传代的miR-483转基因小鼠是研究其功能的重要环节．利用特异miR-483克隆引物，以小鼠基因组为模版，经PCR获得pre-miR-483片段，通过重组构建pCAGG-miR-483重组质粒．该质粒可在真核细胞中稳定表达成熟miR-483．再利用原核显微注射法建立miR-483过表达转基因小鼠．利用实时PCR检测各组织miR-483含量．结果显示，miR-483转基因小鼠心肌、骨骼肌、肝脏等组织可过表达成熟miR-483．此外，miR-483转基因过表达小鼠较野生型小鼠体重降低，提示miR-483可能在发育、代谢等方面具有调节作用．miR-483转基因小鼠模型的建立为microRNA功能研究提供了在体研究的平台．

参照已报道的鱼类线粒体基因序列, 通过PCR扩增与测序, 获得了全长为16 627 bp的尼罗罗非鱼线粒体基因组全序列, 共编码13种蛋白质基因、2种rRNA基因、22种tRNA基因和1段控制区序列. H-链碱基组成具有明显的AT偏向性. 由H-链编码的蛋白质基因在第3位密码子上相对于前2个密码子具有一定的G排斥性. L-链编码蛋白质基因在碱基组成上与H-链编码基因存在差异. 编码基因除COI以GTG作为起始密码子外, 其它均以ATG起始. 终止密码子有2种, 分别为不完全T-或TA-和TAA. L-链复制起始区位于WANCY区域(tRNATrp - tRNAAla - tRNAAsn - tRNACys - tRNATyr)的tRNAAsn和tRNACys基因间, 长度为33 bp. 系统发育分析显示, 源于非洲的口孵鱼属、蓝首鱼属和球丽鱼属聚为单系群, 其中口孵鱼属莫桑比克罗非鱼先与同属罗非鱼KM-2006聚类后再与尼罗罗非鱼聚类.

为研究移动抑制因子和嗜铬粒蛋白A (chromogranin A， CgA)在脊髓损伤过程中的表达变化及其参与急性脊髓损伤修复的作用机制，建立了完全脊髓横断实验模型.采用双向凝胶电泳和基质辅助激光解吸电离串联质谱对脊髓损伤的动物组织样品进行分析，鉴定出20种差异表达蛋白质，其中有巨噬细胞游动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor， MIF)和CgA等.通过RT-PCR和Western 印迹分析，移动抑制因子和CgA在损伤的脊髓组织中表达量发生变化，提示这两种蛋白可能均参与了脊髓损伤过程，但在脊髓损伤中的具体作用机制还有待于进一步的研究.

Zα是能够特异性识别并结合左旋DNA(Z-DNA)的蛋白结构域，首先在人ADAR1中鉴定，随后又在ZBP-1(DLM-1)和E3L等蛋白质中发现了该结构域．鲫鱼PKZ是首次报道的具有Zα结构域的鱼类eIF2α激酶．为深入了解鲫鱼PKZ Zα的功能，原核表达并亲和层析纯化了3种多肽，即野生型PZα(Zα1Zα2)、替换型P(Zα1)2(Zα1Zα1)和点突变型（PZαK34A、PZαS35A、PZαR39A、PZαP57A）．同时，构建了含有d(GC)6、d(GC)13、d(TA)13特殊插入序列的3种重组质粒，用于体外模拟Z-DNA．凝胶阻滞实验分析了3种多肽分别与重组质粒的亲和性结果表明,PZα和P(Zα1)2能够与d(GC)重组质粒结合，并且随着多肽含量的增加，阻滞效应越明显．与野生型PZα相比，替换型P(Zα1)2结合d(GC)重组质粒的能力更强PZα和P(Zα1)2还能微弱地与d(TA)13重组质粒结合．点突变型多肽都不能与重组质粒结合，暗示鲫鱼PKZ Zα结构域中这4个氨基酸残基在结合核酸分子的过程中非常关键．该文结果有利于进一步揭示鱼类PKZ Zα结构域与Z-DNA结合的分子机理．

利用基因表达谱芯片分析法筛选出与大白猪高肌肉产量-肌纤维形成有关的CFL2b基因.参考人和小鼠CFL2b基因序列，采用SMART-RACE技术结合EST序列拼接技术,从猪骨骼肌肌肉中首次克隆了猪CFL2b的全长cDNA序列（GenBank登录号EU561660,EU561661），Northern杂交检测CFL2b基因 mRNA.结果表明,猪CFL2b基因含有2个转录本，长转录本3　012 bp，短转录本1　466 bp .CFL2b基因在多种真核生物中都有表达，且编码区序列非常保守，开放式读码框501 bp编码了166个氨基酸的蛋白质.氨基酸序列分析表明,猪CFL2基因与人和小鼠氨基酸同源性分别为100%和99.1%.核苷酸序列相似性分别为88.1%和74.9%.

采用Long-PCR扩增线粒体全基因组方法得到了孟加拉笛鲷线粒体基因组全序列.序列分析结果表明，孟加拉笛鲷线粒体基因组序列全长16 511 bp，共有13个编码蛋白质基因、22个tRNA基因、2个rRNA基因和1个D-loop区.在编码蛋白质基因中，除COⅠ是以GTG作为起始密码子外，其它均是以ATG起始，NDⅠ、COⅡ、ND3以TAG作为终止密码子，而ND4、Cyt b则以不完全的T为终止密码子，其余8个蛋白质基因的终止密码子均为TAA.孟加拉笛鲷线粒体基因组各基因长度、位置与典型的脊椎动物相似，其编码蛋白质基因和rRNA基因与其它硬骨鱼类具有很高的同源性.基于14种笛鲷线粒体区段COⅠ、COⅡ和Cyt b基因的全序列合并成的一个组合数据集构建系统进化树，显示孟加拉笛鲷与四带笛鲷关系最为密切.

Toll样受体（TLRs）可识别病原体相关分子模式，在天然免疫和适应性免疫应答中起着重要的作用.IRAK2为TLRs信号转导中的重要分子，对信号转导及调节有着重要的作用.为了深入研究牛TLRs介导的信号转导通路对牛病原体所致疾病抗性中的作用，本研究采用RT-PCR和RACE方法克隆了牛IRAK2基因，并分析了基因序列，及其编码蛋白质的结构和功能预测. 结果表明,牛IRAK2存在2个选择性剪接产物IRAK2a和IRAK2b，其cDNA长度分别为2 148 bp和2 001　bp(GenBank登录号为EU528620和EU528621)，分别编码622个和384个氨基酸.与IRAK2a相比，IRAK2b缺少第3外显子147 bp片段，使得起始密码子后移，IRAK2a蛋白含有DD结构域和S-TKc结构域，而IRAK2b则缺少DD结构域，只有部分S-TKc结构域.

参照近缘物种线粒体全基因组序列,设计14 对特异引物,采用PCR产物直接测序法测得中国狼线粒体基因组全序列，并分析其基因组特点和各基因的定位.用pDRAW32软件，预测12种限制性酶的酶切图谱.结果表明,中国狼线粒体基因组全长16 774 bp, 包括13 个蛋白质编码基因、2 个rRNA 基因、22 个tRNA 基因和1个非编码控制区.除ND2、 ND3和ND5 基因以ATA作为起始密码子外，其它基因的起始密码子均为ATG.除COXⅢ、 ND4、 ND3基因的终止密码子分别为不完全的T,T,TA；ND2，COXⅡ，Cytb基因的终止密码子分别是TAG、TAG、AGA外；其余基因均以TAA作为终止密码子，而欧亚狼和狗COXⅡ基因则以TAA终止.基于近缘哺乳动物15种近缘物种的线粒体基因组的12S rRNA 和 16S rRNA 基因全序列，用邻近法、最大简约法和最大似然法构建系统进化树，系统进化关系与传统的系统分类基本一致.并在已有文献的基础上，探讨了中国狼的进化地位.

根据GenBank公布的蛇类物种线粒体基因序列和已知的引物序列，总共设计和合成了9对引物.采用保真度较高的Ex-Taq酶，以总基因组DNA为模板进行PCR扩增，产物纯化后进行TA克隆和步移测序，拼接后获得了全长17 144 bp银环蛇线粒体基因组全序列.其共编码13种蛋白质、2种rRNA和22种tRNA.这些基因没有内含子，基因间排列紧密，仅有极少或完全没有核苷酸，甚至相互重叠.除了含有2个调控线粒体基因组复制和转录的控制区外，其余基因在长度和位置等方面与其它脊椎动物均具有较高的同源性.

丙酮酸磷酸双激酶（pyruvate phosphate dikinase, PPDK; EC 2.7.9.1）能够可逆催化磷酸烯醇式丙酮酸（phosphoenolpyruvate, PEP）、单磷酸腺苷（adenosine monophosphate, AMP）和焦磷酸盐（pyrophosphate, PPi）生成三磷酸腺苷（adenosine triphosphate, ATP）、无机磷酸盐（orthophosphate, Pi）和丙酮酸（pyruvate）.以热玫瑰小双孢菌基因组DNA为模板，PCR扩增得到了编码PPDK的基因，将此基因片段插入表达载体pET24a (+)，在大肠杆菌中表达C端融合His-Tag的重组PPDK.与我们先前表达的N端融合His-Tag的PPDK相比，酶的活性提高了20倍，提示该酶的N端对活性十分重要.重组PPDK单体分子量为98 kD.经过镍亲和层析和超滤后，重组PPDK基本达到电泳纯.重组PPDK与荧光素酶偶联能够形成1个ATP-AMP循环反应，在该循环反应中，荧光素酶催化ATP生成的AMP和PPi能够被PPDK重新转化成ATP，产生一个持续稳定的信号.

肌肉生长抑制素(myostatin，MSTN)参与肌肉生长和脂肪发生的调节．本研究在克隆大黄鱼MSTN cDNA的基础上，对3′端非编码区微卫星序列的多态性及其与体长、体重和肌肉脂肪含量的关系进行了分析．结果表明，获得的cDNA长1 886 bp，在3′端非编码区存在微卫星序列（CA）_n．在受检的52个个体中，微卫星序列长度在64～126 bp之间.大部分个体的微卫星序列内存在碱基替换，最常见的碱基替换形式是C→T，属于非完美型微卫星序列．根据该位点微卫星序列长度，在实验群体中共检测到23个等位基因，其中频率为0.019 2的等位基因11个，0.038 5的5个, 0.076 9的3个，0.057 7的2个，0.115 4和0.134 6的各1个．该基因位点的群体杂合度为0.932 7，多态信息含量为0.928 8．微卫星序列长度与大黄鱼体长、体重和肌肉脂肪含量之间的相关系数分别为0.409、0.435和-0.026，P值分别为0.021、0.016和0.878．碱基替换对大黄鱼生长及肌肉脂肪含量均无显著影响．

丙酮酸磷酸双激酶（Pyruvate phosphate dikinase, PPDK; EC 2.7.9.1）能够可逆催化磷酸烯醇式丙酮酸（PEP）、单磷酸腺苷（AMP）和焦磷酸盐（PPi）生成三磷酸腺苷（ATP）、无机磷酸盐（Pi）和丙酮酸（pyruvate）。本文以热玫瑰小双孢菌基因组DNA为模板，PCR扩增得到了编码PPDK的基因，将此基因片段插入表达载体pET24a (+)，在大肠杆菌中表达C端融合His-Tag的重组PPDK，与我们先前表达的N端融合His-Tag的PPDK相比，酶的活性提高了20倍，提示该酶的N端对活性十分重要。经SDS-PAGE分析，重组PPDK单体分子量为98 kDa，测定其最适反应温度为50 ℃，最适反应pH为7.0，pH稳定范围为7.0-10.0，50 ℃放置1 h仍能保持80 %以上的活性，经过镍亲和层析和超滤后，重组PPDK基本达到电泳纯。重组PPDK与荧光素酶偶联能够形成一个ATP-AMP循环反应，在该循环反应中，荧光素酶催化ATP生成的AMP和PPi能够被PPDK重新转化成ATP，产生一个持续稳定的信号。

木犀科苦丁茶是我国西南地区一大类重要的代茶饮料植物，其中以粗壮女贞［Ligustrum robustum (Roxb.) Blume］为代表．本研究应用随机扩增多态DNA(randomly amplified polymorphic DNA,RAPD)分子标记技术，系统地研究了粗壮女贞种质材料的亲缘关系和遗传多样性．用所筛选出的19条RAPD随机引物对79份不同地域来源的粗壮女贞种质材料进行扩增，共扩增出369条谱带，多态性带百分率为86.0%；各种质材料间的GS值变化范围为0.466 4～0.973 6，平均GS值为0.662 3；有效等位基因数N_e=1.432 1，Nei’s基因多样性指数H_e=0.259 5，Shannon多样性信息指数H_o=0.396 0．这表明，粗壮女贞不同地域来源或不同类群种质材料之间存在着显著的遗传差异，其遗传多样性丰富； RAPD技术可以应用于粗壮女贞种内遗传多样性分析．基于RAPD遗传相似系数的UPGMA聚类结果表明，所有各供试材料均按其地理起源聚类，可把供试的79份粗壮女贞材料分为两大类群，即A类群(贵州四川类群)和B类群 (云南类群)．

为了比较不同地域萤火虫荧光素酶基因的进化关系，通过GenBank中已知的荧光素酶基因保守区段设计引物，利用5′RACE（rapidamplification of cDNA ends）和3′RACE技术克隆了来自云南省文山州和西双版纳州的同种卵黄萤荧光素酶基因cDNA和全基因序列.来自不同地域的2种卵黄萤荧光素酶在基因序列上存在3个不同碱基位点，但是它们编码的荧光素酶只存在1个不同的氨基酸.卵黄萤荧光素酶基因全长（从起始密码子到终止密码子）1998 bp，包含7个外显子,6个内含子，其cDNA序列共1976 bp，包含102 bp 5′ UTR (untranslated region)、1635 bp的荧光素酶基因开放阅读框和239 bp的3′ UTR序列.卵黄萤荧光素酶基因的开放阅读框编码1个544个氨基酸的蛋白质，比同属的其它几种荧光素酶少4个氨基酸. 来自2个不同地域的卵黄萤荧光素酶在进化上是比较保守的，它们与北美萤火虫Photinus pyralis荧光素酶在碱基序列上分别有629%和63%相似性.

脑胶质瘤患者对化疗药物的耐受性是亟待解决的问题之一．microRNA参与了肿瘤发生发展的诸多过程．选取目前临床上常用的治疗脑恶性胶质瘤的化疗药物替尼泊苷(teniposide) VM-26和人恶性胶质瘤细胞系U373MG为研究对象，通过反义寡核苷酸技术，应用MTT及细胞生长曲线等方法，发现抑制microRNA-21的功能后,细胞活性明显降低，且可以在一定程度上抑制U373MG细胞对VM-26作用的耐受性，而且这种耐受性的抑制与细胞生长速度关系不大，从而为指导临床用药，探索肿瘤细胞耐受化疗药物的机制提供新的线索．

Wnt10b是Wnt转录因子家族成员之一，是一种胞外信号分子，它通过一系列复杂信号通路调控胚胎发育、干细胞定向分化等生理过程.根据NCBI公布的wnt10b基因序列在保守区内设计引物，利用降落PCR法扩增猪Wnt10b基因，所得序列提交GenBank，登录号EU181371.核酸序列分析结果显示，该基因编码394个氨基酸，与人、小鼠、大鼠、牛和马等核苷酸序列比对，同源性分别为94%、89%、89%、92%和93%，氨基酸同源性分别为98%、96%、96%、94%、98%和97%.揭示该基因在不同物种间具有高度保守性.