中国生物化学与分子生物学报

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万新星;ZHANGDian-Zheng,;陈汉春

中国生物化学与分子生物学报. 2010, 26(04): 295-300.

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受干扰素诱导表达的干扰素刺激基因15编码蛋白质(ISG15)是第1个被鉴定的类泛素修饰蛋白质.目前已在病毒感染细胞和肿瘤细胞中发现了多种ISG15的作用靶蛋白，提示ISG15可能在免疫调节和肿瘤发生等方面发挥重要作用.本文介绍ISG15的结构与生化特点，探讨ISG15在相关酶系作用下修饰目标蛋白质的机制，总结ISG15及其修饰酶系的抗病毒和抗肿瘤作用及其相关机制.

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反式激活应答元件RNA在HIV\|1感染中的作用

孙晓娜;杨怡姝;曾毅

中国生物化学与分子生物学报. 2010, 26(04): 301-305.

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反式激活应答(transactivation response, TAR)元件RNA作为HIV-1中的一种非编码RNA，从转录与翻译水平负调控HIV-1的基因表达.同时HIV-1采取了相应的策略拮抗TAR RNA的负调控作用：病毒蛋白Tat或细胞蛋白TAR RNA结合蛋白(TRBP)结合TAR RNA后，分别在转录与翻译水平促进HIV-1的基因表达.此外，TAR编码的miRNA有助于保持HIV的潜伏感染及阻止细胞凋亡.TAR与其它蛋白间相互作用及其功能的研究对于深入了解HIV-1感染细胞后的调控机制，寻求新的抗HIV治疗靶点具有重要意义.

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朊蛋白PrP^C与神经元的凋亡和存活

王朝云;田婵;董小平

中国生物化学与分子生物学报. 2010, 26(04): 306-310.

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朊病毒是不含核酸的一种蛋白质感染颗粒，感染宿主后可诱导细胞固有的同类朊蛋白（PrP^C）构象改变、转化成具有蛋白酶抗性的致病性朊粒蛋白（PrP^Sc），导致可传播性海绵状脑病的发生. PrP^C既作为朊病毒复制和疾病发生的分子基础，又是正常的细胞膜蛋白，作为细胞信号转导的参与者调控多条信号通路.因此, 揭示PrP^C在各条信号途径中发挥的作用将有助于深入了解PrP^C的生理功能，进一步理解疾病发生发展过程，为今后的诊断治疗奠定基础.

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窖蛋白-1、基质金属蛋白酶-2与乳腺肿瘤的侵袭和转移

王洋;封爽;邹伟，

中国生物化学与分子生物学报. 2010, 26(04): 311-314.

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窖蛋白（caveolin）是分子量为21~24 kD的整合膜蛋白，是胞膜窖（caveolae）的标志性结构分子，其家族成员窖蛋白-1（caveolin-1, Cav-1）参与细胞内许多重要的生命活动.近来研究发现，窖蛋白-1与乳腺上皮细胞转化及乳腺癌的发生密切相关.基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases, MMPs）是基质降解代谢的主要酶类，几乎能降解细胞外基质和基底膜的所有成分，其家族成员明胶酶A（MMP-2）在乳腺癌的浸润和转移过程中起重要作用.新近发现,窖蛋白-1与基质金属蛋白酶-2在胞膜窖中共定位，窖蛋白-1通过抑制基质金属蛋白酶-2的激活来抑制乳腺癌的侵袭和转移，起到肿瘤抑制因子的作用.本文对窖蛋白-1与基质金属蛋白酶-2各自在乳腺肿瘤侵袭转移中的作用及两者关系的研究进行综述.

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肌球蛋白X在细胞运动中的作用

王俊杰,;王兴智;唐利洲;丁伟;朱筱娟

中国生物化学与分子生物学报. 2010, 26(04): 315-321.

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肌球蛋白X（myosin X, Myo X）是一类尾部具有MyTH4(myosin tail homology 4, MyTH4)和FERM(band4.1/ezrin/radixin/moesin, FERM)结构域的非传统型肌球蛋白，广泛分布于脊椎动物细胞中. 近几年的研究表明，Myo X尾部结构域能够与众多的信号分子相互作用，参与调节从丝状伪足形成到胞质分裂等多种细胞运动过程，但其具体的调控机制目前尚不完全清楚. Myo X作为一类连接细胞膜与细胞骨架的动力蛋白分子，它的研究越来越受到人们的关注，其功能的揭示将为进一步阐明细胞多种运动机制提供理论依据.

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P90核糖体S6蛋白激酶家族与人类疾病的关系

吴雯雯;宋现让

中国生物化学与分子生物学报. 2010, 26(04): 322-326.

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P90核糖体S6激酶（ribosomal S6 kinase, RSK）属于苏氨酸/丝氨酸激酶家族，是Raf-MEK-ERK级联信号通路下游重要的一级效应分子, 通过磷酸化大量的细胞内蛋白来调节细胞分裂、存活和分化等，迄今已发现此家族有4个成员，在人体各种细胞及组织中的分布和作用不同，它们的异常表达可能会产生不同的病理改变.本文对RSKs与某些疾病发生发展的关系及可能的机制做简要综述.

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乙肝病毒X蛋白通过骨桥蛋白OPN促进肝癌细胞迁移

张烜;叶丽虹;张晓东

中国生物化学与分子生物学报. 2010, 26(04): 327-331.

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乙型肝炎病毒(HBV)感染与肝细胞癌（HCC）的发生具有十分密切的关系，乙肝病毒X蛋白(HBx)对HCC的发生和转移具有重要的作用.研究发现，骨桥蛋白(OPN)在许多肿瘤及其转移组织中高表达，与肿瘤转移
密切相关.为了进一步阐明HBx在肝癌细胞迁移中的作用及其分子机制，以稳定表达HBx的肝癌细胞H7402-X为模型探讨了HBx与OPN的关系. 结果发现,HBx可激活OPN启动子转录活性和上调OPN 的mRNA表达.“体外
划痕”实验结果显示, HBx与肝癌细胞的迁移能力呈正相关.通过RNA干扰下调OPN的表达可抑制H7402-X细胞的迁移能力.本研究发现,HBx通过上调OPN的表达促进肝癌细胞迁移，对揭示肝癌转移的分子机制具有重要
意义.

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血清通过调节mGluR1介导的信号通路调控细胞的生长与凋亡

朱萍;冯吉;杨荟敏;谷利;张红

中国生物化学与分子生物学报. 2010, 26(04): 332-340.

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血清因子能调节细胞的生长与凋亡，但是其分子机制尚不清楚.通过细胞培养基中血清存在与否，研究了代谢型谷氨酸受体1（mGluR1）介导的胞外信号调节激酶（ERK），蛋白激酶B(PKB/AKT)通路的活化及其对细胞生长与凋亡的影响.在过量表达mGluR1的HEK293细胞中，血清饥饿促进了mGluR1对ERK,AKT信号通路的活化；细胞凋亡剂STS应激损伤时，受体激动剂DHPG可降低细胞活性，促进细胞凋亡.在大鼠胶质瘤细胞中，与过表达mGluR1的HEK293细胞的结果相反,血清有助于mGluR1对ERK,AKT通路的活化作用；STS应激损伤时，内源性mGluR1的活化抑制了细胞凋亡.结果表明：血清中存在的细胞因子，通过细胞中表达水平不同的mGluR1受体，调节受体介导的信号通路，从而调控细胞生长与凋亡.本文可能揭示了一种血清调节细胞生长与凋亡的新机制.

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过表达CDK11^p58促进人胰腺导管腺癌MIAPaCa-2细胞增殖

余诗灏;王辉;丁婧;孟雁

中国生物化学与分子生物学报. 2010, 26(04): 341-346.

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CDK11^p58属于CDK11/PITSLRE蛋白激酶家族成员，由Cdc2L2编码，是一种重要的细胞周期调控蛋白.为了研究CDK11^p58与胰腺癌细胞增殖的关系，我们通过采用脂质体转染真核表达载体及G418筛选的方式，获得了稳定过表达CDK11^p58的MIAPaCa-2（人胰腺导管腺癌细胞）单克隆细胞，并通过流式细胞分析、MTT检测及real-time PCR的方法检测了细胞周期、细胞增殖能力及G₁/S期相关调控基因的转录水平.结果显示，该单克隆细胞（实验组）与空载体组细胞和空白对照组细胞相比G₁期细胞比例明显下降（P<0.01），S期细胞比例明显上升（P<0.01）；细胞增殖能力明显提高（P<0.01）；cyclin D1、cyclin D3、p21基因 mRNA水平较两组对照细胞明显升高（P<0.01）.提示过表达的CDK11^p58通过上调cyclin D1、cyclin D3和p21基因的mRNA水平促进MIAPaCa-2细胞通过细胞增殖的关键限速点G₁/S期，加快细胞增殖.

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人血小板源性生长因子受体β启动子的结构与功能分析

张传宇;孙奋勇;时宿妹;马纪;谢秋玲

中国生物化学与分子生物学报. 2010, 26(04): 347-355.

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通过PCR扩增人血小板源性生长因子受体β(PDGFR-β)基因启动子片段，经双酶切后克隆到pGL3-basic载体构建了5个PDGFR-β基因启动子5′系列缺失重组载体，与作为内参的pRL-TK共转染人脐静脉内皮细胞（ ECV304, HUVEC）后，通过荧光素酶活性检测鉴定出人PDGFR-β启动子中具有转录调控作用的2个活性区（-983~+53）和（+540~+1457），前者执行正调控，后者则起负调控作用. 这2个转录活性区分别含有在人、大鼠、小鼠PDGFR-β基因启动子区都高度保守的区域A-box、B-box和C-box，凝胶迁移或电泳迁移率检测（EMSA）证实,核因子能与B-box*、C-box*特异结合.

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CCR2介导MCP-1诱导的人内皮细胞凋亡

徐艳;刘喜平;李琴山;尚惠锋;钱民章

中国生物化学与分子生物学报. 2010, 26(04): 356-361.

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本室前期工作发现, 单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)可诱导人内皮细胞(hVECs)凋亡. 为进一步揭示MCP-1诱导凋亡分子机理, 首先观察MCP-1对hVECs CC类趋化因子受体2 (C-C motif chemokine receptor -2, CCR2)蛋白表达的影响. Western印迹结果显示, MCP-1以剂量依赖方式诱导CCR2在hVECs的表达. 以脂质体为载体的CCR2反义寡核苷酸序列转染hVECs后, 激光共聚焦显微镜及膜联蛋白（annexin）V-FITC/PI 双染流式细胞术显示, CCR2反义寡核苷酸转染hVECs 48h后可明显降低CCR2蛋白质的表达(P <0.05), 抑制MCP-1诱导的hVECs凋亡(P <0.01). 反义CCR2抑制凋亡结果与加入CCR2阻断剂RS102895后细胞凋亡测定结果一致. 上述结果表明, MCP-1的主要受体CCR2介导了MCP-1诱导的hVECs凋亡.

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BTI基因转染诱导EC9706细胞凋亡及G₁阻滞

李玉英;田欣;张政;王转花

中国生物化学与分子生物学报. 2010, 26(04): 362-368.

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为了研究荞麦胰蛋白酶抑制剂（buckwheat trypsin inhibitor, BTI）对肿瘤细胞凋亡与细胞周期的影响，构建增强型绿色荧光蛋白 (EGFP) 与BTI融合蛋白真核表达质粒. 将BTI基因成功克隆至pEGFP-N1中转染食管癌EC9706细胞后，激光共聚焦显微镜镜检显示, BTI-EGFP获得良好表达. 表达的融合蛋白大部分分布于细胞核，在细胞质中有少量分布. Western 印迹检测可见约27 kD和36 kD的特异性条带. 流式细胞术分析结果显示, BTI能够诱导EC9706细胞发生凋亡，并使细胞停滞于G₀/G₁期.

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PA28γ及其胞浆定位突变体在HepG2中的表达

李烨;吴晶晶;彭彬;姜孝成;汪保和;印大中

中国生物化学与分子生物学报. 2010, 26(04): 369-373.

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本研究采用RT-PCR法从293T细胞中克隆得到PA28γ cDNA全长序列，并将该片段亚克隆到pMD-18T载体中，利用定点突变获得核定位序列缺失突变的PA28γ突变体，分别将野生型（WT）和突变型（MT）PA28γ基因克隆到真核表达载体pDsRed1-C3中，脂质体法转染293T细胞，荧光显微镜观察发现，在293T细胞中，PA28γ WT定位在胞核中，而PA28γ MT定位在胞浆中；再将野生型和突变型PA28γ基因分别克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-)Flag中，用脂质体法將其转染HepG2細胞.Western 印迹检测结果表明，PA28γ WT和PA28γ MT蛋白在HepG2细胞中获得了高效表达，建立了高表达PA28γWT和PA28γMT 蛋白的HepG2细胞系.这些结果的获得，为进一步研究人类PA28γ 基因的功能奠定了基础.

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硫氧还蛋白-1(Trx1)氧化还原状态的检测

高卫;谷利;杨荟敏;张红

中国生物化学与分子生物学报. 2010, 26(04): 374-379.

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硫氧还蛋白-1(thioredoxin-1，Trx1）是一种广泛存在于生物体内的氧化还原调节蛋白，其氧化还原状态的变化是细胞内发挥氧化还原调控作用的重要过程.本文建立了Trx1氧化还原状态的检测方法—氧化还原蛋白免疫印迹法（redox Western blot），即通过碘乙酸（IAA）标记Trx1，根据蛋白所带负电荷的不同，达到分离蛋白氧化与还原状态的目的，并根据能斯特方程计算出相应的氧化还原电势.本方法是在蛋白免疫印迹（Western blot）的基础上建立的，具有低成本、易操作的特点.实验中分别采用H2O2和DTT处理样本，利用此方法检测了细胞裂解液中、细胞内及过表达Trx1氧化还原电势的变化；并检测了HEK293细胞不同生长时期Trx1的氧化还原状态.

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基于PCR的染色体步移中单引物扩增的克服与非特异引物的利用

刘春香，;张卫华;孙小镭

中国生物化学与分子生物学报. 2010, 26(04): 380-385.

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基于PCR的染色体步移（PCR-Walking）方法已有许多种，包括反向PCR 、连接介导的PCR、随机引物PCR等.在众多的方法中，经常存在由通用引物引起的单引物非特异扩增现象.本文综述了连接介导的PCR-Walking 中单引物扩增的形成原理及克服方法.克服单引物扩增主要是使接头引物在DNA两端的接头上只有1个结合位点，从而避开单引物扩增.常用的方法有3′端加氨基修饰的不对称接头、泡泡状接头或Y字型接头及单寡核苷酸接头等方法.还介绍了2种利用通用引物非特异扩增克隆目的序列的方法：引物错配法及基于RAPD原理的单引物PCR法.

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古DNA实时荧光定量PCR实验中标准品的制备

盛桂莲;吴恋娟;赖旭龙

中国生物化学与分子生物学报. 2010, 26(04): 386-391.

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实时荧光定量PCR技术通过对PCR每一循环扩增产物的实时检测，可对模板的精确拷贝数进行绝对定量，从而用于古DNA实验中提取和扩增条件的比较和优化.本研究采用异硫氰酸胍碱裂解-SiO2吸附的方法，从采自黑龙江省的晚更新世斑鬣狗化石材料中提取得到了斑鬣狗线粒体基因组古DNA. 经常规PCR扩增后，将纯化的扩增产物克隆到微生物体内使其大量复制，再用M13通用引物扩增出含少量外源DNA的古DNA目标片段，从而建立了适用于古DNA荧光定量PCR扩增的标准品的制备方法. 经检测分析，运用该方法制备的标准品性质稳定，能够准确地指示反应体系中较为精确的古DNA模板拷贝数，从而反映古DNA的提取和扩增效率，用于比较并优化古DNA提取和扩增条件.

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