中国生物化学与分子生物学报

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蔡维霞，张军，胡大海

中国生物化学与分子生物学报. 2009, 25(04): 297-303.

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Nrf2/ARE是近年新发现的机体抵抗内外界氧化和化学等刺激的防御性转导通路．生理条件下，NF-E2相关因子2(Nrf2，NF-E2-related factor 2)在细胞质中与Keap1结合处于非活性、易降解的状态.在内外界自由基和化学物质刺激时，Keap1的构象改变或者Nrf2直接被磷酸化，导致Nrf2与Keap1解离而活化．活化的Nrf2进入细胞核，与抗氧化反应元件(ARE)结合，启动ARE下游的Ⅱ相解毒酶、抗氧化蛋白、蛋白酶体/分子伴侣等基因转录和表达以抵抗内外界的有害刺激．MAPK、PI3K/AKT、PKC等信号通路分子广泛参与了Nrf2的活化和核转位过程，但是具体何种通路被激动、何种通路发挥主导作用，取决于刺激物种类、刺激方式和细胞类型．本文就Nrf2分子结构、Nrf2活化机制、Nrf2/ARE调控的下游基因、与Nrf2相关的信号通路分子以及其在肿瘤、炎症、衰老等应用领域的最新进展进行综述．

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染色质修饰酶在记忆中的作用

冯月梅，白洁

中国生物化学与分子生物学报. 2009, 25(04): 304-308.

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学习记忆的形成依赖于转录机制.近年研究发现，染色质修饰在基因表达调节中起重要作用.组蛋白乙酰化和去乙酰化是染色质修饰中最为常见调节方式，参与基因的转录调控.乙酰化可以激活转录，促进记忆的形成.组蛋白去乙酰化酶抑制剂可以增强突触可塑性，改善记忆损伤.因此，对于染色质修饰的深入研究，不仅有助于阐明记忆形成的分子机制，而且对记忆相关疾病的治疗以及新药物研发也具有重要指导意义.本文主要就组蛋白乙酰转移酶调节基因转录以及组蛋白去乙酰化酶抑制剂促进记忆形成的作用机理进行综述.

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ATGL调节细胞内脂质代谢和代谢相关疾病

丁明，徐冲，徐国恒

中国生物化学与分子生物学报. 2009, 25(04): 309-315.

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脂肪组织甘油三酯水解酶(adipose triglyceride lipase, ATGL)是一种催化甘油三酯第一步水解的重要脂肪酶，在机体能量代谢调节中发挥重要作用.本文介绍了ATGL的基因和蛋白质结构，并详细综述了ATGL的功能调控和与其相关联疾病的研究进展，最后通过与激素敏感脂肪酶(HSL)比较,对ATGL的特征进行总结.

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神经酰胺转运蛋白在非囊泡转运中的作用机制

许佳丽，郭军

中国生物化学与分子生物学报. 2009, 25(04): 316-320.

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神经酰胺转运蛋白（ceramide transfer protein，CERT）是介导神经酰胺（ceramide）非囊泡转运的载体.它包括3个功能区域： PH、FFAT和START.PH和FFAT分别发挥高尔基体和内质网的靶向作用，羧基端的START主要用于与神经酰胺结合.CERT的转运受多种因素的调节，依赖于PKD和PP2Cε诱导的丝氨酸重复区域（SR）的磷酸化和去磷酸化，氧化应激刺激的CERT三聚体形成，以及PI4KⅢβ催化的高尔基体接头PI4P的生成等.CERT功能障碍会导致细胞易受氧化应激的损害.本文拟从CERT的结构、作用及其调节机制3方面进行综述，揭示CERT的研究进展.

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MicroRNA调控动物脂肪细胞的分化

李国喜;宁小敏;康相涛;杨公社

中国生物化学与分子生物学报. 2009, 25(04): 321-326.

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MicroRNA (miRNA)属于非编码小调节RNA，在动物细胞的增殖、分化、凋亡和代谢等许多生物学过程中具重要作用.研究显示大量miRNA也参与动物脂肪细胞的分化调节，在前体脂肪细胞向成熟脂肪细胞的分化过程中具有多种功能.目前的研究结果表明，这些miRNA在脂肪细胞分化的早期或后期通过其靶基因发挥功能，如miR-17-92和miR-143分别通过其靶基因Rb 2/p 130和ERK 5/BMK 1调节脂肪细胞分化，过表达可促进体外培养的脂肪细胞分化.因此，了解更多miRNA在脂肪细胞分化中的功能，可以加深对动物脂肪形成分子机制的理解，并有可能将其作为脂类代谢性疾病治疗的潜在靶点.

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热量限制延长寿命的分子机制

宁斌，李巧峰，孟庆雄

中国生物化学与分子生物学报. 2009, 25(04): 327-332.

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很多研究均发现,热量限制在很多物种中都有延长寿命的作用.这些报道认为,寿命的延长可能与氧化应激和炎症过程有关.值得注意的是，热量限制调节氧化应激与脂质代谢调控、抑制细胞凋亡、DNA保护等分子过程有密切关系.最近，有研究者表明，热量限制调控氧化应激和炎症过程是通过胰岛素/胰岛素样生长因子信号通路起作用的.热量限制在所有的动物模型实验中都显示延长寿命，然而，在人类中应用热量限制，可能还存在很多对人体健康问题值得关注.本文就热量限制如何调控寿命的机制的研究进展作一综述.

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Cys146-Cys146分子间二硫键在人瘦素二聚化过程中起主导作用

李晶，朱森，张园，迟毓婧，唐建国，杨吉春

中国生物化学与分子生物学报. 2009, 25(04): 333-338.

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在前期研究中，已发现人瘦素（leptin）在体外再折叠过程中会形成稳定的二聚体，但其二聚化机制尚不清楚. 本研究旨在分析瘦素二聚体的结构特性，并重点研究体外再折叠过程中瘦素二聚化的机制. 相较与瘦素单体，瘦素二聚体保留了约75％免疫活性及15％受体结合活性，同时显示出明显慢的天然电泳迁移率. 圆二色性分析显示,二聚体基本保留了单体α螺旋索结构特征. 还原性及非还原性凝胶电泳分析和自由巯基测定结果表明,瘦素二聚体是由一对分子间二硫键连接2个单体而成的.为了确定瘦素二聚化过程中起主导作用的分子间二硫键，利用PCR定点突变技术构建了C96S和C146S两个突变体瘦素. 通过分析C96S及C146S突变体瘦素的体外再折叠特性及过程,并与野生型瘦素相比较，揭示C96S瘦素的二聚体显示出与野生型瘦素二聚体相似的特性，而C146S瘦素不能形成结构稳定的二聚体. 以上研究结果表明，Cys146-Cys146分子间二硫键在人瘦素二聚化过程中起主导作用.

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下调细胞P21WAF1/CIP1基因表达可抑制单纯疱疹病毒Ⅱ型复制

周琦,张浩;王波,彭宜红,屠静,朱萌;徐萍

中国生物化学与分子生物学报. 2009, 25(04): 339-344.

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为了揭示细胞P21蛋白在单纯疱疹病毒Ⅱ型（herpes simplex virus type 2, HSV-2）复制中的作用,通过用HSV-2感染和感染前用特异性小干扰RNA (small interfering RNA，siRNA) 抑制P21基因表达，应用Western 印迹方法检测宿主细胞和病毒蛋白水平，用终点滴定法测定病毒半数组织培养感染量（50% tissue culture infectious dose, TCID50），以及观察感染细胞的细胞病变效应（cytopathic effect, CPE）等3个方面，揭示细胞P21蛋白水平的变化对病毒复制的影响.结果表明，HSV-2在细胞内复制时可引起P21蛋白水平增高；而用特异性siRNA下调细胞P21基因表达时，可显著地抑制HSV-2 gB蛋白水平，减少培养细胞上清液中病毒TCID50.提示P21蛋白对HSV-2的复制具有重要的作用.

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LRRC4基因转染U251细胞的比较蛋白质组学分析

杨静,武明花,王蓉,张祖萍,李小玲,李桂源

中国生物化学与分子生物学报. 2009, 25(04): 345-351.

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LRRC4是我室自主克隆的一个脑组织优势表达基因.前期研究结果表明，外源性LRRC4基因转染至U251细胞，可明显地抑制U251细胞的增殖、黏附、趋化和侵袭等生物学行为. 因此，LRRC4亦是一个脑胶质瘤抑制性基因.为了进一步了解LRRC4在胶质瘤发生发展中的调控作用，本研究采用荧光差异凝胶电泳（2D-DIGE）和质谱分析技术获得了LRRC4转染U251细胞的11个差异表达蛋白质，并用Western 印迹证实了U251细胞在转染LRRC4基因前后热休克蛋白27、stathmin 1和S100钙结合蛋白A11的差异表达变化. 这些差异蛋白质涉及细胞代谢、增殖、转录、信号转导等众多事件，表明LRRC4基因转染U251细胞后可能通过调控这些蛋白质的表达而参与细胞的增殖、黏附、趋化和侵袭等生物学过程.

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胆管癌患者与健康志愿者血清样品蛋白质表达差异分析

练惠辉，韩鹏，邱乒乒,康劲翮，戴燕燕，李华l亮;李文岗;陈清西

中国生物化学与分子生物学报. 2009, 25(04): 352-357.

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胆管癌（cholangiocarcinoma，CCA）是一种难于早期诊断和治疗的恶性肿瘤.利用蛋白质组学技术以期筛选出人血清中具有医学价值的胆管癌癌变的标志物.利用白蛋白/IgG去除试剂盒去除血清中高丰度的白蛋白和IgG，再经丙酮沉淀得到高质量的血清样品.样品经双向电泳（2-DE）得到了分辨率较好的胆管癌血清的蛋白点图谱.利用Image Master 2D软件对比分析了胆管癌病人和正常健康对照组的2-DE图谱.其中,表达上调蛋白有8个，表达下调蛋白有6个.用质谱获得上述差异蛋白的肽质量指纹图谱，并经数据库检索共鉴定出了11种差异蛋白质，其中8种蛋白质的表达与胆管癌密切相关.本研究为阐明胆管癌的机理提供了一条新途径.

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应用siRNA技术探讨MCF-7乳腺癌细胞分泌的VEGF对树突状细胞的影响

王海燕;葛银林

中国生物化学与分子生物学报. 2009, 25(04): 358-363.

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为探讨MCF-7乳腺癌细胞分泌的血管内皮生长因子（ vascular endothelial growth factor, VEGF）对树突状细胞（dendritic cell, DC）功能及其分化的影响，针对VEGF基因设计siRNA（small interfering RNA, siRNA),采用脂质体转染法以100 nmol/L最佳转染浓度导入MCF-7乳腺癌细胞（siRNA组），以脂质体Lipofectamine　2000TM转染MCF-7 乳腺癌细胞培养上清培养正常DC作为对照（对照组），采用ELISA法检测经siRNA 干扰VEGF基因后的MCF-7 乳腺癌细胞分泌的VEGF因子含量， Western 印迹检测VEGF蛋白表达,以探讨siRNA的基因沉默效果；以siRNA组和对照组培养上清分别培养外周血单个核细胞，用流式细胞仪检测所诱导DC表型CD1a、CD80、CD83、CD86和HLA-DR的表达，用MTT法检测转染前后两组DC 诱导的细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocyte, CTL）对MCF-7细胞的细胞毒作用.结果显示,MCF-7 乳腺癌细胞培养上清能明显抑制正常DC分化成熟及抗原递呈能力，干扰VEGF基因后MCF-7 乳腺癌细胞培养上清对DC的影响明显降低，CD80、CD83、CD86和HLA-DR的表达较对照组显著升高，而CD1a表达下降（P＜0.01）.转染前后DC 诱导的CTL对MCF-7细胞的杀伤活性有明显差异（P＜0.01）.由此可见，siRNA可靶向抑制MCF-7乳腺癌细胞VEGF的表达，下调VEGF后的MCF-7 细胞上清对DC分化成熟及功能的抑制作用明显降低，从而推测VEGF在肿瘤的发生、发展和免疫抑制方面可能起着重要的作用.

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黑色素及谷胱甘肽通过抑制NF-κB途径的激活可有效抑制H 5N1禽流感病毒感染

张晓玲;杨桥;代俊;顾潮江;许振辉;焦炳华

中国生物化学与分子生物学报. 2009, 25(04): 364-372.

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我国是H5N1高致病性禽流感频发区.为筛选天然药物用于H5N1禽流感的防治并研究其抗病毒感染的作用机制，本研究选取黑色素及谷胱甘肽（GSH）为候选药物，通过Hoechst 33258荧光染色,观察了禽流感病毒(AIV)感染后的细胞形态变化；细胞凋亡流式细胞术定量分析表明，H5N1 AIV感染可诱导宿主狗肾上皮细胞(MDCK)凋亡，而黑色素及GSH对其具有显著抑制作用(P<0.01)；当20 μg/ml黑色素及10 mmol/LGSH共同作用时,抑制率高达89% (P <0.01)；采用MTT法检测,黑色素及GSH可增强AIV感染后的宿主细胞存活率；病毒血凝素(Ｈa)基因的RT-PCR检测结果表明，黑色素及GSH可显著降低AIV在宿主细胞内的增殖(P<0.01)；一氧化氮（NO）毛细管电泳（CE）激光诱导荧光检测显示，黑色素及GSH均可显著降低病毒感染诱导宿主细胞内的NO释放量(P<0.05)；RT-PCR技术结合ELISA方法,分别分析了病毒感染后宿主细胞的诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）、环氧化酶(cyclooxygenase-2, COX-2)及核因子κB(nuclear factor-kappa B，NF-κB）在mRNA和蛋白水平表达的差异.结果表明，黑色素及GSH可抑制病毒感染诱导的iNOS与COX-2的基因及蛋白的表达 (P<0.05)，并进而抑制NF-κB途径的激活(P<0.01)，从而可有效抑制H5N1 AIV感染.

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鼻咽癌组织中氧化性DNA损伤标志物8-硝基鸟嘌呤和8-羟基脱氧鸟苷的检测及与iNOS的关系

黄元姣，马宁，玄超，张贝贝，冯海燕，木村真理子

中国生物化学与分子生物学报. 2009, 25(04): 373-378.

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8-硝基鸟嘌呤（8-nitroguanine, 8-NitroG）和8-羟基脱氧鸟苷（8-hydroxy-2′-deoxyguanosine, 8-OHdG）是2个氧化性DNA损伤生物标志物，而诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在病理状态下催化细胞合成与氧化性DNA损伤有关的氧自由基NO.本研究通过检测鼻咽癌组织中8-NitroG、8-OHdG和iNOS的免疫反应强度，初步探究鼻咽癌的发生和发展是否与氧化性DNA损伤有关以及8-NitroG、8-OHdG与iNOS表达的关系.利用多克隆抗体8-NitroG和单克隆抗体8-OHdG、iNOS，采用双色荧光免疫组织化学方法检测鼻咽癌组织中8-NitroG、8-OHdG和iNOS的免疫反应，秩和检验统计学方法分析鼻咽癌和慢性咽炎鼻咽组织之间8-NitroG、8-OHdG和iNOS免疫反应强度的差异.结果显示，19例鼻咽癌组织细胞中，8-NitroG、8-OHdG和iNOS均为强免疫反应，8-NitroG和8-OHdG阳性率100%，iNOS阳性率94.7 %，与13例慢性咽炎组织比较差异显著(P.<0.05).结果提示，鼻咽癌的发生和发展与氧化性DNA损伤有关，其原因与炎症等病理刺激下鼻咽组织高表达的iNOS催化细胞合成氧自由基NO引起的8-NitroG和8-OHdG DNA损伤密切相关.另外，8-NitroG和8-OHdG有望成为辅助鼻咽癌诊断的生物标志物.

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pBV220载体中外源基因高效表达的自动化设计

查磊，应晓敏，王立贵，曹源，骆志刚，苑波，李伍举

中国生物化学与分子生物学报. 2009, 25(04): 379-382.

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pBV220载体是国内科学家构建的原核系统表达载体，目前仍在广泛应用.但是，实现外源基因的高效表达需要综合考虑诸如RNA二级结构等多种因素，极其耗时费力．为此，基于我们提出的pBV220载体中外源基因高效表达数学模型，编写了外源基因高效表达的自动化设计软件，并可定性用于原核系统其它载体中外源基因表达水平分析，最终为加快实验进程提供帮助

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鲫鱼PKZ Zα结构域与d(GC)、d(TA)重组质粒的结合

杨攀，吴初新，李琴，夏玉洁，胡成钰

中国生物化学与分子生物学报. 2009, 25(04): 383-387.

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Zα是能够特异性识别并结合左旋DNA(Z-DNA)的蛋白结构域，首先在人ADAR1中鉴定，随后又在ZBP-1(DLM-1)和E3L等蛋白质中发现了该结构域．鲫鱼PKZ是首次报道的具有Zα结构域的鱼类eIF2α激酶．为深入了解鲫鱼PKZ Zα的功能，原核表达并亲和层析纯化了3种多肽，即野生型PZα(Zα1Zα2)、替换型P(Zα1)2(Zα1Zα1)和点突变型（PZαK34A、PZαS35A、PZαR39A、PZαP57A）．同时，构建了含有d(GC)6、d(GC)13、d(TA)13特殊插入序列的3种重组质粒，用于体外模拟Z-DNA．凝胶阻滞实验分析了3种多肽分别与重组质粒的亲和性结果表明,PZα和P(Zα1)2能够与d(GC)重组质粒结合，并且随着多肽含量的增加，阻滞效应越明显．与野生型PZα相比，替换型P(Zα1)2结合d(GC)重组质粒的能力更强PZα和P(Zα1)2还能微弱地与d(TA)13重组质粒结合．点突变型多肽都不能与重组质粒结合，暗示鲫鱼PKZ Zα结构域中这4个氨基酸残基在结合核酸分子的过程中非常关键．该文结果有利于进一步揭示鱼类PKZ Zα结构域与Z-DNA结合的分子机理．

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猪CFL2b 基因cDNA克隆初步分析

赵微;曾瑞霞;巴彩凤;宋慧娟;苏玉虹

中国生物化学与分子生物学报. 2009, 25(04): 388-392.

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利用基因表达谱芯片分析法筛选出与大白猪高肌肉产量-肌纤维形成有关的CFL2b基因.参考人和小鼠CFL2b基因序列，采用SMART-RACE技术结合EST序列拼接技术,从猪骨骼肌肌肉中首次克隆了猪CFL2b的全长cDNA序列（GenBank登录号EU561660,EU561661），Northern杂交检测CFL2b基因 mRNA.结果表明,猪CFL2b基因含有2个转录本，长转录本3　012 bp，短转录本1　466 bp .CFL2b基因在多种真核生物中都有表达，且编码区序列非常保守，开放式读码框501 bp编码了166个氨基酸的蛋白质.氨基酸序列分析表明,猪CFL2基因与人和小鼠氨基酸同源性分别为100%和99.1%.核苷酸序列相似性分别为88.1%和74.9%.

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