中国生物化学与分子生物学报

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王桂玉,刘润梅,潘善培,李伟雄

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(02): 175-178.

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将人绒毛膜促性腺激素β－亚基的羧基肽（ＣＴＰ）与羊黄体生成素（ｏＬＨ）的α－亚基融合，通过设计两对引物，用部分重叠聚合酶链式反应（ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇＰＣＲ）的方法构建了羊的α亚基ＣＴＰ嵌合体．这个嵌合体被克隆到ｐＰＩＣ９Ｋ质粒中，用电打孔方法转入巴氏毕赤酵母（Ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ），并获高效表达．表达蛋白经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹证明分子量约为２８ｋＤ．２．５Ｌ发酵罐大量培养，产量可达２．０ｇ／Ｌ．

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人转化生长因子β1在大肠杆菌中的分泌表达

龙建银,王会信,刘莉,王芳,周廷冲

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(02): 179-184.

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为了研究双体形式生长因子的原核基因工程，尝试了人转化生长因子β１（ｈＴＧＦβ１）基因的分泌表达．通过缺失突变，构建了能表达具有天然一级结构的ｈＴＧＦβ１单体蛋白的周质分泌表达质粒．采用双顺反子表达系统，使ＴＧＦβ１在周质中获得了高效可溶性表达．研究了改善转运通路对重组蛋白分泌表达的影响，发现共表达σ３２基因和ｄｓｂＡ基因，可促进周质中ＴＧＦβ１双体分子的形成；而共表达ｓｅｃＥ／Ｙ基因对ＴＧＦβ１的分泌表达则没有明显影响．通过共表达ｋｉｌ基因，使ＴＧＦβ１在胞外培养基中获分泌表达，并在胞外折叠、组装形成具有生物活性的双体分子

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PCR扩增同源重组片段筛选转基因胚胎

卢一凡,邓继先,肖成祖,马清钧

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(02): 185-188.

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使用小鼠乳清酸蛋白基因（ＷＡＰ）启动子控制下的人集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）基因为显微注射片段，采用ＰＣＲ方法检测了转基因胚，为消除ＰＣＲ扩增中的假阳性结果，构建了两个具有部分同源性的亚克隆片段进行共注射．ＰＣＲ扩增片段跨越这一同源区域，仅当注射的片段能够整合并发生正常重组，转基因整合胚才能以相对高的比例扩增出特异性片段．结果表明，１、２和８细胞期的阳性率分别为１１．１％、５５．５％和４４．４％，较常规ＰＣＲ检测获得更为明确的结论，为在大动物转基因胚胎检测提供了依据

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RGDS-尿激酶原嵌合体的构建与表达

孙迎庆,郭雁,李令媛,茹炳根

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(02): 189-193.

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利用定点突变及ＤＮＡ重组技术，构建了在尿激酶原Ｋ区Ｃ端的β发夹区插入了精氨酸－甘氨酸－天冬氨酸－丝氨酸〔ＲＧＤＳ〕片段的尿激酶原嵌合体基因，并利用昆虫杆状病毒表达系统通过感染Ｓｆ９细胞对野生型及嵌合体尿激酶原进行了高效表达，表达量分别为１２００～１８００ＩＵ／（１０６细胞·ｍｌ）和１８００～２４００ＩＵ／（１０６细胞·ｍｌ）．经过ＣＭ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ离子交换层析、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５凝胶过滤层析及超滤浓缩对野生型及突变型进行了部分纯化，并对其性质进行了初步研究．表明突变体尿激酶原保留了全部尿激酶原的纤溶酶原激活活性，并具有很强的抗血小板聚集活性．ＲＧＤＳ－尿激酶原嵌合体兼有溶栓及抗栓活性

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用富集文库克隆人胰岛素基因组基因

寿思明,朱宝利,齐顺章

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(02): 194-199.

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通过构建可富集人胰岛素基因的λ噬菌体文库，克隆了人胰岛素基因组基因．首先从中国人血液白细胞中提取到人基因组ＤＮＡ，用ＥｃｏＲⅠ和ＢｇｌⅡ对基因组ＤＮＡ进行全酶切，经０．４％琼脂糖凝胶电泳，特异回收９．５ｋｂ左右的ＤＮＡ片段．将该片段与λＥＭＢＬ３／ＢａｍＨⅠ臂连接，构建成一个特殊的人基因组λ噬菌体文库（富集文库），效价为２×１０４．同时采用ＰＣＲ方法及用引物Ⅰ：５′ＧＧＡＣＡＧＧＣＴＡＣＡＴＣＡＧＧＡＡＧＡＧＧ３′，引物Ⅱ：５′ＣＴＧＣＧＴＣＴＡＡＴＴＧＣＡＧＴＡＧＴＴＣ３′，从人基因组ＤＮＡ中扩增出一段含胰岛素基因的１．３６ｋｂＤＮＡ片段，做为放射性标记探针，对文库进行了噬菌斑原位杂交筛选，从１×１０４个噬菌斑中筛选到一个含人胰岛素基因组基因的阳性克隆，并进一步完成了亚克隆和该基因１７３２ｂｐＤＮＡ序列的测定．结果该基因的１７３２ｂｐＤＮＡ序列包括部分５′端和３′端与国外发表的人胰岛素α型等位基因的序列相同

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重组FAS分子的表达、纯化及抗体制备

罗振革,孔祥英,彭虹,张明,高杰英

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(02): 200-204.

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用ＰＣＲ法扩增出编码人ＦＡＳ分子胞外区的ｃＤＮＡ片段，直接克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ载体上，经ＤＮＡ序列测定后，再插入到谷胱甘肽转硫酶（ＧＳＴ）融合蛋白表达载体ｐＧＥＸ－ＫＧ的ＥｃｏＲⅠ和ＳａｌⅠ位点之间，构成重组质粒ｐＫＧ－ｈＦＡＳ，将此质粒导入大肠杆菌，经ＩＰＴＧ诱导后获得ＧＳＴ－ｈＦＡＳ重组融合蛋白的表达，用谷胱甘肽偶联的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ经亲合层析获得纯化的ＧＳＴ－ｈＦＡＳ蛋白，经凝血酶酶切和二次亲合层析去除ＧＳＴ部分，得到纯化的ＦＡＳ蛋白．用纯化的ＦＡＳ抗原免疫家兔制备了抗ＦＡＳ抗体，经检测发现抗ＦＡＳ抗体能诱导Ｕ９３７细胞发生细胞凋亡

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东亚钳蝎神经毒素在大肠杆菌中的表达

梁爱华,苏智广,李晓玲,王伟

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(02): 205-210.

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以山西风陵渡东亚钳蝎（ＢｕｔｈｕｓｍａｒｔｅｎｓｉＫａｒｓｃｈ）的尾腺总ＲＮＡ为模板，根据已知的蝎神经毒素保守氨基酸序列设计引物，利用ＰＣＲ技术，扩增并克隆了两个蝎神经毒素基因．序列分析表明，由两个基因导出的氨基酸序列（ＢｍＫＭｍ１和ＢｍＫＭｍ２）与已知的蝎神经毒素ＢｍＫⅠ、ＢｍＫⅡ、ＢｍＫⅢ、ＢｍＫＭ１、ＢｍＫＭ９有很高的同源性．将ＢｍＫＭｍ２基因重组到大肠杆菌分泌型表达载体ｐＥｘＳｅｃ１中进行表达．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ证明表达产物被分泌到细胞周间质及培养液中．经ＩｇＧ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ纯化后的蛋白质注射小白鼠表明表达产物有生物学活性

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解偶联蛋白基因-3826多态性与其mRNA表达相关性的研究

刘永明

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(02): 211-214.

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为了探讨解偶联蛋白（ＵＣＰ）基因－３８２６多态性与ＵＣＰｍＲＮＡ表达水平之间可能存在的联系，应用ＲＴ－ＰＣＲ方法测定了ＵＣＰ基因－３８２６多态性野生型（ＡＡ），杂合子（ＡＧ）和突变纯合子（ＧＧ）３组人群脂肪组织中ＵＣＰｍＲＮＡ的表达水平．定量结果指出：３种基因型（ＡＡ、ＡＧ和ＧＧ）携带者腹膜内脂肪的ＵＣＰｍＲＮＡ表达水平存在极显著差异（Ｐ＜０．０１），并显示突变等位基因（Ｇ）的数量与ＵＣＰｍＲＮＡ表达水平呈负相关．此结果表明ＵＣＰ基因Ａ→Ｇ（－３８２６）变异与ＵＣＰｍＲＮＡ表达水平降低密切相关．但该变异导致ＵＣＰｍＲＮＡ表达水平降低的机制还有待进一步研究

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苏云金杆菌以色列亚种cryIVB基因在E.coli中的高表达

刘国奇,蒋如璋,张自立

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(02): 215-218.

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韭菜迟眼蕈蚊（Ｂｒａｄｙｓｉａｏｄｏｒｉｐｈａｇａ）幼虫以取食根部危害韭菜的生长．为了研究有效的生防制剂，采用ＤＮＡ聚合酶链式反应方法，从苏云金杆菌以色列亚种（Ｂｔｉ）得到３．５ｋｂ的开放阅读框架（ＯＲＦ），其包括Ｂｔｉ杀虫蛋白基因ｃｒｙＩＶＢ的结构基因和部分上游启动区．将结构基因亚克隆到高表达载体ｐＱＥ５２中，构建了高表达质粒ｐＱＥ５２Ｂ．在Ｅ．ｃｏｌｉＳＧ１３００９（ｐＲＥＰ４）中，经ＩＰＴＧ诱导，１３０ｋＤ的蛋白表达量约占细胞总蛋白的７．９％，其对韭菜迟眼蕈蚊三龄幼虫具有较强的毒杀作用．为进一步利用ｃｒｙＩＶＢ基因，构建生防工程菌株打下了基础

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可随HeLa细胞传代而传递的反义RNA真核表达系统

陈云弟,顾小锋,宫澜,陈巍,陈美珏,黄淑帧,曾溢滔

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(02): 219-222.

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为研究反义ＲＮＡ表达载体在细胞内的稳定性，构建了一个特异性针对β地中海贫血基因ＩＶＳ－２－６５４Ｃ→Ｔ（β６５４）突变ｍＲＮＡ前体异常剪接位点的反义ＲＮＡ表达载体ｐＣＭＶＡ．ｐＣＭＶＡ转染β６５４ＨｅＬａ细胞后，通过ＲＮＡ定量检测反义片段对β６５４ｍＲＮＡ异常剪接的纠正作用；再从转染后传代５次并冰冻保存１年的ＨｅＬａ细胞中回收反义表达载体，转染另外的β６５４ＨｅＬａ细胞，同样检测它对β６５４ｍＲＮＡ异常剪接的纠正作用．结果显示该载体在细胞传代前后均能阻断β６５４异常剪接，部分恢复其正常剪接途径：用回收的ｐＣＭＶＡ转染β６５４ＨｅＬａ细胞后，正常剪接的βｍＲＮＡ水平［β／（β＋β＊）］由０．０５上升到处理后１５ｄ的０．４８，而２种对照质粒处理后对这一比值影响不大．表明ｐＣＭＶＡ可在ＨｅＬａ细胞中随着细胞传代而传递下去，并保持结构与功能完整

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人淀粉样前体蛋白基因C端在SH-SY5Y细胞系中的稳定表达及其对细胞生长发育的影响

乌永中,马康涛,张迺蘅

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(02): 223-227.

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淀粉样前体蛋白（ＡＰＰ）是阿尔茨海默氏病（ＡＤ）病因学中重要的分子，但其正常的生理功能尚不清楚．为了研究细胞内过量产生其各种片段对细胞生理机能的影响．将人ＡＰＰ６９５ｃＤＮＡ中编码Ｃ端１０５个氨基酸残基的ＤＮＡ片段重组到真核表达载体ｐＤＯＲｎｅｏ中形成重组质粒ｐＤＯＲ－ｎｅｏ－ＣＴ．然后用脂质体将其转染到人神经母细胞瘤细胞ＳＨ－ＳＹ５Ｙ中．用８００μｇ／ｍｌＧ４１８筛选获得了在ｍＲＮＡ和蛋白质水平均表达相应片段的稳定细胞系．ＭＴＴ和ＬＤＨ分析表明，ＡＰＰＣ端的表达未能对ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞产生明显的毒性作用．

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重组人蛋白激酶CK2β亚基cDNA的克隆与测序

刘新光,梁念慈,马涧泉,刘文

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(02): 228-231.

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蛋白激酶ＣＫ２是一种存在的信使非依赖性丝／苏氨酸蛋白激酶．它是由两个催化亚基（α或α′）和两个调节亚基（β）组成的不均一四聚体．用反转录ＰＣＲ从ＨＬ－６０细胞中获得了人蛋白激酶ＣＫ２β亚基编码区ｃＤＮＡ，将ＮｄｅⅠ／ＨｉｎｄⅢ双酶切ＰＣＲ产物连接到表达载体ｐＴ７－７的ＮｄｅⅠ／ＨｉｎｄⅢ双酶切位点中．转化感受态细菌ＤＨ５α获得转化子，阳性筛选率为７２％．限制性酶切分析结果表明，插入片段和重组质粒的大小与理论推测值相符．随机挑选４个阳性质粒测定其插入片段ＤＮＡ序列，结果显示有２个含有正确插入的人蛋白激酶ＣＫ２βｃＤＮＡ，命名为ｐＴＣＫＢ．其余２个克隆分别存在１个和２个点突变，即在其编码区ｃｏｎｄｏｎ１４８的ＴＣＡ→ＴＴＡ，结果Ｓｅｒ→Ｌｅｕ；另一个则在Ｃｏｎｄｏｎ１４３ＧＴＧ→ＡＴＧ，Ｖａｌ→Ｍｅｔ；Ｃｏｎｄｏｎ１７０ＧＴＧ→ＧＣＧ，Ｖａｌ→Ａｌａ．重组质粒（ｐＴＣＫＢ）克隆的成功，将为在原核细胞中表达蛋白激酶ＣＫ２β亚基以及利用ＣＫ２βｃＤＮＡ作为探针进行深入研究打下基础．并为利用ｐＴ７－７表达载体构建其他重组质粒建立了一套成功的方法

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抗肿瘤单抗3H11对应抗原cDNA片段的克隆

陈东海,寿成超

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(02): 232-235.

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单克隆抗体３Ｈ１１能与多种肿瘤细胞特异结合，克隆其对应抗原无疑具重要意义．用胃癌细胞ＭＧＣ８０３构建ｃＤＮＡ表达文库，通过抗体３Ｈ１１对其进行原核表达筛选，获得一株能与３Ｈ１１特异反应的阳性克隆．其ｃＤＮＡ插入片段为５５４ｂｐ．ＧｅｎＢａｎｋ不含其同源序列．将此ｃＤＮＡ片段与谷胱甘肽转移酶表达质粒ｐＧＥＸ－４Ｔ重组，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ和竞争抑制实验表明，表达产物依然保持同３Ｈ１１反应的特异性．可见它是３Ｈ１１对应抗原的ｃＤＮＡ．

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转录因子NF-κB p50基因的克隆、表达及抗p50抗体的制备

谭焕然,牛刚

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(02): 236-240.

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利用ＤＮＡ重组技术，将转录因子ＮＦ－κＢｐ５０基因片段插入ｐＧＥＸ－２Ｔ质粒载体，经ＤＮＡ序列分析证明克隆的正确性．将重组的ｐＧＥＸ－２Ｔ／ｐ５０转化入大肠杆菌ＪＭ１０９，表达出ｐＧＥＸ－２Ｔ／ｐ５０融合蛋白．经ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ检测证实表达产物对抗ｐ５０ｃ的抗体呈特异性反应，表明克隆的正确性，并成功地应用纯化的ｐ５０蛋白制备了免疫血清．为进一步对ＮＦ－κＢ的功能进行研究打下了良好的基础

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家蚕滞育生物钟蛋白质Ease A4的纯化及其分子结构分析

徐世清,甲斐英则,徐俊良,东健一郎,谷直纪,郑必平

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(02): 241-246.

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ＥａｓｅＡ４是家蚕卵的一种滞育生物钟蛋白质．产下后２ｄ的家蚕Ｃ１０８品种滞育性卵，经过丙酮脱脂、８５℃热处理、硫酸铵沉淀和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５凝胶过滤层析初步分离，进一步经过Ｓｅｐ－ＰａｋＣ１８脱盐浓缩，ＨＰＬＣ（柱为ＹＭＣ－ＰａｃｋＰｒｏｔｅｉｎ－ＲＰ）分离，通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＭＡＬＤＩＭＳ方法鉴定，纯化得到ＥａｓｅＡ４蛋白质．从１０ｇ蚕卵最终得到了１１．８μｇＥａｓｅＡ４．ＥａｓｅＡ４由从Ｈｉｓ到Ｔｙｒ的１５５个氨基酸残基构成，蛋白质部分的分子量为１６６０１．其２２位氨基酸残基Ａｓｎ处有一个Ａｓｎ－Ｘ－Ｔｈｒ糖基化场所，并有糖基结合在该部位，糖基的分子量约为７６０．ＥａｓｅＡ４的６１位和１５０位的两个Ｃｙｓ氨基酸残基之间存在二硫键．糖基和二硫键的存在不仅有利于酶蛋白的分离，还可能与酶活性有关

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苦荞种子胰蛋白酶抑制剂的分离纯化及部分性质研究

张政,王转花,林汝法,金晓弟

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(02): 247-251.

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采用凝胶层析及离子交换层析等方法，从苦荞种子中分离出一组胰蛋白酶抑制剂（ＴＢＴＩ－Ⅰ、Ⅱ）．对其性质研究表明：两个组分均对胰蛋白酶有较强的抑制作用，对胰凝乳蛋白酶抑制作用较弱，其中ＴＢＴＩ－Ⅱ的抑制作用大于ＴＢＴＩ－Ⅰ，两者对胃蛋白酶、木瓜蛋白酶及枯草杆菌蛋白酶均无抑制作用．用ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶层析分别对纯化产物进行分析得出ＴＢＴＩ－Ⅰ和ＴＢＴＩ－Ⅱ的近似分子量分别为１５．０ｋＤ和１８．０ｋＤ．ＴＢＴＩ－Ⅰ、Ⅱ都具有较高的热稳定性，在１００℃处理１０ｍｉｎ后可保留８６％左右的抑制活性．ＴＢＴＩ在酸性环境下较为稳定，在ｐＨ２．０条件下保温１ｈ，仍保留７５％的抑制活性．用Ｌｉｎｅｖｅａｅｒ－Ｂｕｒｋ作图法得知，该抑制剂属竞争性抑制类型，ＴＢＴＩ－Ⅱ的Ｋｉ值为３．５９×１０－７ｍｏｌ／Ｌ（以ＢＡＰＮＡ为底物），对胰蛋白酶的摩尔抑制比为１∶１．４．

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利用15肽随机肽库确定抗TNF单抗表位的研究

杨子义,董家新,王鑫,姚志建,沈倍奋

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(02): 252-255.

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利用抗ＴＮＦ的Ｔ５单抗作为筛选配基，对经ＤＮＡ碱基组成分析证明具有良好随机性的１５肽库进行亲和筛选．经过三轮筛选后，以硝酸纤维素膜斑点印迹法观察到良好的富集效果．由第三轮挑选出的３１个克隆进行ＤＮＡ测序，结果推出的优势克隆的短肽为ＣＹＲＲＰＡＧＧＬＰＧＩＣＳＡ等，竞争性ＥＬＩＳＡ实验证明带有以上短肽的噬菌体与ＴＮＦ能竞争性地与Ｔ５单抗结合．该多肽可能是Ｔ５单抗所识别的模拟表位

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鸡胚骨骼肌组织M-CAT结合因子的初步鉴定

倪菊华,党喜同,贾弘褆,张迺蘅

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(02): 256-259.

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采用偶联ＣＡＴＴＧＣＴ寡核苷酸的ＤＮＡ亲和层析柱从发育１３ｄ鸡胚骨骼肌核抽提物中分离到两种核蛋白．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果表明，被ＤＮＡ亲和柱滞留的两种核蛋白分子量分别为３０ｋＤ和３２ｋＤ．凝胶阻滞结合竞争分析显示，纯化的核蛋白可与Ｍ－ＣＡＴ共有序列ＣＡＴＴＣＣＴ特异结合．Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔｅｒｎ印迹技术确定仅３０ｋＤ分子可直接识别、结合ＣＡＴＴＣＣＴ元件，但３２ｋＤ分子却不能．结果提示，３０ｋＤ分子为依赖ＤＮＡ的Ｍ－ＣＡＴ结合因子，３２ｋＤ分子属性有待进一步研究证实

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可溶性血纤蛋白促进细胞伸展及其作用机制

杨威,松田道生

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(02): 260-264.

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可溶性血纤蛋白（ｓｏｌｕｂｌｅｆｉｂｒｉｎ，ＳＦ）为血纤蛋白单体和血纤蛋白原１∶２的复合物．现已知在血液凝固系统被激活的病理状态下，存在于循环血液中，然而它的生理作用仍然不明．首次发现细胞能在固定的ＳＦ上伸展，并能被外源性ＳＦ及精氨酸－甘氨酸－天冬氨酸（ＲＧＤ）合成肽所抑制，但不能被血纤蛋白原和血纤蛋白单体所抑制，提示ＳＦ形成后其结构变化是引起细胞伸展的关键．片段Ｘ（缺乏ＲＧＤ２序列的血纤蛋白原片段）与血纤蛋白单体形成的复合物，使细胞伸展活性明显减低，提示在ＳＦ结构中，血纤蛋白原的ＲＧＤ２序列在细胞伸展中起重要作用．同时发现ＤＩＣ患者血浆中的ＳＦ也具有细胞伸展活性．ＳＦ作为一个粘附分子在体内血栓形成过程中起重要调节作用

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丝瓜的三聚体G蛋白的初步研究

赵发清,胡松年,阎隆飞

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(02): 265-268.

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根据拟南芥（ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｔｈａｈｌｉａｎａ）ＧＰＡ１的保守区段Ａ设计一对特异引物（５′ｃｔｇｇｇｇａａｔｃｔｇｇａａａａｔｃ３′，５′ｃａｃａｇｃｔｇｔａｃａｃｃｔｃａａａｃ３′）通过ＰＣＲ从丝瓜核基因组中扩增植物的三聚体Ｇ蛋白α亚基编码基因，获得了２个片段（ＬＦＧ１，ＬＦＧ２），并已克隆和测序（已在ＥＭＢＬ数据库中登记，登记号为：ｙ１５２７０，ｙ１５２７１）．序列分析表明ＬＦＧ１和ＬＦＧ２分别由１５１５ｂｐ和７３２ｂｐ构成，都含有三聚体Ｇ蛋白α亚基编码基因的保守区段Ａ，但也都含有内含子．根据片段的大小及ＰＣＲ的特性，ＬＦＧ１可能是丝瓜三聚体Ｇ蛋白α亚基编码基因上的片段．

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昆虫谷胱甘肽S-转移酶分离纯化的新方法

周先碗

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(02): 269-273.

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谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＳ－ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｓ，ＧＳＴ）是一类具有多种生理功能的同功酶．从蜡螟幼虫（Ｇａｌｅｒｉａｍｅｌｏｎｅｌａ）的提取液中分离纯化谷胱甘肽Ｓ－转移酶的基本方法如下：首先将冷冻的蜡螟幼虫在磷酸缓冲液中匀桨，经１００００ｇ和１０００００ｇ分级离心；取上清液通过ＱＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５离子交换柱层析除去部分色素和杂蛋白；然后采用谷胱甘肽－琼脂糖凝胶亲和层析（ＧＳＨ－ＱＴ４），四溴酚酞二磺酸盐－琼脂糖凝胶亲和层析（ＢＳＰ－ＱＴ４），铜离子－琼脂糖凝胶螯合层析（Ｃｕ２＋－ＱＴ４）及ＰＢＥ９４－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（ＰＢＥ９４）聚焦层析等层析技术进一步分离纯化．将上述方法获得的色谱峰以ＣＤＮＢ和ＤＣＮＢ为底物检测生物活性．具有生物活性部分的蛋白质，通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定其分子量．实验结果表明，采用ＧＳＨ－ＱＴ４亲和层析法获得的活性峰，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图谱上呈现出两条带，分子量为２４ｋＤ，２４．５ｋＤ左右；Ｃｕ２＋－ＱＴ６螯合层析法分离的活性峰，呈现出一条带，分子量为２４ｋＤ左右；ＰＢＥ９４－聚焦层析法分离获得三个活性峰：第一色谱峰，呈现出一条带，分子量为２３ｋＤ左右

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谷胱甘肽过氧化物酶的硒代半胱氨酸插入元件

瞿祥虎,黄开勋,高中洪,徐辉碧

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(02): 274-278.

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真核生物将硒代半胱氨酸插入蛋白质必需硒代半胱氨酸插入元件（ＳＥＣＩＳ）的参与，后者位于硒蛋白ｍＲＮＡ的３′非翻译区．采用ＲＮＡ折叠程序对１５个谷胱甘肽过氧化物酶基因进行计算机处理发现，其可能的ＳＥＣＩＳ中都具有３段保守碱基ＡＵＧＡ－Ａ（Ｇ）ＡＡ－ＧＡ．根据Ａ（Ｇ）ＡＡ位于顶环或者顶环上游５′臂的突环上，可将ＳＥＣＩＳ分为Ⅰ型和Ⅱ型结构

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AngⅡ和PKC对心肌细胞AngⅡ 1型受体的转录调节

常文静,崔兆强,陈曦,陈兰英,黄楚滨,刘力生

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(02): 279-283.

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利用体外培养的心肌细胞，观察血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）和蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）在诱导ＡｎｇⅡ１型受体（ＡＴ１）基因表达及蛋白质代谢中的作用．研究结果表明：ＡｎｇⅡ可诱导ＡＴ１ｍＲＮＡ水平一过性下调，呈时间及剂量依赖性，１０ｎｍｏｌ／ＬＡｎｇⅡ刺激细胞６ｈ，引起ＡＴ１ｍＲＮＡ水平降低幅度最大，降至对照的５１．６％±９．５％，然后逐渐回升，２４ｈ恢复至对照水平．３０μｍｏｌ／ＬＨ－７（ＰＫＣ抑制剂）能阻断ＡｎｇⅡ诱导的ＡＴ１ｍＲＮＡ水平的下调．０．３μｍｏｌ／Ｌ的ＰＭＡ（ＰＫＣ激活剂）单独应用可诱导ＡＴ１ｍＲＮＡ水平下调达对照的４３％±８％，加入ＡＴ１拮抗剂ＤＭＰ８１１及Ｄｕｐ７５３均可阻断ＡｎｇⅡ诱导的ＡＴ１ｍＲＮＡ水平的下调．１０ｎｍｏｌ／Ｌ的ＡｎｇⅡ刺激心肌细胞９６ｈ可使蛋白含量降低至对照的７３．４％±５．６％，而加药持续刺激１４４ｈ可使蛋白含量较对照增加３３．８％±６．３％，Ｈ－７不能阻断ＡｎｇⅡ诱导的蛋白含量降低，但可有效地抑制蛋白含量的增加．以上结果提示：ＡｎｇⅡ对心肌细胞ＡＴ１基因的转录和细胞的蛋白代谢有调节作用，而ＰＫＣ则参与了ＡｎｇⅡ的这种调节作用

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血管紧张素Ⅱ对大鼠心肌肌浆网Ca~(2+),Mg~(2+)-ATPase基因转录调节的影响

崔兆强,陈曦,陈兰英,刘力生

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(02): 284-288.

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观察血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）对心肌肌浆网Ｃａ２＋，Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ基因（ＳＥＲＣＡ２ａ）转录调节的影响，评价ＤＭＰ８１１对此效应的干预作用．６周龄雄性ＳＤ大鼠随机分为３组，每组６只．组１：生理盐水输注；组２：ＡｎｇⅡ输注＋ＤＭＰ８１１管饲（３ｍｇ·ｄ－１·ｋｇ－１）；组３：ＡｎｇⅡ输注（２００ｎｇ·ｍｉｎ－１·ｋｇ－１．１周后称其体重，取心脏并称重，提取心脏总ＲＮＡ后采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ的方法检测ＳＥＲ－ＣＡ２ａ的转录水平，采用ＲＴ－ＰＣＲ检测ＡｎｇⅡ１型受体（ＡＴ１）ｍＲＮＡ水平．实验后，组３心重（ＣＷ）、心重／体重（Ｃ／Ｂ）、ＡＴ１受体转录水平均高于组１（分别增加４．７±０．４％，４．９±０．９％和２４．７±３．５％；Ｐ＜０．０１），而ＳＥＲＣＡ２ａ基因转录水平显著低于组１（降低２０．１±３．０％，Ｐ＜０．０１），并且ＳＥＲＣＡ２ａｍＲＮＡ水平与ＡＴ１受体ｍＲＮＡ水平呈负相关（ｒ＝－０．７４，Ｐ＜０．０１）．ＡｎｇⅡ导致的上述改变能被ＤＭＰ８１１完全阻断．ＡｎｇⅡ通过其Ⅰ型受体的介导，诱导了ＳＥＲＣＡ２ａ的转录下调

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二价铅离子与金属硫蛋白相互作用的研究

魏欣,茹炳根

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(02): 289-295.

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通过紫外吸收光谱和平衡透析法研究了二价铅离子同脱金属硫蛋白（ａｐｏ－ＭＴ）、锌－金属硫蛋白（Ｚｎ－ＭＴ）的相互作用，证实Ｐｂ（Ⅱ）是以金属巯基复合物（金属巯基比为１∶２）的形式同金属硫蛋白结合，表观离解常数（ＫＤ）为８．７１×１０－７ｍｏｌ／Ｌ．在自由铅浓度达到６．５２×１０－６ｍｏｌ／Ｌ的条件下，铅离子即可将Ｚｎ－ＭＴ上的Ｚｎ完全取代下来．通过ＥＤＴＡ、ＤＴＮＢ竞争反应、圆二色性（ＣＤ）光谱分析，认为Ｐｂ－ＭＴ的金属巯基复合物不同于Ｚｎ－ＭＴ中Ｚｎ与巯基形成的紧密的正四面体结构，而是可能形成一种三级结构相对松散、热力学上不稳定的Ｃｙｓ－Ｓ－Ｐｂ－Ｓ－Ｃｙｓ平面形结构．研究认为金属硫蛋白的两种亚型ＭＴ－Ⅰ、ＭＴ－Ⅱ与Ｐｂ（Ⅱ）的结合能力并无显著差异

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胰凝乳蛋白酶短肽抑制剂的筛选和活性分析

刘莹,张姝,李天羽,范洪宽,周慧,李惟

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(02): 296-299.

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报道了一种从噬菌体肽库中筛选胰凝乳蛋白酶短肽抑制剂的新方法．在通常的亲和富集筛选的基础上，利用胰凝乳蛋白酶自身的水解活力切割掉结合的底物噬菌体，再经抑制活力分析得到抑制性噬菌体克隆．这样筛得的噬菌体克隆具有明显的胰凝乳蛋白酶结合活力和抑制活力，ＤＮＡ序列分析发现其保守序列为（Ｓ／Ｔ）ＲＶＰＲ（Ｒ／Ｈ）．按此序列化学合成的短肽Ａｃ－ＡＳＲＶＰＲＲＧ－ＮＨ２、Ａｃ－ＡＳＲＶＰＲＨＧ－ＮＨ２同样表现出对胰凝乳蛋白酶的抑制作用．该方法为蛋白酶短肽抑制剂的筛选提供了一条有效途径

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甲状旁腺素、胰岛素样生长因子-Ⅰ对骨特征性标志蛋白的影响

白秀英,俞文华,李平风,周爱儒,顾文霞,杜国光

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(02): 300-303.

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为了阐明甲状旁腺素（ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄｈｏｒｍｏｎｅ，ＰＴＨ）、胰岛素样生长因子－Ⅰ（ｉｎｓｕｌｉｎ－ｌｉｋｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ－Ⅰ，ＩＧＦ－Ⅰ）在促成骨样细胞ＲＯＳ１７／２．８增殖的同时对其分化状况的影响，研究了ＰＴＨ、ＩＧＦ－Ⅰ对骨特征性标志蛋白碱性磷酸酶（ａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ，ＡＬＰ）活性、骨钙素（ｏｓｔｅｏｃａｌ－ｃｉｎ）ｍＲＮＡ表达及骨胶原蛋白（ｃｏｌａｇｅｎ）合成的影响．结果表明，ＰＴＨ、ＩＧＦ－Ⅰ均可抑制ＡＬＰ活性，ＰＴＨ的抑制作用强于ＩＧＦ－Ⅰ，抑制作用具有时间剂量依赖性；ＰＴＨ、ＩＧＦ－Ⅰ均可诱导骨钙素ｍＲＮＡ表达增加；ＰＴＨ能够促进３Ｈ－脯氨酸参入新生小鼠颅骨组织，既ＰＴＨ能够骨胶原蛋白合成增加．这些结果提示，ＰＴＨ、ＩＧＦ－Ⅰ在促成骨样细胞ＲＯＳ１７／２．８增殖的同时也促进其分化，表明在成骨细胞的生发成熟过程中，增殖、分化现象相辅相成，相伴而行．

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甲状旁腺素增强成骨样细胞ROS 17/2.8中酪氨酸蛋白磷酸化的研究

白秀英,李平风,周爱儒,杜国光

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(02): 304-307.

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为了研究甲状旁腺素（ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄｈｏｒｍｏｎｅ，ＰＴＨ）促成骨样细胞ＲＯＳ１７／２．８增殖分化的信号传递的机理，观察了ＰＴＨ对细胞内酪氨酸蛋白激酶（ｔｙｒｏｓｉｎｅｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅｓ，ＴＰＫ）活性及酪氨酸蛋白磷酸化水平的影响，并检测了ＰＴＨ对ｃ－ｒａｓｍＲＮＡ表达的诱导作用．结果表明，ＰＴＨ可增强细胞内ＴＰＫ活性，提高细胞内酪氨酸蛋白磷酸化水平，以及促进ｃ－ｒａｓｍＲＮＡ的持续表达．这些结果提示，ＰＴＨ促增殖的细胞内信息传递通路与酪氨酸蛋白激酶－ｒａｓ－ＭＡＰＫｉｎａｓｅ通路密切相关，而ＰＫＡ／ＰＫＣ通路的最终效应可能是通过与上述通路的ｃｒｏｓｓｔａｌｋ实现的

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叠氮水杨酰胺类化合物对呼吸链琥珀酸-细胞色素c还原酶的抑制作用

吕斌,徐建兴,肖燕,古练权

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(02): 308-311.

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合成了３－叠氮基－Ｎ－正癸烷基水杨酰胺和５－叠氮基－Ｎ－正癸烷基水杨酰胺并检测了它们对呼吸链酶系从琥珀酸到细胞色素ｃ段电子传递活性的抑制作用．两种化合物对琥珀酸－泛醌还原酶的抑制能力基本相同，而５位叠氮基取代物对泛醌－细胞色素ｃ还原酶的抑制能力较３位叠氮基取代物为强．它们与泛醌反应抑制剂３－硝基－Ｎ－正癸烷基水杨酰胺相比较，其抑制性质基本相似，只是抑制能力较后者为弱

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紫外线对大鼠晶状体抗氧化酶mRNA表达水平的影响

陆爱丽,刘莹,董东生,侯纬敏,张昌颖

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(02): 312-315.

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为探讨紫外线对晶状体的损伤机制，用ＲＴ－ＰＣＲ方法（ｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，反转录聚合酶链反应），研究经紫外线照射后大鼠晶状体抗氧化相关酶，包括铜锌－超氧化物歧化酶（ｃｏｐｐｅｒ－ｚｉｎｃ－ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅ，Ｃｕ－Ｚｎ－ＳＯＤ），谷胱甘肽过氧化物酶（ｇｌｕ－ｔａｔｈｉｏｎｅｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ，ＧＳＨ－Ｐｘ）和过氧化氢酶（ｃａｔａｌａｓｅ，ＣＡＴ）等ｍＲＮＡ的表达．结果显示，短时间的照射（２～５ｍｉｎ），抗氧化相关酶的ｍＲＮＡ表达水平有增高表现，随后其ｍＲＮＡ表达水平开始下降，１５ｍｉｎ时抗氧化相关酶ｍＲＮＡ的表达下降更为明显，与对照组相比有非常显著性差异（Ｐ＜０．００１）．照射后２４ｈ，抗氧化相关酶的ｍＲＮＡ表达有不同程度的恢复；照射后４８ｈ，其ｍＲＮＡ表达水平基本恢复，与对照组相比没有显著性差异．从而从基因水平上初步探讨了紫外线的氧化损伤机制

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纯化重组霍乱毒素B亚单位与天然霍乱毒素B亚单位性质的对比研究

刘传暄,马清钧,张艳红,施维,熊凌霜

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(02): 316-319.

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霍乱毒素Ｂ亚单位（ＢＳ）已用于新型口服霍乱疫苗、佐剂及蛋白质载体，但成本高，来源困难．用重组霍乱毒素Ｂ亚单位（ｒＢＳ）代替ＢＳ可克服上述缺点．ｒＢＳ用于上述目的前必须证实其在物理、化学及免疫学性质方面与天然同类产品的一致性．用亲和层析法从各批次大罐发酵所获工程菌Ｅ．ｃｏｌｉＭＭ２（ｐＭＭ－ＣＴＢ）培养物上清中制备得到了小批量ｒＢＳ纯品，在同等条件下与ＢＳ（Ｓｉｇ－ｍａ公司产品）进行理化、免疫学性质的对比研究，证实二者在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ中电泳带位置一致、分子量相同，纯度达９９％；在反相ＨＰＬＣ中出峰行为一致，纯度达１００％；在半干式聚焦电泳分析中电泳带分布相同，等电点为７．９１．ｒＢＳＮ端起的２０个氨基酸序列为ＴＰＱＮＩＴＤＬＣＡＥＹＨＮＴＱＩＨＴＬ，与克隆基因来源株的毒素Ｂ亚单位同一段序列完全一致．氨基酸组成分析证实ｒＢＳ与ＢＳ相近．在免疫学性质分析中，ｒＢＳ与ＢＳ在免疫双扩散试验中与抗ＣＴ均出一条沉淀线且相互吻合；在免疫电泳试验中二者与抗ＣＴ在相应位置上产生一条沉淀弧；二者均能与神经节苷脂ＧＭ１结合且这种结合均可通过二者与抗ＣＴ的预保温处理而被阻断．对比研究结果揭示ｒＢＳ与ＢＳ性质完全一致，可代替ＢＳ用于

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鼠毛及脑线粒体DNA片段缺失与增龄的关系

曾昭惠,段建明,张宗玉,童坦君

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(02): 320-322.

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以聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测不同年龄Ｂａｌｂ／ｃ小鼠脑细胞线粒体ＤＮＡ片段缺失与增龄的关系．发现老年鼠脑细胞线粒体３８６７ｂｐ片段缺失率为５０％；而断奶鼠与青年鼠均无此缺失片段出现；用鼠毛为材料进行无损伤检测亦获类似的结果．有人认为线粒体ＤＮＡ片段缺失率可作为生物衰老的一种生物学标志

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PIC-BE诱导K562/ADM细胞凋亡及逆转其MDR的研究

卢步峰,杨佩满,于丽敏,王淑婷,郝立宏,朱正美

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(02): 323-327.

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β榄香烯吗素（ＰＩＣ－ＢＥ）是抗癌新药β榄香烯的水溶性衍生物．采用人红白血病的多药耐药性（ＭＤＲ）细胞株Ｋ５６２／ＡＤＭ作为实验模型，观察ＰＩＣ－ＢＥ对Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞的生长抑制和凋亡诱导作用，并进而研究其对该细胞ＭＤＲ的可能影响．结果显示：（１）Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞对ＡＤＭ具有明显的抗性，与Ｋ５６２细胞相比，抗性倍数约为４０倍，而两者对ＰＩＣ－ＢＥ的ＩＣ５０接近，无显著差异；（２）ＰＩＣ－ＢＥ（１０．０～３０．０μｇ／ｍｌ）对Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞具有明显的生长抑制和凋亡诱导作用，两种作用的强度在一定的范围内均具药物浓度和作用时间依赖性；（３）低毒剂量ＰＩＣ－ＢＥ（１０．０μｇ／ｍｌ）与ＡＤＭ（４．０μｇ／ｍｌ）联合应用，可显著增强ＡＤＭ对该细胞的生长抑制和凋亡诱导作用，升高细胞内ＡＤＭ的浓度，降低该细胞对ＡＤＭ的ＩＣ５０，使该细胞对ＡＤＭ的抗性有数倍逆转．上述结果提示，ＰＩＣ－ＢＥ不仅是一种有效的广谱抗肿瘤剂，而且也是一种有效的ＭＤＲ逆转剂

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固氮酶铁钼辅基在分离纯化中结构变化的新证据

张凤章,黄河清,龙敏南,邱雪慧,许良树

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(02): 328-331.

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根据Ｋｉｍ－Ｒｅｅｓ模型［１］，固氮酶铁钼辅基（即ＦｅＭｏｃｏ或Ｍ簇），是由一个ＭｏＦｅ３Ｓ３簇和一个Ｆｅ４Ｓ３簇通过三个Ｓ－桥联接而成．然而，自Ｓｈａｈ等（１９７７）首次从结晶的钼铁蛋白中分离出具有生物重组活性的ＦｅＭｏｃｏ以来，固氮研究者们一直致...

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乙酰乳酸合成酶的制备、分离与纯化

曹殿芳,周家驹

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(02): 332-333.

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乙酰乳酸合成酶［１］（ａｃｅｔｏｌａｃｔａｔｅｓｙｎｔｈａｓｅ，ＡＬＳ）是目前国际上除草剂研究的前沿热点．它能催化一分子丙酮酸脱羧并与另一分子丙酮酸缩合成一分子乙酰乳酸，从而导致侧链氨基酸缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸的生物合成．存在于细菌和植物组织中［２...

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槲皮素硫酸酯对猪血小板胞浆游离钙浓度和蛋白激酶C的影响

刘文,宋芝娟,梁念慈,佘戟,莫丽儿

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(02): 334-336.

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槲皮素（ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ，Ｑｕｅ），是一种天然的黄酮类化合物，具有多种生物活性［１］，但是Ｑｕｅ水溶性差，口服时胃肠难以吸收［２］．因此，为进一步开发和利用Ｑｕｅ，人工合成水溶性Ｑｕｅ——槲桷皮素硫酸酯（ｓｏｄｉｕｍｑｕｅｒｃｅｔｉｎｓｕｌｆａｔｅ...

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硝基水杨酰胺抑制泛醌-细胞色素c还原酶的作用对氢醌的敏感性

吕斌,徐建兴,陈世智

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(02): 337-339.

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泛醌－细胞色素ｃ还原酶（ＱＣＲ）是线粒体呼吸链的三个能量偶联部位之一，它起着将电子从还原型泛醌传递给细胞色素ｃ（Ｃｙｔ．ｃ）的作用，根据Ｋｉｎｇ和Ｙｕ提出的泛醌结合蛋白理论［１］，泛醌－细胞色素ｃ还原酶中含有泛醌结合蛋白ＱＰｃ．研究表明，泛醌－细胞色...

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苜宿银纹夜蛾核型多角体病毒vp39基因的克隆及其对S_f9细胞形态的影响

刘德立,孙晓洁,齐义鹏,李小峰,朱应

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(02): 340-343.

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最近的研究发现：ＡｃＮＰＶ的ｖｐ３９基因与侵染密切相关［１］．在侵染过程中，ＶＰ３９蛋白与宿主的肌动蛋白结合，使其重排形成缆索（ｃａｂｌｅ）．导致细胞骨架发生变化有利于病毒编码的蛋白酶的水解．最后，子代病毒颗粒大量形成，宿主昆虫体全部液化成为脓水．可...

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关于召开“二十一世纪新药研究战略研讨会”的通知

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(02): 343-343.

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为推动我国新药研究开发，加强新药审批管理，经国家药品监督管理局药品注册司等有关部门授权和支持，《中国新药杂志》与中国老教授协会医药专业委员会将联合召开“二十一世纪新药研究战略研讨会”。原定《中国新药杂志》召开的第三届中国新药学术研讨会暨１９９８年优秀...

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金属硫蛋白导向血栓单抗化学偶联体的制备及性质研究

孙艳,阮长耿,茹炳根

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(02): 344-347.

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金属硫蛋白（ｍｅｔａｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ，简称ＭＴ）是一类低分子量、富含半胱氨酸的蛋白质，由于１个ＭＴ分子可结合７个金属离子，因此ＭＴ分子具有很强的金属结合特性［１，２］．本文一方面利用ＭＴ分子的高金属结合性能，另一方面利用苏州医学院血液研究所研制成...

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用ELISA法测定抗人心肌肌球蛋白轻链(CMLC)单克隆抗体的K_D值

杨非易,李平风,葛韵琴

中国生物化学与分子生物学报. 1999, 15(02): 348-350.

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人心肌肌球蛋白由轻链（ｃａｒｄｉａｃｍｙｏｓｉｎｌｉｇｈｔｃｈａｉｎｓ，ＣＭＬＣ）和重链（ｃａｒｄｉａｃｍｙｏｓｉｎｈｅａｖｙｃｈａｉｎｓ，ＣＭＨＣ）组成．当心肌细胞遭到破坏时，ＣＭＬＣ释放入血，可致血中ＣＭＬＣ浓度增高．血中ＣＭＬＣ的测定是一种高度...

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