中国生物化学与分子生物学报

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罗进贤,王凌,张添元,李文清,徐柏年

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(02): 125-129.

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degQ基因编码一个由46个氨基酸组成的多肽，能增强许多芽孢杆菌胞外酶基因的表达．以pMK4作克隆载体构建短小芽孢杆菌基因文库，并用DNA探针原位杂交法从中钓出degQ基因．对克隆基因的DNA序列进行了分析并证明克隆的短小芽孢杆菌degQ基因具有增强枯草杆菌蛋白酶和果聚糖蔗糖酶基因表达的能力．degQ基因克隆有助于研究芽孢杆菌的正调控机理并可望提高外源基因在芽孢杆菌中表达．

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肝再生增强因子的cDNA克隆、表达及表达产物的生物活性研究

杨晓明,谢玲,邱兆华,宫锋,吴祖泽,贺福初

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(02): 130-135.

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以肝部分切除后再生肝组织为起始材料，利用RT-PCR扩增出大鼠肝再生增强因子（ALR），亚克隆于pGEM-T载体，核苷酸序列测定证实为大鼠ALR；将ALRcDNA亚克隆于pBV220质粒，构建了原核表达栽体，并获高效表达菌株，特异表达蛋白占细菌总蛋白的15％，原核表达的ALR在体外缺乏促进大鼠原代培养肝细胞及SMMC-7721肝癌细胞DNA合成的活性，但在体内1／3肝部分切除模型中可刺激肝细胞DNA合成；ALR在生物学活性方面与肝脏刺激物（HSS）存在一定差别，ALR和HSS应是两种不同的活性因子．ALR还具有促肝损伤修复的作用，对其深入研究可能为临床治疗严重肝病提供有效的药物.

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人神经母细胞瘤株中β-淀粉样前体蛋白基因IL-1反应元件的研究

王少文,马康涛,张迺蘅

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(02): 136-140.

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细胞团子IL-1β可以诱导SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞中APP基因的转录．为了研究APP基因启动子区的IL-1β反应元件，用含不同长度APP启动子片段的报告基因载体，瞬时转染SH-SY5Y细胞，发现APP启动子在SH-SY5Y细胞中有较强活性，其中-488到-303区为IL-1β诱导APP转录活性增加所必需，这个区域包括1个AP1结合位点和1个HSE元件．

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IL-1对β-淀粉样前体蛋白基因在人神经母细胞瘤株中表达的调节作用

王少文,马康涛,张迺蘅

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(02): 141-144.

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β-淀粉样前体蛋白及白介素-1β与老年性痴呆病的发生发展有密切关系．用SH-SY5Y细胞株研究了rh-IL-1β对细胞中APPmRNA表达的影响．Northern杂交结果显示，IL-1β可诱导SH-SY5Y细胞中APPmRNA的表达增加，且有时间剂量反应关系．通过转录延伸实验证实，IL-1β对APP基因表达的诱导作用主要发生在转录水平．

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PARP酶抑制剂未引起整合的外源LacZ基因的丢失

杨其伟,陈雅文,张学,陈德风,张自立

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(02): 145-149.

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使用聚ADP核糖聚合酶（PARP）NAD位点抑制剂苯甲酞胺（BA）研究了降低PARP酶活性对外源LacZ基因整合稳定性的影响．利用DNA体外重组技术将LacZ基因全序列插入到真核表达载体pSV2neo的HindⅢ位点，构建了一个具有真核细胞neo基因筛选标记和LacZ基因的真核表达重组体pSV2neo-beta-gal．将该重组体导入HeLa细胞，经G418筛选获得了能稳定表达β-半乳糖苷酶的HeLa转化细胞系HeLa-beta-gal．使用PARP酶抑制剂苯甲酸胺处理细胞5周，随后进行细胞基因组Southern杂交分析与细胞内容物β-半乳苷酶的活性检测．结果表明，经BA处理的HeLa-beta-gal细胞β-半乳糖苷酶的活性及杂交带密度与未经BA处理的HeLa-beta-gal细胞相比未有明显区别．结合以前的结果可以认为，PARP酶抑制剂BA并不能导致所有外源基因的丢失，且使用PARP酶抑制剂BA引起外源基因的丢失具有选择性．

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时间分辨荧光分析法在DNA探针检测中的初步应用

游冬青,陈杞,张丽民,贺广彩,邹鲁峰,陈克明

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(02): 150-153.

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应用时间分辨荧光技术进行核酸杂交分析，选用自制整合剂异硫氰酸苯基-EDTA将铕离子标记连接于链霉亲和素分子中，通过光化学反应制备生物素标记pUC118DNA探针，与固定在聚苯乙烯微滴板中的靶DNA杂交后，以铕离子Eu(3+)标记的链霉亲和素为检测物，检测靶DNA的含量，可检测到30pg的靶DNA．

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T7启动子在哺乳类动物细胞中启动外源基因表达的研究

周天鸿,李月琴,王彤歌,刘飞鹏

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(02): 154-158.

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人低密度脂蛋白（LDL）受体基因cDNA和氯霉素已酞转移酶基因（CAT）及PolyA信号序列被克隆进pGEM4载体的T7噬茵体启动子下游，构建成质粒pT7LDLR和pT7CAT．两个重组质粒转化CHO细胞．PCR和CAT酶实验显示：两个基因被T7噬菌体启动子所启动．结果证实真核生物RNA聚合酶能够识别T7启动子，转录外源基因．常用的含有T7启动子的质粒可同时作为原核生物和真核生物的表达载体．

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PGDH~L生化突变型谷氨酸生产菌株选育的生化模式

高焕春,吕晓玲,李超文

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(02): 159-163.

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以Tbm-3（icl-，异柠檬酸裂解酶活力丧失的生化突变株）为出发菌株，经紫外线诱变，通过依据生化代谢所设计的选择培养基（L-阿拉伯糖平板与D-葡萄糖酸钠平板）对接的筛选方法，获得磷酸葡萄糖酸脱氢酶（PGDH，E．C．4．2．1．12）渗漏突变型（pgdh1）的生化突变型菌株Tbm3-18．该菌株经摇瓶发酵试验显示，比出发菌株Tbm-3提高产酸率8．9％和转化率8．1％．表明pgdh-或pgdh1生化突变型菌株的选育，对谷氨酸的积累是有利的，该选育生化模式是成功的．

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性激素对成年小鼠脑微管蛋白合成的影响

郭守祥,田德润,李云生,孙育敏,张墨玲

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(02): 164-168.

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以3H-秋水仙碱为探针，测定小鼠脑微管蛋白含量．结果表明雌性激素具有显著的促进成年鼠脑微管蛋白合成的作用．与雌性激素相比，雄性激素促进脑微管蛋白合成的作用较弱．特别值得指出的是雌性激素促进脑微管蛋白合成的作用发生在脑发育的临界期之外，而此时甲状腺激素早已丧失了促进脑微管蛋白合成的作用．因此雌性激素在维护成年脑结构和功能的完整完善方面起着重要作用，而且这种作用可能会获得新的应用．

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放射性配体结合分析法测定鸡视网膜多巴胺D1受体

肖林,贺师鹏,陈瑞英,郭静秋,黄天贵

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(02): 169-172.

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用放射性配体[3H]SCH23390建立鸡视网膜多巴胺D1受体的放射性配体结合分析法，并测定不同试验组鸡视网膜多巴胺D1受体的Bmax值有显著性差异，KD值无明显差异．同时探讨了干，湿滤膜片对放射性测定结果的影响，以及影响试验结果的其它因素．实验表明湿滤膜片测量效果优于干滤膜片，膜受体即使贮存在-20℃条件下亦只能一周，否则影响受体的活性．

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人肝癌细胞的IGF-BP1分子特性及内源性蛋白酶对其降解的研究

沈辉,王梅,ThomasBraulke

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(02): 173-176.

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用SDS-PAGE电泳、高效液相色谱（HPLC）、质谱等方法，研究了人肝癌细胞（HepG2）分泌的胰岛素样生长因子结合蛋白-1（35S-IGF-BP1）的分子结构、特性，及其被内源性蛋白酶降解的特点．35S-IGF-BP1经抗体免疫沉淀、生化分离，纯化为均一体．其分子是由多个亚基构成的蛋白质，分子量约为27kD；细胞UMR、HepG2、H35。BRL3A分泌的蛋白酶能将35S-IGF-BP1催化水解成较小分子（14kD）的多肽．

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DCM和DMF对DCC-HOBt系统催化酯化及酰化反应的影响

张志刚,何素婷,何明华,蔡豪斌,何水淋

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(02): 177-180.

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DCC-HOBt系统在DCM和DMF溶剂中，催化Fmoc-Leu-OH与王氏树脂的酯化反应，其结合率分别为18％和10％．该系统催化Fmoc-Phe-OH与H2N-Leu-resin的酰化反应中，溶剂为DCM时，反应30min，其结合率为100％；当DCM：DMF体积比为1：3．5时，反应130min，其结合率为81％，表明DCC-HOBt系统宜在DCM非极性溶剂中催化肽键的形成．

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林生山黧豆谷氨酸脱羧酶的分离纯化及部分性质的研究

穆小民,沈黎明,吴显荣

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(02): 181-186.

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以林生山黧豆为材料，利用硫酸按分段盐析，丙酮沉淀，DEAE-SepharoseFF离子交换柱层析，SephacrylS300凝胶过滤柱层析及FPLC-MonoQ柱层析技术，以聚酰胺薄膜层析荧光定量法为酶活力检测手段，分离纯化了谷氨酸脱羧酶，达到电泳银染纯．纯化后的林生山黧豆谷氨酸脱羧酶活力达375．09U·mp-1，纯化倍数38．2倍，经SDS-PAGE测定，其亚基分子量为70kD，经梯度PAGE确定，天然分子量为140kD，表明该酶是由两个亚基组成的二聚体．酶学研究表明，纯化的林生山黧豆谷氨酸脱羧酶的最适pH值为5．4，对谷氨酸的Km值为1．62×10-3mol·L-1，酶的最适温度为40℃，酶特异性地使谷氨酸脱羧，不能使天门冬氨酸等其它氨基酸脱羧．

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银杏花粉微管蛋白的纯化及鉴定

张红,刘国琴,阎隆飞

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(02): 187-190.

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采用丙酮粉抽提，DEAE-SephadexA-50、SephacrylS-300、MonoQ柱层析，从银杏（GinkgobilobaL．）花粉中分高纯化出微管蛋白（tubulin），其两个亚基（α、β）的分子量分别为54kD和52kD．纯化的微管蛋白可与鸡脑微管蛋白抗体发生免疫交叉反应．

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重组人白介素6受体功能区片段的功能鉴定

段聚宝,王嘉玺,彭善云,马贤凯

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(02): 191-194.

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用生物素标记重组人白介素6受体功能区片段rIL6R-28及其二联体蛋白rIL6R-53．竞争ELISA表明重组蛋白可以与配基IL-6特异结合．流式细胞术检测结果表明IL-6与生物素标记的重组蛋白所形成的复合物能够与7TD1细胞表面的gp130结合．而7TD1细胞生长分析则表明，重组蛋白可以增强IL-6对7TD1．细胞的生长刺激作用．

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在大鼠发育过程中β1,4半乳糖基转移酶的组织分布及其变化的研究

江松敏,李溪冰,邵东敏,顾建新

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(02): 195-199.

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用HPLC纯化了荧光标记的底物（Gnβ1-2Ma1-6（Gnβ1-2Mα1-3）Mβ1-4Goβ1-4Gn-PA）用β-1，4-半乳糖基转移酶的荧光标记底物的HPLC测定方法，测定了在发育过程中大鼠肝，肾，脑中的酶活性的变化，结果表明，（1）在正常成年大鼠中，各组织酶活性具有组织特异性，（2）不同的发育期，其酶活性不同。胎鼠（孕20d，以下同）时最高，以后就渐渐下降，各组织酶活力变化幅度是不一致的，这些变化的生理意义有待子进一步研究．

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硫酸乙酰肝素蛋白聚糖对培养人脐静脉内皮细胞合成蛋白聚糖的影响

丛祥凤,张春玲,张英珊

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(02): 200-203.

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以[35S」-Na2SO4为示踪物，观察人正常主动脉中的硫酸乙酸肝素蛋白聚糖（HSPG）对培养的第一代人脐静脉内皮细胞（hUVEC）合成蛋白聚糖（PG）的影响．用解聚提取法及离子交换柱层析分离人主动脉HSPG．35S-PGs的混合物用离子交换及凝胶过滤柱层析法分离35S-HSPG，35S-硫酸软骨素-硫酸皮肤素PG（35S-CSDSPG）及35S-硫酸皮肤素PG（35S-DSPG）．结果发现实验组（加HSPG）与对照组（未加HSPG）相比，hU-VEC的35S-PGs总量（培养液+细胞层）无差别，但实验组培养液中35S-PGs总量升高、35S-DSPG、35S-CSDSPG及其相对百分含量均升高，而35S-HSPG及其百分含量降低．细胞层的35S-PGs，35S-HSPG及其相对百分含量降低，35S-DSPG及其相对百分含量升高，而CSDSPG未见差别．

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三甲基苯基磷酸酯对神经毒性酯酶的抑制及其酶促动力学分析

伍一军,冷欣夫

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(02): 204-209.

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以可使人和敏感动物产生迟发性神经毒性的有机磷化合物三甲基苯基磷酸酯（TOCP）为测试药物，研究其在体外对成年产卵来航母鸡不同神经组织神经毒性酯酶（NTE）活性抑制的敏感性及其抑制的动力学．结果表明，外周神经NTE对于TOCP的抑制比中枢神经NTE敏感得多．TOCP对鸡脑、脊髓和坐骨神经中NTE抑制的I50值．分别为：1．9323、2．3950和0．0035mmol／L．NTE酶促动力学研究显示，鸡脑NTE催化分解底物戊酸苯酯（PV）的Vmax为62．10nmol·min-1·mg-1，Km为0．92mmol／L．TOCP对鸡脑NTE的抑制属竞争性抑制类型，并有"底物抑制"现象．

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红细胞分化因子诱导HL-60细胞排核过程中酪氨酸蛋白质磷酸化的改变

郭双立,白龙川,颜卉君,费仁仁,吴国利

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(02): 210-215.

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红细胞分化因子是从兔子网织红细胞中提出的一个蛋白因子，它可以使多种癌细胞株的生长受到抑制[1]．以早幼粒白血病细胞（HL-60）为材料，研究其被EDDF诱导过程中细胞内PTK，PTPP及它们底物磷酸化水平的变化．实验发现：部分纯化的EDDF对HL-60细胞生长有明显的抑制作用，经NBT还原和Giemsa染色，可见HL-60细胞被诱导出现排核．同时，细胞的PTK，PTPP酶活性有明显的变化，PTPP和PTK的底物蛋白在胞浆中酪氨酸蛋白磷酸化水平亦出现改变（但颗粒部分变化不明显）．

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一种新型肿瘤细胞抑制蛋白的分离纯化

陶海南,刘辉,刘全俊,陈贵泉,欧阳献,舒志群

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(02): 216-220.

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介绍了从健康牛骨髓中分离到一种具有抑制肿瘤活性的糖蛋白，并对该糖蛋白进行了纯化，获得了电泳纯和层析纯的纯品．测得该糖蛋白N末端为两氨酸残基．用SDS-PAGE法测得该溏蛋白的表现分子量为65kD．氨基酸组成分析显示其为一种富含丝氨酸的蛋白质．生物活性测定表明，该糖蛋白纯品对小白鼠白血病P388细胞和人慢粒白血病HL-60细胞株的增殖均有抑制作用．有关该糖蛋白的糖含量的定量测定及蛋白质一级结构分析正在进一步的研究中．

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D-葡萄糖苷酶抑制剂的研究

岳保珍,王孝伟,贺师鹏,王志文,孟晓菲,张佩瑛,马灵台

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(02): 221-225.

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用高灵敏度的荧光法研究了13种糖类化合物对α或β-D-葡萄糖苷酶的抑制作用．实验结果表明：5-氨基-5-脱氧-D-吡喃葡萄糖-1-磺酸铵盐（1）、5-氨基-5-脱氧-D-吡喃葡萄糖-1-磺酸（2）、5-氨基-5-脱氧-D-葡萄糖-1．亚硫酸加成物（3）等三种氮杂糖对α或β-D-葡萄糖苷酶均呈现竞争性抑制作用．化合物（1）的Kiα＝372μmol／L；Kiβ＝6．38μmol/L．化合物（2）的Kiα＝34．4μmol／L；Kiβ＝6．84μmol／L．化合物（3）的Kiα＝47．2μmol/L；Kiβ＝11．9μmol/L．上述三个化合物对β-D-葡萄糖苷酶的抑制作用都强子α-D-葡萄糖苷酶．尤其对化合物（1），其Kiα／Kiβ＝58．3，表明其抑制糖苷酶活性有较好的选择性．

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癌患者血清中癌细胞凝集因子特性的研究

侯琳,周柔丽,王少斌,芮静安

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(02): 226-230.

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前曾报道癌患者血清中存在选择性凝集具高转移潜能的人鼻咽癌细胞的凝集因子．现除扩大了检测例数外，重点对癌患者血清中凝集因子的化学本质及生物学特性进行了系统研究，证明其可能是一种内源性凝集素（糖结合蛋白质），特异性识别甘露糖及β1，6分枝的N-乙酰氨基乳糖．其作用不依赖于Ca+，而还原剂可提高其活性并对高碘酸氧化敏感．对这种内源性凝集素在癌栓形成及癌细胞转移中的作用进行了讨论．

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钒对人红细胞膜蛋白和膜脂质过氧化的影响

陈宝卫,白玉国,王夔,张伯彦

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(02): 231-234.

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对钒酸根V（V）与红细胞膜相互作用研究表明V（V）使膜蛋白内源荧光淬灭（KD，37＝2．23，KD，20＝4．17）和膜巯基含量降低，但对膜脂质过氧化影响较小，提示V（V）主要与膜蛋白作用．与V（V）不同，V（V）与红细胞膜的作用虽使膜蛋白就基含量下降，但不显著，其主要作用是引起膜脂质过氧化．

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应用抗病毒抗体表位筛选的多肽文库的构建

杜芝燕,赵云峰,王全立,王海涛,王升启

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(02): 235-236.

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作用于pNPP的磷酸酶在凝胶中的特异性染色

姚知行,夏英,颜卉君

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(02): 237-239.

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磁性聚乙二醇载体固定化α淀粉酶的研究

邱广亮,栗淑媛,郝翠秀,高艳春

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(02): 240-242.

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邻苯二甲醛修饰法探测中华猕猴桃蛋白酶在胍溶液中活性部位的构象变化

颜青,林青松,颜思旭

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(02): 243-245.

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肿瘤细胞诱导分化剂NADAH在硅胶载体上的固定化及其与DNA作用的研究

颉东旭,李树本,任礼勤

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(02): 246-248.

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