中国生物化学与分子生物学报

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王均，贾弘　

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(05): 507-510.

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ＭｙｏＤ家族生肌因子ＭｙｏＤ、生肌素（ｍｙｏｇｅｎｉｎ）、ｍｙｆ－５和ｍｙｆ－６／ｈｅｒｃｕｌｉｎ对脊椎动物肌细胞分化和骨骼肌系统的发育成熟具有重要意义，其中生肌素的作用尤为突出，是肌细胞终末分化的关键因素。采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹技术检测鸡胚骨骼肌发育过程中生肌素在转录水平的表达动力学，发现在胚胎发育第９ｄ已有鸡肢体骨骼肌生肌素ｍＲＮＡ表达，第１３ｄ达到高峰，第１５ｄ开始下降，第１８ｄ至出生后两周几无可检测的ｍＲＮＡ；而生肌素蛋白则在胚胎发育第１３ｄ方可被检测到，第１５～１８ｄ达到高峰，至出生后两周仍维持在一定水平，表明生肌素的表达存在翻译和翻译后水平的调控。利用鸡生肌素基因上游－２２３／＋４０调控片段为探针对发育不同时期的鸡肌肉组织细胞核抽提物进行Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析。发现一种约３５ｋＤ的核内蛋白与探针有较强结合，结合活性第９ｄ时出现，至第１８ｄ达到峰值，出生后两周时降至难检测水平；另外有一种约１１ｋＤ的核内蛋白的ＤＮＡ结合活性恰好在转录活性下降的第１５～１８ｄ发生，按此情况两种核因子可能对生肌素的转录激活分别起正负调控作用。

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胰岛素蛋白质工程：高活性［B10Asp］人胰岛素

唐月华，刘卫东，刘滨，徐明华，冯佑民

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(05): 511-515.

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用基因定位突变方法将胰岛素Ｂ链第１０位的Ｈｉｓ变为Ａｓｐ，获得高活力胰岛素──［Ｂ１０Ａｓｐ］人胰岛素。其受体结合能力和离体生物活力分别为猪胰岛素的２６２％和２３５％；体内生物活力也明显高于猪胰岛素；它的促细胞生长能力为猪胰岛素的１７４％。

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纤溶酶原激活物抑制因子－1突变体E350G，E351K的构建及性质研究

隋广超，张曼，胡美浩

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(05): 516-520.

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利用ＰＣＲ扩增和合成突变引物的方法，将ＰＡＬ－１的Ｇｌｕ３５０和Ｇｌｕ３５１分别突变为Ｇｌｙ和Ｌｙｓ，在大肠杆菌中表达并分离纯化突变体ＰＡＬ－１（Ｅ３５０Ｇ，Ｅ３５１Ｋ），用盐酸胍激活并以ＥＬＩＳＡ法确定它与野生型ｒＰＡＩ－１的相对含量。通过对ｕ－ＰＡ，ｔ－ＰＡ抑制的动力学研究表明，突变体与野生型ｒＰＡＩ－１相比，对ｕ－ＰＡ和ｔ－ＰＡ的抑制活性都有明显下降，由活性态向潜伏态转变的半寿期也由０．８３ｈ缩短为０．５７ｈ。

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亚硒酸钠对大鼠晶体上皮细胞αA晶体蛋白基因转录的影响

何海鹰，王波，汪晓鹏，梁康，张昌颖

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(05): 521-524.

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在体外观察了亚硒酸钠（Ｎａ＿２ＳｅＯ＿３）作用于大鼠晶体上皮细胞（ＲＬＥｃｅｌｌｓ）而引起其晶体蛋白基因转录的改变，对不同浓度的硒在体外对αＡ晶体蛋白基因转录的影响作了初步的研究。结果发现，随着亚硒酸钠浓度的升高，αＡ基因的转录下降；而当亚硒酸钠浓度升至５×１０（－５）ｍｏ１／Ｌ时，αＡ基因的转录又呈反跳性回升。提示硒在致障过程中对晶体蛋白基因转录的影响作用不可忽视；同时αＡ晶体蛋白在晶体细胞内，至少应答于高浓度的硒，可能作为一种应激蛋白表达。

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固定化锤头状ribozyme的初步研究

张晓岚，陆长德，祁国荣

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(05): 525-528.

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用共价连接方式将专一切割苜蓿夜蛾核多角体病毒多角体蛋白ｍＲＮＡ片段的锤头状ｒｉｂｏｚｙｍｅ（ｈａｍｍｅｒｈｅａｄｒｉｂｏｚｙｍｅ）固定在ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－４Ｂ上，ｒｉｂｏｚｙｍｅ与载体之间有１９个原子的距离，研究并比较了该固定化ｒｉｂｏｚｙｍｅ与游离（非固定化）ｒｉｂｏｚｙｍｅ的底物专一性、催化活性、最适反应温度以及热和保存稳定性。讨论了固定化ｒｉｂｏｚｙｍｅ与固定化酶在性质上的相似性以及固定化ｒｉｂｏｚｙｍｅ研究在理论和应用上的可能意义。

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重组人白细胞介素－6与肿瘤坏死因子突变体融合蛋白的构建及表达

刘丽，欧阳应斌，黄培堂，刘及

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(05): 529-534.

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针对肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）在肿瘤治疗剂量下产生的严重毒副作用及一些肿瘤细胞上白细胞介素－６（ＩＬ－６）受体明显增高的事实，根据ＴＮＦ结构与功能研究的最新信息，利用ＰＣＲ技术，对人ＴＮＦα基因进行了改造，并将其与人ＩＬ－６成熟肽编码区ｃＤＮＡ通过人工接头进行融合。融合蛋白在大肠杆菌中表达后，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析表明，分子量约为３７ｋＤ；活性检测结果证实，该融合蛋白兼具有ＴＮＦ抗肿瘤活性和结合ＩＬ－６受体的能力，在高表达ＩＬ－６受体的人骨髓瘤细胞上测得的细胞毒活性较同样位点突变的ＴＮＦ高约３倍。

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LDL受体基因cDNA的RT－PCR分离、克隆及其在RFLP中的应用

周天鸿，王彤歌，李月琴，谢建雄，刘飞鹏

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(05): 535-539.

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利用ＲＴ－ＰＣＲ技术分离低密度脂蛋白受体基因ｃＤＮＡ，将长为２６０５ｂｐ的ｃＤＮＡ插入质粒ｐＪＮ６，并经全序列测定证实，该序列与已报道序列相比，存在两个变异碱基，即第７５４位Ｃ→Ｔ，和１６５４位的Ｇ→Ａ，这两个变异碱基并不改变编码的氨基酸，利用ＬＤＬ受体基因ｃＤＮＡ中的ＣｌａⅠ片段作为探针，检测到ＬＤＬ受体基因上外显子８的ＳｔｕⅠ位点是个限制性片段长度多态性位点。所克隆的ｃＤＮＡ含有可译框架的全部密码，因此可作为基因表达材料。

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M－CAT盒在鸡AchR　γ－亚基基因转录激活中的作用

王军，贾弘褆，张迺蘅

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(05): 540-543.

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原代培养鸡胚肌细胞瞬时转染结合氯霉素乙酰基转移酶水平测试表明：鸡ＡＣｈＲγ－亚基基因缺失近起始点一对Ｅ盒（ＣＡＮＮＴＧ）的－２０４／－５０片段与含Ｅ盒的－２０４／＋３６片段一样，均可独立激活ｔｋ启动子的转录活性，证明了该片段的增强子样作用，利用鸡胚肌肉核抽提物与－２０４／－５０片段进行胶阻滞分析，检出了明显的迁移位移条带的发生；迁移条带不仅可被未标记的－２０４／－５０片段消除，而且还可被含Ｍ－ＣＡＴ盒（ＣＡＴＴＣＣＴ）的２３ｂｐ寡核苷酸竞争阻断，说明胶阻滞分析中出现的迁移条带系由核内因子特异结合－２０４／－５０片段中的Ｍ－ＣＡＴ序列所致，上述结果证明，Ｍ－ＣＡＴ盒对鸡ＡＣｈＲγ－亚基基因－２０４／－５０片段的转录激活功能起作用。

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大鼠脑谷氨酸脱羧酶基因的cDNA克隆及序列分析

宋学文，赵崇，邓彤，蔡军，何炜，张镜宇

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(05): 544-546.

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胰岛β－细胞自身抗原蛋白之一是脑中谷氨酸脱羧酶（Ｇｌｕｔａｍｉｃａｃｉｄｄｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ，ＧＡＤ，ＥＣ４．１．１．１５）同源物。以双链ｃＤＮＡ为模板，用ＰＣＲ方法快速克隆了Ｗｉｓｔａｒ大鼠脑ＧＡＤ基因的ｃＤＮＡ，将此包括编码５９３个氨基酸的全长ＤＮＡ片段重组入ｐＵＣ质粒并用双脱氧末端终止法测定了全部序列，证明其全长为１７７９ｂｐ．经比较发现Ｗｉｓｔａｒ大鼠脑与Ｒｕｓｓｅｌｌ报导的大鼠脑ＧＡＤ基因序列，有一处碱基的差别，但并不涉及氨基酸的改变。同时还对用ＰＣＲ扩增长片段ＤＮＡ进行了方法学上的探讨。

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慈菇（Sagittaria　safittifolia）α－半乳糖苷酶的纯化与性质

肖念清，孙册

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(05): 547-552.

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以对硝基苯糖苷基为底物，测定了慈菇的１２种糖苷酶，其中α－甘露糖苷酶、α－和β－半乳糖苷酶活力较高；经硫酸铵分级沉淀，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０分子筛层析，ＣｏｎＡＳｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析，ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ离子交换层析，从慈菇抽提液纯化了α－半乳糖苷酶。纯化酶的比活提高１０７２倍，活力回收１５．６％，在圆盘聚丙烯酰胺凝胶电泳和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上均显示１条蛋白质带，在α－半乳糖苷酶浓度为１５０ｍＵ／ｍｌ的溶液中测不到其他糖苷酶的活力。慈菇α－半乳糖苷酶的分子量用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤柱测定或在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上测定均为６０ｋＤ，酶反应的最适ｐＨ在５．８附近，最适温度为６０℃。该酶分解对硝基苯基－α－半乳糖苷的Ｋ＿ｍ值为３．７×１０￣（－４）ｍｏｌ／Ｌ，Ｖ＿ｍ值为２．１×１０￣（－４）ｍｏｌ／Ｌ。银离子、汞离子显著抑制酶活力，Ｄ－半乳糖和密二糖均竞争性地抑制该酶水解对硝基苯基α－Ｄ－半乳糖苷的活力，根据Ｄｉｘｏｎ作图求得其Ｋ＿ｉ值分别为０．９２×１０￣（－３）ｍｏｌ／Ｌ和１．９８×１０￣（－３）ｍｏｌ／Ｌ。２－脱氧－Ｄ－半乳糖和Ｌ－岩藻糖为酶活力的非竞争性抑制剂。化学修饰

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化学修饰单克隆抗体模拟谷胱甘肽过氧化物酶

丁兰，朱振齐，罗贵民，邢辉，刘仔，杨同书，沈家骢

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(05): 553-558.

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化学修饰具有底物谷胱甘肽（ＧＳＨ）结合部位的单克隆抗体（４Ａ４），使其结合部位上的丝氨酸（Ｓｅｒ）转变成谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＰＸ）的催化基团硒代半胱氨酸（Ｓｅ－Ｃｙｓ），因而产生高活力的含硒抗体酶（Ｓｅ－ａｂｚｙｍｅ）．突变的４Ａ４（ｍ４Ａ４）的ＧＰＸ活力达到了天然酶活力的１９％，并对ｍ４Ａ４的酶学性质和动力学性质进行了研究；硒代谷胱甘肽（ＧＳｅＨ）连到４Ａ４结合部位，其ＧＰＸ活力由３．８６Ｕ／μｍｏｌ提高到５９８．９Ｕ／μｍｏｌ用黄嘌呤氧化酶／次黄嘌呤为中心的心肌线粒体自由基损伤模型证明Ｓｅ－ａｂｚｙｍｅ（ｍ４Ａ４）可减轻活性氧对线粒体的损伤。

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胸腺细胞表面岩藻糖化抗原在细胞凋亡过程中变化的初步研究

刘义辉，王玉玲，马天舒，于丽华，朱正美

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(05): 559-563.

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细胞表面糖在细胞分化及细胞周期中均有一定的变化，而且还与细胞间的识别与信息传递有关，为了解膜表面糖复合物在细胞凋亡过程中的作用，通过地塞米松诱导小鼠胸腺细胞凋亡为模型，利用对８种抗原结构相关的寡糖特异的单克隆抗体，观察凋亡过程中胸腺细胞表面岩藻糖化糖抗原结构的变化。免疫组化的分析结果表明：正常胸腺细胞表面的糖抗原主要是含有岩藻糖基的Ｈ－２和Ｌｅ￣ｂ．而凋亡的胸腺细胞表面出现ＧｌｃＮＡｃβ１－３Ｇａｌ－，Ｇａｌβ１－４ＧｌｃＮＡｃβ１－３Ｇａｌ－及双岩藻糖化抗原Ｌｅ￣Ｙ，同时Ｌｅ￣ｂ消失。磷脂提取结果表明在给药３ｈ后膜的ＰＳ条带明显增加，通过对诱发细胞凋亡过程中组化分析的时相变化观察发现：凋亡细胞膜表面糖抗原的变化在给药１ｈ（即凋亡发生前）就出现。以上结果说明凋亡过程中胸腺细胞表面岩藻糖化抗原发生了变化，且此变化可能与细胞凋亡的始发有关。

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油麻藤凝集素的荧光光谱研究

周红，曾仲奎，鲍锦库

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(05): 564-568.

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用化学修饰、内源荧光和荧光淬灭等方法研究了油麻藤凝集素（ＭＳＬ）的溶液构象变化和微环境的构象特征。研究发现ＭＳＬ分子中总共有９个色氨酸（Ｔｒｐ）残基，它们的荧光能被丙烯酰胺淬灭，但不易为ＫＩ接近而淬灭，ＭＳＬ经Ｎ－溴代琥珀酰亚胺（ＮＢＳ）修饰后，其内源性荧光发射谱发生相应变化，结果表明ＭＳＬ分子中部分Ｔｒｐ残基埋藏于分子内部，而位于分子表面的Ｔｒｐ残基可能处于分子的疏水袋中。

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人胎肝造血干细胞增殖刺激物的分离及鉴定

文耕云，吴祖泽，贺福初，裴雪涛

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(05): 569-573.

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经过超滤、ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ、ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００和Ｓｕｐｅｒｏｓｅ１２ＨＲ多步分离纯化，从人胎肝细胞原代培养上清中分离到一分子量为３５ｋＤ的单一活性组分，具有造血干细胞增殖刺激活性，定义为ＦＬＳ－４。ＦＬＳ－４可能是一种新型造血干细胞增殖刺激因子，与具有这类活性的ＩＬ－３、ＩＬ－６、ＧＭ－ＣＳＦ、ＦＬＴ３配基和ＳＣＦ等在理化特性或生物学性质上均有所差异，在胎肝造血活跃时期，是启动早期造血干细胞从Ｇ＿０期进入Ｓ期的主要候选活性物质。

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着床期小鼠子宫内膜Le~y糖蛋白的动态变化

张昕原，朱正美，曹詠清

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(05): 574-577.

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为了解子宫内膜Ｌｅ~ｙ糖蛋白在胚泡着床期间的变化，以及与胚泡表面阶段特异性Ｌｅ~ｙ抗原出现的关系，应用对Ｌｅ~ｙ寡糖特异的ＡＨ－６单抗为探针，通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ免疫酶标染色，观察了小鼠子宫内膜Ｌｅ~ｙ糖蛋白在着床期的动态变化和分布特点。结果表明：（１）未孕及着床前后的小鼠子宫内膜均含Ｌｅ~ｙ糖蛋白Ｍｒ５０～２００ｋＤ），未孕内膜的含量明显高于着床期间的样品；（２）在着床日（Ｄ４）样品可见微量１６ｋＤ的Ｌｅ~ｙ糖蛋白条带；（３）未孕至Ｄ４的子宫内膜均有Ｌｅ~ｙ糖蛋白分泌至宫腔，但呈渐减趋势，未孕样品Ｌｅ~ｙ糖蛋白主要为分泌型，而Ｄ４样品Ｌｅ~ｙ糖蛋白主要存在于子宫内膜，宫腔液含量很少；结果提示子宫内膜Ｌｅ~ｙ糖蛋白在着床期间具有含量、组成和分布上的动态变化，这些变化可能与胚泡着床以及胚泡在宫腔内其表面Ｌｅ~ｙ糖抗原转为阳性密切有关。

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豆薯种子中两种蛋白质的分离纯化及其性质研究

郝冰，林玉娟，叶晓明，潘克桢

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(05): 578-582.

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豆薯（Ｐａｃｈｙｒｒｈｉｚｕｓｅｒｏｓｕｓ）种子经磷酸盐缓冲液抽提，Ｓ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦａｓｔＦｌｏｗ柱，ＤＥ－５２纤维素柱和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５柱层析，提取出两种高纯度的蛋白成分，命名为ＰａｃｈｙｒｉｎⅠ和Ⅱ．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得其分子量分别为３３ｋＤ和１４．５ｋＤ，但ＨＰＬＣ分子筛的结果显示ＰａｃｈｙｒｉｎⅡ的分子量为２８ｋＤ，无论在还原条件下，还是在非还原条件下，ＰａｃｈｙｒｉｎⅡ电泳的结果都完全相同，表明该蛋白的亚基不是以二硫键相连。两种蛋白的等电点分别为４．５和６．５．用酸解法测定了它们的氨基酸组成。在无细胞体系中，它们对蛋白合成有较弱的抑制活性，显示它们可能是核糖体失活蛋白（ＲＩＰｓ）家族中的新成员。

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胰蛋白酶分子中二硫键Cys129－Cys232的定位改造研究

王军，唐建国，张庭芳，张龙翔

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(05): 583-587.

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对胰蛋白酶所特有的二硫键［１２９，２３２］进行了定位改造，将Ｃｙｓ突变为Ｓｅｒ，以观察其对胰蛋白酶稳定性及活性的影响。采用蛋白质工程的方法，构建了三个突变体Ｃ１２９Ｓ、Ｃ２３２Ｓ和Ｃ１２９Ｓ／Ｃ２３２Ｓ．在Ｅ．ｃｏｌｉＸ－９０菌体中进行表达，表达产物用含胰蛋白酶特异性底物ＴＡＭＥ的活性胶检测活性，发现Ｃ２３２Ｓ丧失胰蛋白酶活性，而Ｃ１２９Ｓ和Ｃ１２９Ｓ／Ｃ２３２Ｓ保留了胰蛋白酶活性。在盐酸胍作用下比较双突变体和野生型胰蛋白酶活性，发现突变体Ｃ１２９Ｓ／Ｃ２３２Ｓ的稳定性有所降低。结果表明二硫键Ｃｙｓ１２９－Ｃｙｓ２３２对于胰蛋白酶的活性是非必需的，可能在稳定蛋白质的结构上发挥着重要作用。

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乳链菌肽的分离纯化和部分生物学性质

刘稳，朱文淼，马桂荣，高福鸿

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(05): 588-592.

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用乳酸链球菌ＳＭ５２６进行乳链菌肽的发酵生产，产量为４０～５０ｍｇ／ｌ．经中空纤维超滤器超滤，非极性大孔吸附树脂ＸＡＤ－２层析，ＣＭ－ＳｅｐｈａｄｅｘＣ－２５层析和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０层析纯化了该肽。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ表明达均一，ＲＰ－ＨＰＬＣ表明其纯度不低于９５％。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测其Ｍｒ约为３６００，用ＩＥＦ测其等电点为９．５．酸性条件下稳定且抗热；对胰蛋白酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶不敏感，但对α－胰凝乳酶和蛋白酶Ｋ敏感。乳链菌肽对多种革兰氏阳性菌有强烈的抑制作用；以枯草杆菌和金黄色葡萄球菌为指示菌，其作用方式是杀菌。

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脱血红素细胞色素c自发折叠的进一步验证

韩学海，杨福愉

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(05): 593-598.

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用胰蛋白酶水解结合聚丙烯酰胺凝胶电泳以及纳秒内源荧光衰减谱分析对鸡心脱血红素细胞色素ｃ在透析复性过程的自发折叠现象作进一步确定。结果显示随着透析复性时间的增加，鸡心脱血红素细胞色素ｃ对胰蛋白酶的水解敏感性逐渐下降，内源荧光寿命值增大，与此对应的马心脱血红素细胞色素ｃ没有发生变化。

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人主动脉硫酸乙酰肝素蛋白聚糖对培养人的脐静脉内皮细胞生长的影响

丛祥凤，张春玲，刘俊明，张英珊

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(05): 599-602.

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为探讨硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（ＨＳＰＧ）对内皮细胞生长的作用，用解聚提取及离子交换柱层析法分离出人主动脉ＨＳＰＧ，用倒置显微镜、细胞计数、及￣３Ｎ－ＴｄＲ参入观察其对培养的第一代人脐静脉内皮细胞（ｈＵＶＦＣ）生长的影响。结果发现：（１）倒置显微镜下观察，加入ＨＳＰＧ（１．７０μｇ已糖醛酸／ｍｌ）的ｈＵＶＥＣ生长密度高于对照组（未加ＨＳＰＧ）．（２）随着培养时间增加（２４，４８及７２ｈ）．根据细胞计数计算出同一剂量的ＨＳＰＧ（１７．０μｇ已糖醛酸／ｍｌ）对ｈＵＶＥＣ的促增殖％增高（分别为１４％，３０％及３７％）。（３）随着加入ＨＳＰＧ浓度的升高（４．３，８．５及１７．０μｇ已糖醛酸／ｍｌ．培养７２ｈ）．根据￣３Ｈ－ＴｄＲ参入计算出ＨＳＰＧ对ｈＵＶＥＣ的促增殖％亦增高（分别为４９％，７１％及９８％）。故人主动脉ＨＳＰＧ对培养的人脐静脉内皮细胞有促增殖作用。

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一种东亚钳蝎碱性神经毒素的纯化和初步晶体学研究

邓君鹏，王淼，李宏民，王大成

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(05): 603-607.

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经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０和ＳＰ－ＳｅｐｈａｄｅｘＣ－２５两次柱层析，从河南淅川马氏钳蝎毒素中分得一种碱性神经毒素ＢｍＫＭＩ８．等电聚焦和ＳＤＳ电泳显示单一组分，其ｐＩ为９．１，Ｍｒ为７１００．毒性测试结果表明，该组分对小白鼠有较强的毒性，对昆虫也有一定的毒性，已获得该毒素的两种晶型的大单晶，并测定其空间群为Ｐ２＿１２＿１２＿１，晶胞参数为：ＢｍＫＭＩ８－Ａ：ａ＝３６．７，ｂ＝２６．６，ｃ＝５２．０，ＢｍＫＭＩ８－Ｂ：ａ＝３６．６４Ａ，ｂ＝３７．３１，ｃ＝３７．９５，已收集了ＢｍＫＭＩ８－Ｂ分辨率为１．７４的Ｘ射线单晶衍射数据。

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枯草杆菌蛋白酶突变体的纯化和晶体生长

林峥，朱榴琴，马建华，毕汝昌

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(05): 608-612.

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应用基因工程手段，获得了枯草杆菌蛋白酶Ｅ的双突变体基因（Ｍ２２２Ａ，Ｎ１１８Ｓ），此基因在枯草芽孢杆菌中表达得到了既抗氧又耐高温的碱性蛋白酶，含Ｍ２２２，Ｎ１１８Ｓ碱性蛋白酶基因的枯草杆菌发酵液经过硫酸铵分级沉淀和ＤＥＡＥＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５阴离子交换层析柱，再在ＦＰＬＣ层析系统上用Ｈｉｌｏａｄ２６／１０ＳＳｅｐｈａｒｏｓｅＨＰ阳离子交换柱分离得到ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳纯的蛋白酶样品。突变体酶的等电点为ｐＨ８．９，分子量为２７４００，用四肽底物测得的动力学参数也有较大的变化。对该突变体酶进行了晶体生长研究，获得了较大的单晶体。

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有机盐对基因启动子的σ因子选择性的影响

丁清泉，石浜明

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(05): 613-617.

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用σ￣（７０）或σ￣（３８）和核心酶（Ｅ）组成的大肠杆菌ＲＮＡ聚合酶全酶（Ｅσ）对四种启动子进行了体外转录。结果表明：ｌａｃＵＶ５，ｒｐｌＪ主要被Ｅσ￣（７０）识别，ｋａｔＥ主要被Ｅσ￣（３８）识别，ｆｉｃ在低盐浓度时被Ｅσ￣（７０）识别，在高浓度盐时被Ｅσ￣（３８）识别；Ｅσ￣（３８）转录特异性启动子所需酶量大于Ｅσ￣（７０）转录特异性启动子的酶量；在含有分别对σ￣（７０）或σ￣（３８）亲和性大的混和启动子的体外转录中，启动子之间不存在干扰和竞争，转录水平与启动子浓度成正相关。

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杨梅黄素及蛇葡萄素对酪氨酸酶的抑制作用

刘德育，雷焕强

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(05): 618-620.

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杨梅黄素及蛇葡萄素对酪氨酸酶有显著的抑制作用；在２ｍｍｏｌ／Ｌ的Ｌ－多巴浓度下，５０％抑制的药物浓度分别为０．０８２ｍｍｏｌ／Ｌ及０．２０８ｍｍｏｌ／Ｌ，用Ｌ－多巴作底物，蛇葡萄素对酪氨酸酶是竞争性抑制，其Ｋ＿ｉ是０．０８５ｍｍｏｌ／Ｌ；而杨梅黄素对酪氨酸酶则是混合性抑制，其Ｋ＿ｉ与Ｋ′＿ｉ分别是０．０２６ｍｍｏｌ／Ｌ与０．０７２ｍｍｏｌ／Ｌ。

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用PCR分析HCV－RNA　NS5部分序列变异

魏来，王宇，陈红松，陶其敏

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(05): 621-623.

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用ＰＣＲ分析ＨＣＶ－ＲＮＡＮＳ５部分序列变异魏来，王宇，陈红松，陶其敏（北京医科大学人民医院肝病研究所，北京１０００４４）对丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ｃＤＮＡ的序列分析是验证ＨＣＶ基因分型，确定新的型与亚型的基础￣［１］．经典的序列分析方法需经繁琐的分子...

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大鼠脑前缩胆素原的cDNA克隆

宋学文，赵崇，邓彤，蔡芳，张镜宇

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(05): 624-625.

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大鼠脑前缩胆素原的ｃＤＮＡ克隆宋学文，赵崇，邓彤，蔡芳，张镜宇（天津医科大学内分泌研究所，天津３０００７０）缩胆素（ｃｈｏｌｅｃｙｓｔｏｋｉｎｉｎ，ＣＣＫ）是一种脑肠肽激素，它不仅存在于小肠粘膜的分泌细胞，而且分布于中枢和外周神经系统［１，２］；在血...

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木瓜蛋白酶PPAⅢ自水解作用

王秀艳，周慧，葛玉斌，李惟

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(05): 626-628.

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木瓜蛋白酶ＰＰＡⅢ自水解作用王秀艳，周慧，葛玉斌，李惟（吉林大学分子生物学系，长春１３００２３）ＰＰＡⅢ、ｐａｐａｉｎ、ｐｅｐｓｉｎｅ、ｓｔｅｍｂｒｏｍｅｌａｉｎ等都属于以Ｃｙｓ－ＳＨ为活性中心的酶，同种分子之间存在着一种相互切割的趋势，称为酶自水解...

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大肠杆菌梭曼水解酶的纯化和性质

邵煌，刘昌玲，肖美珍，孙曼霁

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(05): 629-630.

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大肠杆菌梭曼水解酶的纯化和性质邵煌，刘昌玲，肖美珍，孙曼霁（北京军事医学科学院毒物药物研究所，北京１００８５０）梭曼属Ｇ类神经性有机磷毒剂．自然界发现多种细菌中均存在梭曼水解酶（Ｓｏｍａｎａｓｅ）活性［１－３］．研究细菌梭曼水解酶，寻求生物解毒的方法...

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有机相中脂肪酶催化不对称酯合成反应动力学的研究

杨红，高修功，郭妮妮，曹淑桂，杨同书

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(05): 631-632.

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有机相中脂肪酶催化不对称酯合成反应动力学的研究杨红，高修功，郭妮妮，曹淑桂，杨同书（吉林大学酶工程国家重点实验室，长春１３００２３）在环已烷中应用酵母脂肪酶催化外消旋２－辛醇和辛酸的不对称酯合成反应，研究了该反应的动力学机制，测定了表现动力学常数．利...

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