中国生物化学与分子生物学报

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秦文斌,岳秀兰,阎秀兰,睢天林

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(05): 513-517.

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本文介绍一种酸性琼脂电泳方法。它可以比较容易地分开血红蛋白A和血红蛋白F、可将异常血红蛋白分成两大类,即酸性电泳阳性和酸性电泳阴性两类异常血红蛋白。此法在血红蛋白病中比较常用的是鉴别血红蛋白S与其它电泳速度相同的变异物,帮助诊断镰状细胞贫血。在常见病方面,这种方法还能分开血红蛋白A和糖基化血红蛋白,用来帮助诊断糖尿病。

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微粒体细胞色素P-450、NADPH-细胞色素P-450还原酶的纯化与重组活性

黄俊勇,冷欣夫

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(05): 518-523.

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经苯巴比妥钠诱导的雄性大白鼠的肝微粒体纯化的细胞色素P-450同功酶组份,经SDS-PAGE鉴定呈电泳纯,分子量为55kD。部分纯化的NADPH-细胞色素P-450还原酶,含72和77kD两个蛋白质组分。上述细胞色素P-450和NADPH-细胞色素P-450还原酶与卵磷脂制备的脂质体重组后的活性试验表明,对艾氏剂有环氧化作用,对环已烷有羟化作用,对溴氰菊酯的羟化作用微弱。当重组系统中缺少细胞色素P-450组份时,对环已烷不再起作用。同时还研究了纯化的细胞色素P-450的光谱特性。

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异常血红蛋白HbQueens及Hb广州—杭州的携氧功能及78—180K的穆斯堡尔谱测定

廉英,任邦哲,曾玄圣

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(05): 524-528.

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本实验通过对HbQueens[α_(34)B_(15)Leu→Arg]及Hb广州-杭州[α_(64)E_(13)Asp→Gly]的氧亲合力及它们在78-180K范围的穆斯堡尔谱测定,得到氧亲合力大小顺序为HbQueens>Hb广州-杭州>HbA,由穆斯堡尔谱结果的计算所得的结构参数表明中心Fe~(2+)与卟啉环平面的距离为HbQueens

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小鼠白细胞介素4基因的化学合成、克隆与表达

任力强,陈南春,陈苏民,苏成芝,金伯泉

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(05): 529-534.

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利用381A型DNA合成仪,分29个寡聚核苷酸片段化学合成了小鼠IL-4全基因,共442bp。以pUC12质粒作为载体,将所有合成片段分前后两组进行磷酸化、退火、连接和克隆,经过菌落原位杂交、酶切鉴定和质粒DNA序列分析,分别得到了含有小鼠IL-4前后两半基因片段的两种重组质粒,回收前半基因片段,插入到含有后半基因重组质粒的EcoRI和PstI酶切位点之间,成功地得到了含有小鼠IL-4全基因的重组质粒pFR101。将全合成基因插入到质粒pSM53中,得表达质粒pFR105,转化大肠杆菌TAP106,根据IL-4对CTLL细胞的作用,肯定了TAP106(pFR105)细菌中有小鼠IL-4活性蛋白的表达。

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人嗜中性白细胞活化蛋白-1/白细胞介素-8合成基因的修正及修正基因在大肠杆菌中的表达

徐荣辉,金冬雁,王平,袁劲松,吴淑华,侯云德,梁希若

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(05): 535-540.

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本文采用寡核苷酸介导的定位诱变技术修正了人嗜中性白细胞活化蛋白-1/白细胞介素-8合成基因中出现的合成错误,在该基因编码区的201位插入了原来缺失的G残基,从而使之恢复正确读框。经对修正基因进行DNA全序列测定,表明定位诱变的结果符合设计要求。在此基础上,利用原核高效表达载体pBV220在P_RP_L串联启动子的控制下在大肠杆菌中对该基因进行了表达,并测定了重组人嗜中性白细胞活化蛋白-1/白细胞介素-8的嗜中性白细胞趋化活性。本工作为开展人嗜中性白细胞活化蛋白-1/白细胞介素-8基因工程及蛋白质工程的研究奠定了基础。

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用蛋白质工程的方法改良枯草杆菌蛋白酶E(Subtilisin E)的抗氧化性

王培之,王贤舜,孔丽云,李党生

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(05): 541-546.

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以含有蛋白酶E基因(aprE)的单链M13mp18-aprE DNA为模板,合成的寡核苷酸5′-3′为诱变引物,用缺口双链法对aprE进行Met-222-Ala点突变。经菌落印迹杂交筛选,选出阳性噬斑。用SaⅡ酶解M13mp18-aprE得到aprE,将它和pPZW103重组,转化中性、碱性蛋白酶缺失宿主菌DB104。经含卡那霉素和脱脂奶粉板筛选和比较aprE限制性内切酶NcoⅠ和SacⅡ水解电泳图谱分析,完成构建一个分泌抗氧化的枯草杆菌蛋白酶E的工程菌PW8888。

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人心肌肌凝蛋白轻链(CMLC)的分离及临床应用

顾郁,何忠效,袁煜

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(05): 547-552.

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从人心肌提取了肌凝蛋白,并检测了其ATP酶活力的稳定性。用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法纯化并鉴定了人心肌肌凝蛋白轻链(CMLC),结果表明CMLCI的分子量为27000;CMLCⅡ的分子量为20 000。它们的紫外吸收光谱显示A260>A280,表明其高含苯丙氨酸。制备了兔抗人CMLC抗血清,免疫双扩散的结果表明,纯化后的CMLC与肌凝蛋白有相同的抗原性。用阳性的兔抗人CMLC抗血清为对照作ELISA实验,不仅从免疫学角度进一步证实了人心肌CMLC的特性且为其在临床诊断应用提供了可靠的方法。

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寡聚脱氧核苷酸d(G-C)_3的激光喇曼谱及其分析

黄汝多,戴艳姿,龚立三,黄德民,梁镇和,汤锦炎,崔益本,王振海,刘颂豪

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(05): 553-559.

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用改进的固相磷酰三酯法合成了oligo-d(G-C)_3。以氩离子激光为激发光源,波长488nm.,在室温条件下,分别测定了纯化后的oligo-d(G-C)_3和其组分单体5’-dGMP和5’-dCMP的激光喇曼谱。观察到被测定的物质在300-2500cm~(-1)频率区间,各自都有其特征的谱形和喇曼峰。5’-dGMP和5’-dCMP谱中大多数特征峰在寡聚体的谱中消失,而在oligo-d(G-C)_3谱中出现了几处新的喇曼峰。经查证,峰832,851和899cm~(-1)系糖-磷酸主链的特征喇曼峰,另外几处峰与DNA的构象有关。实验结果表明oligo-d(G-C)_3在水溶液中(室温)主要以B-构象存在。

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抑制O~6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶活性与肿瘤细胞对亚硝脲药物敏感性关系的研究

陈建敏,章扬培,陈月能,范国才,吴英

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(05): 560-564.

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80％以上的肿瘤细胞为O~6-甲基鸟嘌吟-DNA甲基转移酶(O~6-MT)活性较高的Mer~+型,能够修复亚硝脲药物(NU)造成的DNA烷化损伤,对NU不敏感。本实验证明,用0.75,0.50和0.25mmol/L甲基亚硝脲(MNU)分别处理Mer~+型的HeLaS3,SMMC-7721和表现Mer~-型特征的Cc801,均能明显降低细胞中O~6-MT活性,从而显著提高了三种细胞对嘧啶亚硝脲和双氯乙亚硝脲的敏感性,提示降低O~6-MT活性是使用NU对Mer~+型肿瘤进行有效治疗的前提。

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人膀胱癌中某些癌基因的研究

葛正龙,胡征,周爱儒

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(05): 565-569.

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本实验应用Northern和斑点印渍杂交技术探测了人膀胱癌细胞株中c-myc、c-fos、erbB等癌基因的表达,以及TPA对这些癌基因表达的调控,发现BIU-87细胞有这些癌基因的表达,并能被TPA所增强,同时也发现人膀胱癌组织有c-myc、c-fos、erbB、N-ras基因的高表达。提示蛋白激酶C的激活可以诱导某些癌基因的表达。多种癌基因的表达异常可能在膀胱癌中起重要作用。

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毛细管电泳测定牛红细胞超氧化物歧化酶的巯基位点

屠红旻,夏其昌,李文杰

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(05): 570-573.

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本文介绍了毛细管电泳分析蛋白质酶解产物中含巯基多肽的方法。还原的及天然的牛红细胞超氧化物歧化酶(SOD)经4-乙烯吡啶修饰后,由TPCK-胰蛋白酶水解,在254nm检测到还原的SOD水解物中含3个巯基多肽,天然的SOD为1个疏基多肽且其毛细管电泳行为与上述3个多肽之一相一致。分析它们的氨基酸顺序,证实Cys-6为游离的巯基,Cys-55和Cys~(-144)形成二硫键。

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细胞色素C引起心磷脂的还原

程昆蓉,程伯基,宋慧芳,乔梁,王动,倪雪梅,林克椿

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(05): 574-577.

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本工作采用FT-IR和NMR技术,研究了心磷脂(CL)与还原态细胞色素C作用后其脂肪酸链中双键数目的变化。发现伴随细胞色素C的氧化,CL双键被部分还原为单键,提示CL可能直接参与吸呼链的电子传递。

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鸡红细胞膜囊泡及其蛋白质组成

范培昌,梁晓方,张闻,赵东红

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(05): 578-582.

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叙述了一种以囊泡形式制取鸡红细胞膜的方法。该囊泡呈杆菌状,大小约2.02×0.47μm。其SDS-PAGE谱虽类似于人红细胞膜影泡,但:鸡囊泡无甘油醛-3-磷酸脱氢酶;α和β收缩蛋白呈宽间隔双体带,带3蛋白由两种变体,B3.1和B3.2所组成;含有人红细胞膜没有的Goblin、中间丝和来自核膜的组蛋白。用胰蛋白酶原位消化鸡囊泡时,带3消失并在Mr=55和36kD处显两新带,后者并不存在同条件下人红细胞原位酶解谱中,说明两种带3在膜中构象并不相同。

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顺铂与小鼠艾氏腹水肝癌细胞膜的相互作用

陈宝卫,王夔

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(05): 583-586.

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本文研究了顺铂对小鼠艾氏腹水肝癌细胞膜蛋白内源性荧光的淬灭作用和测定了其在膜上的结合量。结果表明顺铂能与癌细胞膜结合。按存在两类结合部位,得到表观结合常数和结合部位数为: K_1=1.35×10~5L/mol n_1=6.80×10~(-4)mol/g(protein) K_2=2.50×10~3L/mol n_2=1.92×10~(-3)mol/g(protein)

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猪生长激素及其单克隆抗体的制备与纯化

余慕贞,方是民,王韵,何新,史瀛仙

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(05): 587-592.

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本文介绍一种简便快捷提纯猪生长激素的方法。通过杂交瘤技术,首次获得抗猪生长激素的单克隆抗体,并讨论和比较从腹水纯化单克隆抗体的各种方法。

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用聚焦层析法纯化人巯基蛋白酶抑制肽C-hCRI_c

孙诠,汪淑荣,姜春霞,冯建芳,李平,陈明哲

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(05): 593-596.

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以肾衰病人尿为材料,通过碱变性、酸变性和热变性除去部分杂质和尿蛋白。然后用羧甲基-木瓜蛋白酶-琼脂糖4B亲和层析,最后用多缓冲剂聚焦层析,把人的巯基蛋白酶抑制肽C(human cysteine proteinase inhibitor C,简称 hCPI_C)和其他的hCPI_C分开,制备得高纯度、高活性的hCPI_C。在SDS-PAGE中为均一条带,每mg蛋白可抑制50单位木瓜蛋白酶活性的50-63％。

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胆红素自由基对人红细胞的损伤作用

刘湘陶,王夔,肖美芳,沈莉平

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(05): 597-601.

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为了进一步证明胆红素自由基对细胞造成的直接损伤,探讨胆红素对细胞表现毒性的机理以及在色素类结石形成中所起的作用,我们以胆红素自由基作用于人红细胞,用TBA法研究了完整人红细胞的脂质过氧化,用SDS-PAGE法研究了红细胞膜的损伤以及用荧光法研究了膜损伤后某些性质的改变。结果表明:胆红素自由基能引起人红细胞膜脂质过氧化,使膜蛋白发生降解,从而直接可测氨基减少,而溶液中游离氨基的含量却相应增加。根据以上事实,重点讨论了胆红素对细胞表现毒性的可能原因以及与色素类结石形成的关系。

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氧化修饰与丙二醛修饰的低密度脂蛋白对巨噬细胞高密度脂蛋白结合量及胆固醇酯聚集的影响

刘尚喜,周玫,陈瑗

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(05): 602-607.

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本文用Cu~(2+)(引发氧化修饰)和脂质过氧化降解产物丙二醛(MDA)对低密度脂蛋白(LDL)进行修饰,观察了两种修饰的LDL对巨噬细胞高密度脂蛋白_3(HDL_3)结合量及细胞内胆固醇酯聚集的影响。结果说明:1.Cu~(2+)和MDA修饰的LDL都可使巨噬细胞HDL_3结合量下降,细胞内脂质过氧化物(LPO)含量升高,但当处理细胞在含10％无脂血清(LPDS)培养液中继续培养时,由MDA修饰的LDL(MDA-LDL)导致的HDL_3结合量降低又有一定的恢复,细胞内LPO含量不再升高,而Cu~(2+)修饰的LDL(Cu~(2+)-LDL)处理的细胞继续培养时,HDL_3结合量则继续下降,细胞LPO含量则继续升高。2.由Cu~(2+)-LDL导致的巨噬细胞HDL_3结合量下降与细胞LPO含量升高之间呈负相关(r=-0.81,P<0.01)。3.MDA-LDL和Cu~(2+)-LDL都可造成巨噬细胞胆固醇酯聚集,但MDA-LDL造成的胆固醇酯可被HDL_3大量清除而Cu~(2+)-LDL造成的胆固醇酯聚集则不能。

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壳聚糖固定化木瓜蛋白酶的研究

徐凤彩,李雪萍,程京燕,柏涛,李明启

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(05): 608-613.

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以壳聚糖为载体,成二醛为交联剂将木瓜蛋白酶固定化。5％戊二醛在4-6℃下处理载体5h,加酶液(3.5mg/mL蛋白,pH7.2)固定12h,活力回收达32％,作用于酪蛋白的半衰期为36天,其表观K_m(酪蛋白)值为0.075％(W/V),溶液酶的K_m值为0.086％;最适pH7.0～7.5,溶液酶为7.0～8.5。固定化酶在pH8.5以下,溶液酶在9.0以下活力稳定。固定化酶在45℃以下,溶液酶在75℃以下稳定。用6mol/L脲洗脱固定化酶4次(5.5h)活力仍有54.5％。用固定化酶处理啤酒浊度比对照下降了1.5-3.7倍,蛋白质含量下降了44％,冷藏(4℃)120天无冷混浊现象发生并保持了啤酒原有风味和理化性状。

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化学发光法测定正常人皮肤纤维母细胞高密度脂蛋白(HDL)受体功能

吴翠贞,薛隆翠,戚晓红

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(05): 614-618.

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用氨基丁基乙基异鲁米诺(ABEI)通过碳二亚胺(EDC)法标记分离的无载脂蛋白E的HDL_3。其标记率为0.89m mol/m mol HDL_3。HDL_3-ABEI与Apo A-Ⅰ和Apo A-Ⅱ抗体作用仍有免疫反应,说明标记后的HDL_3其免疫原性没有丧失。用HDL_3-ABEI与传代培养的正常人皮肤纤维母细胞作用,测其HDL受体活性。标记配基HDL_3-ABEI与人皮肤纤维母细胞HDL受体结合的最适量为20μg HDL_3-ABEI的蛋白质;人皮肤纤维母细胞HDL受体与HDL_3-ABEI在4℃结合的最适时间为1h;HDL_3-ABEI与人皮肤纤维母细胞结合时,人皮肤纤维母细胞最适量为0.1×10~6个细胞;未标记的HDL_3封闭结合HDL受体的最适用量为400μg。

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ZNC(C)PR的构象及分子动力学模拟

王鹏良,来鲁华,杜雨苍,江寿平,徐小杰

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(05): 619-623.

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本文用分子动力学方法和质子间距约束结合建立了ZNC(C)PR的构象。质子间距是由二维核磁共振的NOE效应得到的。结果表明ZNC(C)PR分子的主链是伸展的,但Asn2的侧链与Arg5的侧链相互靠近,使整个分子成紧密结构。在所建模型的基础上,对ZNC(C)PR进行了分子动力学摸拟。发现第一位的焦谷氨酸环很灵活,这可能意味着焦谷氨酸环对ZNC(C)PR的活性并不重要,这与实验结果是一致的。

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荧光法研究血清白蛋白与药物的结合作用

马贵斌,杨频

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(05): 624-629.

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本文应用荧光光谱法,观测了药物分子头孢菌素Ⅳ、异烟肼、维生素B_6和氟哌酸对白蛋白荧光的猝灭。由Lineweaver-Burk双倒数作图法,确定了药物与白蛋白作用的离解常数。并通过Forster偶极-偶极无辐射能量转移机理确定了药物分子氟哌酸在人血清白蛋白中与色氨酸残基之间的距离R为2.55nm,由这一距离确定了药物分子可能进入的区域和位置。

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牛脾胆绿素还原酶的性质

丁兆坤,许友卿,黄溢明

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(05): 630-634.

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纯牛脾胆绿素还原酶是单一蛋白质,分子量约34 000,等电点约6.2。该酶对胆绿素具有专一性,在还原胆绿素为胆红素中,以还原胆绿素Ⅸ_α最快,Ⅸ_β、Ⅸ_γ和Ⅸ_δ皆很慢。于还原反应中,此酸可以NADH为电子和氢供体,NADPH亦然。然而,NADH依赖性酸与NADPH依赖性酶动力学性质不同:与NADH反应的最适pH7.0,而与HADPH反应时为8.5;两者活性均为过量的胆绿素所抑制,不过,NADPH依赖性酶更敏感。

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岩豆凝集素寡糖链的纯化及组成研究

曾仲奎,郑建,刘荣华,周红

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(05): 635-638.

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<正> 糖蛋白分子上的寡糖链是细胞间和分子间相互识别的基础。寡糖链的结构研究首先是寡糖链的分离纯化及糖基组成分析。寡糖链的组成分析多用气相色谱或高效液相色谱。本文报道用气相色谱法对纯化的岩豆凝集素(Milletia dielsiana Harms.Lectin,简称MDL)寡糖链糖基组成的研究结果。

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HbA及热变性HbA的穆斯堡尔谱

廉英,任邦哲,曾玄圣

中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(05): 639-640.

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<正> 已有某些Hb及其衍生物穆斯堡尔谱的研究。本实验通过对HbA、HbO_2A、及加热后部分热变性的HbO_2A作穆斯堡尔谱测定,以探测Hb辅基上Fe~(2+)的微环境的变化。材料和方法一、样品制备

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