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• 1992年, 8卷, 第02期
  刊出日期：1992-04-20

    

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  血清胆碱酯酶与血脂的关系

  何善述,邓耀祖,冯宗忱,龚成新,余英宏

  中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(02): 129-132.

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  通过对749例40～60岁工人SChE和血脂水平的分析,结果显示SChE与TC、TG、LDL-C和VLDL-C呈正相关,与HDL-C呈负相关,相关系数分别为0.21,0.23,0.12,0.11和-0.08。高脂血症患者的SChE活性(2271.8±650.7u/L)高于血脂正常者(1968.6±607.0u/L),但冠心病患者的SChE活性(2242.8±499.4u/L)与高脂血症组无差异。在各型高脂血症中,只有高甘油三酯血症(2241.5±623.9u/L)和混合性高脂血症患者(2561.5±704.8u/L)的SChE活性增高,而高胆固醇血症患者的SChE活性(2034.8±640.0u/L)与血脂正常者无差异(p>0.1)。提示SChE与血脂之间存在一定的联系,本文对此关系进行了讨论。
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  人巨细胞病毒IE基因调节子特异DNA结合蛋白cDNA的克隆和鉴定

  党进军,Eddie Huang,Tony Okada,keiichi Itakura

  中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(02): 133-137.

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  本文利用人巨细胞病毒(HCMV)IE基因调节子中特异DNA片段作为探针,自人Hela细胞cDNA表达库中筛选并分离出两个编码能与该探针结合的DNA结合蛋白cDNA克隆(DJ-1和EH-2)。其中EH-2编码的蛋白具有明显的DNA结合序列特异性。比较DJ-1和EH-2克隆在HCMV戚染不容性和可容性畸胎瘤细胞中mRNA表达水平,未见明显差异。DJ-1和EH-2克隆可能涉及IE基因表达调控过程。
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  肿瘤坏死因子第59位酪氨酸对其细胞毒活性的意义

  张德震,陈南春,智刚,吴淑华,苏成芝

  中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(02): 138-143.

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  肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor,TNF)的基因克隆表达成功后,已进行了广泛的实验室研究,并进入Ⅰ期及Ⅱ期临床试验。但关于肿瘤坏死因子结构与功能关系人们尚所知甚少,阻碍了对肿瘤坏死因子各种生物活性的机制研究,也影响了肿瘤坏死因子的临床应用。本研究为肿瘤坏死因子结构与功能关系研究的一部分。肿瘤坏死因子不仅有广泛的生物学活性,也可引起严重的毒副作用。本文用寡核苷酸诱导的体外基因定点突变法,选择位于肿瘤坏死因子分子中央保守区第59位酪氨酸,将其改变为门冬氨酸。所选用的琥珀突变选择性突变系统,造成肿瘤坏死因子基因突变,获得较高的突变效率(约80％)。DNA序列分析证实第59位酪氨酸密码子TAC突变为门冬氨酸密码子GAT。将突变体肿瘤坏死因子基因于同一原核表达载体进行表达,结果表明,突变后不影响表达量及表达产物分子量,但其细胞毒比活性下降724倍,表明Tyr59对于维持肿瘤坏死因子细胞毒活性非常重要。
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  蜈蚣(Scolopendra subspinipes mutilans L.Koch)毒的化学组成和生物活性

  吴刚,冉永禄,凌沛深,陶勇,唐向辉,叶文娟,迟程,朱绍文

  中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(02): 144-149.

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  系统分析少棘蜈蚣粗毒的化学组成,蛋白质含量86.23％、水不溶物质0.24％、还原糖0.23％、水份2.1％,仅含Ser、Pro、Arg等三种游离氨基酸,鉴定了11种微量元素,碱性凝胶电泳显示20条蛋白质谱带。分析了10种酶的活性、出血毒性及对血小板聚集的影响,其中精氨酸酯酶活力最高,不存在类凝血酶、淀粉酶活性及出血毒性,蜈蚣毒的浓度为0.3μg/μL时强烈诱导血小板的聚集。
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  桑寄生凝集素的纯化及部分性质研究

  陈希宏,曾仲奎,刘荣华

  中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(02): 150-156.

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  利用DEAE一纤维素柱盐离子浓度梯度洗脱,再经猪胃粘蛋白-Sepharose 4 B亲和柱可以从中药桑寄生中分离纯化出桑寄生凝集素。经pH8.9,Tris-EDTAN_2a-borate的PACE和SDS-PAGE测定均呈现单一蛋白带,测得其分子量为67 500,中性糖含量为14.6％,DNS法测得N-末端氨基酸为缬氨酸。氨基酸组成分析表明,该凝集素富含酸性氨基酸,而碱性氨基酸含量较少,不含精氨酸。当凝集素浓度为15.6μg/mL时,即可凝集兔红细胞,而对人的A、B、O型血细胞,凝集素浓度高达1000μg/mL,也不发生凝集反应。Gal、GalNAc、山梨糖、岩藻糖和松三糖对凝集兔红细胞的能力有抑制作用。桑寄生凝集素是一种促有丝分裂原,对猪血淋巴细胞的转化率达78％,细胞分裂比率为11.2％。
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  人子宫平滑肌肉瘤中性鞘糖脂含量、组成及其四糖基组分糖链结构的变化

  朱正美,刘义辉,杨凌,崔肇春

  中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(02): 157-163.

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  本文分析了人子宫平滑肌肉瘤组织的中性鞘糖脂,发现子宫肉瘤组织的中性鞘糖脂的含量明显低于正常组织,组成成分虽与正常子宫平滑肌相似,均含有单、双、三、四糖基及多糖基组分,但各组分的相对含量则变化显著。肉瘤中所含短糖链的组分相对减少,高极性的CPH明显增加。本文还纯化了子宫肉瘤中性糖脂中主要的四糖基组分,应用HPTLC、酸解和酶解法以及特异单抗放射免疫染色法对该组分进行鉴定。结果证明子宫平滑肌中所含主要的四糖基组分糖链结构在正常组织为Globo系列的红细胞苷脂,而在肉瘤中则转变为乳糖系列的拟红细胞糖苷脂。
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  四种中草药抗白内障形成中晶状体脂类过氧化水平及脂类含量的变化

  杨涛,梁康,侯纬敏,张昌颖

  中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(02): 164-168.

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  我们观察了中草药防治大鼠半乳糖性白内障形成中脂类含量的变化及脂类过氧化水平。结果表明,与正常晶状体相比,白内障晶状体中总脂类的含量明显降低,总胆固醇的含量及脂类过氧化水平明显升高,总脂类与总胆固醇之比明显下降。而同时分别用黄苓、石斛、菟丝子及玉蝴蝶四种中草药水煎剂灌胃的大鼠晶状体中,总胆类与总胆固醇的含量基本恢复至正常;脂类过氧化水平虽仍高于正常晶状体,但也明显低于白内障晶状体,表明脂类过氧化参与了白内障的形成,上述四种中草药具有抑制脂类过氧化的作用。
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  四种中草药成分对醛糖还原醇和脂类过氧化的抑制作用

  杨涛,梁康,侯纬敏,张昌颖

  中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(02): 169-173.

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  我们在体外研究了四种中草药提取物对醛糖还原酶及脂类过氧化的抑制作用。结果表明,四种中草药的提取物在不同浓度下,对醛糖还原酶活性及脂类过氧化作用均有不同程度的抑制作用,其抑制醛糖还原酶活性的作用属非竞争性抑制类型。对醛糖还原酶活性及脂类过氧化的抑制作用均随中草药提取物浓度的降低而降低。本实验的结果证明中草药中含有抗脂类过氧化及抑制醛糖还原酶的某些成分。
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  两个DMD cDNA片段在进行性肌营养不良症基因诊断中的应用

  储文明,张俊武,吴冠芸,赵艳君,刘敬忠,孙(忄念)怙,卞美璐,吴玉珍,宁杨,吴沪生,叶其芬,邹丽萍

  中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(02): 174-178.

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  本文使用了缺失热点区的两个DMD cDNA片段1b-2a及8为探针检测Duc-henne型及Becker型肌营养不良(DMD/BMD)患者的基因缺失。在34例不相关患者中分别检测到5例及8例基因片段缺失,缺失检测率分别为14.7％及23.5％,总检出率为38.2％。结果表明,中国肌营养不良患者的基因缺失也不是随机分布的,主要集中于基因中心附近,其次在基因5′侧。
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  促甲状腺激素对甲状腺细胞胞内游离钙和钙调蛋白的影响

  叶庆林,WagnerM,SmytheS,MacNeilS

  中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(02): 179-185.

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  本文研究TSH和forskolin对原代培养的猪甲状腺细胞[Ca~(2+)]_i和钙调蛋白的影响。结果表明,TSH可引起甲状腺细胞[Ca~(2+)]_1急性升高。此反应是剂量依赖关系,而与细胞外钙的存在与否无关。其反应性在细胞单层高于细胞是液,近汇合细胞单层高于汇合细胞单层。TSH作用3天,可使甲状腺细胞的钙调蛋白含量增高,此作用与TSH对甲状腺细胞数的影响无关。Forskolin对甲状腺细胞的[Ca~(2+)]_i和钙调蛋白均无明显的影响。
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  红细胞膜肌醇磷酯结合蛋白的研究

  许彩民,方芳,刘晓冰,潘华珍

  中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(02): 186-189.

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  本文用~8H-肌醇标记红细胞膜,分别用薄层层析及SDS-PAGE对肌醇磷酯在红细胞膜上的分布作了探讨。发现一种在脂双层内,另一种是与膜蛋白结合(即肌醇磷酯结合蛋白)作为膜蛋白的锚(anchor)而存在,并用抗AchE及DAF单克隆抗体作免疫印渍实验,在电泳中~3H-肌醇磷酯所在部位与AchE及DAF相符。这结果与文献中报道AchE及DAF为肌醇磷酯结合蛋白一致。至于这两种形式不同的肌醇磷酯的相互关系还有待研究。
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  双价工程菌K99和F41菌毛抗原的提纯、特征分析及免疫效果观察

  钟声,李丰生,芮贤良,吕学洗,王庆元,黄培堂

  中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(02): 190-194.

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  本文利用加热搅拌及Sephadex G-100凝胶过滤方法,从双价重组工程菌RRI(pMG611)中分离了重组K99和F41菌毛抗原。SDS-PAGE测定其分子量,重组K99和F41抗原亚单位分子量分别是17200和29800,与各自野生菌毛亚单位分子量相同。甘露糖抗性血凝试验(MRHA)性质与野生K99和F41抗原相似。双向扩散试验和Western blot分析证实其免疫学性质亦与野生菌毛抗原相似。重组K99和F41抗原的免疫原性较强,能够刺激家兔产生高效价的抗体出现。
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  稀土元素Pr~(3+)、Nd~(3+)对蚕豆(Vicia feba)叶片原生质膜上Ca~(2+)·Mg~(2+)-ATPase活性的影响

  张金红,吴隽平,魏继中,翟治清,张遂坡,徐友涵

  中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(02): 195-200.

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  本文介绍用二相分配法制备蚕豆叶片原生质膜上的Ca~(2+)·Mg~(2+)-ATPase,用以研究镧系,稀土离子对此酶活性的影响。初步证实Pr~(3+)、Nd~(3+)对依赖于CaM的以及不依赖于CaM的蚕豆叶片原生质膜上Ca~(2+)·Mg~(2+)-ATPase活性的抑制不是CaM专一的。
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  猪心组织型纤溶酶原激活剂的纯化鉴定

  王会信,刘农乐,蒋滋慧,谢文光,王芳,周廷冲

  中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(02): 201-206.

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  本文介绍了一种简便易行的纯化组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)的方法。新鲜猪心组织经丙酮脱脂脱水,制成干粉,再经醋酸钾缓冲液提取。提取液经阳离子交换柱、肝素柱亲和层析及凝胶柱层析分离纯化。经SDS凝胶电泳分析证明纯化的t-PA只在分子量为67000道尔顿位置出现一条染色带。同时把该蛋白带转移到纤维蛋白板上,也在同一位置出现溶解带。
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  磷脂对琥珀酸-细胞色素c还原酶的作用

  李路,郑连兴,徐建兴,杨福愉

  中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(02): 207-211.

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  琥珀酸细胞色素c还原酶除去90％以上的磷脂后活力丧失约95％。将去脂琥珀酸细胞色素c还原酶与磷脂和辅酶Q_2保温,可恢复其活性。活力恢复程度依赖于磷脂的组成。当磷脂酰胆碱(PC):心磷脂(CL):磷脂酰乙醇胺(PE)=2:2:1时活力恢复最高,比大豆磷脂的效果更为明显,单组分PC,PE或CL恢复活力较差。与酶蛋白紧密结合的CL和PC在活力可逆恢复中有重要作用。
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  固定化葡萄糖异构酶最适pH值的调节

  孔维,周慧,刘辉,李惟,沈家聪

  中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(02): 212-215.

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  用多孔强碱性三乙醇胺基聚苯乙烯树脂作为载体,用CNBr与载体上多羟基作用共价偶联葡萄糖异构酶(GI)。最适偶联条件表明:CNBr量增多,蛋白载量增加,但比活下降。固定化葡萄糖异构酶(IGI)最适反应温度比天然酶提高15℃。并系统地研究了影响IGI活力-pH的曲线的各种因素:用具有不同平均孔径的载体(R=137A,185A,230A,365A)固定化GI,在低离子强度条件下(0.0064mol/L),测定其最适pH值分别7.76,7.56,7.50,8.20。选择平均孔径为230A且具有不同数量三乙醇胺基的载体(0.94,1.05,1.13,1.37mmol/g干胶)分别固定化GI,其最适pH值分别为7.70,7.50,7.46,7.36。
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  小鼠再生肝胞浆磷酸酪氨酸蛋白磷酸酶的纯化和性质研究

  杨云,王玉环,吴国利

  中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(02): 216-224.

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  以~(32)P(Tyr)-Poly Glu,Tyr(4:1)为底物,用于研究小鼠再生肝胞浆磷酸酪氨酸蛋白磷酸酶(PTPP)的分离纯化和性质。再生肝胞浆经60％饱和度硫酸铵盐析,二次DEAE纤维素层析,Sephadex G-200柱层析和Poly Glu,Tyr-Sepha-rose 4B亲和层析后,得到的PTPP分子量为67000,纯度提高1123倍,活性回收率为28％,对~(32)P(Tyr)-Poly Glu,Tyr有很高的活力,对~(32)P(Ser/Thr)-Casein(酪蛋白)和PNPP(对硝基苯酚磷酸盐)没有作用,其最适pH为6.8～7.1,对热不稳定。EDTA对酶有激活作用,Zn~(2+)、PNPP、P-Tyr、多胺化合物、焦磷酸根、钼酸根、柠檬酸根对酶有明显的抑制作用。酶对Na_3VO_4不敏感。碱性蛋白质组蛋白、鱼精蛋白对酶活力有抑制作用,酸性蛋白质酪蛋白和酸性多糖物质肝素对酶活力有激活作用,且后者能减弱前者的抑制作用。
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  人肝二氢蝶啶还原酶的三个活性组分

  陈震华,沈荣森,关秀华,盛文璐,CreedW.Abell

  中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(02): 225-229.

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  本文测定了人肝二氢蝶啶还原酶三个活性组分(Ⅰ,Ⅱ和Ⅲ)的动力学常数。对NADH来说,这三个组分几乎具有相同的Km值,对组分Ⅱ来说,二氢蝶啶还原酶对蝶啶的Km值顺序如下:醌型6,7一二甲基二氢蝶啶(qDMPH_2)>醌型6-甲基二氢蝶啶(q6MPH_2)>醌型生物喋呤(qBH_2)。以qDMPH_2为底物,组分Ⅰ和Ⅱ的Km值大约比组分Ⅲ的Km值高2.5倍。所有三个组分具有不同的Vmax值,因而催化效应也不相同。每一个组分的SDS凝胶电泳均为单一谱带,相当于分子量26kD亚基。这些结果告诉我们,不同组分的DHPR在结构上有某种联系但催化效应却有差别。
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  [B10,22-Asp,B25-Tyr-NH2]-去β链C端五肽胰岛素的合成和性质

  许英镐,崔大敷,杨海林,朱尚权

  中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(02): 230-233.

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  本文报道了[B10,22-Asp,B25-Tyr-NH2]-去B链羧端五肽胰岛素的制备及其生物活性。结果表明,这一类似物的生物活力比去五肽胰岛素(DPI)的活力高一倍,但却比Gerald所报道的[B10-Asp,B25-Tyr-NH_2]-DPI的活力低很多,说明后者的高活性可能依赖于分子中B22-Arg的存在。
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  巨噬细胞极低密度脂蛋白受体的调节作用

  黄强,冯宗忱,邓耀祖,王淳本

  中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(02): 234-241.

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  本文研究了小鼠腹腔巨噬细胞极低密度脂蛋白(VLDL)受体的调节。用富含甘油三酯(TG)的VLDL与小鼠巨噬细胞预温育后,细胞结合~(125)I-VLDL的最大结合容量(Bmax)比对照细胞只降低5％(1071/1127ng/mg细胞蛋白质),当细胞内TG增加到对照的2.5倍时,细胞摄取及降解~(125)I-VLDL的量分别下降40％和22％;乙酰-低密度脂蛋白(AC-LDL)预温育的细胞结合~(125)I-VLDL的Bmax比对照细胞只降低14％(633/831ng/mg细胞蛋白质),当细胞内胆固醇(Ch)增加到对照的23倍时,细胞摄取及降解~(125)I-VLDL的量只分别下降10％和21％。此后随着细胞内TG或Ch含量的增加,摄取及降解~(125)I-VLDL的量仍保持不变。 结论:细胞内TG或Ch含量对VLDL受体的调节作用微弱,与TG相比,Ch的调节作用更弱。
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  人白细胞介素6cDNA克隆的分离与鉴定

  王嘉玺,韩家槐,任启生,马贤凯

  中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(02): 242-246.

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  我们从重组的人α干扰素处理的单层HeLa细胞常规提取Poly(A)~+RNA作为逆转录合成cDNA第一链之模板,用引物-适配接头法在噬菌质粒pTz19R中构建cDNA文库。以~(32)p-标记的480bpIL-6cDNA片段作探针进行菌落原位及狭缝印迹杂交,筛选出6个阳性克隆。其中两个克隆并用限制酶切分析及DNA序列测定做进一步鉴定。结果证明,一个克隆的cDNA片段长1.3kb,含有人白介素6全长编码区;另一个的cDNA插入片段为0.9kb,缺乏信号肽及成熟IL-6N端30个残基的编码序列。
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  高效液相层析法纯化人胎盘谷胱甘肽硫转移酶

  张迺哲,阎继茂,张燕玲,符云峰

  中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(02): 247-250.

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  足月分娩的新鲜胎盘组织制成匀浆后,经高速离心、超速离心,谷胱甘肽(GSH)Sepharose 6B亲合层析,Amicon pM-10膜超过滤及高效液相层析,最终经SDS-PAGE鉴定,结果呈现单一亚基区带,其亚基分子量为25000。 根据我们现有高效液相设备条件,用ODS柱代替RadulovicL等报道的特异阴离子柱,用磷酸盐洗脱液代替含谷胱甘肽、二硫苏糖醇及氯化钾的梯度洗脱液,从人胎盘组织成功地制备了谷胱甘肽硫转移酶(GST)纯酶,全过程在15min内完成,保留时间及主峰面积的重复性均较理想,7次实验结果的变异系数为0.2％,最终纯化578.9倍。本研究为各种形式GST的纯化制备提供了一个新的、重复性好、分辨率高及回收理想的简易方法。
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  亲和层析法分离纯化猪血浆α_2-巨球蛋白

  郑远旗,贾一平

  中国生物化学与分子生物学报. 1992, 8(02): 251-256.

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  本文报道通过聚乙二醇分级沉淀,Cibacron Blue F3GA Sepharose4B染料亲和层析和Zn螯合Sepharose4B亲和层析从猪血浆中分离纯化的方法,经高pH不连续PAGE、低pH不连续PAGE和SDS-PAGE检测证明为电泳纯。N-末端氨基酸为丝氨酸,亚基分子量为182000。