中国生物化学与分子生物学报

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中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(01): 1-2.

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<正> 中国生物化学会主办的《生物化学杂志》(Chinese Biochemical Journal)创刊已五周年了。《生物化学杂志》是生化学术界具有广泛群众基础的高级学术刊物。它的创办推动了我国生化学科的蓬勃发展和广大生化工作者更广泛的学术交流。在一九八一年第二次全国生化代表大会上,经理事会决议由常务理事会编辑出版组负责筹办本刊。历时四年终于得到了国家科委、中国科协及新闻出版局等领导部门的批准,由北京医科大学为承办单位,于一九八四年六月十四日宣告了《生物化学杂志》首届编委会的成

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组建油桐尺蠖核型多角体病毒基因组物理图谱的计算机方法

陈海雷,刘年翠

中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(01): 3-9.

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本文报道了一种双酶混合切割后用计算机对结果进行分析、比较及组建出物理图谱的方法。用Bam HⅠ、BglⅡ等限制性内切酶进行单酶双酶切割,计算出油桐尺蠖核型多角体病毒基因组DNA的分子量为120.23Kb,BamHⅠ切割DNA后产生10条带;BglⅡ切割后产生7条带。经计算机分析后打印出前者在物理图谱中的顺序为A(GE)C(HI)B(DFJ),后者在物理图谱中的顺序为AGC(EF)BD。在本文中还提出了组建图谱的计算机程序思想,并讨论了此法的可靠性。

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人类食管癌γ-谷氨酰转肽酶性质的研究

唐炳华,陈玉芳

中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(01): 10-16.

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从人类食管癌组织、正常食管粘膜、以及正常肾脏组织部分提纯γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT),分析比较其生物化学及免疫化学性质,结果如下:(1)人类正常食管粘膜癌变后,γ-GT活性升高。(2)食管癌γ-GT的酶动力学性质(Km及最适pH)与正常组织相同。(3)4—20％线性梯度PAGE分析,食管癌γ-GT呈现100kD左右及380kD左右两个分子群,前者活性较高。正常食管粘膜γ-GT中,缺少100kD左右分子群,此分子群可能在癌变中有重要意义。(4)食管癌组织γ-GT,与正常组织γ-GT的抗原性相同。(5)食管癌γ-GT富含D-甘露糖、D-葡萄糖及N-乙酰-氨基葡萄糖,分子中的糖结构高度不均一,其与100kD左右分子群的关系,值得深入研究。

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大鼠高重复顺序DNA的核苷酸顺序分析及其与灵长类类α-DNA顺序的比较

林海玉,蔡■琬,黄秉仁,袁建刚

中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(01): 17-22.

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啮齿目动物高重复顺序DNA的结构特征,虽已有人进行过分析,并提出大鼠DNA中有酶切位点分布独特的高重复顺序,也有人认为在Sprague-Dawlay大鼠中有类似于α-DNA大小的高重复顺序,并命名为α型(α-type),是否大鼠中也含有类α顺序,并没有人讨论过。我们对Wistar大鼠高重复顺序DNA进行了分离、纯化、分子克隆及核苷酸序列分析,测定了全序列为370bp,它也是具有酶切点分布独特的高重复顺序,但与前者存在着18％的差异性。我们对此顺序与灵长类类α-DNA进行了比较分析,发现二者在几方面都不存在相似之处,如此序列G-C含量占全部碱基组成的37.3％,而类α顺序的G-C含量约在40％以上,一些酶切位点也与类α-DNA完全不相同,另外在此序列的相应位置上也不具有灵长类类α-DNA的三个“冷点区”等等,由此得出大鼠这一高重复顺序并非类α顺序,而类α顺序只是灵长类动物所特有的。

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HeLa S3 DNA转染后XP细胞UV抗性的稳定增加和切除修复基因的定位探索

章扬培,白晓彬,范国才,陈月能,徐惠英,吴英,夏寿萱

中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(01): 23-26.

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通过带有选择标志的质粒pSV_2Neo的基因共转染和第一轮转化的XP细胞DNA的再转染,进一步证明了前文报道的HeLaS3 DNA的切除修复基因在XP细胞中的稳定表达,以及受体细胞UV抗性的稳定增加。通过五种限制性核酸内切酶酶切DNA片段的转染,初步寻找出切除修复基因位于Bg1 Ⅰ,xhoⅠ 酶切片段之中。

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工程菌产霍乱肠毒素B亚单位的纯化

熊凌霜,马清钧,张艳红

中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(01): 27-31.

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本实验室使霍乱肠毒素(CT)B亚单位基因在大肠杆菌中获得表达,并能分泌到胞外。将该菌株培养物上清经过超滤浓缩后,用偶联上霍乱毒素IgG的CNBr-Sepharose 4B进行亲和层析,得到表达产物霍乱毒素B亚单位纯蛋白。经PA-GE、HPLC及琼脂免疫扩散等方法鉴定证明该蛋白与天然霍乱肠毒素B亚单位完全相同。

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抗人表皮生长因子受体单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

管恩南,周廷冲

中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(01): 32-38.

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用人上皮癌细胞系A 431细胞作为抗原免疫BalB/c小鼠,制备七株抗人表皮生长因子受体的单克隆抗体的杂交瘤,这些杂交瘤经三次亚克隆后仍能稳定地分泌单克隆抗体。对其中四株杂交瘤分泌的单克隆抗体进行了鉴定。免疫沉淀放射自显影结果示单克隆抗体3、101和176均可识别A 431细胞膜抗原MW为170000的蛋白质即EGF受体。单克隆抗体59可以识别低分化鼻咽癌细胞膜上EGF受体。单抗3、176和59等可抑制EGF与受体的特异结合,而101和94则不能抑制EGF与受体的结合。用Protein-A Sepharose CL4B纯化了单抗,纯化的单抗主要为IgG_1亚类。用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳对纯化的单抗进行了纯度测定。

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底物对变性酶的修复作用

侯立向,谢贵福,周海梦

中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(01): 39-44.

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兎肌肌酸激酶被LDS变性后,底物能够诱导变性酶使其活力和构象得到部分恢复。变性程度不同的酶,构象和活力的恢复程度也不同:低浓度LDS变性酶,恢复程度较高;反之亦然。活力的恢复与构象的恢复两者呈对应关系。底物修复作用的pH以8.2为好。底物修复作用受其它蛋白质(例如BSA)存在的影响。等速电泳结果表明,BSA能竞争性结合LDS-酶复合物的LDS,使酶成为游离酶。变性酶先与BSA保温再加底物所得的活力恢复,大约是变性酶与含BSA的底物保温所得活力的10倍。这一结果似表明LDS变性酶仍能结合底物;被结合的底物还能使变性酶的构象发生变化。

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人脑髓鞘碱性蛋白的分离纯化和鉴定

王会信,赵强,蒋滋慧,刘农乐,周廷冲

中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(01): 45-48.

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本文介绍了从人脑中分离纯化髓鞘碱性蛋白的方法,人脑组织匀浆经甲醇—氯仿脱脂、酸提取、硫酸铵沉淀和羧甲基纤维素柱层析,得到了纯化的髓鞘碱性蛋白。该蛋白在SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳中为单一带,分子量为21kD。在聚焦电泳中测得其等电点在pH10以上,氨基酸组成分析结果也与文献值接近。这为进一步研究人脑髓鞘碱性蛋白的抗原性创造了条件。

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核苷对ROS17/2.8细胞株腺苷酸环化酶活性的影响

卢明,杜国光

中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(01): 49-51.

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大鼠成骨肉瘤细胞株(ROS17/2.8)系甲状旁腺素(PTH)的靶细胞。当该细胞质膜上的PTH受体与PTH结合后,可激发腺苷酸环化酶(AC)的活性。腺苷及四种不同的核苷酸(AMP、GMP、UMP、CMP)单独对AC无明显效应,但却可抑制PTH对AC的刺激作用。而鸟苷或木糖腺苷则可显著增强PTH对AC的刺激作用。提示核苷的不同代谢物在代谢调节中的多样化作用。

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丙酮酸氧化酶激活机制的研究——α-肽与磷脂囊的结合

张庭芳,L.P.Hager

中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(01): 52-56.

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丙酮酸氧化酶既能被两性脂类激活,也能被蛋白酶从羧基端切下一个23肽(称α-肽)激活,而且这两种激活方式相互排斥。本文用分离纯化的α-肽,通过测定色氨酸荧光能量转移的方法,证明α-肽能与磷脂囊(vesicle)结合。我们选用两种不同类型的荧光探针,发现α-肽对它们表现不同的色氨酸能量转移效率。α-肽对Dan-syl-DPPE为7.4±1.0％对Dansyl-UAPC为12.5±2.0％。由此推测α-肽的色氨酸残基易与磷脂双层内部疏水区结合,说明α-肽是一种较为疏水的肽。我们推测α-肽在这种外膜酶的激活过程中,提供了与膜结合的部位,在生理过程中起着重要作用。

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五肽胃泌素及其类似物对大鼠胃粘膜细胞DNA合成的作用

王新昌,于志江,陈钧辉,张鹤云,王新光

中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(01): 57-60.

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利用细胞培养的方法,测定五肽胃泌素(Boc-β-Ala-Trp-Met-Asp-phe·NH_2)、葡萄糖-1-脱氧果糖四肽(GIe-1-Deoxyflu-Trp-Met-Asp-phe·NH_2)及Boc-三肽(Boc-Met-Asp-Phe·NH_2)等胃泌素类似物对~3H-胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)参入胃粘膜细胞DNA合成的影响。实验结果表明五肽胃泌素对胃粘膜细胞DNA合成有明显促进作用,而泌酸活性比五肽胃泌素还强的葡萄糖-1-脱氧果糖四肽却没有这种作用。进一步证明胃泌素的营养作用是独立于泌酸活性而存在的,二者有着不同的作用机理。

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经蛋白A连接于琼脂糖的单克隆抗体亲和层析柱用于抗独特型抗体的纯化

寿成超,董志伟,刘培楠

中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(01): 61-65.

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以Sepharose CL-4B-Pro A吸附胃癌单克隆抗体(McAb)PD4,继之以交联剂二甲基庚二亚胺二盐酸盐(dimethyl pimelimidate dihydrochloride)处理,形成亲和介质(柱Ⅰ)。该亲和介质用于纯化抗PD4独特型抗体(aIdAb)具有明显的优点。与Sepharose CL-4B-PD4(柱Ⅱ)相比,前者的结合容量为后者的1.78～1.94倍。采用柱Ⅰ纯化的aIdAb,当其与McAb PD4的分子比分别为1:1及4:1时可50％或100％地抑制McAb PD4与靶细胞的结合,但采用柱Ⅱ获得的aIdAb,只有当分子比达到2:1及8:1时,才能达到同等的抑制效应。这可能是由于Pro A与McAb PD4的Fc片断结合,使后者的Fab端得以充分暴露,因而有更多的机会与aIdAb结合。

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人U_1和U_2snRNA基因定位缺失和取代突变

韩玉珉

中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(01): 66-70.

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用寡聚核苷酸诱导的定位突变法,将人U_1和U_2snRNA基因的5'-端调控区域的一段能与SV_(40)T抗原相结合的DNA删去,造成缺失突变,改变这段DNA核苷酸的排列顺序,造成取代突变。突变株用原位杂交法筛选,由限制性内切酶电泳图谱分析和DNA顺序测定得到证实。突变率约为5％。

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乙醇对F_1-ATP酶和H~+-ATP酶的抑制与其核苷酸结合位点状态的关系

李生广,孙珊,许桂珍,林治焕

中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(01): 71-75.

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本文利用动力学方法研究了乙醇对F_1-ATP酶和H~(+)-ATP酶复合体的抑制与其结合核苷酸位点状态的关系,结果表明天然情况下乙醇对F_1呈现反竞争性抑制类型,对H~(+)-ATP酶呈现非竞争性抑制类型,且乙醇对F_1和H~(+)-ATP酶的抑制与核苷酸结合位点的构象密切相关。游离状态下和膜结合状态下的F_1在部分结合的核苷酸被洗脱前后动力学行为的不同,反映了二种状态下的F_1具有不同的构象,且F_0和膜脂对F_1起着一定的调控作用。

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淀粉液化芽孢杆菌α-淀粉酶在盐酸胍和碳酸胍变性过程中的构象变化

张学忠,吴华,汪大伟,董庆初,吴晓霞,曹淑桂,程玉华

中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(01): 76-81.

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利用紫外差光谱,荧光光谱和圆二色谱法对比地研究了淀粉液化茅孢杆菌α-淀粉酶在盐酸胍和碳酸胍变性过程的构象变化与活性关系以及在变性早期钙离子对酶构象的稳定作用。

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正常人及肝细胞癌患者肝脏及血浆中丙酮酸激酶同工酶免疫测定

刘金波,郑榕岚,陈惠黎

中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(01): 82-87.

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分别从人肝及鼠肝中高度纯化L型和M_1型丙酮酸激酶(Pyk),制备相应的免抗血清。从抗血清中纯化IgG并水解成F(ab')_2,进而还原成Fab',后者与辣根过氧物酶(HRP)交联成Fab'-HRP,再利用这两种复合物建立了各自的高灵敏夹心ELISA来免疫定量L及M_2型(与鼠M_1-Pyk有交叉免疫)Pyk,结果发现:正常人肝中95％的Pyk为L型,M_2-Pyk仅占5％,而肝细胞癌中L-Pyk降至正常肝的3.5％,M_2-Pyk却增至正常的14.6倍,以致M_2-Pyk占总量的95.5％。免疫组化研究进一步证实定量的结果,正常人肝L-Pyk染色呈强阳性。M_2-Pyk染色较弱,而肝细胞癌恰好相反,L-Pyk染色明显减退,而M_2-Pyk不仅癌组织染色很深,癌周组织也明显深于正常,而且愈近癌巢,染色愈深。测定血浆Pyk,发现正常人L-Pyk占89.9％,M-Pyk(以M_2计)仅占10.1％。肝细胞癌患者血浆L-Pyk略见降低,为正常值的79.6％,p值在0.02～0.05之间,但血浆M型Pyk明显升高至正常的4.59倍,占Pyk总量的39.6％,并证明主要来源于肝癌组织中的M_2,故M_2-Pyk有可能成为肝细胞癌诊断的新指标。

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氯菊酯和氯氰菊酯对突触体膜流动性影响的研究

唐促跃,马谭庚,刘毓谷

中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(01): 88-90.

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<正> 拟除虫菊酯类杀虫剂(简称拟菊酯)是七十年代以来发展最快的一类新型农药。这类化合物的许多生物学效应都涉及到神经膜结构功能的改变,如钠离子通道、受体-离子载体复合物和ATPase等。这些结构均为膜结合蛋白,其功能状态与膜流动性有密切关系。由于拟菊酯的疏水性,易于结合在生物膜酯区,因而有可能干扰膜脂结构,改变其性质,继而影响膜结合蛋白的功能。本文利用DPH(1,6-diphenyl-1,3,5-hexatriene)和ANS(1-anili-

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A型血专一性凝集素(Phaseolus lunatus Linn vel aff)的纯化和性质研究

曾仲奎,杨成勇,洪瑛,曾光耀

中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(01): 91-93.

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<正> 对人类A型血具有专一性的凝集素已有几种被纯化出来,纯化方法都是基于生物特异性的吸附作用:(1)以修饰的或天然的多糖为吸附剂;(2)利用偶联的糖肽或糖蛋白作配基进行亲和层析;(3)利用结合单糖或双糖作配基的亲和吸附。本文用猪胃粘蛋白-Sepha-rose 4B作亲和吸附剂对Phaseolus Iunatus Linn vel aff种子中的凝集素进行了研究。

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羟基磷灰石柱层析纯化小鼠腹水中抗结肠癌单克隆抗体

毕琼斯,王才力,王继杰,林辉祥

中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(01): 94-96.

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<正> 我们在Stanker工作的基础上研究了抗结肠癌单克隆抗体H b3(IgM)Ga_3(Ig G_2a)的分离纯化,均获得较满意的结果。材料与方法 HAp层析柱:HAp经0.01mol/L磷酸缓冲液(PB)pH6.8,含0.02％NaN_3浸泡过夜,用自然沉降法装柱,经上述PB液平衡后,即可进行层析。小鼠腹水予处理:取小鼠腹水数毫升,用水稀释(1:5),在4℃下,经4000r/min离心机离心30分钟,弃去沉淀物。

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