中国生物化学与分子生物学报

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转铁蛋白结构与功能的研究——骆驼血清转铁蛋自的分离纯化及其含单一铁结合部位的结构域的制备和鉴定

侯宪玉,冯佑民,张友尚

中国生物化学与分子生物学报. 1988, 4(04): 289-295.

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分离纯化获得的骆驼血清转铁蛋白由分子量为73,000和63,000两个组分组成。两者至少N-端五肽顺序相同(Met-Pro-Asp-Lys-Thr)。骆驼血清转铁蛋白在生理pH下不能与人胎盘转铁蛋白受体结合。用胰蛋白酶酶解骆驼转铁蛋白可以同时得到两个合单一铁结合部位的结构域,分别来自转铁蛋白分子的N-端称N-端结构域(分子量34,700和40,700)和C-端称C-端结构域(分子量35,100)。在上述结果的基础上指出并讨论了反刍动物转铁蛋白在结构和功能上存在更多的共同性,而与其它哺乳动物的转铁蛋白有着明显的区别。

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河蚌C-反应蛋白的性质研究

杜锦珠,夏东元

中国生物化学与分子生物学报. 1988, 4(04): 296-300.

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采用亲和层析方法从河蚌体液中可以一步获得纯化的C-反应蛋白(CRP)。本文对河蚌CRP一些性质做了进一步的研究。该蛋白是一个糖蛋白;但对鸡血红细胞并无凝集作用。通过免疫电泳法测得在正常河蚌体液中CRP的含量约为8.3mg/l。经荧光光谱研究发现,该蛋白结合Ca~(2+)和磷酸胆碱(PC)后有构象变化。

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HSV-1特异转移因子活性成分的化学本质

黄莉莉,万芷芳,苏成芝

中国生物化学与分子生物学报. 1988, 4(04): 301-306.

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亲和色谱法分离TF_(HSV-1)特异活性成分,该成分在高效液相层析(包括离子交换层析和反相层析)产生一个紫外吸收峰,簿层层析后有一个荧光胺显色点而无254nm吸收点。在等电点聚焦分析中该成分为一条考马斯亮蓝染色带。凝胶层析测定特异成分的分子量为12,870 dalton。特异成分不含DNA和游离氨基酸,与Orcinol反应阴性,其水解物含16种氨基酸。实验结果表明,TF_(HSV-1)特异成分是12,870 dalton的多肽。

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培养的人主动脉平滑肌细胞合成的蛋白聚糖的生化分析

郭明,张英珊,陈国芬

中国生物化学与分子生物学报. 1988, 4(04): 307-314.

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人胎儿主动脉平滑肌细胞(SMC_8)体外培养的第4(T_4)及第10(T_(10))代细胞在含[~(35)S]-硫酸钠的培养液中培养以标记蛋白聚糖(PG)。培养液及细胞层的4mol/L盐酸胍提取液中的PG_8用DEAE-Sephacel离子交换及凝胶过滤柱层析纯化。两代(T_4及T_(10))培养液中均含有一种分子较大及大小类似的硫酸软骨素-PG(CS-PG,在Sepharose CL-4B柱的排阻部位洗脱),其相对含量在T_4为20.8％,T_(10)为12.9％,另外尚均含有一种分子较小及大小类似的硫酸皮肤素-硫酸软骨素-PG(DS-CS-PG,Kd=0.27-0.33,Sepharose CL-4B),其相对含量在T_4为72.7％,T_(10)为81.5％。两代细胞层中除有一种与培养液中大小类似的CS-PG外(其相对含量在T_4为21.7％,T_(10)为10.2％),尚均含有一种分子较小(小于培养液中者)的DS-CS-PG(Kd=0.53,Sepharose CL-4B),其相对含量在T_4为57.4％,T_(10)为75.0％。另外,两代培养液及细胞层中均含有硫酸乙酰肝素-PG(HS-PG),在T_4及T_(10)培养液中分别为6.5％及5.6％;而在细胞层中则分别为20.9％及14.8％。T_(10)的培养液及细胞层中DS-CS-PG的[~(35)S]参入量均高于T_4者;而CS-PG及HS-PG则相反。T_(10)除有PG合成变化外尚有其他衰老迹象(如脂质堆积等),故SMC_8的老化可能与动脉粥样硬化病变形成有关。

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一种纯化细菌有机磷水解酶的简便方法

赵永芳,朱勤,王银善,庞学军,叶明,周济兰

中国生物化学与分子生物学报. 1988, 4(04): 315-319.

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Cibacron blue T_3GA与溴化氰活化的Sepharose 4B偶联后,产生一种能有效地分离有机磷水解酶的吸附剂。用0.15mol/L MgCl_2溶液从黄杆菌P3—2细胞抽提出的粗酶液通过柱层析分离,即可得到纯化8倍、酶活性回收率为269.4％的纯酶制品。该酶制品用凝胶电泳测是均一的。

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L-天冬酰胺酶与产物的相互作用

张学忠,张华,程玉华,张丽芳,马荣久

中国生物化学与分子生物学报. 1988, 4(04): 320-323.

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本文从几方面探讨了产物L-天冬氨酸和L-天冬酰胺酶之间的相互作用。产物与珀琥酸对酶荧光影响的比较研究以及产物存在下对碘离子淬灭酶荧光性质的观察表明产物和酶之间存在直接的相互作用。产物保护天冬酰胺酶抗胰蛋白酶水解及抗热失活作用暗示它结合在酶的活性部位附近。

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大白鼠DNA拓扑异构酶Ⅰ生物学性质的研究

张穗生,王理开,徐晓利

中国生物化学与分子生物学报. 1988, 4(04): 324-330.

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对大白鼠组织作DNA拓扑弄构酶Ⅰ(拓扑酶Ⅰ)活力测定,见酶活力出现在胚胎早期,在胚胎发育过程及出生后不同年龄期,酶活力基本稳定;几种成年大鼠组织的酶活力彼此无显著差异;肝细胞再生及癌变,酶活力亦无显著变化。

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小鼠腹水型肝癌H22a细胞浆内磷蛋白磷酸酶活力调节的研究

杨迪,吴国利

中国生物化学与分子生物学报. 1988, 4(04): 331-337.

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小鼠腹水型肝癌细胞胞浆内磷蛋白磷酸酶对磷酸化的组蛋白、酪蛋白、鱼精蛋白具有脱磷酸化活力,而对小分子底物P-Ser、P-Thr、P-Tyr、PNPP等无活力。二价金属离子Mn~(2+)、Co~(2+)、Mg~(2+)对酶有明显激活作用,而Zn~(2+)、F~-、Pi对酶有明显抑制作用。代谢中间物G-6-P、G-1-P、F-6-P、F-1.6-2P、ATP、ADP、GTP对酶有抑制作用,而磷酸化氨基酸和环核苷酸对酶活影响很小。还试验了碱性蛋白质和酸性蛋白质对酶活力的影响,肝素和组蛋白均对酶活力有抑制作用,当两者混和后,其抑制作用会相互抵消。

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氨基酸产生菌E_(65)中质粒的分离与鉴定

张明,陈慎,申同健

中国生物化学与分子生物学报. 1988, 4(04): 338-344.

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在棒杆菌与短杆菌中,用微量质粒分离方法筛选到一株含多种质粒的乙酰短杆菌(Brevibacterium actylicum)E_(65)菌株,该菌株具有产氨基酸特性。进一步大量制备其质粒DNA,并进行氧化绝密度梯度超离心纯化,以及电泳分析,电镜观察,并对质粒进行分离与鉴定,从而确定了每种质粒的分子量大小。

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猪肺血管紧张素转换酶的提纯

陈兰英,田敏,谢贵福

中国生物化学与分子生物学报. 1988, 4(04): 345-351.

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本文报道了猪肺血管紧张素转换酶(ACE)的提纯方法及其鉴定,并讨论了方法的改进。肺匀浆经1.6—2.6mol/L硫酸铵沉淀,Sephadex G-200凝胶过滤,DEAE-Sephaeel及羟基磷灰石柱层析步骤,从168克肺中获得4.5毫克酶蛋白纯品。活力回收45.2％,比活力15.6单位/毫克蛋白;和匀浆上清比较,提纯390倍。经聚丙烯酰胺凝胶电泳(pH8.3)鉴定为一条带。按SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测得其分子量为132,000道尔顿。酶蛋白在-30℃貯存10月,比活力丢失30％。

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DNA拓扑异构酶Ⅰ生物学活性的比较研究

曾桂超,罗雁,张迺蘅,戚豫

中国生物化学与分子生物学报. 1988, 4(04): 352-357.

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测定了3T3细胞、人和大鼠一些组织中DNA拓扑异构酶Ⅰ的活性;估计了核酸内切酶对拓扑酶Ⅰ松弛活性测定的干扰程度;发现增殖组织全细胞抽提液中酶比活高于正常分化组织,而且在异常增殖组织中酶比活的增高更为显著。

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一种cDNA克隆的简易方法

余力,张迺蘅,张昌颖,刘惠珍,闵福源

中国生物化学与分子生物学报. 1988, 4(04): 358-363.

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构建了一种适用于克隆cDNA的双分子质粒载体。使用此载体,以载体引物合成ds-cDNA后,用连接酶将cDNA-载体重组子自身环化,转化宿主菌。本文以此方法构建了人胚胎组织cDNA文库,转化菌中约50％含有cDNA插入片段。此方法大大简化了cDNA克隆步骤,提高了克隆效率。

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蜜蜂5SrRNA核苷酸序列及与其他5SrRNA的比较

刘笑洋,程振起

中国生物化学与分子生物学报. 1988, 4(04): 364-369.

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蜜蜂5SrRNA由119个核苷酸组成。与其他几种昆虫的5SrRNA比较,其序列的同源性在80％以上,具有较高的保守性。在二级结构的模式基础上,证明了单链突环区比双链螺旋区保守的现象;通过计算5SrRNA每年每个核苷酸位点上的碱基平均替换率,揭示了昆虫5SrRNA比脊椎动物的5SrRNA有较高的替换速率,其主要原因是双链螺旋区碱基高替换所致;并提出了用比较较保守的单链压的方法,修正计算碱基替换率的公式,以便由小分子rRNA推导出的遗传变异速率的结论更具有广泛性。

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具有谷氨酸脱羧酶的大肠杆菌固定化细胞

王子浩,赵景联

中国生物化学与分子生物学报. 1988, 4(04): 370-376.

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本文研究了用海藻酸钙包埋法制备含谷氨酸脱羧酶固定化细胞的方法以及研究了制备的条件和影响其制备的因素。该法具有包埋细胞活力回收高,方法简便等优点。比较研究了固定化细胞和自然细胞谷氨酸脱羧酶的一些生物化学性质。其中固定化细胞最适pH和pH稳定性增加,最适温度及热稳定性下降;表观米氏常数增大;二价金属离子Zn~(++)、Cu~(++)、Mg~(++)、Fe~(++),Sr~(++)程度不同的抑制酶活性,Ca~(++)激活固定化细胞酶活性,EDTA无抑制作用。对固定化细胞和自然细胞酶活力活化的研究中发现这两种细胞经蒸馏水保温处理后酶活性都上升,且自然细胞酶活的上升较固定化细胞大;而用底物溶液处理后,自然细胞无变化,固定化细胞酶活下降。

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人胚肝发育过程中染色质组份的变化

温博贵,李竹芳

中国生物化学与分子生物学报. 1988, 4(04): 377-383.

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从14-,17-,21-,27-,34-,及38-周令的人胚肝细胞核分离出柒色质,分别对其中的RNA、DNA、组蛋白(HP)及非组蛋白(NHP)进行测定。在胚胎发育过程中肝柒色质HP/DNA比值变化不大。但是,NHP/DNA与NHP/HP比值发生显著改变。人胚肝NHP量的变化一直保持在整个胚胎发育过程中,NHP量的高峰位于21-及34-周。用SDS-聚丙烯酰胺凝胶板电泳分析处于不同发育阶段的人胚肝总染色质蛋白。电泳图谱显示出染色质NHP组分在质与量上有所改变。

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幼龄小白鼠全脑5SrRNA的全核苷酸序列测定

王爱民,吕慧梅,郑集,曹功杰,王启松

中国生物化学与分子生物学报. 1988, 4(04): 384-384.

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<正> 5S rRNA是一种稳定的独立小分子,在原核和真核细胞中都牢固地结合在核糖体的大亚基上。它在蛋白质生物合成过程中具有重要作用。微生物、大鼠肝细胞及某些植物细胞5S rRNA的一级结构都已经测定,脑细胞5SrRNA的一级结构尚未见报道。因此,我们对幼龄小鼠全脑5S rRNA的序列进行了分析。我们用辜祥荣等人的方法分离和纯化5S rRNA,5S rRNA3′-末端标记参照Peattie的方法(2)。3′-末端标记5S rRNA的序列分析用化学降解-凝胶直读法及特异RNa8e降解直

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