中国生物化学与分子生物学报

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刘庆坡，薛庆中

中国生物化学与分子生物学报. 2006, 22(11): 851-855.

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作为生命信息的基本遗传单位，基因组遗传密码的破译对于人们加深对生命本质的认识具有重要的理论价值和现实意义。目前，遗传密码子的研究重心已由遗传密码子的破译及反常密码子的发现转入到遗传密码子的起源与进化及扩张等研究。遗传密码子的起源与进化是当今基因组学研究的热点命题之一，相关的学说、假设层出不穷，但尚未取得实质性突破。另一方面，无义密码子的再定义及遗传密码的扩张等研究却极大的丰富和发展了遗传密码子的科学内涵，推动了生命科学研究的发展。文章综述了遗传密码子的多态性、起源与进化、无义密码子的再定义及遗传密码的扩张等方面的研究进展，并就其应用价值作了评述，期待为其在基因组学、医学等相关领域的应用研究提供参考。

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与人PC-1同源的鼠PC-1基因的启动子的分子克隆和特性分析

梁瑞霞；涂智杰；王建；张惠；姜飞；庞博；郑斌；李素萍；施庆国；黄翠芬；周建光

中国生物化学与分子生物学报. 2006, 22(11): 856-861.

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为了鉴定鼠mPC-1基因表达的调控元件，克隆并分析了该基因的启动子.构建了一系列mPC-1基因启动子的截短序列.通过荧光素酶报道基因,分析了它们在前列腺癌细胞和其它细胞中的表达.结果表明,在AR阳性细胞系中,mPC-1基因启动子活性远远高于SV40和p61-PSA 启动子，mPC-1基因启动子 599 bp 至449bp 可能含有一个负调控元件； mPC-1 1.1 kb 启动子控制的表达主要在前列腺癌细胞系中；雄激素可调控mPC-1 1.1kb 启动子表达.mPC-1 1.1kb 序列是一个有前列腺癌细胞特异性和较强的启动子，经过进一步的修饰有可能作为一种有用的前列腺癌基因治疗元件.

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醋酸酐对太平洋白对虾(Penaeus vannamei)β-N-乙酰-
D-氨基葡萄糖苷酶的抑制动力学

谢晓兰,，黄乾生，韩鹏，石艳，陈清西

中国生物化学与分子生物学报. 2006, 22(11): 862-868.

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β-N-乙酰-D-氨基葡萄糖苷酶与南美白对虾的食物消化吸收、蜕壳生长有着密切关系. 海水里存在的有机污染物将影响酶生理功能, 从而进一步影响虾的正常蜕壳，严重将导致对虾的死亡. 醋酸酐是常用的有机溶剂, 故本文应用动力学方法研究醋酸酐对南美白对虾β-N-乙酰-D-氨基葡萄糖苷酶催化pNP-NAG水解时酶活力的变化规律. 表明在醋酸酐浓度低于20.0 mmol/L, 酶的抑制作用是可逆的, 测得醋酸酐对酶抑制的IC50为9.0 mmol/L. 用双倒数作图法测定醋酸酐与游离酶(E)和酶-底物络合物(ES)的结合平衡常数, 结果显示醋酸酐是酶的非竞争性抑制剂. 用底物反应动力学方法观测在不同底物浓度下酶在0.0、3.0、6.0、9.0、12.0 mmol/L的醋酸酐溶液中的失活过程，分别测定了酶的微观失活速度常数k+0及复活速度常数k-0, 结果表明醋酸酐对酶的影响是快速结合再缓慢失活的过程. 比较微观失活速度常数k+0及复活速度常数k-0, 结果暗示在高浓度的醋酸酐溶液中, 酶将完全失活.

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细胞动粒蛋白Hec1启动子的结构及功能分析

李良维，刘兢，姚雪彪，程联胜

中国生物化学与分子生物学报. 2006, 22(11): 869-875.

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细胞的分裂是一个严格调控，高度有序的过程.为了将复制后的染色体均匀、准确地传递给两个子细胞，细胞在分裂中后期受到纺锤体检验点的严格监控.Hec1定位于动粒，是纺锤体检验点调控的关键蛋白之一，它通过螺旋螺旋结构域与其他动粒蛋白相互作用调节姐妹染色体的精确分离.为研究Hec1转录水平的调控机理，采用BLAST工具,从GenBank 中搜索到了人Hec1基因上游的序列，并利用在线工具http://mbs.cbrc.jp/research/db/TFSEARCH.html提供的转录因子结合位点搜索引擎,对其5′启动子调节区段进行了分析.分析结果表明：在Hec1基因上游-200～-1序列内,存在E2F、ATF4和cAMP应答元件结合蛋白（CREB）等转录因子调控元件.在结构分析的基础上，提取HeLa细胞基因组DNA，用PCR方法克隆了Hec1基因启动子，并构建了多个含启动子不同区段的pGL3荧光素酶报告基因表达质粒.瞬时转染HeLa细胞后的结果表明，-70～－63以及－155～－144之间的启动子区对维持荧光素酶活性最为关键.凝胶迁移实验证明,这两个区段分别能够和转录因子CREB以及ATF4结合.随后,采用野生型的以及含有133位磷酸化位点突变的CREB转染HeLa细胞，通过荧光定量PCR实验发现,Hec1的表达水平分别出现明显上升和下降.该结果表明,Hec1表达的调控是通过CREB的活化来完成的.

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猪IGF-I基因的一个遗传多态性及其遗传效应分析

薛慧良，周忠孝

中国生物化学与分子生物学报. 2006, 22(11): 876-879.

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采用PCR-SSCP方法对长白猪（87头）、大白猪（79头）和马身猪（102头）的胰岛素样生长因子-I（IGF-I）基因exon3和exon4分别进行单核苷酸多态性分析。发现exon3上有多态性，且存在3种基因型（AA、AB、BB）。统计结果表明，3种基因型在各品种中的分布不一致，多重比较差异极显著（P<0.01）。固定效应模型分析结果表明，背膘厚基因型间差异显著（P<0.05），而初生重、断奶重和6月龄重基因型间差异不显著（P>0.05）。最小二乘分析结果表明，BB基因型与其它2种基因型比较有较大的初生重，同AA和AB型比较差异极显著（P<0.01），3种基因型在初生重的大小排列顺序为AA<AB<BB；BB基因型与AA基因型比较有较小的背膘厚，且差异极显著（P<0.01）。因此，推测IGF-I基因对个体的初生重和胴体瘦肉率存在一定的影响，选择带有B等位基因的个体，有望提高个体的初生重和胴体的瘦肉率。关键词猪；IGF-I基因；遗传多态性；遗传效应

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新疆军垦型细毛羊基因组BAC文库的构建

李谨,，杨公社，陈创夫,刘海波，马润林，王金富

中国生物化学与分子生物学报. 2006, 22(11): 880-885.

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选用新疆军垦型细毛羊为材料,.构建了含有190 464个克隆的BAC文库，文库平均插入片段大小为133 kb，同时文库92.5%的克隆插入片段大于100 kb，而且有部分克隆甚至大于300 kb，这将满足大多数基因筛选的要求.假定绵羊的基因组含有3x106 kb，根据文库的平均插入片段大小，计算的文库基因组覆盖率为8倍.因此,从文库筛选到目的片段的概率为98.2%.由于该文库中插入的外源片段来自新疆军垦型细毛羊的基因组，这对于研究新疆军垦型细毛羊的特殊性状的基因与其他绵羊品种和物种之间的差异，及构建其全基因组物理图谱和基因图谱地完善是非常有利的.

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过表达E2F6基因抑制BRD7基因启动子活性

刘华英,罗晓敏,李夏雨,牛朝霞,张荔茗,周鸣,彭聪,向波,李征,彭淑平,李丹,李小玲,李桂源

中国生物化学与分子生物学报. 2006, 22(11): 886-893.

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BRD7基因是采用cDNA代表性差异分析法克隆的一个新Bromodomain基因(GenBank 登录号AF152604)。它在鼻咽癌细胞和组织中表达明显下调，过表达BRD7基因可抑制鼻咽癌细胞的生长和细胞周期的进程。前期工作已克隆了BRD7基因启动子区,并将其启动子定位于450bp（-404→+46bp）的区域。为了进一步揭示BRD7基因在鼻咽癌细胞和组织中表达下调的分子机制，生物信息学分析表明BRD7启动子区有E2F6转录因子结合位点，电泳迁移率实验结果表明转录因子E2F6特异性地结合于BRD7启动子区。荧光素酶检测和绿色荧光蛋白表达检测都证实过表达E2F6基因能抑制BRD7基因启动子活性

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山奈酚抑制蛋白激酶CK2活性

林小聪,刘新光,陈小文,,梁念慈

中国生物化学与分子生物学报. 2006, 22(11): 894-901.

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研究体外以及HL-60细胞内山奈酚对蛋白激酶CK2的抑制作用及机制. 通过测定药物作用后转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的32P的放射性活度, 探讨山奈酚对重组人CK2全酶以及细胞内CK2活性的影响; 采用多重RT-PCR检测CK2α、α' 和 β亚基的mRNA表达水平; 通过 Lineweaver-Burk作图法,分析CK2的酶动力学机制.山奈酚能显著抑制重组人CK2活性（IC50 = 1.88 μmol/L）和HL-60细胞内的CK2活性, 对细胞内CK2的作用效果强于阳性对照四溴-2-氮杂苯并咪唑(TBB). 山奈酚作用2h,对CK2各亚基的mRNA表达水平均没有影响. 山奈酚对重组人CK2的酶动力学分析表明, 山奈酚与ATP(Ki = 1.14 μmol/L)及酪蛋白(Ki = 1.03 μmol/L)均呈非竞争性抑制作用. 结果提示, 山奈酚是一种有效的蛋白激酶CK2的抑制剂, 其作用机制可能与其阻碍CK2与ATP以及底物的结合有关.

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1型糖尿病葡萄糖代谢与胰岛素信号传导途径异常导致大鼠海马Alzheimer样tau蛋白过度磷酸化修饰

杨雁胡蜀红张建华张木勋龚成新,

中国生物化学与分子生物学报. 2006, 22(11): 902-908.

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Tau蛋白过度磷酸化是Alzheimer病(Alzheimer disease, AD)的一个重要病理特征.采用 I 型糖尿病大鼠模型,研究胰岛素信号传导途径及葡萄糖代谢失调对tau蛋白过度磷酸化的形成机制进行探讨.以同龄Wistar大鼠做对照（CTL），胰腺大部分切除造低胰岛素组（PX），STZ较大剂量一次性注射造1型糖尿病模型即低胰岛素高血糖组（T1DM）.葡萄糖氧化酶法检测血浆血糖，放免法检测血浆胰岛素，蛋白质印迹分析海马内总tau蛋白及tau蛋白上部分位点（Ser199、Thr212、Ser214、Ser396及Ser422）的磷酸化及神经细胞膜上葡萄糖转运子3（Glucose transport 3，GLUT3）水平.γ-32P-ATP和特异性底物肽检测海马内胰岛素信号传导系统中的关键酶糖原合成酶激酶-3β（Glycogen synthase kinase-3β, GSK-3β）活性.发现3组大鼠海马回总tau蛋白水平无显著差异，但以高血糖、低胰岛素血症为特征的T1DM组在tau蛋白Ser199、Thr212、Ser214、Ser396及Ser422位点上，呈现过度磷酸化状态，以低胰岛素血症为特征而血糖正常的PX组在位点Ser199、Thr212及Ser396上磷酸化程度比CTL组显著上升, 在位点Ser214及 Ser422上的磷酸化程度的改变不显著；T1DM及PX组大鼠海马 GSK-3β活性显著高于CTL组, 而GLUT3水平在T1DM和PX组均降低, 尤以T1DM组降低更显著.研究结果显示，胰岛素水平低下可能通过激活GSK-3β和下调细胞内葡萄糖代谢的双重作用引起脑内tau蛋白过度磷酸化.

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组织因子对肝癌细胞侵袭能力的影响

陈宁，张同琳，姚宏伟

中国生物化学与分子生物学报. 2006, 22(11): 909-913.

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组织因子（Tissue Factor，TF）是机体外源性凝血途径的启动因子，发挥生理性止血的重要作用.近来研究表明,TF除凝血功能外尚与多种恶性肿瘤的血管生成，侵袭转移及预后密切相关.为了探讨TF对人类肝癌细胞的影响，将成功构建带有正义/反义TF cDNA的真核细胞表达质粒pcDNA3.1-TF(+)/(-)转染人肝癌细胞系HepG2，经药物筛选后获得稳定细胞克隆；应用RT-PCR和Western blot检测内源性TF mRNA及蛋白质表达水平的变化；通过体外侵袭实验进一步分析对细胞侵袭能力所造成的影响.结果显示，转染pcDNA3.1-TF(+)质粒的细胞TF表达水平明显升高，相应的其侵袭能力明显增强，而转染pcDNA3.1-TF(-)质粒的细胞TF表达水平,及体外侵袭能力显著下降.研究结果表明，TF可以增强人类肝癌细胞体外侵袭和转移能力，与肝癌的进展相关，可作为原发性肝癌治疗的一个新靶点进行研究.

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甲基化特异性PCR检测FMR1 和XIST基因甲基化实验方法的建立

杨芳，,赵新,张文红,薛丽,王琰,白玉杰

中国生物化学与分子生物学报. 2006, 22(11): 914-918.

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建立一种快速、灵敏的检测脆性X智障基因（Fragile X mental retardation， FMR1）和X染色体失活基因（X chromosome inactivation，XIST）甲基化的方法，用亚硫酸氢钠和对苯二酚对基因组DNA进行脱氨基修饰。以修饰后的DNA为模板，用两套不同的引物对：1对甲基化特异性引物和1对非甲基化特异性引物扩增FMR1基因（CGG）n重复序列区、FMR1 和XIST 基因的启动子区。PCR产物进一步克隆、测序。以亚硫酸氢钠和对苯二酚脱氨基修饰后的DNA为模板，进行PCR扩增后的产物与预期基因目的基因片段大小相符合，无非特异性扩增产物。测序结果表明，FMR1、XIST基因中的非甲基化的C碱基转变为U碱基，而CpG岛被甲基化的C碱基不改变。成功地建立了检测FMR1、XIST甲基化的方法，为实验室诊断脆性X综合征提供了新的方法。

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银染增强的纳米金标记探针对微量核酸的检测

赵立凡李柏生黑笑涵李晓波李媛媛徐顺清

中国生物化学与分子生物学报. 2006, 22(11): 919-923.

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本研究利用银染增强的纳米金技术建立了一种简单快速的核酸定量方法.该方法基于纳米金与烷巯基修饰的寡核苷酸分子共价键合作用，将纳米微粒报告基团标记在与靶核酸一端序列互补的寡核苷酸上，同时生物素化修饰另一端互补序列.靶核酸与两段寡核苷酸探针杂交后，借亲和素固定在酶标板孔内，通过纳米金催化的银染放大效应产生高灵敏的识别信号,适时记录其吸光度值从而实现核酸分子的定量.该检测方法检测单链核酸分子的灵敏度达0.1 fM，双链分子为10 fM.

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水稻类受体激酶OsCR4的抗体制备及特异性检测

马云，孙大业，孙颖

中国生物化学与分子生物学报. 2006, 22(11): 924-930.

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运用生物信息学的方法对水稻类受体激酶OsCR4的抗原性进行分析，选取胞外部分片段与GST融合，在细菌大规模诱导该融合蛋白，利用GST sepharose进行亲和层析纯化，所得蛋白使用SDS-PAGE结合KCl/DTT染色切胶的方法得到收集。以此融合蛋白作为抗原免疫新西兰兔，获得了1：512，000效价的多克隆抗体，该抗体可特异识别水稻叶片微粒体组分中的OsCR4蛋白。

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