中国生物化学与分子生物学报

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张利红,张立杰,杨公社

中国生物化学与分子生物学报. 2006, 22(12): 931-934.

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围脂滴蛋白（perilipin）是脂滴相关蛋白家族的核心成员之一，是定位于脂滴表面的高磷酸化的蛋白，对脂肪组织中甘油三酯的代谢有双重调节作用，既可通过阻止脂肪酶接近脂滴降低基础状态下的脂解，又可促进激素刺激的脂肪分解.Perilipin在脂代谢中发挥重要作用，其表达调控可能与肥胖及其相关代谢疾病如糖尿病、胰岛素抵抗等有重要关系.本文主要介绍了perilipin的发现、命名、结构特征以及激素和转录因子对perilipin的调控，并阐述了其与相关脂肪酶间的相互作用.目前的研究主要集中于围脂滴蛋白（perilipin）和激素敏感脂肪酶（HSL）之间，与新近发现的脂肪酶脂肪三酰甘油脂酶（ATGL）的相互作用则有待于进一步研究.

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ERK7的结构性活化与功能

陈玲，邢飞跃

中国生物化学与分子生物学报. 2006, 22(12): 935-941.

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ERK7是细胞外信号调节激酶家族中的新成员.尽管ERK7激酶的活化环上含有ERK家族成员共有的TEY基序,但是在活化上与其它ERK家族成员截然不同,ERK7无需典型活化ERK的细胞外刺激或JNK和p38激酶活化物而发生自磷酸化并足以使其在缺乏上游激酶时发生活化,且发现ERK7中非激酶结构域的C端区域调节其结构性活化、核定位、生长抑制.此外,N端的20个氨基酸作为ERK7降解的首要决定因素调节ERK7的表达.新近研究表明ERK7与乳腺肿瘤、神经元分化、胚胎发生密切相关.本文就ERK7的结构特性活化、调控及功能等作了综述.

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可溶性耐药相关钙结合蛋白

张蓓蓓,吴毓,李庆伟

中国生物化学与分子生物学报. 2006, 22(12): 942-946.

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可溶性耐药相关钙结合蛋白(sorcin)是一个21.6 kD的胞浆蛋白，具有典型的EF手臂(EF-hand)钙结合位点, 广泛存在于多种组织中，在心肌细胞中含量最丰富.Sorcin可与肌浆网钙离子通道RyR相互作用影响心肌细胞兴奋——收缩偶联.另一方面，sorcin在肿瘤耐药细胞中大量表达，它可以与细胞中钙离子结合，引起细胞内游离钙离子浓度下降，然后导致钙离子所介导的磷酸酶活性降低，使得具有排药功能的P-gp糖蛋白磷酸化水平下降，最终导致耐药.一旦明确引发和维持细胞耐药的作用机制，就可为克服肿瘤耐药提供新的靶点.同时随着RyR活性抑制作用研究的深入，有望通过sorcin转基因技术治疗心力衰竭.本文主要对sorcin的结构特点和生物学特性进行综述，并初步分析其耐药机制.

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卵磷脂与细胞周期

常平安秦文珍,魏进民

中国生物化学与分子生物学报. 2006, 22(12): 947-952.

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卵磷脂作为哺乳动物细胞膜结构组成的重要成分，在细胞增殖过程中表现出周期性的变化.卵磷脂生物合成和分解代谢中关键酶的共同作用调节卵磷脂的变化规律，尤其是CTP:磷酸胆碱胞苷转移酶和非钙依赖的磷脂酶A2在其中起着非常重要的调节作用.在简述卵磷脂在细胞周期中的变化规律的基础上，详细阐述了卵磷脂周期性变化规律的调节机理，并就卵磷脂和细胞周期的关系及其重要生物学意义与相关疾病发生关系进行了探讨.

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动力蛋白激活蛋白亚单位Dynamitin具有ATP酶活性的生物化学特征

甄红英

中国生物化学与分子生物学报. 2006, 22(12): 953-959.

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动力蛋白激活蛋白(dynactin) 是一个与胞浆内动力蛋白的功能相关的多亚基复合物.动力蛋白（dynein）为向微管负端运输的马达蛋白，其多种功能包括细胞核迁移、有丝分裂纺锤体定位以及细胞间期和有丝分裂的细胞骨架再组装.Dynamitin，是一个50 kD的动力蛋白激活蛋白亚单位, 对于稳定动力蛋白激活蛋白复合物是非常重要的.为研究这种稳定性机制，分析了dynamitin的序列，并揭示dynamitin的一些DNA序列与ATP酶的Walker A 和 Walker B 序列具有同源性.纯化的谷胱甘肽巯基转移酶标签蛋白dynamitin和无此标签的蛋白dynamitin都特异性显示了ATP酶活性.DNA序列Walker A的失活突变可废除dynamitin蛋白的ATP酶活性，而Walker B 序列无此作用.因此，突变实验进一步证实dynamitin蛋白的ATP酶活性.ATP酶活性的动力学研究结果表明Km为 125.78μmol/L和 Kcat 为7.4 min-1

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一种苦荞麦种子蛋白酶抑制剂的纯化、特性及其抗虫活性

王转花;赵卓慧;张政;袁静明;NOBACKDan;WIESLANDERGunilla

中国生物化学与分子生物学报. 2006, 22(12): 960-965.

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蛋白酶抑制剂广泛存在于生物体内, 是自然界含量最为丰富且具有一定防御作用的蛋白种类之一. 本文采用离子交换层析和凝胶层析等方法，从苦荞麦种子中分离出一种胰蛋白酶抑制剂（TBTI-Ⅱ）. SDS-PAGE分析表明,TBTIⅡ的分子量约9.0 kD，由80个氨基酸残基组成，分子中含有较多的 Glu, Asp 和Arg. TBTI-Ⅱ具有较高热稳定性.当在100℃加热处理10 min后,仍保留有67.6%的抑制剂活性. 动力学测定显示,来自苦荞麦中的TBTI-Ⅱ对胰蛋白酶的抑制作用常数(Ki)为1.01×10－4 mol/L. 另外,将含有不同活力单位的苦荞麦蛋白酶抑制剂掺入到棉铃虫的饲料中进行饲养试验显示，TBTI-Ⅱ具有明显的抑制棉铃虫生长的作用. 这些结果表明，来自苦荞麦种子中的小分子蛋白酶抑制剂可能是一种潜在的抗虫因子.

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HNF1α对人FXR 启动子的调控作用

娄桂予，陈敏，陈彬，陈健，李渝萍，周度金

中国生物化学与分子生物学报. 2006, 22(12): 966-972.

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为探讨肝细胞核因子1α（HNF1α）对人胆汁酸受体（FXR）转录激活的作用及机制，将含HNF1α的真核表达载体（pcDNA3.1(+)HNF1α）和含有FXR启动子的荧光素酶报告基因载体共转染人肝癌细胞系HepG2，检测转染细胞中荧光素酶活性并用半定量RT-PCR、免疫印迹法检测FXR的表达.QuikChange法对FXR启动子HNF1α可能结合位点进行突变，将包含突变点的重组荧光素酶报告质粒单独或与pcDNA3.1(+)共同转染HepG2细胞，检测各组荧光素酶活性.根据凝胶电泳迁移率变化，分析HNF1α与FXR启动子区域的结合.结果发现，转染pcDNA 3.1(+)HNF1α可以上调FXR在HepG2细胞中的表达，并增强FXR启动子活性且具有剂量依赖性；－65～－48区域的点突变，导致FXR启动子活性明显降低，共转染pcDNA3.1(+)HNF1α也不具有增强作用.结果提示，转录因子HNF1α能调控FXR基因表达，其机制为：HNF1α与FXR启动子区域－65～－48区域的反向半位点结合，发挥其反式激活作用.

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小麦返白系胆色素原脱氨酶纯化及编码cDNA序列分析

程冬梅，，范三红;刘香莉;陈根云;邓志勇;郭蔼光

中国生物化学与分子生物学报. 2006, 22(12): 973-978.

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以小麦(Triticum aestivum)返白系F772为材料，通过粗提、加热处理、硫酸铵分级沉淀和凝胶柱层析等方法，对胆色素原脱氨酶（PBGD）进行了提取纯化，纯化倍数为1092，得率为15%.纯化的PBGD约为37 kD.对其部分生化性质的研究表明：高浓度的NH+4对酶活性有强烈的抑制，光照处理可以使酶活性降低.对纯化后的PBGD N末端氨基酸序列进行了测定.根据N端序列设计简并引物，获得了PBGD的cDNA全部编码区序列.它编码一个351个氨基酸的前体蛋白，有一个叶绿体导肽的序列.通过比较小麦PBGD与来自与其他物种的同源蛋白表明，有些氨基酸残基非常保守.

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重组人MBD4蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化及活性分析

李伟

中国生物化学与分子生物学报. 2006, 22(12): 979-983.

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为获得重组人MBD4蛋白，将编码MBD4的开放式阅读框（ORF）插入原核表达载体pGEX6P1 GST基因下游的多克隆位点（MCS）.将获得的表达质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3) 菌株扩大培养并用IPTG诱导融合蛋白的表达.用谷胱甘肽琼脂糖凝胶 4B亲和介质从菌体裂解液中纯化了GST-MBD4融合蛋白.经过Prescision protease专一性裂解成功去除了融合蛋白上的GST标签.通过Mono Q阴离子交换层析获得了纯度达94%以上的MBD4蛋白，该蛋白具有甲基化DNA结合和糖苷酶生物活性.

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花生四烯酸诱导肌球蛋白磷酸化被抑制的平滑肌细胞
迁移的信号传导途径

吴晶辉，叶婷婷，王洪辉，周晓雷，米达，吴莲英，王长晔，郭威，张伟英，张晓东，叶丽虹

中国生物化学与分子生物学报. 2006, 22(12): 984-990.

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在应用肌球蛋白轻链激酶特异抑制剂ML-7抑制了肌球蛋白轻链磷酸化后，花生四烯酸(arachidonic acid，AA)仍可诱导兔血管平滑肌细胞（SM3）发生迁移.为了进一步阐明其信号传导途径，应用多种信号抑制剂，采用免疫印迹、Boyden小室和提取细胞膜蛋白等实验方法，对上述迁移作用的信号传导途径进行了深入的研究.结果显示，PTX（Gi蛋白抑制剂）、U73122（PLC抑制剂）、staurosporine (PKC抑制剂)、PD98059（ERK1/2抑制剂）和SB203580（p38抑制剂）分别可拮抗上述AA诱导的SM3细胞迁移作用，而SP600125（JNK抑制剂）的作用较弱.免疫印迹结果显示，AA可提高SM3细胞中PKC(ε)、ERK1/2、p38和JNK信号的磷酸化水平，呈时间依赖性， PTX或U73122可抑制上述作用；staurosporine可抑制由AA 引起的ERK1/2和JNK的磷酸化水平增强，但对p38的磷酸化水平无影响.还发现AA可促进PLCβ2的细胞膜移位， PTX可抑制其作用.上述结果表明，当肌球蛋白轻链的磷酸化被抑制后, AA可通过Gi蛋白的活化促进PLCβ2向细胞膜移位，进而通过激活PKC(ε)、ERK1/2、p38和JNK等信号转导途径而诱导SM3细胞发生迁移

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PLK1基因沉默抑制HeLa细胞凋亡

张敏,游泳,陈智超,肖娟,刘芳,仲照东,田蕾,邹萍

中国生物化学与分子生物学报. 2006, 22(12): 991-995.

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以高表达Polo样激酶1（Polo-like kinase 1，PLK1）的宫颈癌细胞系HeLa细胞为模型，观察针对PLK1基因的短发夹状RNA（short hairpin RNA，shRNA）对其凋亡和增殖的影响.设计并合成了针对PLK1的shRNA，将其导入构建的携带增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的RNAi（RNA interference）表达载体中.通过 RT-PCR和Western 印迹分别检测HeLa细胞PLK1基因和蛋白水平的表达，以流式细胞仪和PI-Hochest双染法测细胞凋亡，MTT法检测细胞的增殖水平.成功构建了携带EGFP的RNAi表达载体pEGFP-H1.转染shRNA后，HeLa细胞PLK1的表达降低至30%.与对照组和空载体转染组相比，shRNA转染组的HeLa细胞凋亡率明显增加，其增殖活性则明显降低.本课题构建的RNAi表达载体便于观察靶基因的转染情况，且不影响H1启动子的体内转录.PLK1的基因沉默能明显增加HeLa细胞的凋亡，抑制该细胞的增殖，有可能为未来肿瘤的治疗找到新的靶点和有效途径.

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人同源盒基因NKX3.1对前列腺癌细胞的诱导凋亡作用

刘闻闻，于春晓，崔福爱，张鹏举，陈蔚文，胡晓燕，姜安丽，张建业

中国生物化学与分子生物学报. 2006, 22(12): 996-1002.

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构建人同源盒基因NKX3.1 cDNA真核表达载体，研究其在前列腺癌细胞PC-3、LNCaP 中的表达及对细胞的促凋亡作用.以人前列腺癌细胞LNCaP细胞中的总RNA为模板,RT-PCR扩增NKX3.1基因全长编码片段，将NKX3.1 cDNA重组到真核表达载体pcDNA3.1（+）中; 将pcDNA3.1-NKX3.1表达载体瞬时转染前列腺癌细胞PC-3和LNCaP 细胞,用RT-PCR和Western印迹检测NKX3.1 cDNA在转录水平和蛋白水平的表达;绘制细胞生长曲线,观察NKX3.1对前列腺癌细胞增殖的抑制作用；用DNA/ladder和流式细胞术检测NKX3.1对前列腺癌细胞凋亡的影响,进一步用RTPCR检测凋亡相关基因caspase3、caspase8、caspase9、Apaf1、survivin和Bcl2表达的变化.人同源盒基因NKX3.1 cDNA真核表达载体pcDNA3.1-NKX3.1经酶切及测序鉴定正确. pcDNA3.1-NKX3.1转染PC-3和LNCaP细胞后，经RT-PCR和Western印迹证明能有效表达NKX3.1.生长曲线显示，前列腺癌细胞转染NKX3.1 cDNA后细胞增殖受到抑制；前列腺癌细胞转染NKX3.1 cDNA 48 h后,DNA电泳呈现具有凋亡特征的DNA ladder；流式细胞术检测出现明显凋亡峰；RT-PCR检测凋亡相关基因.结果显示，caspase3、caspase8、caspase9基因表达明显增加，Bcl2基因表达明显减少.本研究成功构建了真核表达载体pcDNA3.1NKX3.1, 转染PC3和LNCaP细胞后能有效表达，并对细胞具有诱导凋亡作用

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整合BLAST搜索与GO注释的软件GoBlast

王成刚;莫志宏

中国生物化学与分子生物学报. 2006, 22(12): 1003-1006.

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随着越来越多基因组测序的完成，人们可以获得大量的序列信息，如何利用这些信息对未知基因的功能进行预测是一个非常重要的问题.Blast是基本的预测新基因功能的工具，但是仅通过Blast的原始搜索结果，尚无法获得相关基因本体论(gene ontology,GO)注释信息.目前,用户为了获得新基因的GO注释信息，首先需要进行Blast搜索，然后用Blast搜索的结果到GO网站去查询相关的GO注释信息.这浪费了大量的时间，尤其是当Blast的结果数据量很大时.为此,基于GO分类系统，整合BLAST 的结果信息，结合bioperl模块，使用perl语言开发了GoBlast软件.通过GoBlast系统，对于新基因，研究人员只须1次分析运算,就可以同时获得Blast搜索结果和GO注释信息，从而有效地提高了基因功能注释的可信度，加速了功能基因组学的研究.GoBlast为B/S（Browser/Server）架构，用户客户端只要有浏览器程序，就可以通过国际互联网在http://bioq.org/goblast上使用GoBlast系统

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高转移倾向乳腺癌细胞中p-ERK促进增殖和迁移作用的信号转导途径

尤嘉琮,汪宏斌,杨宗伟,张晓东,叶丽虹

中国生物化学与分子生物学报. 2006, 22(12): 1007-1013.

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在建立乳腺癌细胞MCF-7高转移倾向亚克隆LM-MCF-7细胞株的基础上，为阐明LM-MCF-7细胞具有更强增殖和迁移能力的分子机制，对其相关分子及其信号转导途径进行了探讨.免疫印迹结果显示，与MCF-7细胞相比，LM-MCF-7细胞中p-ERK1/2水平显著升高.流式细胞术和“伤口愈合”实验结果表明，ERK1/2的特异性抑制剂PD98059可明显抑制LM-MCF-7细胞的高增殖和高迁移能力.免疫印迹检测发现，与MCF-7细胞相比，LM-MCF-7细胞中与增殖和迁移相关的因子，如β-catenin、细胞周期蛋白D1、磷酸化肌球蛋白轻链（p-MLC）和肌球蛋白轻链激酶（MLCK）的水平呈明显增高，PD98059对这些因子水平的增高具有抑制作用.免疫荧光染色显示，LM-MCF-7细胞中β-catenin分布在细胞核中，应用PD98059处理后，β-catenin主要分布在胞浆中.上述研究结果表明，在LM-MCF-7细胞中活化的ERK1/2水平升高，是导致该细胞增殖和迁移能力增强的重要原因之一，与ERK1/2-MLCK-p-MLC和ERK1/2-β-catenin细胞周期蛋白D1等信号转导途径有密切的关系.

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