中国生物化学与分子生物学报

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郑翔, 邓大君

中国生物化学与分子生物学报. 2014, 30(5): 415-420.

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PcG蛋白主要以PRC1和PRC2两组复合物的形式存在,通过参与核小体组蛋白翻译后修饰等机制，发挥调控靶基因转录的功能. PRC1复合体中的RING1A/B具有使组蛋白H2AK119泛素化的活性；PRC2中的EZH2具有使组蛋白H3K27三甲基化的活性，形成PRC1锚定到核小体上的位点. PcG蛋白的表达特征具有发育阶段和细胞类型时空特异性. 长链非编码RNA等反式作用因子能募集PcG蛋白结合于靶基因，发挥靶向作用. 本文就PcG蛋白功能、构成的时空特异性、募集机制及其与疾病发生的关系研究进展做一综述.

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类泛素蛋白FAT10介导的蛋白酶体降解途径

胡俊文, 邵江华

中国生物化学与分子生物学报. 2014, 30(5): 421-425.

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泛素-蛋白酶体系统（ubiquitinproteasome system,UPS）是细胞内蛋白质降解的一个重要途径,在此过程中,泛素需要通过酶级联途径与靶蛋白形成多聚泛素化链,才能被26S蛋白酶体识别并降解,而泛素单体并不能有效启动蛋白酶体降解信号. FAT10 (human leukocyte antigen F-associated transcript 10)是唯一能直接介导蛋白酶体降解途径的类泛素蛋白(ubiquitin-like modifiers,UBLs)，不仅与泛素结构相似，而且在功能上也类似，但其调节靶蛋白降解途径不依赖于泛素. 与泛素相比，FAT10单体能有效结合26S蛋白酶体，并高效调节蛋白酶体降解. 因此，FAT10-蛋白酶体降解途径（FAT10-proteasome system, FPS）是1条独立于泛素之外的蛋白质降解途径. 近年研究发现，FPS在调控细胞生物学功能方面发挥重要作用，并受到广泛关注，本文就FAT10蛋白酶体降解途径的研究做一综述.

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基于CRISPR-Cas系统的基因组定点修饰新技术

王梦瑶, 杨亦农, 边红武

中国生物化学与分子生物学报. 2014, 30(5): 426-433.

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CRISPR（clustered regulatory interspersed short palindromic repeat）序列源于原核生物的一种获得性免疫系统，协同Cas（CRISPR-associated）蛋白家族参与抵抗噬菌体或其它病毒的二次感染，广泛存在于细菌（60%）和古菌（90%）中．病菌和宿主的共同进化导致了CRISPR-Cas系统具有多样性，可分为3大类（Ⅰ-Ⅲ），又分为10亚类．在Ⅱ型CRISPR-Cas系统基础上建立了RNA介导的CRISPR-Cas系统来修饰（删除、添加、激活、抑制）靶细胞中特定的基因序列，现已在人类细胞、小鼠、斑马鱼、酵母、细菌、果蝇、线虫、拟南芥
中得以应用．本文主要介绍了Ⅱ型CRISPR-Cas系统的结构特点、作用机理及作为新型基因组定点修饰技术的研究进展,分析该技术优势，并展望CRISPR-Cas系统的应用前景．

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甲型流感病毒RNA聚合酶——抗病毒药物靶点

罗芬, 马卫列, 张志珍

中国生物化学与分子生物学报. 2014, 30(5): 434-440.

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甲型流感病毒的RNA聚合酶由PB1、PB2和PA 三个亚基组成，在病毒的生命周期中负责行使病毒基因组的转录与复制等多方面功能. 甲型流感病毒由于频繁变异，导致其对传统抗病毒药物的敏感性降低，因此开发疗效好、针对性强、毒性低的新型抗病毒药物已成为当前亟待解决的问题.由于RNA聚合酶是甲型流感病毒生命周期重要的调控蛋白，并且编码聚合酶各亚基的基因序列具有高度保守性，故成为当前抗病毒药物的重要靶点.

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分子伴侣HdeA与HdeB的作用机制

于延庆, 于志超, 李艳妮

中国生物化学与分子生物学报. 2014, 30(5): 441-446.

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分子伴侣能够与其他蛋白质的不稳定构象相结合并使其稳定．它的功能之一是能够帮助蛋白质进行正确的折叠与组装．最新研究发现,在肠道致病菌的周质空间中存在着酸性条件下能帮助周质蛋白复性的分子伴侣HdeA和HdeB．HdeA在极端酸性的胃部环境中由二聚体迅速解离成具有伴侣活性的单体，HdeA单体能够和变性的底物蛋白结合防止它们酸诱导聚集，从而保护肠道致病菌安全到达肠道．本文对肠道致病菌的耐酸机制进行了总结，最后对 HdeA和HdeB作用机制的研究近况进行综述，最后对HdeA和HdeB以后的研究方向进行了展望．

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经典Wnt信号通路与人类肿瘤

李春艳, 高宁, 侯颖春

中国生物化学与分子生物学报. 2014, 30(5): 447-452.

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近年来，随着对肿瘤的深入研究，Wnt信号的研究也受到了高度的关注．Wnt信号通路是一条在进化上保守的信号途径，在控制胚胎发育，调节细胞生长、迁移、分化，调控正常组织重建等生命活动中发挥重要的作用，其异常活化与众多人类肿瘤的发生、发展密切相关．Wnt信号途径异常的核心是β-catenin在细胞内累积，并通过其下游途径引起特异靶基因的转录．本文着重介绍Wnt/β-catenin信号转导通路的研究进展及其与肿瘤的关系，了解该通路在肿瘤发生过程中的具体分子机制有助于为临床诊断提供依据，为早期干预治疗提供方法．

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N-酰基高丝氨酸内酯酶的分子改造及酶学特性

杨梅简思美杨彩云谢盼盼曾世涌

中国生物化学与分子生物学报. 2014, 30(5): 453-461.

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革兰氏阴性细菌的群体感应系统利用N-酰基高丝氨酸内酯（N-acyl-homoserine lactone, AHL）作为主要信号分子诱导致病因子表达，造成细菌性病害. N-酰基高丝氨酸内酯酶（N-acyl-homoserine lactonase, AHLase）能水解AHL分子的内酯键，减弱致病菌的危害.本研究利用从苏云金芽孢杆菌克隆的N-酰基高丝氨酸内酯酶基因（auto inducer inactivation A, aiiA）,根据Swiss-model模拟aiiA所编码的AiiA蛋白三维结构,预测可能形成的分子内盐桥、活性中心位点等,利用环状诱变方法对AiiA进行定点突变,以期提高其酶活力和热稳定性等酶学性能.对AiiA及其突变蛋白酶学特性分析结果发现,突变体AiiA-N65K-A206E酶活力要比野生型AiiA-wild提高87.4%，并表现出良好的热稳定性和储存稳定性；37 ℃温浴30 min后酶活力剩余73;9%，比AiiA-wild有了大幅提高；4 ℃储存120 h后酶活力剩余12.9%，而AiiA-wild丧失酶活力.酶动力学分析表明,AiiA-N65K-A206E酶促反应的米氏常数Km为1.23 mmol/L,与野生型相当；最大反应速率Vmax为32.36 μmol/L/min，比野生型有较大提高.本研究表明,利用定点突变技术改造AiiA的分子结构，可有效提升AiiA酶活力、热稳定性和储存稳定性.本研究结果为进一步阐明AiiA结构与功能的关系，促进AiiA在植物病害生物防治上的应用,提供了有益的参考和新的思路.

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Saposin C下调LNCaP细胞雄激素受体的多泛素化降解（英）

任凯, 任立刚, 丁岩, 张雅利

中国生物化学与分子生物学报. 2014, 30(5): 462-467.

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本研究旨在证实鞘脂活化蛋白C(saposin C)对雄激素受体（AR）多泛素化降解的影响及其机制. 通过将真核表达载体saposin C转染LNCaP细胞，发现saposin C上调AR的蛋白水平和转录激活活性. 进一步将野生型和突变型泛素质粒Ubwt和UbK48R分别与saposin C 共转染LNCaP细胞发现，saposin C能够促进AR蛋白的单泛素化形式的稳定性，抑制AR的多泛素化修饰及其在蛋白酶体中的降解. 其分子机制是saposin C、Ub和AR三者形成复合体，抑制了AR的进一步多泛素化过程. 同时还发现，在这一机制中,细胞内低浓度的雄激素（0.1 nmol/L）与saposin C具有协同作用.

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游仆虫肽链释放因子eRF1对编程性翻译移码的影响

李禄琴, 胡苗清, 王软林, 柴宝峰, 梁爱华

中国生物化学与分子生物学报. 2014, 30(5): 468-474.

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编程性翻译移码是mRNA翻译为多肽链时核糖体沿mRNA正向或反向滑动1个碱基才能表达出1个完整多肽链的现象. 人的肽链释放因子eRF1对HIV-1病毒的编程性-1移码有直接的影响. 而且在频繁发生编程性+1移码的单细胞真核生物游仆虫中，肽链释放因子eRF1对编程性移码也有明显的影响. 为进一步研究eRF1中影响编程性翻译移码的关键序列及调控机理，本研究将含有不同终止密码子的移码序列和已报道的游仆虫移码基因Ndr2分别插入双荧光素酶报告基因中，成功建立了可在酵母中进行研究的编程性移码报告检测体系. 利用游仆虫肽链释放因子Eo-eRF1b的N结构域和酵母肽链释放因子Sc eRF1的MC结构域构建了杂合肽链释放因子(Eo/Sc eRF1)，检测Eo-eRF1b N结构域中的不同突变位点对移码效率的影响. 结果表明,游仆虫肽链释放因子eRF1b中YCF区的突变能明显促进含终止密码UAA的移码序列的移码，推测这可能是由于eRF1突变体降低了对UAA的识别所导致. 此外，杂合肽链释放因子Eo/Sc eRF1能够有效地提高移码基因Ndr2的移码效率. eRF1b中YCF区的突变同样能明显促进 Ndr2的移码. 因此, 游仆虫肽链释放因子YCF区的特殊序列可能是这种生物中发生编程性移码频率较高的原因之一. 本研究为探讨纤毛虫编程性翻译移码调控机制提供了实验数据.

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人EGFR显性负性突变体对胃癌细胞体内成瘤及淋巴结转移的影响

毛红朝, 王子卫, 廖刚, 查郎, 黄镇, 向吉锋

中国生物化学与分子生物学报. 2014, 30(5): 475-480.

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为了研究人表皮生长因子显性负性突变体(dominant negative mutant of EGFR, dnEGFR)对胃癌细胞体内成瘤及淋巴结转移的影响，用目的质粒pEGFPN1dnEGFR，空质粒载体pEGFPN1分别转染胃癌细胞NCI-N87.筛选出稳定转染株，实验共分3组：NCI-N87细胞未转染组（untreated NCI-N87，UN组），NCI-N87细胞pEGFP-N1转染组（EN组）；NCI-N87细胞pEGFPN1-dnEGFR转染组（DN组）.将3组细胞接种于裸鼠右后足垫，6周后测量移植瘤大小及对应腹股沟转移淋巴结数目，HE染色验证，real-time PCR和Western 印迹检测3组细胞中AKT1、MAPK3 mRNA和蛋白的表达改变.结果发现,DN组移植瘤较UN、EN组明显缩小（P<0.05），且右腹股沟转移淋巴结数目较UN、EN组减少（P<0.05）.DN组细胞中，AKT1、MAPK3 mRNA和蛋白水平较UN、EN组降低（P<0.05）.提示pEGFPN1-dnEGFR可抑制裸鼠体内胃癌细胞成瘤及淋巴结转移，AKT1及MAPK3信号通路可能参与其中.

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铜绿假单胞菌噬菌体K5中DNA聚合酶等基因在宿主中的表达

秦旭颖, 陈岩, 林书祥, 杨洪江

中国生物化学与分子生物学报. 2014, 30(5): 481-488.

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本研究分析了铜绿假单胞菌噬菌体K5基因在宿主中的表达及其影响因素. 通过测定融合报告基因dnaP-lacZ、capP-lacZ、bapP-lacZ和rdr-lacZ编码的β半乳糖苷酶活力，分析了噬菌体K5相关基因的表达水平，发现噬菌体K5的不同基因在宿主细胞内表达水平存在较大差异，其中噬菌体K5的DNA聚合酶基因dnaP的表达水平最高，而主要衣壳蛋白基因capP的表达水平最低. 加入噬菌体后，除二磷酸核糖核苷酸还原酶基因rnr外，其它基因的表达水平均有明显提高，说明噬菌体自身因子能够调控噬菌体部分基因在宿主细胞中的表达. 进一步分析显示，噬菌体基因在对数生长前期细胞中的表达水平显著高于平衡期. 同时，噬菌体感染对数生长前期的宿主菌，其释放量为12.8 PFU/感染中心，是平衡期释放量的9.2倍. 噬菌体以对数生长期宿主为指示菌时噬菌体的滴度为4.7×108 PFU/mL，而以平衡期宿主菌为指示菌噬菌体K5滴度仅能达到2.5×104 PFU/mL，噬菌体K5的裂解能力显著降低. 这些结果对研究噬菌体与宿主细胞的相互作用机制具有重要作用.

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干扰素膜蛋白Tet-on系统稳定细胞系的建立及对CA16病毒的抑制作用

张磊, 钟理, 张玮, 武智勇

中国生物化学与分子生物学报. 2014, 30(5): 489-495.

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通过Tet-on调控系统,构建受多西环素诱导表达干扰素诱导的跨膜蛋白（interferon-induced transmembrane proteins 1/2/3，IFITM1/2/3) 基因的HeLa细胞系，并初步探索了IFITM蛋白对柯萨奇病毒A16（CA16）的抑制作用．首先将调控质粒pTet-on转染进入HeLa细胞，通过G418筛选出阳性克隆细胞系，在此细胞系基础上共同转染反应质粒pTRE2-IFITM1/2/3和伴侣质粒pTK-Hyg，通过潮霉素筛选出单克隆细胞系，加入多西环素后利用Western印迹筛选出可诱导表达IFITM1/2/3蛋白的单克隆细胞系．使用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)检测发现, 多西环素诱导表达的IFITM 蛋白对不同感染复数 (multiplicity of infection, MOI)的CA16具有明显的抑制作用，其中IFITM 3对CA16的抑制效果最为明显．Tet调控IFITM1/2/3基因表达HeLa细胞系的成功建立，为进一步研究IFITM基因的功能及其抗病毒机理提供了一个理想的细胞模型．

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嗜热菌HB8 Fe-S簇生物合成相关酶SufS与SufE重组酶的体外复合体功能

张宗棋, 田甜, 王妮莎, 刘晓晴

中国生物化学与分子生物学报. 2014, 30(5): 496-502.

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Fe-S簇在细胞的生物学过程中发挥重要作用，参与电子传递和基因调节等过程. 以嗜热菌HB8基因组为模板，通过PCR扩增获得Fe-S簇SUF系统生物合成途径中的sufS与sufE两个基因. 将目的基因分别连接到表达载体pET28a和pGEX-6P-1上,构建重组质粒sufS-pET28a和sufE-pGEX-6P-1. 重组质粒转化E.coli BL21(DE3)菌株进行蛋白质表达及亲和层析纯化. 研究证明,SufS具有脱硫酶活性,而SufE的存在可增强其活性. 体外重组实验表明，在60 ℃孵育SufS和SufE 1.0～2.5 h，其复合体脱硫酶活性约是单体SufS的2倍，但两者相互作用时间短暂. 若通过交联剂MtsAtfBiotin使SufS与SufE共价连接，此时SufSE酶活性是SufS的6倍左右，并可持续72 h.

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NUAK1增加乳腺癌细胞的趋化和粘附能力

李洪利, 尹崇高

中国生物化学与分子生物学报. 2014, 30(5): 503-507.

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本课题组先前已证明NUAK1/ARK5可通过影响F-actin的聚合从而促进乳腺癌细胞的侵袭和转移. 但是NUAK1是否还通过其它机制影响乳腺癌的侵袭和转移尚有待于探讨.本文证明NUAK1还可以影响乳腺癌细胞趋化、粘附能力从而在乳腺癌细胞侵袭转移中起重要作用. 应用化学合成的小RNA干扰质粒转染到乳腺癌细胞系MDAMB231中，用免疫印迹技术检测NUAK1蛋白的表达情况. 结果显示,在敲除NUAK1的细胞（siNUAK1/MDA231）中, NUAK1蛋白表达水平明显降低；趋化运动实验结果显示, siNUAK1/MDA231细胞的趋化运动能力比未处理组（Scr/MDA231）细胞明显降低；细胞粘附实验结果显示, EGF刺激5 min、15 min后,siNUAK1/MDA231细胞比Scr/MDA231细胞粘附细胞数量均明显减少；免疫印迹技术检测integrin β1磷酸化验证NUAK1影响乳腺癌细胞粘附的机制. 结果显示,siNUAK1/MDA231细胞内integrin β1磷酸化比Scr/MDA231细胞不同程度降低. 上述结果表明, NUAK1通过磷酸化integrin β1促进乳腺癌细胞与纤维粘连蛋白的粘附，从而促进乳腺癌的侵袭和转移.

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应用N端Cys-free断裂蛋白质内含子标记蛋白质N端

戴旭东, 李佳, 刘相钦, 孟清

中国生物化学与分子生物学报. 2014, 30(5): 508-515.

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蛋白质的特异位点修饰可以帮助了解蛋白质的结构与功能.但是，现有的蛋白质特异位点标记方法种类有限，而且存在局限性,所以有必要开发新的蛋白质特异位点标记方法．以谷胱甘肽-S-转移酶(GST)为研究对象，借助蛋白质反式剪接技术，建立了利用新型断裂蛋白质内含子对蛋白质进行N 端标记的新方法.在这个方法中,通过简单的重组表达、标记和纯化得到带有荧光基团的小肽,经过蛋白质反式剪接,荧光基团被标记到蛋白质的N 端. 初步研究结果显示,标记效率可达到12 %.

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中国生物化学与分子生物学会2014年活动计划表

中国生物化学与分子生物学报. 2014, 30(5): 516-516.

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学术活动

序号活动名称主要内容时间规模(人) 地点联系人电话
1 第八届全国核糖核酸学术讨论会围绕RNA领域最新发展趋势和我国RNA领域科学的研究动态 4月12-13日 300 合肥单革 0551-63601356
2 第二届炎症与肿瘤蛋白质组学研讨会年初 300 北京王琰 010-80705188
3 心血管诊断标志物研究学术研讨会心血管诊断标志物研究学术研讨 5月 100 北京王玲 010-66939433
4 全国第三届生物化学与分子生物技术学术研讨会围绕人类健康和培育发展生物产业的重大需求，交流研讨生化与分子生物技术的学术前沿和技术进展。 5月 100 天津
5 全国糖生物学会议糖生物学领域的全国性学术会议待定 200 西安顾建新 021-54237703
6 第十届全国海洋生物技术与创新药物学术讨论会海洋生物（动植物、微生物）天然产物（包括蛋白质、多肽、多糖、酶类、藻类、甾醇类、生物碱类）等海洋天然生化活性物质及其研发创新药物等内容。 7或8月 300 内蒙古赤峰市王梁华缪辉南 021-81870967 13601925917
7 第三届农业生物化学与分子生物学全国代表大会暨第十三届学术研讨会选举新一届理事会；就农业生物化学与分子生物学新理论、技术、方法进行学术交流 7月 150 西宁许雷 010-82109695 13661388818
8 农业新技术创制论坛农业生物技术在新品种繁育、新型肥料、新型农药、新型饲料创制和农产品加工中的应用及科研与中小企业技术对接进行研讨 7月 150 西宁许雷 010-82109695 13661388818
9 中国生物化学与分子生物学会第十一届会员代表大会暨2014年全国学术会议蛋白质的动态复合物和结构功能、能量代谢的动态平衡、蛋白质翻译后的动态修饰与功能效应、功能蛋白质的亚细胞动态分布、核酸的动态修饰与基因表达调控、动态糖修饰与功能、靶分子药物筛选与作用机制、生物化学教育等 8月21-23日 1500 厦门孙晓丽宋娟 021-54921088 021-54921090
10 第四届全国生物化学与分子生物学教学研讨会教学学术交流 8月 150 长春
11 第八届中国生物产业大会-海外生物医药高层次人才和重点项目对接洽谈会围绕生物医药产业最新研究成果做报告，针对引进的重点项目举办签约仪式待定 150 天津
12 中药现代化中的生物技术交流研讨现代生物技术在中药现代化中的应用 9月约100人天津（暂定）
13 定量蛋白质组研讨会待定 80 大连王琰 010-80705188
14 蛋白质组学与临床检验研讨会待定 80 待定王琰 010-80705188
15 临床生物化学与分子生物学分会2014年学术年会学术年会 10月 100 苏州王玲 010-66939433
16 第十二届全国脂质与脂蛋白学术会议 (1)召开第十二届全国脂质与脂蛋白学术会议；(2)评选优秀青年论文；(3)召开专业委员会六届六次会议； (4)召开青年委员会一届三次会议 10月10-12日 300 杭州沃兴德黎健王绿娅 13606629567 010-58115048 010-64456436
17 慕尼黑分析化学展专题研讨会 10月 100 上海王琰 010-80705188
18 生物技术与现代医药开发交流研讨生物技术在现代医药开发中的应用 11月约100人天津（暂定）
19 第三届中国计算蛋白质组学研讨会待定 200 北京王琰 010-80705188

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