中国生物化学与分子生物学报

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周海燕,邵爱云,孟清

中国生物化学与分子生物学报. 2007, 23(08): 605-611.

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Ⅱ组内含子(group Ⅱ intron)存在于原生生物、真菌、藻类、植物细胞器以及细菌和古细菌基因组中.在体内，Ⅱ组内含子可通过两步连续的转酯反应从前体RNA中自剪接，并连接两侧外显子.许多Ⅱ组内含子的剪接反应是由蛋白质辅助完成的，这种蛋白质有的是由内含子编码，有的是由宿主基因编码.Ⅱ组内含子能够有效地归巢进入无内含子的等位基因，也能够以低频率逆转座进入非等位基因.转座过程依赖内含子RNA和内含子编码的蛋白质（内切核酸酶活性和逆转录酶活性）.本论文在总结Ⅱ组内含子最新研究成果的基础上，分析Ⅱ组内含子可能的起源和进化途径

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猪MyoG基因内含子1的一个遗传多态性及其遗传效应分析

薛慧良

中国生物化学与分子生物学报. 2007, 23(08): 612-616.

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以长白猪(73)，大白猪(68)，沂蒙黑猪(57)和莱芜猪(83)为研究对象，采用PCR-SSCP方法对猪MyoG基因遗传多态性进行分析，并研究基因型与初生重、日增重、肌肉嫩度和背膘厚的相关性.根据猪MyoG 基因的DNA序列（M14331）设计引物，结果在内含子1扩增的片段上发现了一个多态性，检测到2个等位基因(A、B)，3种基因型（AA、AB、BB），并对纯合子进行测序，发现2　943位G→C突变.基因型在不同猪种分布的多重比较,结果表明，大白猪与长白猪、沂蒙黑猪和莱芜猪比较差异显著（P<0.05），莱芜猪与长白猪和沂蒙黑猪比较差异显著（P<0.05），长白猪与沂蒙黑猪比较差异不显著（P>0.05）.固定效应模型分析结果表明，初生重及嫩度基因型间差异显著（P<0.01），而日增重及背膘厚基因型间差异不显著（P>0.05）.最小二乘分析结果表明，BB基因型个体与AA基因型个体比较肌肉嫩度的差异显著（P<0.05），AA基因型个体与AB和BB基因型个体比较背膘厚的差异显著（P<0.05）.因此，推测MyoG基因对猪肉品质、生长速度及背膘厚存在一定的影响，将 MyoG基因应用于猪育种过程中的标记辅助选择将可以改善猪肉品质，提高生长速度，加快猪的育种进程.

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LRRC4通过LRR结构域抑制脑胶质母细胞瘤U251细胞的生长和侵袭

武明花，唐运莲，李小玲，曹利，李桂源

中国生物化学与分子生物学报. 2007, 23(08): 617-624.

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LRRC4基因是候选的脑胶质瘤抑制基因，其细胞外区域含有一个保守的LRR和一个IgC2 结构域.本研究结合生物信息学分析，通过一步PCR法构建了不同结构域缺失的突变体（pc ΔLRR, pcΔIgC2或pcΔTm）.并将全长LRRC4（pcLRRC4）和各突变体转染至U251细胞，构建了稳定表达的U251细胞系.通过MTT,软琼脂集落形成及Transwell体外侵袭模型检测发现，全长LRRC4能够抑制U251细胞的生长和侵袭；LRR结构域缺失的突变体不再抑制U251细胞的生长和侵袭;而IgC2或Tm区缺失的突变体仍然可以抑制U251细胞的生长和侵袭.该结果表明，LRRC4抑制U251细胞的生长和侵袭依赖于它的LRR结构域，而不是IgC2或Tm结构域.

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NF-κB决定小鼠胎肝激酶-1基因启动子的基本活性

郑丽端;童强松;杨渝珍;侯晓华;杨秀萍;董继华

中国生物化学与分子生物学报. 2007, 23(08): 625-630.

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为克隆小鼠胎肝激酶-1（fetal liver kinase-1，FLK-1）基因上游启动子序列，并观察其不同截短片段在小鼠血管内皮细胞中的启动子活性，以小鼠全基因组为模板，通过PCR扩增方法获得-258～+299 bp、-96～+299 bp、-71～+299 bp、-36～+299 bp大小的FLK-1启动子片段，将其定向克隆入pGL3Basic，构建荧光素酶报告基因载体，并制备NF-κB结合位点的突变或缺失体.在阳离子脂质体介导下，报告基因载体瞬时转染小鼠血管内皮细胞株SVEC 4-10.结果发现，在小鼠血管内皮细胞中，各FLK-1启动子片段均有活性；－71～－36 bp区存在FLK-1启动子的核心调控元件.针对该区域NF-κB结合位点进行突变或缺失，能导致启动子活性显著降低；凝胶电泳迁移率实验表明该区段能结合转录因子NF-κB.结果提示，成功克隆了在血管内皮细胞中具有活性的FLK-1上游启动子序列，NF-κB是决定其基本活性的重要转录因子，为进一步研究FLK-1基因的转录调控机制奠定了基础.

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人NFBD1启动子的鉴定与初步分析

卜友泉，宋方洲，易发平，马永平

中国生物化学与分子生物学报. 2007, 23(08): 631-637.

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NFBD1，也称MDC1，是一个参与细胞内DNA损伤后细胞应答反应的重要分子.为了进一步深入研究其转录调控机制，本研究克隆鉴定了NFBD1的启动子.首先应用5′ RACE技术鉴定了NFBD1的转录起始位点，首次发现NFBD1至少存在3种丰度和转录起始位点不同的转录变异体.然后,通过PCR定向克隆和酶切亚克隆策略，构建了覆盖NFBD1基因5′侧翼区起始密码子ATG上游5 kb区域的一系列NFBD1启动子荧光素酶报告基因重组体.启动子活性分析表明，NFBD1启动子区域定位于主要转录起始位点区域附近1.5 kb的区域内.采用转录因子结合位点预测分析软件分析表明，NFBD1启动子缺乏TATA盒，但含有典型的CCAAT盒和GC盒以及其它潜在的转录因子结合位点，提示Sp1和NF-Y等转录因子可能参与NFBD1的转录调控

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人野生型p53基因增强5-FU对大肠癌化疗敏感性的分子生物学机制

雷钧;洪葵;余新;邵江华;

中国生物化学与分子生物学报. 2007, 23(08): 638-643.

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为了探讨人野生型p53（wt-p53）基因增强大肠癌细胞化疗敏感性的分子生物学机制，将携带wtp53基因的质粒分别转染两种p53基因突变的人大肠癌细胞系HT-29及SW620，分析细胞中p53及细胞周期蛋白D1（cyclin D1）蛋白的表达水平；将化疗药物5氟尿嘧啶（5-fluorouracil，5-FU）以不同浓度、不同时间分别作用于HT-29及SW620细胞，另外将已转染wt-p53基因的大肠癌细胞用5-FU进行诱导，Western印迹分析上述干预条件下细胞中p53蛋白及细胞周期蛋白D1表达水平的变化；流式细胞术检测wtp53基因联合5-FU组及对照组中细胞凋亡的改变情况.结果表明，wt-p53基因能增加癌细胞中细胞周期蛋白D1的表达，与wt-p53基因呈剂量依赖性关系；5-FU则降低其蛋白表达，与5-FU呈时间和剂量依赖性关系，而5-FU所致的细胞周期蛋白D1表达水平的降低在细胞预先转染了wt-p53基因时会被抑制；wt-p53基因与5-FU联合使用能提高大肠癌细胞凋亡率.结果提示，wt-p53基因可提高大肠癌细胞中细胞周期蛋白D1的表达水平，并抑制5-FU所致的细胞周期蛋白D1降解，从而提高大肠癌细胞对化疗药物5-FU的敏感性.

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MicroRNA 122对肝癌细胞基因表达谱的影响

骆明勇;杨戎;张亮;王应雄

中国生物化学与分子生物学报. 2007, 23(08): 644-651.

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为研究microRNA（miR-122）对肝癌细胞Hep3B基因表达谱的影响，并探讨其在肝癌发过程中的可能作用，构建了miR-122稳定高表达的Hep3B细胞，利用基因表达谱芯片技术筛选得到和对照组细胞比较的差异表达基因.研究结果显示，2倍以上变化的差异表达基因有490个，其中上调的有345个，下调的有145个.这些基因中有16个与肿瘤发生相关，其它基因涉及细胞周期、信号转导、细胞凋亡和细胞增殖分化等众多生物学过程.这些结果提示，miR-122可能在肝癌发生的过程中发挥作用，并可能与这些差异表达基因密切相关.另外，还结合生物信息学方法，在下调表达的基因中预测了miR-122可能直接作用的靶基因.本研究初步探讨了miR-122在肝癌细胞中的生物学功能，为进一步研究miR-122在肝癌发生中的作用奠定了基础，同时也为miRNA的生物学功能及其作用机制的研究提供了一些参考.

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融合细胞株Eahy926与亲本人肺腺癌细胞株A549差异表达蛋白的蛋白质组学分析

王国平，张宁刚，杨金亮，何燕，瞿燕春，蒋沙沙，路泽军，罗锋

中国生物化学与分子生物学报. 2007, 23(08): 652-659.

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融合细胞株Eahy926是人肺腺癌细胞株A549和人脐静脉内皮细胞杂交而成的永生化细胞株，具有血管内皮细胞的特性，已广泛用于内皮细胞相关研究. 本研究应用蛋白质组学技术分析融合细胞株Eahy926与亲本人肺腺癌细胞株A549的蛋白质差异表达，探讨融合细胞生物学特性变化及其机制. 对Eahy926和亲本A549的细胞总蛋白质进行双向凝胶电泳，在PDQuest软件辅助下找出差异表达蛋白质点，经肽质量指纹图谱(peptide mass fingerprinting,
PMF) 和串级质谱(tandem mass spectrometry,TMS) 分析，SWISS-PROT数据库检索，成功鉴定出28个差异蛋白，如CATB、CK8、CK18、annexin A2、GRP78、HSP90、HSP60、vimentin等一些与分子伴侣、氧化应激、能量代谢、信号转导等有关，并与肿瘤细胞分裂增殖、分化凋亡、侵袭转移、免疫逃逸以及肿瘤血管生长密切关联的蛋白质. 研究发现,融合细胞株Eahy926和人肺腺癌细胞株A549的蛋白质组表达谱存在明显差异，这将有助于今后进一步探讨肿瘤细胞与内皮细胞的相互作用机制及其融合细胞的特性，筛选肿瘤增殖和转移相关蛋白质及分子标志物，亦可为肿瘤的抗血管生成治疗提供新思路.

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MLP参与心肌肥大发生过程与Calcineurin/NFAT信号通路有关

桂有静,安国顺,倪菊华贾弘禔

中国生物化学与分子生物学报. 2007, 23(08): 660-665.

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心肌肥大是心肌细胞面对多种病理刺激时的共同反应，以心肌细胞体积增大和胚胎期基因的重新表达为标志.心肌发育调控基因肌肉LIM蛋白(muscle LIM protein，MLP)的表达异常与心肌肥大有关.为研究MLP参与心肌肥大发生的分子机制,采用去氧肾上腺素（phenylephrine, PE）刺激大鼠原代培养心肌细胞，建立心肌细胞肥大模型，采用RNAi技术敲减MLP的表达，分析MLP与肥大信号通路钙调神经磷酸酶（calcineurin）/活化T细胞核因子（nuclear factor of activated T-cells, NFAT）的关系.结果显示, 原代培养的心肌细胞经一定浓度的PE刺激后细胞表面积增加，肥大标志蛋白ANP、BNP表达增高，并伴有MLP表达上调. RNAi方法敲减MLP的表达则明显抑制PE诱导的心肌细胞表面积增加和BNP表达增高，并且直接
影响NFAT的转录激活活性，提示MLP与心肌肥大的发生密切相关，并且可能是通过calcineurin/NFAT信号通路而参与心肌肥大的发生.

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中国17个黄牛品种mtDNA变异特征与多态性分析

蔡欣;陈宏;雷初朝;王珊;胡沈荣

中国生物化学与分子生物学报. 2007, 23(08): 666-674.

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中国黄牛品种资源丰富，尚有28个地方固有品种.为了进一步深入了解这些宝贵遗传资源，本研究通过mtDNA变异特征与多态性分析揭示这些来自中国不同地域地方黄牛的母系起源与分子系统学特征.在17个品种84个体的mtDNA D-loop全序列中,一共检测到了102个核苷酸替代突变位.由此定义的53个单倍型被类聚为2个明显的单倍群：普通牛和瘤牛.mtDNA D-loop全序列变异的第一个特征是转换发生的频率远高于颠换;第二个特征是缺失与替代突变共存；第三个特征是缺失突变率比较高.所有D-loop全序列的核苷酸多样性和单倍型多样性分别为0.026 78±0.000 50和0.919±0.027.普通牛D-loop单倍型在北方牛种群中占有优势(80%～100%)，而瘤牛单倍型在南方牛种群中占有优势(42.9%～100%)，2种不同单倍型在中原牛种群中的分布也存在差异.2种不同单倍型在中国不同地域17个黄牛品种中的差异性分布揭示出了瘤牛mtDNA基因在中国黄牛中自南而北、由高到低的流动模式，这种基因流动模式的形成可能是由历史事件、地理隔离以及气候环境差异等造成的.

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3-氨基苯酰胺对氧化应激诱导的HeLa细胞端粒DNA链断裂重连接作用的影响

李卫国;王坤英;李清焕;谭铮

中国生物化学与分子生物学报. 2007, 23(08): 675-681.

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端粒是位于真核细胞染色体末端的DNA-蛋白质复合体，在维持染色体稳定上起着重要的作用，并且与细胞的衰老和凋亡有着密切的关系.在各种DNA损伤中，单链断裂(single-strand breaks, SSBs)是最常见的类型之一，既可直接通过内源活性氧或离子化辐射产生，也可间接地在DNA代谢或碱基切除修复期间产生.已知多聚(ADP-核糖)聚合酶［poly(ADPribose) polymerase, PARP］在SSBs修复中起着极为重要的作用.本实验观察了PARP抑制剂3-氨基苯酰胺(3-aminobenzamide, 3-AB)对氧化应激诱导的HeLa细胞端粒DNA链断裂重连接的效应以及对过氧化氢(H2O2)抑制HeLa细胞增殖的影响.结果表明3-AB能够显著地抑制氧化应激诱导的HeLa细胞端粒DNA链断裂后的重连接作用，并能增强H2O2对HeLa细胞增殖的抑制作用，提示PARP参与了端粒DNA链断裂损伤的修复过程.

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玉米有丝分裂染色体上玉米BAC探针的FISH杂交体系的构建

陶勇生;张祖新;程友林;薛亚东;郑用琏

中国生物化学与分子生物学报. 2007, 23(08): 682-687.

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本研究分别探讨了玉米和水稻基因组c 0t DNA对探针的封阻、杂交后洗脱的严谨度、杂交液中FAD的浓度变化对BAC-FISH杂交的影响；探讨了玉米BAC探针中重复序列含量对FISH信号的影响.初步形成了一套以玉米BAC探针在玉米有丝分裂染色体上进行FISH杂交的优化技术体系.结果表明,玉米基因组c 0t DNA对探针封阻的c 0t值应小于50；而降低杂交液中FAD浓度和适度控制杂交后洗脱的严谨度，尤其是使用水稻基因组的c 0t 100 DNA封阻探针重复序列对BAC-FISH杂交信号特异性的改善具有明显的效果；同时，验证了选择重复序列含量较少的玉米BAC作为FISH杂交的探针也是获得特异性杂交信号的重要条件.

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利用碱性磷酸酶初步判定二维电泳中蛋白质磷酸化修饰

姚远，杜劭君，刘进元

中国生物化学与分子生物学报. 2007, 23(08): 688-691.

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磷酸化是蛋白质最重要的翻译后修饰形式之一.以二维电泳为基础的蛋白质组学是发现蛋白磷酸化状态改变的有效途径. 本文介绍了在用于二维电泳的蛋白样品制备过程中，利用小牛肠碱性磷酸酶成功去除蛋白质上磷酸基团的过程. 该技术将去磷酸化作用和蛋白质组学手段联系在一起，为蛋白质磷酸化修饰的初步判定提供了简便、经济、切实可行的方法.

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核基质结合区提高报告基因在稳定转化的杜氏盐藻中的表达

王天云;薛乐勋;姬祥;王亚峰

中国生物化学与分子生物学报. 2007, 23(08): 692-695.

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前期的研究从杜氏盐藻（Dunaliella salina）中分离出一核基质结合区（matrix attachment region,MAR）片段——DSM1.实验证实,它在体外能与核基质结合且具有MAR的典型特征.为研究其在转基因盐藻中的作用，构建了RbcS启动子驱动、氯霉素乙酰转移酶（chloramp
henicol acetyltransferase，CAT）基因为报告基因及表达盒两侧含DSM1 MAR的表达载体.电击法转化盐藻，随机挑选20株稳定转化的盐藻藻株，分析CAT酶活性.结果表明，在稳定转化的盐藻细胞中，MAR能使报告基因CAT的表达水平比对照藻株提高1-5倍，不同藻株之间个体表达的差异性也有所降低

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