中国生物化学与分子生物学报

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武彩萍, 刘欣, 李庆伟, 王继红

中国生物化学与分子生物学报. 2012, 28(1): 1-8.

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富组氨酸糖蛋白（HRG）为一种多结构域血浆糖蛋白，可与多种配体结合而行使多种功能.HRG配体包括锌离子、肝素和硫酸肝素、纤溶酶原、纤溶酶、纤维蛋白原、凝血酶敏感素、原肌球蛋白、IgG、FcγR及补体.在锌离子存在或在低pH的环境中（如组织损伤或肿瘤生长），HRG的富含组氨酸结构域与配体的结合能力加强.HRG的多结构域特点及其与多种配体结合的性质表明，其可以作为细胞外衔接蛋白衔接细胞表面的不同配体.除了细胞表面分子，HRG还可以结合IgG，从而阻止可溶性免疫复合物的产生.HRG与大多数细胞发生结合的功能是在锌离子存在或低pH环境下，通过与细胞表面硫酸肝素蛋白聚糖相互作用实现的. HRG还具有加强凋亡细胞、坏死的吞噬细胞和免疫复合物的清除、抗血管新生、细胞的粘附和迁移、纤维蛋白溶解作用、血凝固、补体激活等生理活动调节等功能.本文针对HRG的分子结构与功能及其在临床上的研究进展进行概述.

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Sirtuins与PARP-1在细胞凋亡过程中的相互作用

魏全伟, 石放雄

中国生物化学与分子生物学报. 2012, 28(1): 9-17.

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哺乳动物Sirtuins家族目前共发现7个成员：SIRT1～SIRT7，它们均为NAD+依赖性且从细菌到人类都保守的一类酶.人们已经对这7种去乙酰化酶进行了亚细胞定位 .目前,对其研究主要集中在对细胞发育相关的重要转录因子如p53、FOXO家族及相关蛋白的去乙酰化修饰.Sirtuins对许多生理过程有着重要的调节作用，尤其是当发现它们对寿命延长的调控作用后，Sirtuins引起了人们极大的关注，且都发表在世界顶级刊物上.聚ADP核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase, PARP)是一类存在于大多数真核细胞中的蛋白质翻译后修饰酶，尤其是聚ADP核糖聚合酶1(PARP-1)在细胞内 DNA损伤修复等过程中起着重要作用，该酶同样以NAD+作为催化反应的底物.有研究发现,Sirtuins家族成员与PARP-1在细胞内某些重要生理过程中存在着相互作用.本文评述了Sirtuins家族成员、PARP-1的生物学特点，并就其参与哺乳动物细胞凋亡的调控机制和相关信号通路进行了详细的论述，以期对Sirtuins家族成员、PARP-1生物学功能及其相互作用的研究提供理论指导.

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不同结构类型糖类物质的荧光标记策略

孙淑萌, 赵峡, 于广利, 李广生

中国生物化学与分子生物学报. 2012, 28(1): 18-27.

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为阐明糖链结构与功能的关系，寻找高灵敏度和高分离度的微量分析方法对糖类物质的分析至关重要.近几年来，荧光标记方法作为糖类物质的色谱定量及辅助结构分析的最佳选择，日益受到人们的广泛关注.荧光标记法分为柱前标记和柱后标记两种，且灵敏度高、分离度好、有多种标记试剂可供选择.本文根据不同糖类物质的结构特点，分别对中性糖和氨基糖以及含有唾液酸、糖醛酸、硫酸基的酸性糖的荧光标记方法及其应用进行了系统的综述，并对近年来报道的荧光标记试剂的特点和反应机理进行了比较和总结，以期为糖类物质微量分析方法的研究提供参考.

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无细胞蛋白质芯片的制备及其应用

狄翠霞, 张红, 杨立娜, 王小虎

中国生物化学与分子生物学报. 2012, 28(1): 28-34.

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蛋白质芯片是生物技术和功能蛋白组学的关键技术之一. 传统的生产蛋白的方法周期长且费用高. 无细胞蛋白质合成系统和蛋白芯片的结合, 避免了基因的克隆、蛋白的表达、纯化和保存等繁琐过程, 使整个无细胞蛋白芯片的制备过程快捷、迅速和高效. 本文详细综述了无细胞蛋白质合成系统及其分类、无细胞表达系统在制备蛋白质芯片方面的研究进展, 并探讨了无细胞蛋白质芯片在蛋白组学研究中的最新应用.

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去乙酰化酶抑制剂TSA通过激活ERK和p38抑制间充质干细胞成脂分化

龚雨琴, 季煜华, 李志耀, 王奎栋

中国生物化学与分子生物学报. 2012, 28(1): 35-41.

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本文研究了丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinases, MAPKs)信号通路在组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitors, HDACis)曲古抑菌素A(trichostatin A, TSA)抑制间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs) C3H10T1/2成脂分化中的调节机制.首先利用 MTT法检测TSA对其增殖活性的影响；Western印迹法首先检测MAPKs信号通路中pERK和p-p38蛋白在间充质干细胞C3H10T1/2成脂分化过程中的表达情况，以及不同浓度、不同时间TSA处理对pERK和p-p38蛋白差异变化情况；其次再用Western印迹检测TSA对成脂分化过程中间充质干细胞pERK和p-p38蛋白表达的影响.MTT结果显示,TSA浓度在1 nmol/L~100 nmol/L范围内抑制C3H10T1/2细胞的增殖活性,且TSA浓度约为60 nmol/L时即抑制一半以上的C3H10T1/2细胞增殖活性.Western印迹结果显示,TSA处理5 min~80 min,及浓度在1 nmol/L~100 nmol/L范围内激活MAPK信号通路中pERK和p-p38蛋白的表达；C3H10T1/2细胞成脂分化过程中，胞内pERK和p-p38蛋白的表达呈现下调趋势；而TSA抑制了成脂分化过程中C3H10T1/2细胞内pERK和p-p38蛋白的表达变化.本研究结果提示，在C3H10T1/2细胞成脂分化过程中，MAPK信号途径分子pERK和p-p38表达下调；TSA可能是通过活化pERK和p-p38进而抑制间充质干细胞C3H10T1/2成脂分化.

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拟南芥野生型与隐花素突变体光调节的蛋白质鉴定与聚类分析

杨粤军, 李旭, 李彦, 郭新红

中国生物化学与分子生物学报. 2012, 28(1): 42-52.

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光是控制植物生长发育十分重要的环境因子之一.隐花素是植物的蓝光受体，在植物中调节多种光形态建成，包括抑制下胚轴的伸长、子叶的伸展和调节植物的开花时间等，但隐花素依赖蓝光调节光形态建成的分子机制尚不清楚.本文采用比较蛋白质组学方法研究了在持续蓝光和红光下生长的拟南芥隐花素双突变体cry1cry2和野生型幼苗的全蛋白图谱.采用基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-TOF)进行肽质谱指纹图谱分析.在cry1cry2和野生型中鉴定了71个差异蛋白点.这些差异蛋白质反应光的变化可以形成6类，结果表明,光调节隐花素是通过控制许多相关基因的表达而实现的，为进一步研究拟南芥隐花素的光反应机制提供一些有用的信息.研究表明,蛋白质表达图谱可用于研究各种突变体在不同光照条件下光应答之间的关系.

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慢病毒载体介导的RNA干扰Akt2表达抑制猪前体脂肪细胞分化

王平, 熊燕, 杨公社, 沈清武, 庞卫军

中国生物化学与分子生物学报. 2012, 28(1): 53-60.

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丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶2(serine/threonine protein kinase2,Akt 2)是胰岛素信号通路的关键基因, 与细胞生存和癌症的发生密切相关. 但Akt2在前体脂肪细胞分化中的作用仍然不是十分清楚. 本研究构建了慢病毒干扰载体pLentiH1-Akt2-shRNA 1, 2, 3及scrambled, 经酶切和测序鉴定均正确; 这4种干扰载体分别转染HEK293T细胞后, 均获得有感染性的病毒颗粒并感染猪前体脂肪细胞. 转染HEK293T细胞48 h 后real-time PCR分析和转染72 h 后Western 印迹分析表明, Akt2-shRNA2 和shRNA3 介导的Akt2 mRNA和蛋白表达被显著下调 (P <0.05), 其中pLentiH1-Akt2-shRNA3 介导的对Akt2 mRNA和蛋白的干扰效率均达到70%以上 (P <0.01). 进一步研究发现, 猪前体脂肪细胞中Akt2被有效干扰后, 细胞中脂滴明显减少并变小, 且成脂标志基因PPARγ和aP2蛋白水平被显著下调. 本研究结果表明, Akt2 knockdown可显著抑制猪前体脂肪细胞分化.

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转录因子Ets-1与β1,3N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶基因启动子结合活性分析

仇灏, 徐正荣, 邵雪君, 周迎会, 徐岚, 吴士良

中国生物化学与分子生物学报. 2012, 28(1): 61-65.

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β1,3-N-乙酰氨基葡萄糖转移酶-2,-8（β3GnT-2, β3GnT-8）共同参与多聚N-乙酰氨基乳糖(［Galβ1→4GlcNAcβ1→3］n)的合成，从而使得细胞表面的相应糖链结构延长进而影响细胞的恶性转化.已有研究表明,在全反式维甲酸诱导人白血病细胞株 HL-60分化过程中β3GnT-2,-8的表达上调，但其分子机制不明.本文旨在探讨ATRA诱导 HL-60分化过程中，转录因子Ets-1对β3GnT-2,-8表达调控的分子机制.采用10-6 mol/L ATRA 诱导人白血病细胞株HL-60向粒系分化，RT-PCR检测到细胞中Ets-1的表达明显增加；进一步采用染色质免疫沉淀（ChIP）结合电泳迁移率变动实验（EMSA）检测证实,有活化的Ets-1结合至β3GnT-2/-8基因调控区. 以上结果表明，转录因子Ets-1对人白血病细胞株HL-60分化过程中β3GnT-2,-8基因有表达调控作用.

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尿路上皮癌胚抗原1（UCA1）在人膀胱癌组织及膀胱癌细胞株中特异表达

张争, 杨阳, 宋毅, 何志嵩

中国生物化学与分子生物学报. 2012, 28(1): 66-70.

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UCA1（urothelial carcinoma antigen 1）为自主研发的1个尿路上皮癌基因.应用实时荧光定量PCR检测UCA1 mRNA在2种膀胱癌细胞系、11种非膀胱癌细胞系、18对膀胱癌组织和配对癌旁正常膀胱组织中的表达，对表达差异进行统计学分析.结果显示， UCA1在2种膀胱癌细胞系中显著高表达，而在其他11种非膀胱癌细胞系中表达水平很低或者不表达，二者表达差异达14~24 812倍，差异有统计学意义（P<0.001）；在18例膀胱癌组织中,UCA1的平均表达水平是癌旁正常膀胱组织的12.4倍，表达差异有统计学意义（P<0.001）. 实时荧光定量PCR使UCA1在膀胱癌细胞系及组织中的特异性高表达得以量化.实验结果明确了UCA1作为潜在的肿瘤标记物在膀胱癌临床诊断中的意义，为定量检测尿液UCA1表达并确定诊断膀胱癌的参考值打下基础.

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电子束辐照对透明质酸功能及结构特性的影响

邹朝晖, 王强, 邓钢桥, 李淑荣

中国生物化学与分子生物学报. 2012, 28(1): 71-78.

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为了探讨电子束辐照对透明质酸功能及结构特性的影响，选择5、10、20、40、80 、100和150 kGy的电子束辐照固体透明质酸，测定透明质酸辐照前后分子量、特性粘度、pH值、抗氧化性、紫外光谱、红外光谱、电镜图片的变化.结果表明，辐照降低透明质酸的分子量、特性粘度、pH值；透明质酸在辐照前后的吸收特征峰没有显著的改变，吸收强度增强；透明质酸形状随着辐照剂量的升高，由块状逐渐变成颗粒状；透明质酸对DPPH·自由基的清除作用和还原力随着辐照剂量的增大逐渐增强.电子束辐照对透明质酸分子结构和功能有一定的影响，但对其一级结构没有影响.

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温肾咳喘片主要成分对HepG2细胞中CYP相关基因表达的影响

张小梅, 冯毅凡, 陈耕夫, 石忠峰

中国生物化学与分子生物学报. 2012, 28(1): 79-85.

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观察温肾咳喘片组方中5种主要单体成分甘草酸、厚朴酚、和厚朴酚、蛇床子素和欧前胡素对细胞色素P450(cytochrome P450, CYP) 1A2，2D6，2E1和3A4基因表达的影响. 采用实时荧光定量PCR技术检测HepG2细胞中药物处理后各CYP mRNA的表达.厚朴酚、和厚朴酚、蛇床子素和欧前胡素在不同浓度均能明显的诱导CYP2E1和CYP3A4，同时欧前胡素也能诱导CYP1A2的表达，而甘草酸、厚朴酚、和厚朴酚、蛇床子素和欧前胡素在不同浓度对CYP2D6的表达均具有较弱的抑制作用.甘草酸、厚朴酚、和厚朴酚、蛇床子素和欧前胡素能明显影响CYP1A2、2D6、2E1或3A4的表达.此研究为中西药物代谢性相互作用及毒理学的研究提供实验依据.

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液质联用多反应监测法定量目标多肽或蛋白质

贾小芳, 刘永福, 腾珍林, 尹林, 刘宝池, 张丽军

中国生物化学与分子生物学报. 2012, 28(1): 86-92.

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为建立优化的血浆内源性多肽提取方法，并且构建目标多肽和蛋白质的质谱定量方法，本研究考察了超滤法、有机溶剂沉淀法和固相萃取法对血浆内源性多肽的提取效果，并通过Tricine-SDS-PAGE对提取效果进行比较.通过液相色谱串联质谱多反应监测（MRM）分析，建立了多肽标准品ESAT-6定量方法，并将ESAT-6定量建立的液相色谱和质谱条件应用于蛋白质的定量，对多肽和蛋白质MRM定量的标准曲线进行了考察.Tricine-SDS-PAGE结果表明，乙腈沉淀法是最佳的血浆内源性多肽提取方法，低分子量的多肽可以得到很好的富集，且能有效地去除高分子蛋白质的污染.液相色谱串联质谱MRM法检测血浆内提取的多肽，标准曲线的线性较好，相关系数为0.999.另外，采用MRM法对胶内分离的蛋白质进行定量，标准曲线的线性相关系数为0.995.综上所述，本研究构建了一种简单有效的血浆多肽提取方法，通过液质联用MRM法成功地实现了目标多肽和蛋白质定量测定.该定量方法可以推广应用于复杂样品中的多肽和蛋白质的定量分析.

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人乳头瘤病毒（HPV）58型中和单克隆抗体的制备及初步应用

刘艳春, 张婷, 谢喜秀, 包琦锋, 许雪梅

中国生物化学与分子生物学报. 2012, 28(1): 93-98.

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人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）58型是宫颈癌的主要诱因之一. HPV58在亚洲地区宫颈癌组织中的检出率仅次于HPV16/18. HPV58中和单克隆抗体可用于 HPV病毒样颗粒（virus-like particle，VLP）疫苗的研究，并为病毒感染入侵机制的研究提供实验材料. 本研究采用HPV58 L1 VLP免疫BALB/c小鼠，取其脾细胞进行杂交瘤细胞的制备，通过VLP-ELISA和假病毒中和实验筛选杂交瘤细胞株；经rProtein A纯化阳性杂交瘤细胞培养上清获得单抗；采用ELISA测定型别特异性中和单抗的亲和力，采用相加实验及变性VLP-ELISA分析单抗识别表位的性质；选取高亲和力单抗建立定量分析HPV58 L1 VLP的ELISA方法. 获得了2株HPV58特异性中和单抗XM-22和XM-23，亲和常数分别为2.7×107 mol-1·L和1.9×106 mol-1·L，二者识别表位可能不同. 同时获得2株具有交叉中和活性的单抗XM-21和XM-24，除可较高水平中和HPV58外，还可分别交叉中和亲缘关系较远的HPV18和HPV6. 以XM-22建立的ELISA方法定量分析HPV58 L1 VLP的检测范围为0.05 μg/mL~0.40 μg/mL. 本研究建立的ELISA方法可用于HPV58 L1 VLP疫苗生产的质量控制研究，获得的4株具有不同特点的中和单抗可用于HPV58感染入侵机制的研究.

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