中国生物化学与分子生物学报

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仲如

中国生物化学与分子生物学报. 1987, 3(03): 193-198.

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<正> 基因表达和它的调控是有机体生命现象的基础,如细胞生长和分化,发育,肿瘤形成和各种遗传疾病的发生,无不与基因的表达和调控有关、基因表达的调控可以在不同的水平上进行,转录水平上基因表达的调控可说是最重要的阶段,为此弄清遗传信息在转录水平上表达的机制将大大有助于阐明各种生命现象的本质。原核基因的转录机制目前了解得较清楚,

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家蚕核型多角体病毒及核衣壳的纯化和其结构蛋白的凝胶电泳分析

刘定干,李载平

中国生物化学与分子生物学报. 1987, 3(03): 199-206.

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用差速离心和蔗糖密度梯度离心提纯了家蚕核型多角体病毒及其核衣壳,并用SDS聚丙烯酰胺凝胶(均一胶和梯度胶)电泳分析了它们的结构蛋白。测量使用游标卡尺,计算使用微型计算机。凝胶用很染色方法染色。结果表明,家蚕核型多角体病毒长381.2±17.81纳米,直径88.86±9.605纳米;核衣壳长328.9±5.917纳米,直径41.36±1.167纳米。两种凝胶电泳所得数据显示病毒粒子至少含有20组分子量不同的结构多肽,含量较多的是P31、P40、P28和P20。P45和一些小分子多肽看来主要存于囊膜上。P31的分子量与多角体蛋白相同,我们的实验表明它可能是病毒粒子和核衣壳的结构组分。

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丙二醛溶血作用的机制

尹长城,潘华珍

中国生物化学与分子生物学报. 1987, 3(03): 207-211.

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脂质过氧化产物丙二醛可引起溶血。本文用丙二醛处理红细胞,发现膜磷脂可与丙二醛交联形成荧光化合物;丙二醛又可使血红蛋白变性,产生一个棕色物质,经质谱及光谱特征鉴定为高铁卟啉,此物质可使红细胞破溶。

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与大鼠Morris肝癌7777相关的染色质蛋白的免疫亲和层析分离与鉴定

温博贵,邱政夫

中国生物化学与分子生物学报. 1987, 3(03): 213-218.

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用5mol/L尿素,将大鼠Morris肝癌7777染色质解离为染色质非组蛋白 (UP组分)及染色质沉淀(UC组分)。UP(含90—95％非组蛋白)用免疫亲和层析(与大鼠Morris肝癌7777去组蛋白染色质抗体交联)分级,经2mol/L NaSCN及8mol/L尿素分部洗脱。将UP及UC,来自UP亲和层析的2mol/L NaSCN及8mol/L尿素洗脱组分同时进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)。以大鼠Morris肝癌7777去组蛋白染色质抗体作探针,进行免疫显迹(Immunoblot)测定。在UP部分出现二条阳性带,分子量为:200K及116K。UC部分有三条染色不很深的阳性带,分子量为200K,118K及91K。来自UP亲和层析的2mol/L NaSCN及8mol/L尿素洗脱部分分别有一条浓而清晰的阳性带,分子量分别为74K及83K。用酶联免疫吸附法(E1isa)测试从UP凝胶上切割下的阳性区带,其免疫特异性显著。

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丹参酮lI-A磺酸钠及莨菪等药物对红细胞膜稳定性及钙调节蛋白(CaM)功能的影响

陈恩鸿,杨国栋,姚仁杰,张月芳

中国生物化学与分子生物学报. 1987, 3(03): 219-224.

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为了进一步证实某些药物对红细胞膜稳定(即抗溶血)作用及抑制CaM功能与药理作用之间的相关性,本文选用丹参酮Ⅱ-A磺酸钠,戊脉安,奎尼丁和莨菪类药物,测定它们对大鼠红细胞溶血及CaM功能的影响。结果表明丹参酮Ⅱ-A磺酸钠,戊脉安,奎尼丁对红细胞溶血抑制率分别为100％,71％,32％,对CaM功能的抑制分别为71.8％,63.4％,46.4％。莨菪类药物有促溶血作用,对CaM功能的抑制也极弱。我们还发现以上药物对膜上Ca~(2+)+Mg~(2+)-ATP酶的直接作用亦有类似的规律。这种相关性可能与膜表面CaM与钙离子,靶酶及药物结合区的疏水性及药物本身的相对疏水性有关。

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靛玉红治疗慢性粒细胞白血病作用原理的研究

甘午君,杨天楹,王志澄,钱林生,马洁,葛韵琴,程伯基,李仲敏,薄慧卿

中国生物化学与分子生物学报. 1987, 3(03): 225-230.

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靛玉红是一种新型抗癌药物,治疗慢性粒细胞白血病(CML)有较好的疗效。本文通过体内及体外实验采用靛玉红—脂质体为剂型,观察药物对CML细胞的作用。据荧光偏振度的测定结果表明,此药物分子能降低大白鼠白细胞膜流动性。还测定服药3天的患者外周白细胞中DNA聚合酶Ⅰ的活性,比治疗前降低74±1％。为靛玉红抑制CML细胞DNA合成的机理提供依据。此外,还使用载有靛玉红的脂质体进行体外实验,表明靛玉红可以直接降低细胞膜的流动性以及抑制CML细胞中DNA聚合酶Ⅰ活性。对靛玉红治疗CML的作用机理提出一些看法和讨论。

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吗啡及第二信使对鼠脑细胞膜蛋白质磷酸化的调节

罗远

中国生物化学与分子生物学报. 1987, 3(03): 231-237.

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本文研究了几种蛋白激酶活化剂及吗啡对脑细胞膜蛋白质磷酸化的调节。cAMP刺激了一种68KDa蛋白质和几种60KDa相关的蛋白质的磷酸化作用,Ca~(++)刺激68KDa和50KDa蛋白质的磷酸化。μ吗啡受体的特异性兴奋剂D-脑啡肽(DAGO)增加68KDa蛋白质的磷酸化,而吗啡K受体的特异性兴奋剂,Bremazocyne抑制这一蛋白质的磷酸化。蛋白激酶c的特异性活化剂——磷脂酰丝氨酸(PS)和甘油二油酸酯(DO)不促进这一磷酸化。相反,却抑制cAMP、Ca~(++)、和DAGO所刺激的68KDa蛋白质的磷酸化。结果表明,在鼠脑细胞膜存在一种68KDa专一的蛋白激酶,其活性受吗啡及几种细胞内信使分子,如cAMP、Ca~(++)和DO的调节。

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雪山豆(Phaseolus sp.)凝集素的亲和层析纯化与其部分性质

曾仲奎,邓俊林,杨燕

中国生物化学与分子生物学报. 1987, 3(03): 239-244.

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用猪甲状腺球蛋白-对氨基苯砜乙基-交联琼脂作亲和吸附剂,可对雪山豆(Phaseolus sp.)凝集素进行亲和层析纯化。纯化后的凝集素在聚丙烯酰胺凝胶电泳中显示单一蛋白质带。Sephadex G-100凝胶层析法测得分子量为65,000道尔顿,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳表明该凝集素分子仅有一个分子量为65,000道尔顿的亚基,酚-硫酸法测得总糖含量为4.6％,氨基酸组成分析表明雪山豆凝集素富含门冬氨酸,而甲硫氨酸含量甚少。该凝集素是强促有丝分裂原,对人外周血中淋巴细胞的转化率大于90％,细胞分裂比率达12％。雪山豆凝集素不仅能凝集多种动物红细胞,还能凝集人精细胞。经体外实验表明,雪山豆凝集素对人肝癌细胞有抑制作用。

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猪垂体总mRNA的提取、鉴定及其cDNA的合成

李显奎,王华岩,任韵翎,曾丙基,齐顺章

中国生物化学与分子生物学报. 1987, 3(03): 245-252.

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用改进的LiCl沉淀法和寡聚(dT)-纤维素亲和层析法由猪垂体制得总mRNA。在兔网织红细胞无细胞翻译体系中进行体外翻译的结果表明,制得的总mRNA具有一定的翻译活力。翻译产物与兔抗猪生长激素抗血清发生免疫沉淀,沉淀物占总翻译产物的10％左右。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的结果表明翻译产物有一条很深的带,分子量约为24,000道尔顿,与猪前生长激素的分子量相近。以制备的mRNA为模板反转录合成了双链cDNA。第一链的合成产率为10—35％,第二链的合成产率为84—115％。cDNA的平均分子长度为825bp。

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正常及白血病小鼠白细胞染色质和DNA的酶切分析

陈石根,周润琦,郑升

中国生物化学与分子生物学报. 1987, 3(03): 253-259.

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本文应用的核酸酶为DNaseⅡ、微球菌核酸酶与限制性内切核酸酶BstNI、EcoRⅡ、HpaⅡ和MspⅠ,将它们作用于正常小鼠615和可移植性白血病小鼠L7712脾脏白细胞染包质及其DNA,根据酶切电泳谱及水解动力学分析表明:1.白血病小鼠染色质相对正常小鼠染色质易被DNaseⅡ微球菌核酸酶水解;2.白血病小鼠染色质比正常小鼠者易被MspⅠ水解,但其DNA的MspⅠ酶切电泳谱无明显差别;3.白血病小鼠染色质及其DNA较正常小鼠染色质及其DNA易被EcoRⅡ水解。这些观察说明,白血病小鼠脾脏白细胞染色质有较活跃的构象状态;其染色质DNA的CCATGC区段内有较低的甲基化程度。

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层粘连蛋白促进实体型瘤细胞粘着、铺展及~3H-TdR参人

周柔丽,高素英,王苏,马康涛,王心民,孙诠,金月英,张莎,梁力民,林明

中国生物化学与分子生物学报. 1987, 3(03): 261-269.

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恶性肿瘤细胞或粘着于基膜以及在一定的基质上增殖对于肿瘤的浸润转移至关重要。层粘连蛋白(1aminin,LN)是基膜所特有的非胶原糖蛋白。我们研究了LN在肿瘤细胞粘着、铺展及增殖中的作用。通过测定粘着细胞所释放的LDH活性定量分析细胞粘着率。LN可显著增加体外培养的小鼠S180-V肉瘤及B16-MBK黑色素瘤细胞在玻璃及Ⅳ型胶原基质上粘着及铺展。纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)亦有类似作用。而非糖蛋白(牛血清清蛋白)或其他糖蛋白(鸡卵清清蛋白或免疫球蛋白)均无类似作用。此外,LN或FN抗体可分别抑制细胞粘着于LN或FN。这些结果表明LN或FN促细胞粘着作用是专一性的。扫描电镜观察表明,粘着在LN敷盖的玻璃表面的瘤细胞呈多突扁平形、膜皱襞及微绒毛十分稀少,而粘着在裸露的玻璃表面者为球形,膜皱襞及微绒毛甚多。再者,~3H-TdR向粘着于LN基质上的瘤细胞群的参入量显著高于粘着在裸露玻璃面者。

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胍和脲溶液对氨基酰化酶活性和构象的影响

周海梦,王希成,周昕

中国生物化学与分子生物学报. 1987, 3(03): 271-278.

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本文研究了不同浓度盐酸胍和脲溶液对猪肾氨基酰化酶活性和构象的影响。研究结果表明,在低浓度的胍和脲溶液中(小于2mol/L),酶分子的整体构象变化的程度与活力变化的程度基本是平行的;而在高浓度的胍和脲溶液中(2mol/L以上),失活程度稍大于构象变化的程度。这些结果与分子量和亚基组成基本相同,但不含金属配基的肌酸激酶的结果,以及小分子量的胰凝乳蛋白酶和牛胰核糖核酸酶的结果相比较来看,可以认为配基锌离子的存在对酶分子的活性部位区域构象的稳定作用有一定的贡献,致使氨基酰化酶的活性部位的构象状态不象后三种酶那样脆弱。同时,我们还发现锌离子的存在对酶分子整体构象的稳定性上贡献很小。

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用单克隆抗体和蛋白水解酶研究人绒毛膜促性腺激素的抗原决定簇

单立新,黄宝珊,李伟雄

中国生物化学与分子生物学报. 1987, 3(03): 279-284.

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本文报道,在不同酶解条件下,用嗜热菌蛋白酶、糜蛋白酶、胰蛋白酶,酶解人绒毛膜促性腺激素(hCG)得四个片段,而用胃蛋白酶则得三个片段;这些酶解片段在聚丙烯酰胺凝胶电泳中的条带位置不同,说明为非均一的酶解产物。应用蛋白质转移电泳技术和在硝酸纤维素膜上进行免疫酶标染色,检测出抗hCG的单克隆抗体9C_2和8B_5可与完整hCG及所有hCG酶解片段反应;而7F_3、BAH和10E_8只与完整hCG反应。表明hCG分子中可能存在序列型和结构型的两种不同的抗原决定簇。

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从羊的结肠提取和纯化血管活性肠肽

杜宝恒,J.Eng,R.S.Yalow

中国生物化学与分子生物学报. 1987, 3(03): 285-287.

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<正> 1972年Said和Mutt二氏从猪的肠组织中发现一种能使周围和内脏血管强烈扩张的多肽,命名为血管活性肠肽(Vasoactive Intestinal Peptide,简称VIP),由28个氨基酸组成。其中以精氨酸和赖氨酸占优势,属于碱性多肽,与胰泌素、胰高糖素和肠抑胃肽同属一族。近来发现VIP是一种重要的脑肠肽,在神经系统传导和胃肠胰的生理、病理活动中占有

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