中国生物化学与分子生物学报

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韩复生,张维

中国生物化学与分子生物学报. 1987, 3(05): 385-390.

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<正> 长期以来,人们一直在寻找抗癌药物的靶子,以阐明抗癌药物的作用机理,从而为设计更有效的抗癌药物提出理论根据。近来,发现不少抗癌药物,无论是与DNA嵌合的药物或不与DNA嵌合的药物都可以通过DNA拓扑异构酶Ⅱ(DAN Topoisomerase Ⅱ)的作用,形成稳定DNA-酶复合物(此酶作用的中间产物),从而导致处于S期或G_2期的DNA断裂,达到杀死细胞的目的。DNA拓扑异构酶Ⅱ可使DNA的双链同时断裂且在瞬间又接连起

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酸性α-1,4葡萄糖苷酶的麦芽糖底物测定法及其在临床诊断上的初步应用

胡波,何善述

中国生物化学与分子生物学报. 1987, 3(05): 391-396.

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本文在探讨酸性α-1,4葡萄糖苷酶的酶动力学基础上,建立了易于在国内推广应用的麦芽糖底物比色法。对于酸性和中性α-1,4葡萄糖苷酶两种同工酶共存的组织,可用30mmol/L的松二糖特异性抑制法,排除中性酶的干扰。应用本法测定了1例Pompe病死亡幼儿肝脏酸性α-1,4葡萄糖苷酶活性,仅相当于正常值的1.7％,几乎全部缺陷。绒毛中仅存在酸性α-1,4葡萄糖苷酶。测定了80例6～12平周的绒毛酸性α-1,4葡萄糖苷酶活性,总均值±标准差为574.0±106.3n mol/mg蛋白质/小时,各孕周间无显著差异。麦芽糖底物比色法可应用于肝脏、白细胞及绒毛等组织样品,故对Pompe病具有临床诊断价值。

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寡聚核苷酸诱导突变法改造φ×174噬菌体A基因蛋白的DNA识别序列

胡美浩

中国生物化学与分子生物学报. 1987, 3(05): 397-402.

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为了进一步研究φX174噬菌体A基因蛋白的复制功能与其所识别的30核苷酸保守序列的关系,我们采用寡聚核苷酸诱导的定点突变法成功地改造了这30核苷酸保守序列。将此保守序列重组到M_(13)mp9噬菌体后,以其单链为模板,在14或16寡聚核苷酸的诱导下,合成共价闭环DNA。经转化到E.coli JM103菌株,用点印迹(Dot blot)杂交法筛选,得到两种重组突变株。一种突变株其30核苷酸保守序列正链的第22碱基由A改为G。另一突变株为其第10碱基A改为C,第11碱基T改为A。突变效率约为5％。制备了此突变株单链及双链DNA,分别做了双脱氧末端终止法及Maxam和Gilbert法序列分析鉴定。

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北京鸭卵对蛋白mRNA的提纯及某些性质的鉴定

吴竹照,谭慎操,王爱,胡美浩,沈同

中国生物化学与分子生物学报. 1987, 3(05): 403-410.

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本文报道了从产卵期北京鸭输卵管中提取总RNA,经Olilo(dT)-纤维素柱层析,再经sepharose 4B柱层析步骤,得到了纯化的鸭卵清蛋白mRNA。我们建立了麦胚无细胞体系并探索了鸭卵清蛋白mRNA在此体系中翻译的最适条件。在此条件下测定了各纯化步骤的总mRNA翻译活性,并用免疫沉淀法测定其中卵清蛋白mRNA的活性。测定结果表明我们从mRNA中分离得到了纯鸭卵清蛋白mRNA。用变性的琼脂糖凝胶电泳对各纯化步骤的核酸样品进行组成分析,确定出鸭卵清蛋白mRNA的大小约为21S。

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氨基酰化酶中金属锌离子的功能作用

区耀华,赵刚,周昕

中国生物化学与分子生物学报. 1987, 3(05): 411-416.

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氨基酰化酶是含锌金属酶。该酶每摩尔蛋白中含2摩尔Zn(Ⅱ)离子。金属鳌合剂与酶作用,通过竞争螯合Zn(Ⅱ)离子使酶活力下降。残余活力与残留金属含量呈正相关。竞争螯合的结果,生成不含金属的脱辅基酶蛋白,并导致酶活力的丧失。脱辅基酶由于加入Zn(Ⅱ)离子而恢复其活力。实验表明金属锌离子是氨基酰化酶催化活力所必需。与Zn(Ⅱ)离子相似,Co(Ⅱ)离子也可与脱辅基酶相结合并使之复活。在190—240nm区域内对比了天然酶、脱辅基酶蛋白与Co(Ⅱ)置换氨基酰化酶的圆二色谱。远紫外圆二色谱表明,与天然酶相比,在脱辅基酶中由于金属离子的丧失导致主链构象发生变化,其中α螺旋增加约7％。因而锌离子(钴离子)对蛋白主链的反应最适构象有一定的稳定作用。脱辅基酶与Co(Ⅱ)离子结合,酶的主链构象恢复至与天然酶几近相同。可认为这是促使酶复活的内在因素。

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人直肠癌β-葡糖苷酶同工酶的动力学研究

姚晓丹,赵宝昌,林钧材

中国生物化学与分子生物学报. 1987, 3(05): 417-424.

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本文对人直肠癌及癌旁组织(对照)的β-葡糖苷酶同工酶的分离、底物动力学和某些物质的影响做了初步探索。结果表明:在这两种组织中分别存在三种同工酶。一种是胞液酶,Km值为1.18mmol/L(对照为1.13mmol/L),受NaCl和抗癌药WB非竞争性抑制;第二种是溶酶休可溶性酶,Km值为2.38mmol/L(对照为2.94mmol/L),不受NaCl影响,受WB的混合型抑制,直肠癌此酶受顺铂的竞争性抑制;第三种是溶酶体膜结合酶,受NaCl激活,使底物动力学由负协同性酶变为米氏酶。肿瘤组织中三种同工酶活性均高于癌旁组织中相应的酶活性。

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猪胸腺末端脱氧核苷酰转移酶的分离纯化及性质的研究

许棉,林卓坤,刘骊生

中国生物化学与分子生物学报. 1987, 3(05): 425-433.

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本文报道了一种较简便的从猪胸腺中分离纯化末端脱氧核苷酰转移酶(TdT)的方法。经一次磷酸纤维素柱层析,使TdT与DNA聚合酶分离;经三次柱层析,可获得SDS-电泳纯,分子量约60K的产品。其酶学性质与牛胸腺TdT相似。

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少年游泳运动员冬训期间HbA_2百分含量的规律性变化

戴舜华,成凯旋

中国生物化学与分子生物学报. 1987, 3(05): 435-440.

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本研究用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳,双波长扫描仪对少年游泳运动员的HbA_2百分含量进行测定。发现大运动量训练对HbA_2水平是有影响的。经六天训练(星期二、五为大运动量训练),星期日休息一天,次周的星期一晨HbA_2百分含量升高,星期二大运动量训练后的次日晨HbA_2百分含量显著下降。运动性贫血的运动员,其HbA_2百分含量一周中的变化趋势与正常运动员相似,但HbA_2百分含量比正常运动员高。

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一种具有抑制糜蛋白酶活性的血清DNA结合蛋白质的纯化和理化特性

於利敏,童坦君,张昌颖

中国生物化学与分子生物学报. 1987, 3(05): 441-448.

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本文采用离子交换层析,DNA亲和层析和硫酸铵盐析三步从人血清中分离纯化了一种肿瘤相关DNA结合蛋白质(64DP)。本方法较简便,产率提高。经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫电泳鉴定纯度符合要求。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定分子量为64,000。等电聚焦电泳测得等电点在4.2左右。醋酸纤维膜电泳和转移电泳表明其为一种α_1球蛋白。过碘酸西夫氏糖蛋白染色呈阳性反应。氨基酸分析和酶抑制试验证实64DP与α_1抗縻蛋白酶很相似。

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亚硒酸钠对肿瘤细胞膜流动性及致癌性的影响

鲁先平,于树玉

中国生物化学与分子生物学报. 1987, 3(05): 449-454.

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本文为探讨硒抗肿瘤的机理而开展了硒对小鼠腹水型肝癌(Hep.A)细胞膜流动性影响的研究。结果表明;1.腹水型肝癌细胞膜流动性明显高于正常肝细胞的膜流动性。2.硒能显著降低腹水型肝癌细胞膜的流动性,而对正常肝细胞的膜流动性没有明显影响。3.通过降低腹水型肝癌细胞膜的流动性,可降低肿瘤细胞的致癌力。

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cGMP、cAMP及两种cAMP衍生物对大鼠肝细胞核体外转录系统的影响

孙卫东,葛韵琴

中国生物化学与分子生物学报. 1987, 3(05): 455-461.

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本文介绍了以α-鹅膏蕈碱和低浓度KCl为手段建立了RNA聚合酶Ⅰ、RNA聚合酶Ⅱ活性的细胞核转录系统进而研究了cGMP、cAMP、cAMP丁酯及cAMP硫代环磷酰二乙胺对大鼠肝细胞核中RNA聚合酶Ⅰ与Ⅱ活性的影响。结果显示cGMP可以提高RNA聚合酶Ⅰ的活性;cAMP主要提高RNA聚合酶Ⅱ的活极,而cAMP分子结构变化产生的丁酯及硫代环磷酰二乙胺衍生物可增强cAMP的这种作用,为深入研究cAMP的构效关系提供了实验依据。

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抗尿激酶单克隆抗体识别相应抗原决定簇的研究

沈倍奋,贺永怀,赵薇薇,陈勇

中国生物化学与分子生物学报. 1987, 3(05): 463-467.

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尿激酶是一种纤溶酶原激活剂,临床上用于治疗血栓。为了有效地用单克隆抗体亲和柱纯化尿激酶,我们对一组抗尿激酶单克隆抗体识别相应抗原决定簇的特性进行了研究。Western Blotting试验表明:S_(13)、S_(26)、N_(14)、N_(30)、N_(17-2)、N_(34)、N_(36)七个单克隆抗体主要抗54000道尔顿的高分子量尿激酶(HUK)。除N_(30)外,其余抗体还同时不同程度地抗33000道尔顿的低分子量尿激酶(LUK)。N_(30)除识别HUK外,还识别分子量为18000道尔顿的多肽链。竞争性结合试验证明:七个单克隆抗体分别抗五个不同的抗原决定簇,但它们都不抗尿激酶的活力中心。

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新型光敏化剂——竹红菌甲素的抑瘤作用

董苍玉,贾弘禔,张力,马长明

中国生物化学与分子生物学报. 1987, 3(05): 468-472.

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利用竹红菌甲素并结合其光敏特性进行了动物体内的抑瘤试验。发现患瘤局部表皮涂布竹红菌甲素软膏或局部皮下注射或腹腔注射甲素花生油溶液、并经光照致敏后能使小鼠S-180实体肉瘤生长减缓,甚至有个别消退。同时利用细胞培养法和~3H标记化合物参入法进行了甲素抑瘤作用的定量分析。发现作用时间固定时(光照40分钟后继续培养3小时),大于12.5ng/ml浓度的甲素能明显抑制~3H-TdR、~3H-UR和~3H-Leu对S-180肉瘤细胞的参入速率;剂量与抑制率呈正相关。据此结果求出甲素对S-180肉瘤细胞的有效抑制浓度(LD(50))为40ng/ml。光照组与无光照组差异有显著性。用Ebrlich腹水癌细胞为研究体系也得到了类似的试验结果。实验结果提示竹红菌甲素具有明显的抑瘤作用,这种作用与其光敏特性有关。

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臭鼩DNA高重复顺序的研究同树鼩的TSr(Bg1 ll)—1顺序比较

归航,袁建刚,蔡良琬

中国生物化学与分子生物学报. 1987, 3(05): 473-474.

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<正> 树鼩是一种小型哺乳动物,它的分类地位还有争议。有的生物学家认为树鼩属于灵长类,也有的将它归于食虫目。我们已经做了灵长类动物和树鼩DNA特性的比较,表明二者之间的核苷酸顺序虽有一定差异,但在类αDNA的三个进化冷点区域内,有较大的相似性。为了探讨树鼩同食虫目的关系,我们选用了食虫目动物臭鼩进行了研究。我们用Bellard法提取了臭鼩DNA,分别用BamHⅠ、BglⅡ、EcoRⅠ、HindⅢ酶切,发现在经BamHⅠ、BglⅡ两酶消化后,可见到高重复区带,而在同样条件下EcoRⅠ、HindⅢ

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一种快速计算RNA分子二级结构的方法

叶青

中国生物化学与分子生物学报. 1987, 3(05): 475-476.

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<正> 计算机在生命科学中的应用已日益深入广泛。在核酸研究方面,提出了各种预测单链RNA分子二级结构的算法。虽然尚未有一种理想的算法能完全正确地预测出一个RNA分子链的二级结构,并且费机时费内存,但是已经开辟了一条道路。本文介绍的算法具有方法简单,内存开销小和运算时间短的优点,在微机上就可以实现对较大的RNA分子二级结构的预测。根据现有的研究文献作以下几个约定:

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牛生长激素抗体的制备及其纯化

戴宗汉,史灜仙

中国生物化学与分子生物学报. 1987, 3(05): 477-479.

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<正> 生长激素是垂体前叶分泌的蛋白质类激素,它在体内有多种生物学效应。近年来,对生长激素的作用机理及生长激素基因工程的研究报道很多,国内也开始了这方面的工作。我们实验室从1984年开始进行牛生长激素基因工程的研究。在这项研究中,为获得牛生长激素基因的探针,首先需要有高纯度牛生长激素mRNA。双抗体免疫沉淀法是分离、纯化特异mRNA的有效方法,采用这种方法分离牛生长激素(bGH)mRNA,需要有高纯度bGH抗体。此外,高纯度牛生长激素抗体对于检测生长激素cDNA在细菌中的表达,对于制备亲和层析

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