中国生物化学与分子生物学报

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棕色固氮菌含铁超氧化物歧化酶的分离提纯及性质研究

罗贵民,李惟,陈惠鹏,张岩,程玉华

中国生物化学与分子生物学报. 1988, 4(03): 193-200.

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本文以改进的方法提纯了棕色固氮菌——230含铁超氧化物歧化酶。产品收率提高1倍以上。该酶在pH8.2时,5℃～60℃稳定。在25℃时,pH6～12稳定。NaN_3和H_2O_2是该酶的抑制剂,而KCN对此酶活力无影响。

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乙型肝炎病毒adr亚型NC-1毒株表面抗原基因的顺序测定与结构研究

琦祖和,阎珺,熊伟军,蔡良琬

中国生物化学与分子生物学报. 1988, 4(03): 201-209.

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用内引物法自pHBVNC-1质粒DNA经Sau3A1降解的1.3Kb片段中,快速、连续测定了HBV adr NC-1表面抗原基因全顺序,与其它三株adr亚型S基因比较,顺序同源性为99％,与adw及ayw亚型比较,同源性为94％。不同亚型间的错义突变比同一亚型不同毒株间的错义突变多。比较11株adr亚型、2抹adw亚型与2株ayw亚型的S基因全顺序,发现在第47,110,113,126,160位的密码子在r亚型中有同源性,在w亚型中也有同源性,所以是w/r亚型决定簇的候选部位。第46,68,134,159,168位的密码子在d亚型中有同源性,而在y亚型中也有同源性,所以是d/y亚型抗原决定簇的候选部位。

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重金属离子对猪红细胞膜Ca~(2+)-ATP酶的作用

粟淑媛,赵昇皓

中国生物化学与分子生物学报. 1988, 4(03): 210-217.

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猪红细胞膜Ca~(2+)-ATP酶是一种钙调蛋白(CaM)依赖酶,其活力又依赖巯基的完整性。实验应用Ca~(2+)-ATP酶这一模型体系观察到重金属离子,Pb~(2+)、Cd~(2+)和Hg~(2+)都能替代Ca~(2+),激活CaM,从而激活Ca~(2+)-ATP酶;其最大刺激活力分别为85％、80％和30％,半刺激浓度分别为32、27和0.7μmol/L。当三种重金属离子的浓度增加时,则与Ca~(2+)-ATP酶的巯基结合,抑制酶的活力,Pb2~(2+)、Cd~(2+)和Hg~(2+)的半抑制浓度分别为370、440和2μmol/L。抑制作用为渐进性过程,而刺激作用为即时效应。抑制作用可为巯基化物,特别是二巯基化物所逆转。研究结果提示,CaM可能是重金属中毒最初作用的靶分子,而重金属中毒不仅使CaM“开关”失灵,还可能导致细胞内Ca~(2+)的调节全面失控。

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小鼠Lewis肺癌组织中层粘连蛋白受体的分离及其性质的研究

王苏,周柔丽

中国生物化学与分子生物学报. 1988, 4(03): 218-226.

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层粘连蛋白(Laminin,LN)是基膜(basement membrane)中的一种主要大分子糖蛋白。一些研究资料表明肿瘤细胞的浸润转移可能与LN有关。肿瘤细胞与LN的作用可能是通过细胞表面LN受体进行的。本文采用亲和层析法从小鼠Lewis肺癌组织中分离LN受体并对其理化性质进行研究。Lewis肺癌LN受体的表观分子量为70,000,还原后SDS电泳图为一条较宽的条带。氨基酸组成中疏水氨基酸占38％,苏氨酸、絲氨酸、门冬氨酸(包括门冬酰胺)占23.5％,通过硝酸纤维素膜片法用HRP-LN测定受体与LN的结合特性,证明具有配基结合专一性,饱和性及高亲和性(Kd=0.95×10~(-9)mol/L)。

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酵母细胞分裂周期突变株中磷酸化蛋白的变化

王会信,Jose,Sy

中国生物化学与分子生物学报. 1988, 4(03): 227-232.

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最近对酵母细胞腺苷酸环化酶和依赖于cAMP的蛋白激酶基因的分子生物学研究,说明磷酸化蛋白在细胞周期中有重要作用。本文用聚丙烯酰胺凝胶电泳研究了酵母细胞分裂周期突变株中蛋白质的磷酸化。依赖cAMP的突变株AM18生长在无cAMP的培基中时,发生了几种磷酸化蛋白的变化,最明显的是分子量为72K Da的蛋白的积聚。细胞分裂周期温度敏感突变株cdc35生长在高于允许温度对,以及野生株生长在稳定期时,也出现类似现象。在这三种情况下,72K Da磷酸化蛋白同时还具有相同的pI值(pI=4.7),磷酸化都发生在苏氨酸残基上,用蛋白酶部分水解法证明它们有相似的肽谱。这些结果说明它们为同一蛋白。

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黑色菜豆(Phaseolus sp.)凝集素的纯化和性质

曾仲奎,柯红,曾光耀

中国生物化学与分子生物学报. 1988, 4(03): 233-238.

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黑色菜豆(phaseolussp.)种子中含有对人A型血专一凝集的凝集素。用猪胃粘蛋白-Sepharose 4B作亲和吸附剂和Sephadex G-200凝胶过滤,可以纯化这种凝集素。纯化的凝集素在pH8.9,Tris-EDTANa_2-borate缓冲液的PAGE中,呈现单一蛋白带;酚-硫酸法测得总糖含量为3.22％。在SDS-PAGE中发现其分子由两种亚基所组成,亚基分子量分别为38,000和35,000。当凝集素浓度分别为0.98μg/ml和1.95μg/ml时能强烈地凝集人A型和AB型血细胞。在凝集素浓度高达500μg/ml时,B型血细胞能发生弱凝集反应,但对O型血和兔红细胞则完全不发生凝集反应。其凝集活性可被GalNAC、L-Fuc、猪甲状腺球蛋白和卵粘蛋白所抑制。该凝集素对人外周血中淋巴细胞的转化率达80％,细胞分裂比率高达37.1％;氨基组成分析表明,凝集素分子中Asp和Glu含量较高,而cys和Met含量很低。

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自发性可移植性615小鼠肺癌和肝癌组织神经节苷脂高效薄层层析图谱的分析

季力,欧阳启楣,朱正美,崔肇春

中国生物化学与分子生物学报. 1988, 4(03): 239-243.

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本文研究了615近交系小鼠的自发性可移植性肺癌(P_(615))和肝癌(H_(615))组织中神经节苷脂结合唾液酸含量和神经节苷脂图谱。P_(615)和H_(615)癌组织中GLS结合唾液酸含量均比正常对照为高,分别为对照组织的2.9倍和1.9倍。615小鼠的正常肺组织和肝组织的GLS主要成分均为GM_3。在P_(615)和H_(615)癌组织中GM_3含量均明显减少。肺癌组织中GM_2大量增加,肝癌组织中不仅GM_2明显增加,GM_1和GD_(18)也明显增加。P_(615)和H_(615)这两种分化程度较高、恶性程度较低的癌组织GD_3的百分含量比正常对照组织略有降低。本文结果提示,自发性可移植性P_(615)和H_(615)肿瘤组织中不仅神经节苷脂含量(以唾液酸量计)升高,而且GLS的组分也发生改变。GM_3含量减少和GM_2含量增高可能与肿瘤的恶性生长和分化程度有关。

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转铁蛋白结构与功能的研究——鸭血清转铁蛋白含单一铁结合部位的结构域的制备和鉴定

侯宪玉,冯佑民,张友尚

中国生物化学与分子生物学报. 1988, 4(03): 244-251.

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分离纯化了鸭血清转铁蛋白、分子量78,000,N-末端为Ala,不能与人胎盘转铁蛋白受体结合。鸭血清转铁蛋白用胰蛋白酶酶解可以同时得到两个含单一铁结合部位的结构域,分别来自分子的N-端和C-端区域。获得的鸭血清转铁蛋白N-端结构域分子量为33,200,C-端结构域分子量为34,900。

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HSV-1特异转移因子活性成分的分离和鉴定

黄莉莉,万芷芳,苏成芝

中国生物化学与分子生物学报. 1988, 4(03): 252-257.

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取单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)免疫小鼠脾脏制备HSV-1特异转移因子(TF_(HSV-1))。利用亲和色谱法从TF_(HSV-1))分离出能与HSV-1抗原特异结合的成分。TF_(HSV-1)及其成分均可诱导正常鼠淋巴细胞出现抗原依赖的粘附抑制,提纯的TF_(HSV-1)特异成分的免疫活性是TF_(HSV1)的40倍。TF_(HSV-1)及其成分亦可提高HSV-1感染小鼠的存活率,该作用具有剂量依赖性。在保护实验中,TF_(HSV-1)中的特异成分的比活性是_(HSV-1)原有活性的16倍。本文结果表明,我们建立的TF纯化方法实验条件温和,能够迅速有效地分离获得具高免疫活性的TF特异成分。

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绿豆胰蛋白酶抑制剂与猪胰蛋白酶复合物分子在四方和三方两种不同晶体中的取向关系

陈忠国,李根培,曾杰,戴小平,林光大,张荣光,严友为,戚正武

中国生物化学与分子生物学报. 1988, 4(03): 258-262.

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用Crowther的快速旋转函数研究了绿豆胰蛋白酶抑制剂(MBI)-猪胰蛋白酶(PTRY)复合物的四方晶体和三方晶体中胰蛋白酶分子的取向关系,并得出了它们之间的旋转矩阵。此旋转矩阵能和从胰蛋白酶模型分子为出发点在四方和三方晶体中所求得的胰蛋白酶分子的取向相互印证。此结果将促进绿豆胰蛋白酶抑制剂与胰蛋白酶的复合物立体结构及它们在不同晶形中的差异的研究。

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ELISA检测肿瘤患者血清64DP

於利敏,童坦君,张昌颖

中国生物化学与分子生物学报. 1988, 4(03): 263-268.

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据报道64DP是一种与肿瘤相关的人血清DNA结合蛋白质,其现有的定量测定方法略嫌繁琐粗糙。本文采用亲和层析法纯化的兔抗64DP抗体,建立了简便灵敏的酶免疫测定法(ELISA)。部分样本经ELISA和火箭电泳两种方法平行测定,证明两者有良好的相关性。对70例恶性肿瘤及86例正常对照血清的测定结果,肿瘤组平均64DP水平显著高于对照组,其中尤以肝癌、胃癌及肺癌的增高更为显著。对非肿瘤其它疾病患者的检测发现感染和外伤也能造成血清64DP的迅速增加。本研究表明血清64DP的改变不仅仅局限于恶性肿瘤,它具有急性期反应蛋白质的特征。这使64DP作为肿瘤标志物应用于临床受到一定限制。

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日本牵牛光周期诱导过程中蛋白质的免疫化学研究

王君,戴尧仁,汤佩松

中国生物化学与分子生物学报. 1988, 4(03): 269-273.

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用从短日诱导及非诱导的日本牵牛子叶中提取的蛋白质分别免疫兔子,所得到的抗血清对诱导及非诱导子叶蛋白质进行双相免疫电泳。有22—24种高白质得到鉴定。首次发现有二种蛋白质在16小时暗期诱导后消失。没有新的特异性蛋白质在诱导过程中形成。

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中国人群(京津地区)载脂蛋白E基因多态性和表型分布的研究

王克勤,解用虹,何锦麟

中国生物化学与分子生物学报. 1988, 4(03): 274-279.

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本文利用作者建立的密度梯度超速离心分离VLDL的新方法和分析等电聚焦电泳,测定了95例中国人Apo-E基因多态性和其表型分布以及血脂水平。所得表型分布趋势与国外报告一致:E_3/E_3频率最高,E_3/E_2和E_3/E_4次之,E_4/E_4,E_4/E_2和E_2/E_2最低。同对发现中国人群的E_3/E_3表型百分分布明显高于西方人群,但未发现有E_2/E_2表型。我国人群Apo-E表型分布的这种特征可能与中国人群冠心病的患病率较西方人群为低有关。血清脂质测定和分析表明,具有不同表型人群的血脂水平无显著的统计学差异。

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常咯啉,磷酸咯啶等药物对家兔心肌脂质易化钙离子转运的影响

陈恩鸿,杨惠华,庞大伟,张月芳,姚仁杰

中国生物化学与分子生物学报. 1988, 4(03): 280-286.

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已知心肌细胞膜微粒体脂质(CMML)能易化钙离子从水到脂相的转运。奎尼丁能抑制这一转运过程。为进一步证明其他带含氮碱性基团的心血管药物是否也能抑制CMML易化钙离子转运过程。本文选用了常咯啉(C),磷酸咯啶(P),奎尼下(Q),乌头碱(A),调微Ⅱ号(莨菪类,T),和非含氮碱性药物成脉安(V),研究了它们对这种易化钙转运过程的影响。结果表明C,P,Q和A在30μg/ml时对这一过程的抑制均超过70％。V和T在相同浓度时抑制作用分别为37.8％和微弱作用·C,P和Q的抑制作用可能是它们治疗作用的生化基础。V和T的药理机制可能与以上药物不同。

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光敏亲和标记试剂8-N_3-5′-ATP的合成

陈红,陈云俊,赵玉凤,于耀德,颜茂恭

中国生物化学与分子生物学报. 1988, 4(03): 287-288.

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<正> 近年来,光敏亲和标记技术已被广泛应用于激素及共受体,蛋白和核酸的相互作用、酶的结构与功能、膜蛋白结构、tRNA同共合成酶的识别等研究上,鉴于ATP是某些酶的底物,因此合成光敏的ATP底物类似物将有助于国内对达些酶的结构与功能进行深入研究,为此我们合成了8-N_8-5′-ATP,现将实验结果报道如下:

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