中国生物化学与分子生物学报

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臭鼩高重复顺序DNA的核苷酸顺序分析及其与树鼩TSr(Bgl Ⅱ)-1顺序的比较

袁建刚,熊伟军,林海玉,蔡良琬

中国生物化学与分子生物学报. 1988, 4(05): 385-391.

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将臭鼩DAN经过Bam H Ⅰ酶切得到的高重复顺序DNA最小片段重组到质粒pAT153上,转化后得到了含有臭鼩BMS(Bam H Ⅰ)-1高重复顺序DNA片段的克隆。再把此片段重组到M_(13)mp19噬菌体DNA上。用末端终止法测得全部苷酸顺序为495个碱基对。对臭鼬BMS(Bam H Ⅰ)-1片段的结构特点进行了分析,并和树鼩TSr(BglⅡ)-1高重复顺序DNA进行了比较。为确定树鼩在分类学上的地位,提供了一定的分子遗传学证据。

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培养的人脐静脉内皮细胞合成的蛋白聚糖

杨小平 ,张英珊 ,陈国芬

中国生物化学与分子生物学报. 1988, 4(05): 392-398.

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以[~(35)S]-Na_2SO_4为示踪物,观察培养的人脐静脉内皮细胞(EC)合成及分泌的蛋白聚糖(PG),经DEAE-Sephacel离子交换及Sepharose6B凝胶滤柱层析分析发现细胞层及培养液均含有三种PG单体,即硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HS-PG)、硫酸软骨素蛋白聚糖(CS-PG)及硫酸皮肤素蛋白聚糖(DS-PG)HS-PG又可分为大小两种,前者(HS-PG_L)位于V_o处,后者(HS-PG_s)Kd=0.53(sepharose6B);CS-PG/DS-PG分为三个峰,峰Ⅰ位于V_0处,峰Ⅱ、峰Ⅲ的Kd值分别为0.26及0.52(sepharose6B)。汇合前后细胞层及培养液中各种PG的含量不同。细胞层PG总量汇合前低于汇合后,无论是细胞层还是培养液汇合前HS-PG_L均低于汇合后,HS-PG_L与HS-PG_s比值亦为汇合前低于汇合后,而CS-PG/DS-PG含量则高于汇合后。汇合前后EC合成及分泌PG的差异与文献报道的EC损伤及正常者类似。

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若干理化因素对萌发的小麦种子α-淀粉酶同工酶的作用

王子浩,杨建雄

中国生物化学与分子生物学报. 1988, 4(05): 399-406.

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用DEAE-纤维素层析可以将萌发的小麦种子α-淀粉酶分成两个组分:α-淀粉酶Ⅰ和α-淀粉酶Ⅱ。α-淀粉酶Ⅰ对高温和Hgcl_2很敏感,而α-淀粉酶Ⅱ对高温和HgCl_2却很稳定。EDTA是两种淀粉酶的抑制剂。CaCl_2对两种同工酶的作用看来比较复杂。低pH(3.6)对两种同工酶的作用未发现明显差别。

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白魔芋和花魔芋葡甘露聚糖研究

贾成禹,陈素文,莫卫平,蒙义文,杨磊

中国生物化学与分子生物学报. 1988, 4(05): 407-413.

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从白魔芋和花魔芋的块茎中分离纯化出两种魔芋葡甘露聚糖(Konjac Glucomannan,简称KGM),分别名为白魔芋葡甘露聚糖(aKGM)和花魔芋葡甘露聚糖(rKGM)。通过超离心、玻璃纤维纸电泳和凝胶过沪证明aKGM和rKGM都是均一的多糖。这两种多糖都由甘露糖(M)和葡萄糖(G)组成,其克分子比G/M:aKGM为1:1.69,rKGM为1:1.60,分子量前者为8.09×10~5,后者为7.37×10~5。酶水解实验和红外光谱分析说明aKGM和rKGM都是由甘露糖和葡萄糖以β-1,4-糖苷键连接的杂多糖;有O-乙酰基的特征吸收峰,说明在某些糖残基上可能有乙酰基团。

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固定化酶的微环境效应Ⅰ——最适pH的移动

周会,查晓,李惟,沈家(马总)

中国生物化学与分子生物学报. 1988, 4(05): 414-419.

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以葡聚糖为载体,在葡聚糖上引入了不同量的羧甲基,采用CNBr法活化葡聚糖上剩余的羟基,使之与葡萄糖淀粉酶(GA)共价结合,从而观察载体羧甲基定量变化对固定化葡萄糖淀粉酶pH——活性曲线的影响。分别使用了两种不同孔度的葡聚糖(SephadxG100、G200)作为载体,首次发现在载体带有离子基因的情况下,载体的孔度变化对固定化酶的pH——活性曲线影响极大,甚至可以完全消除载体静电荷对此带来的影响。这些结果表明:固定化酶的微环境不仅与载体的静电势有关,也与载体分子空间结构的疏密程度有关。本文对固定化葡萄糖淀粉酶(IGA)的热稳定性也作了评价。

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佛波醇酯诱导HL-60细胞巨噬细胞样分化时蛋白激酶C活力及分布的改变

邵国英,Samuel Waxman

中国生物化学与分子生物学报. 1988, 4(05): 420-427.

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本文对佛波醇酶诱导人早幼粒白血病细胞系HL-60细胞分化为巨噬细胞样细胞对蛋白激酶c活力及其在亚细胞分布的变化进行了研究。蛋白激酶c活力在TPA处理1小时即明显降低,此低水平的酶活力持续整个实验时期。酶的亚细胞分布研究提示TPA处理细胞胞质组分酶活力剧烈降低,而颗粒组分存在一高盐浓度洗脱的酶活力峰。蛋白激酶c抑制剂三氟过(口了)嗪单独处理HL-60细胞导致胞质和颗粒组分酶活力升高,但并不诱导细胞分化;若与TPA合并处理细胞,酶活力又降低,此时细胞又分化为巨噬细胞样细胞。对上述结果的可能机理进行了讨论。

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猪肺炎支原体膜上ATP酶生化性质的研究

黄芬,王苏民,吴玉薇,李跃贞,文德成,张兰萍,董清华

中国生物化学与分子生物学报. 1988, 4(05): 428-431.

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猪肺炎支原体膜上ATP酶为Mg~(2+)激活,乌巴因不抑制。DCCD和寡霉素对该酶也无抑制作用,只有NBD与Quercetin才有一定的抑制效果。用梯度凝胶电泳可获均一的具有活性的酶蛋白带。

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人正常软骨和软骨肉瘤蛋白多糖的比较研究

薛延,屠德康,褚为靖,贾维维,于小鹏,宋钰,于志坚,徐万鹏,蔡槱伯,乐守玉,吴大东

中国生物化学与分子生物学报. 1988, 4(05): 432-438.

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取三例一般型一级的软骨肉瘤及不同年令正常人股骨头关节软骨,经4mol/L盐酸胍提取和氯化铯平衡等密度梯度离心,分析蛋白多糖组份的化学组成,并用Sepharose CL-2B层析分析蛋白多糖分子大小。初步结果,两例软骨肉瘤蛋白多糖的化学组成和分子大小与新生儿接近,另一例软骨肉瘤蛋白多糖的化学组成和分子大小与成年人相似。此结果说明软骨肉瘤生物学行为的多变性及其蛋白多糖的异质性。

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丁酸钠对大鼠离体灌流心脏细胞核组蛋白乙酰化的影响

王永业,刘宗正

中国生物化学与分子生物学报. 1988, 4(05): 439-445.

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本文用离体心脏灌流技术研究了丁酸钠对~3H-乙酰基参入大鼠心脏细胞核纽蛋白的影响。用蔗糖梯度离心将大鼠离体灌流心脏的细胞核分为心肌的和非心肌的,分别提取组蛋白。尿素-丙烯酰胺凝胶电泳将组蛋白分为五个组分。其比放射性测定的结果表明,~3H-乙酰基只参入核心组蛋白,程度为H_3>H_(2b)>H_4>H_(2a)。Triton-尿素-丙烯酰胺凝胶电泳图放射自显影结果显示,无论心肌细胞核还是非心肌细胞核,在丁酸钠为1m mol/L情况下,组蛋白H_3又可见三个亚组分(H_(3_1)、H_(3_2)及H_(3_3)),H_4可分出四个亚组分(H_(4_1)、H_(4_2)、H_(4_3)及H_(4_4));其总组蛋白乙酰化程度减低至对照组数值的60％。“冷追击”实验的结果提示,丁酸钠引起高乙酰化组蛋白的积蓄,确是通过其对组蛋白脱乙酰基过程的抑制作用而实现的。

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棉酚对大鼠肾脏γ-谷氨酰转肽酶动力学的影响

张迺哲,付宏杰,符云峯

中国生物化学与分子生物学报. 1988, 4(05): 446-450.

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本文应用动力学分析观察了棉酚对大鼠肾脏γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)的抑制作用。实验结果证实了棉酚在体外是大鼠肾脏γ-GT的抑制剂,而且抑制常数远小于r-GT的天然抑制剂——马尿酸。在不同浓度的棉酚作用下,改变双底物浓度,测定其活力并应用Lineweaver-Burk双倒数作图法,测得棉酚在两种底物情况下,对γ-GT的抑制作用均呈非竞争性抑制。

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大鼠肝含5~1端氨甲酰磷酸合成酶Ⅰ基因的克隆

洪焰,李士谔

中国生物化学与分子生物学报. 1988, 4(05): 451-457.

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为研究氨甲酰磷酸合成酶Ⅰ(CPS Ⅰ)基因表达的调控,我们根据CPS Ⅰ编码1—10氨基酸的mR NA顺序,合成一个30碱基的寡聚核苷酸。以它作为探针从大鼠肝基因库中筛选出一个阳性克隆,λ10。对其中4.5kb插入片断的内切酶谱及部分核苷酸序列测定证明它确含5′上游CPS Ⅰ基因DNA序列。

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正常中国人和DMD患者X染色体Xp~(21)区的RFLP研究

曾溢滔,仇效坤,陈美珏,黄英,薛金荣,徐永华,彭素芬,陆费汉倩,戴超男,邱维勤

中国生物化学与分子生物学报. 1988, 4(05): 458-466.

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本文应用从人类X柒色体Xp~(21)区不同部位分离得到的9种DNA探针,分析了100名正常中国人,38名DMD患者及其母亲X柒色体Xp~(21)区的14个限制性位点多态性(RSP;又称限制性片段长度多态性,RFLP)。发现正常的X染色体与携带DMD基因的X染色体Xp~(21)区的RFLP频率没有明显差别;在38例DMD患者中有7例的X染色体有DNA片段缺失;在本文分析的24例患者母杀中有17例是DMD基因携带者,她们在Xp~(21)区的RFLP均存在杂合的多态性,因此可以应用RFLP连锁分析对这些家系进行DMD的产前诊断。

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恶性肿瘤中溶骨因子的分离鉴定

杜国光,Gino V.Segre,F.Richard Bringhurst

中国生物化学与分子生物学报. 1988, 4(05): 467-473.

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某些源自外胚层的骨外实体瘤,它们并未浸润至骨组织,但可引起血钙显著增高,提示这些肿瘤可能分泌体液因子作用于骨导致溶骨。我们从人膀胱癌、大鼠乳腺癌(Walker 256)及7.12-Dimethyl Benz[α]anthracene诱发的小鼠鳞癌的提取液中初步分离鉴定了一种溶骨因子。肿瘤提取液经ultrogel层析,发观仅有一溶骨活性峰(~(45)Ca自乳鼠顶骨培养中的释出率),相当于表观分子量15,000道尔顿。此溶骨活性峰与PGE2生成的活性峰相平行,两者均能被Indomethacin及煮沸所抑制。在膀胱癌及鳞癌中,溶骨活性峰还与刺激大鼠成骨肉瘤细胞腺苷酸环化酶的活性相平行。实验结果表明此溶骨因子不同于其它已知能引起溶骨的因子。

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用火箭电泳法测定溶菌酶活性

陈捷平,汪秀明,周钺,钟慧平,刘国玲

中国生物化学与分子生物学报. 1988, 4(05): 474-476.

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<正> 测定体液中溶菌酶含量的方法有免疫学和酶学方法两大类。常用的琼脂平板打孔法是一种酶学测定法,其测定范围为10—1000μg/ml。但人和小鼠血清溶菌酶活性分别约为2μg/ml和5μg/ml,低于上述测定范围。因此单用琼脂平板打孔法研究血清溶菌酶活性的细微变化是有困难的。我们将酶学方法和电泳方法结合在一起。由于酶的作用区域增加,灵敏度随之提高。此法类似抗原抗体在电冰过程中形成沉淀的火箭电泳法,但实际上并不是

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棉酚抑制(Na~++k~+)-ATP酶

符云峯,卢振敏,王薇

中国生物化学与分子生物学报. 1988, 4(05): 477-479.

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<正> 棉酚是一种效力很强的非甾体男用节育药。在口服棉酚的成年男性受试者中,在服药期间的不定阶段,有个别出现低血钾及肾性失钾的情况。由于细胞膜(Na~++K~+)-ATP酶是负责细胞内、外之间Na~+、K~+主动性转运的,故推测棉酚的这一毒副作用可能是它抑制跨细胞膜(特别是肾小管细胞)存在的(Na~++K~+)-ATP酶的结果。

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