中国生物化学与分子生物学报

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邓国仁

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(06): 481-485.

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利用多聚酶DNA链延伸反应与限制性内切酶酶解片段长度多态性分析相结合,可简单、迅速、准确地对胃癌组织及细胞株DNA中癌基因c-Ha-ras第12位密码子是否存在点突变进行测定。这个方法是使用非同位素方法对单拷贝基因点突变进行检测的首次报道。

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用琼脂糖亲和层析一步纯化蓖麻毒蛋白

张振范,应文斌,王庆诚

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(06): 486-490.

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本文报道了一种单用琼脂糖(Sepharose4B)来纯化蓖麻毒蛋白的快速简便的方法。我们发现在pH5的条件下,蓖麻毒蛋白和与其密切相关的蓖麻凝集素对琼脂糖的结合能力有很大的差别。在有0.2mol/LD-半乳糖存在下可将蓖麻毒蛋白从Sepharose上洗下,同样条件下蓖麻凝集素仍牢固地结合在柱上。从而经一步柱层析便可得到电泳纯的蓖麻毒蛋白。此法不需另行合成亲和胶,适合于蓖麻毒蛋白的大规模纯化。

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依赖雄激素的大鼠储精囊分泌蛋白的离子交换层析纯化

王震熙,张胜,陈枢青,林国庆

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(06): 491-496.

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本文报道利用阳离子交换层析,纯化了雄激素依赖的大鼠储精囊分泌蛋白(SVPⅡ、SVPⅣ、SVPⅤ_a、SVPⅤ_b及SVPⅥ)。主要纯化步骤包括下列二步:1.Sep-hadex G-100凝胶过滤;2.上样后,联合使用盐梯度和pH梯度,洗脱快速蛋白液相层析(FPLC)系统的阳离子交换柱Mono S。洗脱峰的纯度以变性条件下的聚丙烯酰胶凝胶电泳(SDS-PAGE)和等电聚焦(IEF)鉴定;借此,还测定了已纯化的大鼠储精囊分泌蛋白的分子量和等电点。

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人Ha-ras基因中蛋白质特异结合DNA位点的鉴定

王智,F.F.Becker

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(06): 497-502.

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利用迁移率改变法和DNaseⅠ足纹法观察了Ha-ras癌基因5’端上游序列与特异结合蛋白的相互作用。用限制性内切酶XmaⅠ消化6.6kb Ha-ras基因得到约10个片段,进行3’-末端标记,与T24细胞核提取液反应,经低离子强度聚丙烯酰胺凝胶电泳,发现与蛋白质特异结合的416bp片段,位于Ha-ras基因5’-端上游1230—1646区域内,靠近转录起始点1660bp处(CAP位置)。另一个与蛋白质特异结合的389bp片段,位于转录起始点上游162—551处。

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表皮生长因子对正常细胞与转化细胞染色质蛋白激酶活性的影响

黄平,石星源,童坦君

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(06): 503-508.

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本文研究了正常C3H/10T1/2CI8细胞(一种源于小鼠胚胎的成纤维细胞,简称NC3H/10)与用~3H-TdR转化的C3H/10T1/2CI8细胞(简称TC3H/10)染色质蛋白激酶(CAPK)的作用物特异性,发现这两种细胞的CAPK均能以外源性酸性酪蛋白为作用物,而不以外源性碱性组蛋白为作用物,由此推测CAPK的天然作用物主要为非组蛋白。观察了表皮生长因子(EGF)对培养细胞的CAPK活性的影响,EGF能使NC_3H/10和TC3H/10的CAPK活性分别增加105.6％(P<0.01)和50.7％(P<0.01),后者增加的幅度仅为前者的1/2,说明转化细胞CAPK活性对EGF刺激的敏感性较正常细胞低。EGF和1-油酰-2-乙酰-消旋-甘油(OAG)对无细胞体系的CAPK活性无直接影响,提示EGF可能通过核内受体或OAG以外的其它第二信使来影响CAPK的活性。

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臭味假单胞菌乙酰乙酰辅酶A硫解酶的提纯及性质研究

李钦,L.Nicholas Ornston

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(06): 509-514.

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从臭味假单胞菌中提纯97倍的AcAcCoA硫解酶在聚丙烯酰胺凝胶电泳上是均一的一带。该酶分子量为170,000,每分子含有4个亚基,亚基分子量为42,000。该酶的等电点为pI6.7。它的N-末端为丙氨酸,N-末端是单一的。该酶催化反应的Km值为10.2μmol/L,最大反应速度为16.7μmol/min·mg。臭味假单胞菌细胞粗提液透析后,经DEAE-纤维素(DE-52)柱色谱,从洗脱液中可同时得到四个酶的活力峰:乙酰乙酸琥珀酰辅酶A转移酶,AcAcCoA硫解酶,β-酮已二酸琥珀酰辅酶A转移酶和β-酮己二酸单酰辅酶A硫解酶。一般认为在细菌的芳径代谢中存在β-酮己二酸代谢途径,上述四个酶的活力峰同时存在说明除β-酮已二酸代谢途径外,还同时存在乙酰乙酸代谢途径。

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用改进的寡核苷酸诱导突变法改造人胰岛素前体基因

吴凯瑾,胡美浩

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(06): 515-520.

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我们用改进了的寡聚核苷酸诱导突变法,将两个单一限制性内切酶位点引入人胰岛素前体B链与C链连接处附近,及C链与A铁连接处附近。用含U模板法将B链第30个残基密码子ACC改成ACG,从而引入MluⅠ位点。用修改了的缺口双链DNA突变法,将A链第4个残基密码于GAG改成CTG,引入了一个PstⅠ位点。突变效率的为17％-36％。这个突变体在人胰岛素前体结构及蛋白质折叠的研究中,将有利于更换不同的C-肽。

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双抗性质粒pSC33、pSC48的构建及其特性研究

罗进贤,周桢林,胡晋新

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(06): 521-526.

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截短的短小芽孢杆菌质粒pCJ3与去除了复制功能的金黄色葡萄球菌质粒PUB110经EcoRI酶切,DNA连接酶连接后组建T_o~r及K_m~r的双抗性的重组质粒pSC33和和PSC48。根据电泳迁移率估算pSC33及pSC48的大小分别为6.7及6.27Kb。具有BamHⅠ、AVaⅠ、XbaⅠ及BgLⅡ等限制酶的单切点,其中BgLⅡ切点位于卡那霉素抗性基因内。pSC33及pSC48能转化枯草杆菌各种突变体的感受态细胞,转化率比亲本质粒高一个数量级,也能转化枯草杆菌的原生质体。pSC33及pSC48在枯草杆菌BR151中表现稳定,以PSC48和载体克隆了滑鼠蛇肝线粒体DNA片段。

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生物素标记寡核苷酸探针探测扩增的病理性突变珠蛋白基因

王申五,阮幼林,刘敬忠,姜哲,高庆生,赵艳君,沈岩,吴冠芸,何轮

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(06): 527-531.

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用末端转移酶催化生物素核苷酸底物(Biotin-ll-dUTP)共价连接在合成的寡核苷酸3’羟基末端,从而合成了两种寡核苷酸探针(β~T_(41-42)及β~A_(41-42))。用它们分别与克隆化扩增的正常和突变的β—珠蛋白基因片段杂变。结果表明该探针都具有与~(32)P探针相似的特异性,其杂交的灵敏度为2—3pg(特异序列)。进而将探测HbS基因的正常和异常两种寡核苷酸19聚体(β~A_6和β~S_6)用~(32)P和生物素分别标记;将HbS杂合子病人的白细胞DNA经聚合酶链反应(PCR)法扩增,并以含正常β—珠蛋白基因的DNA片段作对照,与两种探针分别进行斑点杂交。所得结果完全一致;Hbs杂合子DNA对正常和异常探针都显出杂交信号,而正常DNA只与β~A探针显杂交信号。

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丝裂霉素促进活性氧自由基生成的研究

鲁纯素,赵会英,史录文

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(06): 532-536.

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本文探讨了抗癌药丝裂霉素对活性氧自由基,超氧负离子自由基(O_2~-),羟自由基(OH)生成反应的作用,实验表明,丝裂霉素对O_2~-及OH的生成有明显的促进作用,其作用随着丝裂霉素浓度的增加而加强。分别测定了它对两种自由基生成反应的促进率。

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活性氧及过渡金属对关节软骨蛋白聚糖降解的影响

田梦玉,李仙风,张振强,俞小瑞

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(06): 537-542.

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在温育的小牛关节软骨切片介质中加入黄嘌呤氧化酶/次黄嘌呤活性氧产生系统,可使关节软骨蛋白聚糖的降解显著增高。这种作用不能被超氧化物歧化酶或铁络合剂二乙三胺戊乙酸抑制,但可被过氧化氢酶抑制。在温育的介质中加入H_2O_2,也可使关节软骨蛋白聚糖降解增高,Cu~(2+)或Co~(2+)对此有显著促进作用,其它过渡金属则作用不明显。应用Sepharose 6B柱层析,分析软骨蛋白聚糖降解产物,多数实验组只在kD=0处有一个大分子的洗脱峰,但Cu~(2+)+H_2O_2组则在kD=0及0.57处出现两个洗脱峰(分别称为峰Ⅰ及峰Ⅱ)。醋酸纤维素薄膜双向电泳证实峰Ⅱ为硫酸软骨素,提示Cu~(2+)与H_2O_2复合物可导致蛋白聚糖分子的断裂。本研究结果可能有助于阐明某些变性型骨关节疾病的发病机理,例如因缺硒所致的大骨节病等。

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腺苷及其类似物对猪红细胞膜上磷脂酰肌醇磷酸化的抑制作用

陈庆辉,梁念慈

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(06): 543-548.

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本文研究了腺苷及其类似物对猪红细胞膜上磷脂酰肌醇磷酸化的影响。研究结果表明:1、腺苷对磷脂酰肌醇磷酸化有明显的抑制作用,IC_(50)=15μmol/L;动力学分析表明,这种抑制作用机理是与ATP竞争性的;2、腺嘌呤、AMP、ADP、5＇-氯-5＇-脱氧腺苷、阿糖腺苷、2＇-脱氧腺苷对磷脂酰肌醇磷酸化有不同程度的抑制作用;3、cAMP对磷脂酰肌醇磷酸化也有抑制作用,这提示了cAMP与肌醇脂质信使系统有联系;5、6-氯-嘌呤核苷(100μmol/L)对该磷酸化无显著抑制作用。

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抗疟药物氯奎、阿的平、四氢-9-氨基(口了)啶与双链小牛胸腺DNA的结合

Stephen G.Schulman,Leonard S.Rosenberg

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(06): 549-554.

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本文用体相微量量热计所得数据,估算了两种抗疟药物(antimalarial)分子和两种结构上相似的分子与DNA结合时的标准结合热焓。根据在不同离子强度下测定的表观结合常数获得了热力学结合常数。根据这些数据以及标准结合热焓计算出标准结合自由能、标准结合熵。结果发现凡与DNA结合的分子,具有线性芳环结构的,结合时主要取决于热焓的大小。具有脂肪链或脂肪环结构的,结合时主要取决于熵变。

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混合单克隆抗体在固相ELISA双夹心法中的应用研究

杜国光,邱裕民,李倩,刘新军,杨非易,葛韵琴

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(06): 555-559.

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在进行固相ELISA双夹心法时,要选择两种配对的单克隆抗体(McAb)殊非易事。本文用不同McAb的混合物与另一种McAb进行配对夹心,获得了较好的效果。实验表明,在心肌肌球蛋白轻链(CM—LC)的固相ELISA双夹心体系中,以抗CM-LCMcAb(1G6)铺底,(2B4及2F6)混合物为后续复盖抗体,最低检出量可低达10ng/mL,其检出率较单独2B4或单独2F6作为后续复盖抗体者高5—10倍。而若反之,以(2B4及2F6)混合物铺底,1G6作为后续复盖抗体,则其最低检出量竟高至200ng/mL,还不如以其中之一铺底为佳。在人绒毛膜促性腺激素(HCG)的检测体系中,用多克隆抗体与单克隆抗体配对的研究中,也获得了类似的实验结果。

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人尿激酶基因克隆的分离

王嘉玺,郅玉宝,马贤凯,方继明

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(06): 560-562.

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<正> 我们利用噬菌斑原位杂交的方法,从人的基因文库中钓出人尿激酶基因克隆,这对分析尿激酶的基因结构、研究其表达调控都是很有意义的。现将初步结果简报如下: 本研究所用基因文库(吴旻教授惠赠)系将人胎儿食管粘膜总DNA的随机片段,经Burn H I位点插入取代型噬菌体载体EMBL_3,经包装、转染Ecoli K802株而成,滴度为

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G418抗性筛选标记在酵母体系中的应用

张岱,蔡良琬,李进

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(06): 563-564.

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<正> G118是一种氨基苷类抗菌素衍生物,对原核和真核细胞均有毒性作用,能阻断细胞内蛋白质合成。将G418抗性neo基因引入细胞后,neo基因即能编码产生氨基糖苷类3’-磷酸转移酶Ⅰ,它能失活几种不同的2-脱氧链霉氨基糖苷类抗菌素,使其在3’羟基部位磷酸化,

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靶向敏感免疫脂质体的制备及其性能的初步研究

聂松青,曾科,薄惠卿,林克椿

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(06): 565-568.

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<正> 靶向敏感免疫脂质体(TSIL)是利用脂质体的良好载药性能和抗体特别是单抗的特异寻靶能力,并将二者结合起来达到定向释放药物的一种脂质体。目前在国际上研究较多,但国内尚未见报道。我们在参照国外文献的基础上,利用羊抗兔IgG作为抗体,并将其与棕榈酸偶联,然后将棕榈酰抗体掺入到二油酰磷脂酰乙醇胺DOPE中。DOPE本身在常温和生

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生物化学杂志第五卷(1989年)总目录

中国生物化学与分子生物学报. 1989, 5(06): 569-571.

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