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• 1990年, 6卷, 第03期
  刊出日期：1990-06-20

    

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  人参多肽基因的化学合成和克隆

  张今,张红缨,陈冬松,杜文媛,郑兆鑫,严维跃

  中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(03): 193-197.

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  本文报道了具有降血糖作用的人参多肽基因的设计及用固相亚磷酰胺法的合成。再以质粒pUC19作为克隆载体,以大肠杆菌JM101为受体菌,克隆了人参多肽基因,并成功地获得了克隆菌株。
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  调节轻链在平滑肌肌球蛋白分子上的定位

  陈明,李爱媛

  中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(03): 198-202.

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  应用凝胶电泳覆盖技术和放射自显影法研究了32~P-标记的平滑肌肌球蛋白调节轻链在肌球蛋白分子上的定位。实验结果表明调节轻链(LC_(20))可重新结合于平滑肌肌球蛋白重链(200kD),重酶解肌球蛋白(130kD)及其62kD和26kD肽段上。这提示调节轻链的结合点位于平滑肌肌球蛋白亚段-1羧基端的26kD肽段上。
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  大鼠胃泌酸腺细胞膜和肝匀浆对五肽胃泌素及其类似物的降解

  王新昌,于志江,陈钧辉,罗喜牛,练鸿振

  中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(03): 203-207.

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  本文用HPLC分离五肽胃泌素(Pentagastrin,Boc-β-Ala-Trp-Met-Asp-Phe·NH_2,PG_(1-5))及其N-端无保护基的TFA·五肽(β-Ala-Trp-Met-Asp-Pne·NH_2·TFA,TFA·PA_(1-5))被胃泌酸细胞膜和肝匀浆降解之产物,并对它们的氨基酸组成作了分析,又用薄层层析作了进一步验证,从而提出了酶促降解时可能的酶切位点。实验结果表明,N-端的Boc-基团能大幅度增加对酶降解的抵抗力,这从一个方面解释了为什么商品五肽胃泌素的泌酸活性大于其它胃泌素类似物的原因。
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  微量定磷法测定红细胞钙调素含量

  鄢佳程,吴兆锋,刘秉文

  中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(03): 208-211.

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  磷酸二酯酶在钙调素(CaM)激活下水解cAMP为AMP。后者经蛇毒水解为无机磷酸和腺苷。用孔雀绿显色测定无机磷酸量与标准CaM比较即可测出CaM活性。该法测定CaM灵敏度3.4ng,可测范围3.4—48ng,批间变异系数3.8％—6.4％。 纯化的红细胞(RBC)经超声破碎,沸水浴加热,离心上清与标准CaM所作的磷酸二脂酶平行激活曲线呈正相关(r=0.9900,p<0.0005)。RBC CaM含量测定,批间变异系数11.5％,回收率97.8％±2.0％。本法测得30例正常人RBC CaM含量为6.31±1.5fg/cell,性别之间无显著差异(p>0.5)
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  苄基异喹啉类化合物与钙调素相互作用的荧光光谱研究

  陈少林,胡卓逸,郝志奇

  中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(03): 212-216.

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  苄基异喹啉类化合物拮抗钙调素(CaM)并抑制依赖CaM的环核苷酸磷酸二酯酶(CaM-PDE)的活力;用荧光测定法可检测它们与钙调素的相互作用。 Ca~(2+)存在下蝙蝙葛碱(D_1)及其衍生物(D_(14))在激发波长340nm处最大发射波长分别为463和455nm,结合CaM后荧光量子产率增加两倍多。它们同CaM的结合均依赖于Ca~(2+)。 本文制备的丹磺酰基CaM(D-CaM)结合Ca~(2+)后荧光最大发射峰值兰移(518→508nm),荧光强度增加22％。在Ca~(2+)存在下小檗胺衍生物E_6能与CaM结合并淬灭Ca~(2+)-D-CaM荧光。 单苄基异喹啉类化合物86040、86045能淬灭CaM的酪氨酸残基的特征荧光。 实验表明,CaM结合D_(14)、E_6、86040和86045的kd值分别为1.3、1.8、9.5和15.7μmol/L,所观察的化合物与CaM的亲和力的大小与它们拮抗CaM,抑制CaM-PDE的酶活力相对应。
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  4-叠氮雌酮在激光激发下与氨基酸的反应

  傅学胜,雷小平,金长振

  中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(03): 217-221.

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  从4-硝基雌酮出发,经过还原、重氮化、叠氮化钠处理,得到4-叠氮雌酮。本研究表明,在280nm激光照射下,该化合物能和半胱氨酸、精氨酸、蛋氨酸、组氨酸和赖氨酸发生反应,生成新的化合物,而不与丙氮酸发生反应。如这类反应是发生在雌激素依赖性肿瘤细胞内的雌激素受体上,可能会有抑制肿瘤生长的作用。本实验还表明,在560nm激光照射下,4-叠氮雌酮与上述几种氨基酸均未见有反应发生。
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  Na~(+)、Ca~(2+)、Cu~(2+)和Zn~(2+)与HSA相互作用的~(23)(Na)-NMR研究

  赵明,赵修竹,吴钦义,任恕,曾仁端

  中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(03): 222-228.

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  本文应用~23Na-NMR波谱技术,研究了Na~(+)、Ca~(2+)、Cu~(2+)和Zn~(2+)与人体血清白蛋白(HSA)的相互作用。在实验基础上,通过引入两位快交换模型,拟合计算获得了Na~(+)与HSA相互作用的结合常数和处于结合状态Na~(+)的相关时间;实验表明Ca~(2+)能与Na~(+)竞争同HSA结合,拟合计算获得了两者与HSA相互作用结合常数的比值,棕榈酸钠能增强Ca~(2+)同Na~(+)竞争与HSA结合的能力;从实验上未能观察到Cu~(2+)、Zn~(2+)能同Na~(+)竞争与HSA相互作用的证据。
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  艾滋病毒-env26肽基因的化学合成及克隆

  项秉懿,杨静华,陈南春,沈利群,苏成芝

  中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(03): 229-234.

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  选用HTLV-Ⅲ前病毒核酸序列中的6333—6410作为合成HIV-env26肽结构基因,加上必要序列及接头共104bp,分成8个寡核苷酸片段,使结构基因能自身连接成多重串联体。用DNA合成仪合成。组装后与高效表达质粒pRC23重组,转化TAP106。经筛选、鉴定及DNA序列分析,得到一株含有HIV-env26肽基因4重串联体的重组菌,命名为pXY104。
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  艾滋病毒核酸探针的制备

  项秉懿,苏成芝

  中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(03): 235-237.

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  采用PXY104(含化学合成的HIV-env26肽基因4重串联体结构)为材料。温和裂解法提取质粒DNA,制备电泳纯化,Hind Ⅲ和EcoR Ⅰ酶解,低融点琼脂糖凝胶电泳回收HIV-DNA片段作为核酸探针;用[α-~(32)P]dATP通过缺口移位法标记,比放射性为4.05—6.69×10~7cpm/μgDNA通过分子杂交能测出lPg的靶DNA,初步试验结果表明,在本文试验条件下,可用该探针检测与之互补的核酸分子。
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  CWE纯系小鼠脑组织发育过程中细胞癌基因及其表达研究

  孙宁,孙芝琳

  中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(03): 238-242.

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  本文以Ha-ras.c-fos、c-myc、v-erbB、mos五种癌基因片段为分子探针,应用斑点杂交技术,对CWE纯系小鼠脑组织发育的四个时期(胚胎期、新生期、性成熟期、体成熟期)的RNA进行分子杂交分析。发现:在实验各期中这几种癌基因的表达有较明显的变化。Ha-ras、c-fos、c-myc基因的表达在胚胎期和新生期脑组织中较高;v-erbB基因的表达在性成熟期脑组织中较高;mos基因在实验各期均无表达。DNA斑点杂交结果:小鼠脑组织发育各期均未观察到癌基因扩增现象。Southern杂交结果:CWE小鼠发育的各期均显示:5.4kb、3.4kb、1.8kb、1.0kb四条c-fos基因区带;7.4kb、4.5kb、3.4kb三条c-myc基因区带。结果表明:不同细胞癌基因在小鼠胚胎发育和胚后发育中有不同的表达。
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  溶葡球菌酶前体及前体加工蛋白酶的生成控制和纯化

  周润琦,Recsei,A.Paul

  中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(03): 243-248.

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  为深入探讨溶葡球菌酶前体加工转化为成熟的溶葡球菌酶的机制,本文通过条件控制分别从Staphylococcus simulans的培养液中获得了溶葡球菌酶前体和它的加工蛋白酶,并分别通过HPLC和Affi-Gel 501亲和层析对它们进行了纯化,根据聚丙烯酰胺凝胶电泳和凝胶等电聚焦电泳,表明二者已基本上达到均一的程度。在此基础上,又进行了溶葡球菌酶前体的体外加工转化实验。
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  脊髓灰质炎病毒合成肽的免疫诱导作用

  胡希民,叶萌,金玉才,贾玉芳,李文智,李云塘,徐之雄,宋霞,黄惟德,徐来根,郑坚

  中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(03): 249-253.

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  本文报道了模拟脊髓灰质类Ⅰ型病毒Mahoney株外壳蛋白的氨基酸顺序,用化学方法合成了位于VP1 70～75、95～102、93～103、70～75+93～103和VP 3132～143的五段肽。合成的肽段与载体蛋白偶联后免疫家兎能产生明显的免疫记忆作用。结果表明这些合成肽均能被脊髓灰质炎多克隆抗血清所识别,具有一定的免疫原性。
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  化学法合成生物素标记寡核苷酸探针

  王申五,孙强,阮幼林,高庆生,赵艳君

  中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(03): 254-258.

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  生物素可通过氨烷基磷酰胺基团连接到寡核苷酸5'末端,反应在水溶液中进行,核苷酸的侧链基团不用保护。我们以这种化学法合成了生物素标记的寡核苷酸探针,其显色灵敏度达50pg,杂交灵敏度达0.4fmol,并与酶标生物素寡核苷酸探针进行了比较,也对两种不同显色体系作了比较。
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  生物素标记DX_(13)探针及一例甲型血友病家系分析

  王申五,阮幼林,沈岩,赵艳君,何轮

  中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(03): 259-263.

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  以Bio-ll-dUTP替代dTTP经二步法缺口平移标记DNA片段制得生物素DX_(13)探针。其碱性磷酸酶ABC体系显色灵敏度为100fg(约5×10~(-18)mol);与5μg染色体DNA进行Southern印迹杂交,可得清晰的单拷贝杂交区带。以此探针对一血友病家系做RFLP分析,确定两成员为甲型血友病基因携带者。与32P探针对比,两种探针的杂交和分析结果完全一致。表明高标记的生物素探针可应用于单拷贝基因分析和基因诊断。
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  艾氏腹水癌患鼠腹水中一种高分子量DNA结合蛋白的分离

  刘宇红,龚秋明,童坦君

  中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(03): 264-267.

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  本文利用免疫吸收法和免疫亲和层析法,从艾氏腹水癌患鼠腹水DNA结合蛋白中,分离得到了一种高分子量DNA结合蛋白。在免疫双扩散反应中,它与抗艾氏腹水癌患鼠血清DNA结合蛋白的兎抗血清反应形成一条沉淀线,但与正常小鼠血清DNA结合蛋白的兎抗血清不形成沉淀线。该DNA结合蛋白样品用2-巯基乙醇还原后,经SDC-PAGE分析,测得其分子量约为41000。
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  HeLa细胞热休克蛋白的代谢动力学

  徐明波,程素琦

  中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(03): 268-272.

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  HeLa细胞经45℃,15min应激后,可诱导一组分子量为100,85,73,70,54kD的热休克蛋白,其中分子量为73/70kD的HSP产量最高。在产生HSP的同时,正常蛋白质合成受到抑制,并在随后数小时内恢复。HSP73/70在应激后能迅速诱导产生,应激后4—6小时为其合成高峰,10小时后明显减少,24小时恢复正常。其分解遵循指数规律,半衰期为49.9小时。
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  长白山树舌水溶性色素多糖CF_1的分离纯化与结构研究

  梁忠岩,张翼伸,苗春艳

  中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(03): 273-278.

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  从长白山树舌子实体中分离色素多糖,其均一性检查用Sepharose CL-4B柱层析、高压玻璃纤维纸电泳、醋酸纤维素薄膜电泳、超离心分析等方法,用凝胶层析测定的分子量为18.5万。 均一的脱色多糖(CF_1a)分子量为14万。用红外光谱,G.C,~1H-N.M.R,~(13)CN.M.R,高碘酸氧化与Smith降解,甲基化分析等确定其结构为葡聚糖,其基本结构可能如下式: 总色素用次氯酸氧化法测定为24％。在色素多糖中的色素可能是聚合形式。色 素经薄层层析、紫外吸收性质检查等表明可能是新黄酮类化合物。
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  序列固相凝集素亲和层析法研究大鼠诱发肝癌中碱性磷酸酶ALP的糖链变化

  赵毅,陈惠黎

  中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(03): 279-284.

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  凝集素是一种能同复合糖中不同糖基序列特异性相结合的糖结合蛋白质。本文在研究二乙基亚硝胺诱发肝癌中碱性磷酸酶(ALP)活力和同工酶的基础上,利用四种固相凝集素柱组成的序列亲和层析,配合外切糖苷酶β-N-酰氨基葡萄糖苷酶,研究了诱发肝癌ALP糖链中“Bisecting”GlcNAc残基的变化。研究结果表明:(1)大鼠诱发肝癌ALP的活性较正常肝脏明显增高,其性质和正常肝脏ALP基本相同,两者均属于组织非特异性ALP,提示大鼠肝癌发生过程中没有同工酶谱的变化。(2)大鼠诱发肝癌ALP糖链的“Bisecting”GlcNAc残基含量较正常鼠肝明显增加。
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  用高碘酸盐活化葡聚糖凝胶制备亲和吸附剂的研究

  刘建华,徐章雄

  中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(03): 285-287.

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  <正> 用高碘酸盐活化的Sephadex与鸡卵类粘蛋白偶合制备分离纯化胰蛋白酶的亲和吸附剂。该方法比CNBr活化Sepharose 4B制备亲和吸附剂的方法具有操作安全,价格低廉等优点。活化载体在4℃保存较长时间不失去键合能力。该亲和吸附剂可制备得比活力为11228.8u/mgBAEE单位电泳单带纯胰蛋白酶,并能反复使用十余次,仍具有较强亲和吸附能力。酶