中国生物化学与分子生物学报

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赵荧,罗贵民,杨世忱,陈惠鹏,聂丽萍

中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(06): 481-485.

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本文研究了不同底物(N_2,H_2,N_2O,NaN_3,C_2H_2)对棕色固氮菌固氮酶及其钼铁蛋白荧光光谱的影响。结果表明,上述底物均能络合在钼铁蛋白及固氮酶上,但络合程度不同,从而为固氮酶系统有多个不同的底物络合中心,底物络合中心在钼铁蛋白分子上,铁蛋白对钼铁蛋白有变构作用,提供了光谱学证据。

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冬虫夏草多糖的分子结构与免疫活性

龚敏,朱勤,王彤,王新力,马继霞,张惟傑

中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(06): 486-492.

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冬虫夏草多糖(在本文中名为CS-81002)是由冬虫夏草菌Cordyceps sinensis(Berk)Sacc在人工发酵条件下产生的胞外多糖。用凝胶过滤法测出CS-81002的分子量Mr=43kD。CS-81002的单糖组成为Man:Gal:Glc=10.3:3.6:1。甲基化分析和部份酸水解结果表明,CS-81002是多分支的杂多糖,由→6)-Manp-(1→形成主链,大约每10个主链Man残基中,有6个在C3位上被取代(即形成→3,6)-Manp-(1→分支),有4个在位C2上被取代(即形成→2,6-Manp-(1→分支),从而形成侧链。主链中还有少许未被取代的Man残基。侧链则由→3-)-Galf-(1→,→4)-Glcf-(1→,→4)-Manp-(1→和→2)-Manp-(1→组成。位于非还原末端的,则三种单糖残基都有。CS-81002在5mg/kg体重×12剂量条件下,对正常的昆明小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能有显著促进作用。在同样剂量条件下,对正常LACA小鼠脾脏溶血斑形成细胞(PFC)对绵羊红细胞的溶血作用无显著影响。不同程度的部份酸水解可使CS-81002的分子量下降,分支减少,并且对巨噬细胞吞噬功能的促进作用亦有下降趋势。在所得到的各个部份酸水解级分(分子量分别为41000,40000,32000,16000和12000)中,分子量为12000的级分对巨噬细胞吞噬功能无促进作用。

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腺嘌呤核苷脱氨酶及核苷运转系统对精子运动的调节作用

凌晓阳,Dale D.Hoskins

中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(06): 493-498.

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腺嘌呤核苷(ADO)和它的类似物2-Cl-ADO对牛附睾尾部精子的运动有刺激作用,为了探讨ADO及其类似物对精子运动调节作用的机理,我们从ADO受体,核苷运转系统(NTS)及腺苷脱氨酶(ADA)三个方面对牛附睾尾部的精子进行了研究。我们发现腺苷受体不存在于牛精子膜上,但ADA和NTS以膜蛋白的形式结合在精子膜上,并对精子体内的ADO浓度起调节作用。我们的结论是ADO及其类似物对牛精子运动的调节作用是首先通过精子膜上的ADA和NTS影响精子体内的ADO浓度,进而ADO又通过调节钙离子浓度刺激牛精子运动。

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胆汁β-葡萄糖醛酸苷酶的性质及其计算荧光法

宋立新,何善述

中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(06): 499-504.

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胆汁经Sephadex G-25分子筛层析和DEAE-纤维素吸附处理,除去其中直接胆红素及胆汁酸盐,然后对其中的β-葡萄糖醛酸苷酶(GUSB)的性质进行了详细研究:该酶的最适温度为56℃;最适pH为4.5;以4mu Gr为底物测得Km为0.68mmol/L;直接胆红素是其竞争性抑制剂,其k_i=2.04×10~(-3)mmol/L;PI_1=6.0—6.2,PI_2=7.2—7.4,MW=280kD。根据竞争性抑制的米氏方程式设计建立了一个在直接胆红素并存的条件下,定量测定胆汁GUSB的计算荧光法,准确性为97.97±1.79％,重复性CV=1.2％,测定时间大大缩短。利用本法在pH4.5和7.0条件下测定了20例胆红素胆结石和17例胆固醇胆结石患者的胆汁GUSB的真实活性。结果指出:不论在pH4.5或7.0条件下,前组活性均显著高于后组(P<0.01)。证明胆汁中高GUSB活性与胆红素胆结石的形成有密切关系。

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中国鲎凝集素的分离纯化及性质研究

杨端,王正新,张龙翔

中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(06): 505-510.

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经N-乙酰氨基葡萄糖交联琼脂糖亲和层析及以交联琼脂糖介质的高效液相分子筛层析,从中国鲎细胞溶解物中分离纯化了一种凝集素,其活性比原料鲎试剂提高128倍。鲎凝集素SDS电泳时表现出分子量为69000,和72000的二个亚基。N-乙酰氨基葡萄糖、D-半乳糖,D-甘露糖及岩藻糖等对鲎凝集素凝集鸡红细胞的活性有显著抑制作用,加热60℃,10分钟可使凝集素活性基本丧失。CaCl_2为凝集素活性所必需。鲎凝集素与肺炎球菌C多糖有沉淀反应。

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BamHI DNA甲基化酶的提纯及物理化学性质

薛继艳,何忠效

中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(06): 511-516.

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通过硫酸铵盐析,DEAE-纤维素柱层析,磷酸纤维素亲和层析及SephadexG-100凝胶过滤法,从噬淀粉芽孢杆菌HI(Bacillus amyloliguefaciens HI)提纯了DNA甲基化酶。用聚丙烯酰胺凝胶电泳检查,已达电泳均一,比活力提高了326倍。并用聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳和Sephadex G-100凝胶过滤法测得其天然酶的分子量为273000,又用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测得它的亚基分子量为34500,故该酶有8个分子量相同的亚基。用凝胶电聚焦法测得其pI_(22 c)=9.0。

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人胎盘酸性β-1,4葡萄糖苷酶的纯化及部分性质

王瑞秀,何善述

中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(06): 517-521.

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本文以正常人胎盘为材料,通过匀浆、硫酸铵分级分离、20％正丁醇抽提、Sephadex G-200凝胶过滤及Concanavalin A-Sepharose 4B亲和层析等分离纯化步骤,制备获得了纯化3705倍的酸性β-1,4葡萄糖苷酶,其比活性和获得率分别为277261.33n mol·(mg Prot·h)~(-1)和14.3％。经agarosn-IEF检验,该纯化的酸性β-1,4葡萄糖苷酶已达蛋白电泳单点纯,PI为5.2。经3～28％梯度PAGE,求知该酶单体分子量为74kD。该纯制酶极不稳定,4℃贮存6天后活性即降低50％以上,与其特异性抗体结合后,活性全部被抑制。

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猪肝DFPase的结构及某些性质的研究

张应玖,曹淑桂,丁忠田,马林,程玉华

中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(06): 522-526.

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本文对纯化了的猪肝DFPase~[**]进行了一系列结构和性质的测定。用重复中毒的方法证明了猪肝中低分子量二异丙基氟磷酸酯(DFP)水解酶(DFPase)是属于催化酶。分析了DFPase的氨基酸组成并求出其分子量为17900。该酶的km值为6.7×10~(-4)mol/L。催化水解DFP的最适pH为7.5～7.7,反应最佳温度为70℃。根据催化水解DFP、Soman的活力以及Mn~(2+)对此酶的影响证明该酶属于Mazur type DFPase~[1]。

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胆碱脱氢酶与脂质体的重组

刘林,林其谁

中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(06): 527-532.

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用预先制备的脂质体与含Triton X-100的胆碱脱氢酶保温随后用Bio-beadsSM-2去除去垢剂而使酶重组到脂质体,Triton X-100的浓度,磷脂-蛋白比,Mg~(2+),pH等均影响重组,脂质体的大小在重组中不是关键因素,重组酶的活力比纯化酶增加70％,重组酶对PMS的Km,相转变温度及活化能均与线粒体内膜接近而不同于纯化酶。

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葡萄糖淀粉酶色氨酸残基及底物结合位点的研究

张崇华,袁静明

中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(06): 533-537.

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本文用N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)对葡萄糖淀粉酶进行特异性修饰,当酶分子表面有3个色氨酸残基被修饰后,酶活力完全丧失。用邹氏图解法测得酶活性中心有一个色氨酸残基是必需的。如果在酶液中加入不同的底物再用NBS氧化,用荧光发射和荧光猝灭光谱检测表明,底物对酶分子有不同程度的保护作用。在被测试的三种底物中,这种保护能力依为糊精>淀粉>麦芽糖。

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用聚合酶链反应和生物素寡核苷酸探针分析HLA-DQα的基因型

刘晓荣,金坤林,王申五,张萍,陆道培

中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(06): 538-542.

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来自不同人的染色体DNA经聚合酶链反应(PCR)将其HLA-DQα基因的多态区242bp人工地扩增30个循环。用1/10扩增产物点在尼龙膜上。将四种不同的等位基因特异的寡核苷酸(ASOs)经Bio-11-duTP进行3'末端标记得生物素探针。以此探针对不同扩增标本做狭缝印迹杂交。结果表明用此种非放射性的方法能探测出人白细胞表面抗原DQα基因的微多态性,从而得到不同个体的基因型。ASO分型是对血清HLA分型的重要补充和发展,它在骨髓或器官移植以及法医的个人识别中有一定实用价值。

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体外合成大鼠血清淀粉样A蛋白

马康涛,张迺蘅,廖晓令

中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(06): 543-548.

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血清淀粉样A蛋白(Serum Amyloid A-SAA)是一个急性期蛋白,在人和小鼠血浆中长时间维持较高的浓度,即会发展为病理学的淀粉样变。但是在大鼠中从未发现这种情况,而对大鼠SAA的研究人们还一无所知。我们使用体外系统研究了大鼠血清淀粉样A蛋白的转录和转译。在体外系统中合成的大鼠SAAmRNA的分子量约为0.5～0.56kb,用合成的mRNA转译的蛋白质分子量为8.2～10kD。用体外系统转录和转译的结果证明,这个体系重复性好,与体内的结果相似。

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HMG_(17)非组蛋白与转录活性基因的关系

刘庆俐,何开玲

中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(06): 549-552.

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用核内蛋白质与经0.4mol/L NaCL抽提后的细胞核重组,以DNA酶I消化法为测定活性基因的指标,观察猪胸腺HMG_(17)非组蛋白对细胞核中活性基因的影响。结果显示:猪胸腺HMG_(17)使细胞核对DNA酶I作用的敏感性增加,因此认为HMG17为使细胞核胞核中基因呈较大活性的重要因素。

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视黄酸对人肝癌细胞蛋白激酶的影响

刘毅,艾兆伟,陈惠黎

中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(06): 553-557.

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视黄酸(RA)处理SMMC-7721人肝癌细胞株72小时后,胞浆、膜性组分的蛋白激酶C(PK-C)的活力及比活力均下降,活力分别下降44.9％和48.8％,比活力下降42.7％和35.0％。然而,胞浆与膜性组分的活力,比活力比值在RA处理前后并无十分明显的变化,这提示在RA作用过程中,未发生PK-C的膜-浆转位。蛋白激酶A(PK-A)的变化则相反,RA处理72小时,活力、比活力上升了295％,258％。PK-A/PK-C的活力比值则从0.342增加到1.849,比活力比值从0.210增加到0.897。因PKC和PKA分别和细胞的去分化性增殖和分化有关,故上述结果和我们已报道的RA可抑制SMMC-7721细胞株的增殖和促进其分化相一致。

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人绒毛膜促性腺激素β亚基酶解片段免疫性研究

石湛萍,杜国光,李伟雄,刘新军,李受增,徐一树,王悦

中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(06): 558-562.

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以嗜热菌蛋白酶将人绒毛膜促性腺激素(HCG)β亚单位进行酶解,用HPLC分离酶解产物。酶解片段经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定口壬二条带。表观分子量分别为7600及20000。对照氨基酸序列分析,前者为近C端30肽(含糖链),为主要片段;后者为近N端片段。将此酶解片段混合物免疫家兔,用完整HCG作测试抗原,抗体滴度达1:204,800(Avidin-Biotin Micro-ELISA法),与促黄体激素(LH)交叉反应甚弱。表明该片段仍保留有完整HCG的主要抗原决定簇,有较强的免疫原性,可望作为免疫避孕疫苗。

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胃癌和癌旁组织癌基因c-Ha-ras第12位密码点突变测定的研究

孙文东,刘秀怀,邓国仁

中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(06): 563-565.

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<正> 胃癌是我国发病率、死亡率最高的肿瘤之一,癌基因c-Ha-ras第12位密码子的点突变(鸟嘌呤突变为胸腺嘧啶)是其激活的重要方式之一,这一突变使c-Ha-ras的产物p21蛋白第12位氨基酸从正常的甘氨酸变为胃癌中的缬氨酸~[1-4]。点突变的测定可成为临床医生判断术后患者预后的有用指标,为拟定更有效的治疗方案提供帮助。据有关资料统计,点突变阳性及阴性患者的术后生存期分别为11.3±4.5个月和>29±8.1个月,两组间有显著差异

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固定化酶及双酶共反应

周慧,查晓,孔维,李惟,沈家(马总)

中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(06): 566-568.

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<正> 葡萄糖异构酶(GI)将糖化酶(GA)的水解淀粉产物葡萄糖转化为果糖。这二种酶是生产高果糖浆(HFCS)不可缺少的酶。我们根据离子型载体可以改变固定化酶最适PH的道理,将GA固定在磺酸型聚苯乙烯载体上,其最适pH由4.6移到了6.8。将GI固定在季胺多羟基聚苯乙烯载体上,其PH-活力曲线变宽,在pH7.0的活力由48％提高到66％。本文首次创建了使两种酶的最适PH相向移动的双酶共反应体系。其意义在于更加广泛地利用固定化多酶体系的动力学优势。

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生物化学杂志第六卷1990年总目录

中国生物化学与分子生物学报. 1990, 6(06): 569-576.

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