中国生物化学与分子生物学报

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王军;欧绍武;王运杰;宗志红

中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(04): 287-294.

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Nav1.5α亚单位是电压-门控Nav1.5Na+通道发挥作用的核心亚单位，在心肌中首先被成功克隆，是心脏电生理活动最主要的Na+通道α亚单位.最新的研究发现,Nav1.5不仅可以在神经元等非心肌组织中表达，而且其表达的选择性剪接体的类型及电生理学特性与心肌Nav1.5亦不同.目前，不仅对Nav1.5发挥功能的调控机制及与心脏传导功能障碍等疾病的发病关系有了深入的了解，而且一些常见疾病，如肿瘤和癫痫等的发生也被认为可能和Nav1 .5有关. 本文结合国内外对Nav1.5的最新研究及本小组的工作，对Nav1.5的结构、选择性剪接、基因定位、电生理学活性及与疾病的关系作一详细综述.

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植物冷驯化相关信号机制

夏金婵,吕强，郭梅芳，何奕昆

中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(04): 295-301.

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植物经过非致死温度的处理可以获得更强的抗冷能力叫做冷驯化，主要包括寒驯化和冻驯化 .在冷驯化过程中，质膜首先感受冷信号，调节胞质中IP3的含量，诱导胞质Ca2+浓度的升高，从而激活CBF基因的表达.至今已经克隆了大量的冷调控基因，组成了复杂的信号传导网络，其中ICE1-CBF-COR通路在植物的冷驯化过程中起到重要的作用.ICE1基因编码一个MYB类型的碱性螺旋环-螺旋（bHLH）转录因子，在上游调节CBF和其它转录因子的表达，提高抗冷性. HOS1蛋白通过泛素化介导的蛋白降解负调控ICE1，另外，CBF还通过转录的自我调控保持恰当的表达水平.基因的分析研究证明,RNA修饰和核质转运在植物的抗冷过程中也具有重要作用.在不依赖于CBF的途径中，转录因子HOS9和HOS10在调节抗冷有关基因的表达和提高抗冷能力方面具有至关重要的作用.

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MAR结合蛋白及其调控功能

王天云，张俊河，张煜，王俐

中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(04): 302-306.

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核基质结合区（MAR)是真核生物中能与核基质结合的DNA片段.MAR通过与特异的MAR结合蛋白相互作用，在提高转基因表达水平、降低转基因个体之间表达水平差异以及染色体包装等方面具有重要的调控作用.目前,已在不同物种分离MAR结合蛋白，分别为核基质成分、核仁蛋白、组蛋白、叶绿体蛋白等，它们在调控基因表达、细胞发育、细胞凋亡、染色体包装等方面具有重要的功能.本文综述了目前分离出的MAR结合蛋白及其功能，并对MAR-结合蛋白研究作一展望.

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植物多糖对巨噬细胞的免疫调节作用

谢燕霞，安利国，杨桂文

中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(04): 307-314.

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植物多糖是一类广泛存在于植物中具有多种生物学活性的天然大分子物质，对免疫系统的影响普遍认为是通过对天然免疫系统的调节作用，尤其是对巨噬细胞免疫功能的影响. 许多研究表明，植物多糖与巨噬细胞表面多种受体结合启动不同信号途径而发挥生物学作用.本文综述了来源于不同种属的多种植物多糖对巨噬细胞释放活性氧、分泌细胞因子和趋化因子等的免疫调节作用，为新型免疫调节药物的研究开发提供了新的思路.

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转人端粒酶基因骨髓间充质干细胞的蛋白表达谱分析

黄国平;杨金凤;郭春娟;黄建平;王义刚;郑强;沈丹;;潘志军;王金福

中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(04): 315-328.

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通过外源表达人端粒酶基因，构建了具有长期传代能力的骨髓间充质干细胞系（hTERT-hMSC），并在传代过程中尚未发现有丧失接触性生长抑制和转型现象.本文主要目的是采用双向凝胶电泳技术和MALDI-TOF-MS蛋白质谱技术分析hTERT-hMSC 细胞的蛋白差异表达图谱，研究表达外源端粒酶基因对骨髓间充质干细胞生物学特性影响的可能机制.通过分析原代第12代hMSC、第95代和275代hTERT-hMSC的蛋白凝胶图，获得原代第12代hMSC总共1543±145个蛋白点，第95代hTERT-hMSC 1 611±186个蛋白点、275代hTERT-hMSC 1451±126 个蛋白点.质谱分析鉴定100种蛋白质，其中有20种有显著差异表达.结果表明，膜联蛋白（ANX）和GSTP1表达的下调以及内质网钙结合蛋白1（RCN1）、伴侣素CCT、TUBA1B和ACTG1表达的上调可能提升了人骨髓间充质干细胞扩增的能力，而prohibitin 蛋白和p53 蛋白维持正常表达可能对hTERT-hMSC 维持细胞接触性生长抑制起着重要作用.

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中华雏蝗（Chorthippus chinensis Tarb）线粒体基因组分析

刘艳,黄原

中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(04): 329-335.

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采用Lon-PCR扩增线粒体全基因组和保守引物步移法结合克隆方法测定并拼接获得了中华雏蝗（Chorthippus chinensis Tarb）线粒体基因组全序列．序列的注释和分析结果表明,中华雏蝗线粒体基因组序列全长15 599 bp，共有13个编码蛋白质基因、22个tRNA基因、2个rRNA基因和1个A+T富集区．基因顺序与非洲飞蝗（Locusta migratoria）相同，也发生了2个 tRNA Asp(D)和tRNALys(K)的倒置．13个编码蛋白质基因都使用了ATN作为起始密码子．除ND1以TAG和ND5的终止密码子为不完全的T外，其余11个编码蛋白质基因的终止密码子都为完整的TAA．6种直翅类昆虫13个蛋白质的氨基酸序列的联合数据集构建的系统树与形态分类系统一致，中华雏蝗与非洲飞蝗为姐妹群，并与东方蝼蛄构成一单系群．

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异育银鲫c型溶菌酶全长cDNA序列的生物信息学分析及其组织表达分析

钱曦;华雪铭;黄旭雄;冷向军;周洪琪

中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(04): 337-347.

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利用RACE及克隆等方法获得了异育银鲫（Carassius auratus gibelio）c型溶菌酶基因全长cDNA序列．序列分析表明，所克隆的异育银鲫溶菌酶的cDNA全长751 bp，包括溶菌酶基因开放阅读框（ORF）438 bp,5′ 非编码区（UTR）为109 bp和3′ UTR为204 bp．438 bp ORF共编码146个氨基酸，其成熟肽的分子量预测值为14　543.6,理论等电点为8.86．通过ClustalW软件,将异育银鲫和其它多个物种c型溶菌酶的氨基酸序列进行多序列比对发现，所克隆的异育银鲫溶菌酶编码的氨基酸序列中存在c型溶菌酶的活性中心（Glu53和Asp69），且与活性位点相邻的氨基酸序列高度保守．同时,8个保守的半胱氨酸残基也与其它物种的c型溶菌酶相一致．结合BLASTN分析的结果，可以确认所获得的异育银鲫溶菌酶cDNA序列属于c型溶菌酶．异育银鲫c型溶菌酶和人c型溶菌酶（pdb 1at6_）在蛋白质序列上有50%相似性，其三维（3-D）结构非常类似．通过氨基酸空间位置比较发现，两者具有类似的酶活中心，异育银鲫c型溶菌酶只能形成3个二硫键，比人少1个．荧光定量RT-PCR检测和溶菌酶活性测定显示，异育银鲫头肾和脾脏c型溶菌酶mRNA的表达量约为肝胰脏的2.9 倍和1.7 倍，异育银鲫头肾和脾脏的溶菌酶活性约为肝胰脏的6.2 倍和4倍．

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游仆虫重组核糖体蛋白L11与肽链释放因子的体外相互作用分析

王玉瑶;-张志云;-柴宝峰;-梁爱华

中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(04): 348-351.

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核糖体蛋白L11(ribosome protein L11)是一种高度保守的蛋白质．为研究真核生物的核糖体蛋白L11的功能，从八肋游仆虫（Euplotes octocarinatus）大核基因组中克隆到核糖体蛋白L11基因，构建了重组表达质粒pGEX-6p1-L11，通过谷胱甘肽-Sepharose 4B亲和层析，纯化了重组融合蛋白GST-L11．Pull down 分析显示,八肋游仆虫的核糖体蛋白L11与第一类肽链释放因子eRF1a可以在体外相互作用．这一结果提示，与原核生物一样，低等真核生物的核糖体蛋白L11在肽链终止过程中可能起一定的作用．

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牛α辅肌动蛋白(α-Actinin)1 基因遗传变异与产犊数性状的相关性

淮亚红;王淑辉;姬爱国;许尚忠高雪;任红艳;陈金宝

中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(04): 352-358.

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为了探讨辅肌动蛋白1(α-actinin1)基因对母牛产犊数的影响,以鲁西单胎牛，鲁西双胎牛，南阳牛，晋南牛，荷斯坦牛，三河牛和延边牛为研究对象，以α-actinin1为影响产犊数的候选基因，分别扩增418 bp和505 bp 2个片段，采用直接测序，RFLP-RsaⅠ和RFLP-Apa Ⅰ方法检测α-actinin1基因的多态性，并将其与产犊数性状进行了关联分析.在内含子15 第227 nt处的碱基发生G→A突变，和内含子10第3 124 nt处发生A→G突变，使其产生酶切多态.对2个酶切多态位点进行基因型分型，χ2检验表明：在G227A位点，除了鲁西单胎牛外，其他群体都已达到Hardy-Weinberg平衡；在A3 124G位点，除了鲁西双胎牛外，其余群体都已经达到Hardy-Weinberg平衡.SAS 9.0的最小二乘拟和一般线性模型分析结果表明：A3 124G位点的AG基因型的产犊数的最小二乘均数极显著（P＜0.01）高于基因型AA；而单倍型组合GG的产犊数的最小二乘均数显著高（P＜0.01）于其它3种单倍型组合.α-actinin1基因有可能作为产犊数性状的候选分子的遗传标记.

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一组新的沙蚕蛋白酶同工酶的分离纯化与鉴定

李奇;王昭;洪敏

中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(04): 359-365.

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分离纯化一组新的沙蚕蛋白酶同工酶，并对其性质进行鉴定.用硫酸铵盐析、凝胶过滤层析和疏水层析技术从沙蚕中分离得到了沙蚕蛋白酶，经聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）、高效液相色谱（HPLC）、等电聚焦电泳（IEF）和质谱分析（MS）鉴定，发现沙蚕蛋白酶由3个组分组成，均有纤溶活性，其等电点为3.5～4.5，分子量分别为29 248.75、29 007.66、28 954.17，肽指纹图谱分析发现,它们均为未知的新蛋白质，其中2个组分结构相似，具有较高的同源性，与另1个有不同.用抗原抗体反应鉴定其免疫原性，发现3个组分中有2个组分具有相同的免疫原性，另1个组分与2者不同.但3者具有相同的抗原决定簇,证明沙蚕蛋白酶由2个同工酶组成.以4种专一性的抑制剂对其进行抑制，检测酶的活性确定其酶学性质，发现其反应的适宜温度为40℃～50℃、适宜pH值为8～9.沙蚕蛋白酶属于丝氨酸蛋白酶.

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整合HA蛋白的HIV假病毒展示禽流感病毒感染宿主细胞机制

张松林;金梅林;肖凌云;陈焕春,

中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(04): 366-372.

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通过将高致病性禽流感病毒HA蛋白整合到HIV颗粒，包装成表达HA蛋白的假病毒粒子（命名为HIV/H5-HA），并对所包装的假病毒的生物学功能进行了研究.通过RTPCR获得了H5N1亚型禽流感病毒完整的血凝素基因(HA)并克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)上，通过与假病毒构建体系的2种质粒pCMV△8.2和pHR′-CMVLacZ共转染293T细胞,包装成假病毒颗粒.利用LacZ染色和HA假病毒颗粒感染MDCK等6种细胞株并对标记基因LacZ进行检测.结果表明,HIV/H5-HA与天然的禽流感病毒相似，具有广泛的细胞嗜性； Western 印迹和FACS检测结果,和HA假病毒颗粒的电镜照片确认了HA基因在假病毒颗粒表面得到了表达；HIV/H5-HA能够凝集鸡红细胞，并且pH值依赖性测定表明,HA假病毒需要低pH值才能实现正确的入侵宿主细胞.本研究结果显示：禽流感病毒H5N1亚型的HA基因得到了有效的包装，并且所包装的假病毒颗粒能够表达具有高度生物活性的HA蛋白.同时，假病毒模型的建立为进一步研究禽流感病毒与宿主之间的免疫应答提供了一种新的途径.

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羟基喜树碱诱导肝癌细胞凋亡前后线粒体疏水蛋白质组的定量分析

颜玉蓉;付玉荣;王伟佳;邱宗荫

中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(04): 373-382.

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抗癌剂羟基喜树碱可以通过线粒体途径诱导肝癌细胞凋亡.应用定量蛋白质组学技术分析羟基喜树碱诱导肝癌细胞凋亡前后的线粒体疏水蛋白质差异表达，探讨癌细胞凋亡机制及羟基喜树碱的抗癌机理.分离提取羟基喜树碱诱导肝癌细胞凋亡前后的线粒体,并采用顺序抽提法提取疏水蛋白质；用含稳定同位素亲和标签的c-ICAT试剂标记蛋白，利用基于多维色谱线性离子阱/静电场轨道阱质谱联用技术的鸟枪(shotgun)法策略分析鉴定了在肝癌细胞凋亡前后的线粒体中表达量差异有显著统计学意义(P<0.05)的疏水蛋白144种，其中, 12种蛋白的表达量在凋亡细胞中下调，而表达量在羟基喜树碱诱导细胞凋亡后上调10倍以上的蛋白43种.这些蛋白主要与细胞分裂增殖、分化凋亡、能量代谢、核酸代谢以及信号转导相关.该研究结果为在亚细胞定量蛋白质组水平上深入探讨羟基喜树碱的作用机理提供了新的实验依据，亦为研究肿瘤细胞凋亡机制提供了新的思路.

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邻位连接技术：一种新的高灵敏度蛋白质检测技术

李丹滢;周国华;

中国生物化学与分子生物学报. 2008, 24(04): 383-389.

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蛋白质组学(proteomics)诞生以来，高效准确的蛋白质检测技术受到越来越多的关注.最近，一种高灵敏度的蛋白质检测技术，邻位连接技术(proximity ligation assay, PLA)被建立.该技术采用核酸适体(aptamer)或单/多克隆抗体核酸复合物作为邻位连接探针(proximity probes).当一对邻位探针同时识别同一个目标蛋白分子时，它们将在空间位置上相互临近，通过连接反应形成一段可扩增的DNA标签序列，该标签序列能够反映待测蛋白的种类及浓度.该技术将对蛋白质的检测转变为对DNA核酸序列的检测，实现了特殊蛋白质的检测，定量及定位.文章从该方法的产生背景，发展过程，原理以及探针制备等方面对该方法进行了系统的介绍，列举了该方法的几种重要应用，并对该方法在蛋白质组学研究领域的应用前景进行了展望.

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