中国生物化学与分子生物学报

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诸亚君,李春海,张凯,曹祿森,谭予兴,李新萍

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(02): 129-135.

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本文用S-己基谷胱甘肽-琼脂糖-6B亲和层析一步纯化法分别获得电泳纯大鼠正常肝GST_S及含增生结节大鼠肝GST_S。经DE_(52)阴离子交換柱将含增生结节大鼠肝GST_S分离为三个同功酶组份,依次命名为C_(DE)A1及A2,C_(DE)占上柱总GST_S活性84.8％。等电聚焦电泳测定等电点分别为7.8、6.7及6.3。经CM_(52)阳离子交換柱获得五个同功酶组份,依次命名为A_(CM),C1,C2,C3及C4,等电点分别为7.8,7.4,7.9,8.3及8.6。A_(CM)的活性占CM_(52)柱上柱总活性的10％。SDS-PAGE电泳结果和正常大鼠肝GST_S比较,含增生结节大鼠肝GST_S同样出现Ya,Yb及Yc三条区带,而后者的氨基酸组成也与正常大鼠肝GST_S相近,但是和大鼠正常肝组织比较后者GST_S活性明显升高,以阳离子同工酶的活性为主。

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不同转移表型肺腺癌细胞PI-PLC的比较研究

彭愈生,任丽君,张金龙

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(02): 136-140.

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实验证明钙、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酸(PA)及脱氧胆酸钠(DOC)对两种不同转移表型癌细胞磷脂酰肌醇特异的磷脂酶C(PI-PLC)的活性影响有明显差异。高转移性人肺腺癌细胞亚系(Anip_(973))比低或无转移性人肺腺癌细胞系(AGZY_(83-a))腹水型癌细胞PI-PLC活性高2.25—7.1倍。Anip_(1211)细胞培养液PI-PLC活性也大于AGZY_(83-a)。说明不同表型肺腺癌细胞具有不同性质的PI-PLC,且活性变化与转移表型密切相关。

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携有巨大芽孢杆菌淀粉酶基因的两种质粒在枯草杆菌中产酶性质的比较

杨丽珠,马明,王诚一,纪永刚,陈启民,蒋如璋

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(02): 141-145.

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携带巨大芽孢杆菌Bacillus megaterium糖化型α淀粉酶基因的质粒pBX95和pBX96(pBX96在枯草杆菌中传代对自发缺失0.65kb片段的衍生质粒)在枯草杆菌Bacillus subtilis中表达的α淀粉酶分子量分别为64 kD和58kD。它们的比活力相差两倍。并且在等电点、米氏常数、最适温度、最适pH、热稳定性方面均有差别。但二者的淀粉水解产物的层析谱带相同。

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刺参糖胺聚糖的亚分级和各级分的理化特征与抗凝性质

樊绘曾,吳世馥,李毅敏

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(02): 146-151.

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刺参糖胺聚糖及其解聚物在水溶液中可通过逐步提高所加入的醋酸钾浓度引起的沉淀作用进行亚分级。本文对有关级分的理化特征、抗凝活性及诱导血小板聚集的副作用进行了比较。原聚糖平均分子量为50000,所得各级分的分子量分别为55000,48000,41000,23000和9000,它们在不连续琼脂糖凝胶电泳中显示不同特点。化学分析表明,除两个分子量较低级分中葡糖醛酸和岩藻糖含量略低外,各級分组成糖基和硫酸酯基的分子比值与原聚糖相近似。其红外、核磁谱与原聚糖一致。各级分体外抗凝活性随分子量变小而程度不同地减弱,其中分子量对聚糖延长凝血酶时间的影响较其对部分凝血活酶时间的影响为著。分子量最小的级分无明显诱导人血小板聚集副作用。

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大鼠肌肉神经白介素纯化和生化特性及其与磷酸葡萄糖异位酶的关系

郝秀娟,李春海

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(02): 152-157.

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通过硫酸铵沉淀、DE_(52)层析、超滤和高压羟基磷灰石层析,从大鼠肌肉条件培养液中得到电泳纯的神经白介素(NLK)。未发现NLK的神经营养活性(维持鸡胚背根神经元存活和促进脊髓神经元突起伸展)及免疫活性(促进外周血单个核细胞产生免疫球蛋白),却有较强的6-磷酸葡萄糖异位酶(GPI)活性。SDS-PAGE测得亚基分子量为56kD;IEF示五条细而相距很近的带,PⅠ值分别为8.20,8.15,8.10,7.90,7.75。Western Blot证实,PAGE和IEF的五条带均可与抗GPI抗体结合,即五种同工酶形式;NLK与GPI的氨基酸组成相近,BrCN水解NLK和GPI得剖相同的肽谱。许多研究表明:NLK不作为一种神经营养因子,而可能是糖酵解酶,即6-磷酸葡萄糖异位酶。

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重组人白细胞介素4的纯化及N端氨基酸序列分析

李晨,张智清,周圆,姚智,陈慰峰,侯云德

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(02): 158-161.

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本文对重组人白细胞介素4高效表达克隆pBV220/hIL-4a的表达产物进行了纯化,升对纯化的人IL-4进行了N端氨基酸序列分析。人IL-4基因表达产物在大肠杆菌中以不溶性包涵体形式存在,经过超声破菌、包涵体抽提、复性浓缩、离子交換和凝胶过滤层析一系列纯化步骤,终产物纯度达98％以上,按蛋白总量计算回收率为14％,比活性达2×10~6单位/mg蛋白。通过测定纯化人IL-4的N端16个氮基酸序列,与由其DNA序列推导的氨基酸序列完全一致。本文为重组人IL-4的批量生产奠定了基础。

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蛋白激酶与细胞分化—两种分化诱导剂对酪氨酸蛋白激酶的抑制

柴希运,秦慧,陈惠黎

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(02): 162-167.

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在报道视黄酸(RA)是人肝癌细胞株SMMC-7721分化诱导剂的基础上,本文继续报道8-溴-环磷酸腺苷对该细胞也有分化诱导作用,两者都抑制细胞的增殖,降低γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)比活力和升高(ALP)碱性磷酸酶的比活力。在10μmol/LRA和0.5mmol/L-8-Br-cAMP处理细胞1、3、5天后,胞液和膜性组分中的酪氨酸蛋白激酶(TPK)的比活力均降低,其中RA对胞液TPK的作用在早期较明显,约降低30％,而对膜性TPK的影响则随培养天数而逐渐增加,至第5天下降达50％以上。8Br-cAMP则相反,对胞浆TPK的抑制主要发生在3天以后;约抑制43—53％,而对膜性组分则抑制率逐日降低,在第一天较为明显。因TPK是一个细胞增殖恶变的标志,故RA和8-溴-cAMP对TPK的抑制进一步证明这两种分化诱导剂对SMMC-7721细胞的逆转作用。

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铜绿微囊藻毒株M.8641的毒素

何振荣,俞敏娟,何家菀,Wayne W.Carmichael

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(02): 168-172.

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M.8641是从武汉东湖分离培养的一株有毒的铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa),它产生两种环状短肽肝毒素。经凝胶过滤及HPLC等过程纯化,Waters Pico Tag系统测定,其主毒素(毒素Ⅰ)的氨基酸组成为:Glu(1),β-Masp(1),Ala(Ⅰ),Arg(2),Mdha(1),FAB-MS和MS/MS测定分子量为m/z1038,元素组成为C_(49)H_(76)O_(12)N_(13)。毒素Ⅱ的氨基酸组成,除一分子Arg为Leu取代外,其余与毒素Ⅰ相同,分子量m/z 994,分子式C_(49)HT_(75)O_(12)N_(10)。毒素Ⅰ和Ⅱ的毒性分别为129和42μg/kg(i.p.),二者在细胞中的含量各为0.12及0.01mg/kg。FLC测定表明M.8641的两种毒素与MCYST-RR和-LR有相同的Rf值。从氨基酸组成、分子量、分子式及毒性等资料分析,亦证明毒素工相当于MCYST-RR,毒素Ⅱ相当于MCYST-LR。

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平菇子实体钙调素的分离纯化及其与猪脑钙调素的生物活性比较

孔令魁,胡卓逸

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(02): 173-177.

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平菇萃取液经酸性沉淀、热变性、Phenyl-Sepharose CL-4B疏水亲和层析和DEAE-Cellulose 52离子交換层析分冉出了电泳纯的真菌钙调素。在比较钙调素对磷酸二酯酶活化的能力和ELISA实验的免疫亲和力对发现,平菇钙调素与猪脑钙调素的生物活性有较大差异,提示在钙调素定量测定中有必要考虑到标准钙调素与样品钙调素之间的同源性差异。

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蓖麻β-半乳糖苷酶的纯化及其基本性质

孟延发,刘景会,李志孝,孟雪琴,陈耀祖

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(02): 178-183.

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蓖麻籽黄化苗中存在高活性β-半乳糖苷酶。经硫酸铵分级分离、DEAE-纤维素离子交換层析、Sephadex G-100、CM-Sephadex和DEAE-Sephadex层析纯化。活性收率为6.4％,纯化倍数达107倍。纯化了的酶经聚丙烯酰胺凝胶电泳显示单一蛋白带,SDS-PAGE显示两条蛋白带,其相应分子量分别为3.25×10~4和2.94×10~4。用Sephadex G-200分子筛层析法测得分子量为6.7×10~4。综合上述结果推测该酶是由两个不同的亚基构成。以邻硝基苯酚-β-半乳糖苷为底物测得该酶的表观Km为5.9×10~(-3)mol/L。最适pH和最适温度分别为4.5和50℃。酸碱稳定区域在pH4.6—7.5之间。不同浓度缓冲液以及不同种类缓冲液、不同金属离子对酶活性影响均进行了讨论。

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正常椎间盘胶原的研究

李书忠,陈培勋,胡有谷

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(02): 184-189.

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腰椎间盘突出症是引起腰腿痛常见的原因。胶原作为椎间盘结构的主要成分,构成椎间盘的纤维框架,其类型与分布直接决定着椎间盘结构的强度和功能的稳定。本文利用溴化氰消化椎间盘胶原产生多肽,借助于梯度层析。SDS-PAGE及光密度定量扫描等对正常人椎间盘胶原进行了研究。结果表明:正常人椎间盘含Ⅰ型及Ⅱ型两种胶原,它们的分布呈明显而特征性的移行性变化:纤维环外层边缘以Ⅰ型胶原为主(83％),由外向内Ⅰ型胶原逐渐移行为Ⅱ型胶原,靠近髓核处以Ⅱ型胶原为主(72％);髓核中心含有Ⅱ型胶原。此为椎间盘的一个结构特性,以满足椎间盘的特殊功能的需要。

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铜蓝蛋白及纤维粘连蛋白对石英粉尘促进胶原转录的协同作用

刘秉慈,尤宝荣,刘玉英,谢广云,李玉瑞

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(02): 190-193.

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本文使用人胶原α_1(Ⅰ)、α_2(Ⅰ)和α_1(Ⅲ)链cDNA探针,采用斑点杂交技术观察了铜蓝蛋白(ceruloplasmin,Cp)和纤维粘连蛋白(fibronectin,Fn)对体外培养的人胚肺成纤维细胞胶原mRNA合成的影响。发现Cp及Fn对成纤维细胞胶原mRNA的合成有促进作用。向培养的成纤维细胞中同时加入石英粉尘和Cp时,其刺激胶原mRNA增长的程度高于单独加入石英粉尘或Cp时的刺激作用。提示Cp对石英粉尘的促纤维化有协同作用。本实验同时证实Fn也具有类似于Cp的促纤维化的协同作用。

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枯草杆菌表达载体pUB23的构建及地衣杆菌α-淀粉酶基因的表达

罗进贤,李文清,王红革,朱碧瑜

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(02): 194-199.

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将克隆的解淀粉芽胞杆菌强启动子经DNA序列分析后连接到能在枯草杆菌中复制的质粒pUB18上,构建枯草杆菌表达载体pUB23。为了测试构建的表达载体能否表达外源基因,将地衣杆菌抉失了启动子的α-淀粉酶基因接到pUB23上启动子的下游,组建重组质粒,转化枯草杆菌QB1130(amy~-),获得能分泌α-淀粉酶的转化株,证明缺失了启动子的结构基因在pUB23上克隆启动子的启动下获得表达。酶活力测定结果表明,表达水平是用原启动子时的2.5倍.

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人绒毛膜促性腺激素β亚基酶解片段特性的研究

周先锁,李伟雄,李平风,杜国光

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(02): 200-203.

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以嗜热菌蛋白酶水解人绒毛膜促性腺激素,亚基(hCG_β),用HPLC分离制备酶解产物。酶解片段经竞爭性放射分析,不能与LH/hCG受体结合,但保留近乎全部hCG_β的免疫反应性.园二色谱分析,与hCG_β比较,酶解片段所含α螺旋减少,β折叠与无规卷曲含量增多。表明hCG_β可能有几个肽段和/或糖链参与hCG受体相互作用;酶解片段中仍含有hCG_β的主要决定簇,该决定簇与hCG_β结合受体的结构有区别。

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人血浆蛋白C的分离纯化与鉴定

王博诚,李金泉,金坚,张满达

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(02): 204-207.

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冰冻人血浆37℃融化后,经钡盐吸附沉淀、硫酸铵分步盐析、DEAE-Sephadex A-50柱层析、制备性PAGE和肝素亲和层析分离,得到蛋白C。经鉴定,所得蛋白C分子量约为62kD,pI为4.69,PAGE分析高度均一,KPTT法证实其延长凝血时间,与有关文献报道相符。

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用遗传工程的方法构建一个分泌型高表达的枯草杆菌碱性蛋白酶E(Subtilisin E)的枯草杆菌质粒-宿主系统

王培之,王贤舜,丁丽俐

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(02): 208-212.

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将克隆了枯草杆菌蛋白酶E基因aprE的枯草杆菌质粒pPZW101和一个组成型強启动子Psk连接构建成质粒pPZW102,转入碱性和中性蛋白酶缺失枯草杆菌DB104并进行表达。此质粒-宿主系统具有Subtilisin E高表达和外分泌的特点。

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大鼠肾脏和其它组织中磷酸酪氨酸蛋白的研究

张明志,张光毅,王迎伟,赵升皓

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(02): 213-218.

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本文采用P-tyr-BSA为免疫原免疫家无得抗血清。将纯化的IgG与HRP偶联,建立了P-tyr-Pr的ELISA法,并测定了正常大鼠肾脏等组织中P-tyr-Pr含量,其分布规律如下:上清中P-tyr-Pr含量高者,其颗粒部分则低,反之亦然;其中肾脏上清中含量远比其它组织(脾、肺、肝等)高。在此基础上,又研究了膜性肾炎大鼠肾脏P-tyr-Pr含量,发现其上清中的含量远远高于正常大鼠肾脏中的含量。

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中国人SRY基因的分离、克隆和核苷酸序列分析

陈虹,杜晓娟,孙国贤,黄秉仁

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(02): 219-223.

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睾丸决定因子基因(Testis-determining factor,TDF)位于Y染色体短臂上,它的表达产物诱导睾丸组织的发生。SRY基因(Sex-determining Region of the Y)位于Y染色体的性别决定区内,许多特征显示SRY就是TDF。我们选用与SRY基因相应的引物,用PCR技术对正常人男女各10例的基因组DNA进行扩增。将特异扩增的男性SRY基因片段重组到质粒PUC12中,得到含有中国人SRY基因片段的克隆,命名为PSY-1、PSY-2。用[~(32)p]标记重组质粒中的SRY基因片段作探针,与PCR结果进行Southern杂交,男性样品均显示特异杂交带,女性样品为阴性。用末端终止法测定克隆的SRY基因片段的全部核苷酸序列为299bp,含有SRY基因中高度保守及功能特异性区域的240bp,我们对此进行了讨论。

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半枝莲多糖SPS_4组分的纯化性质及分析

孟延发,李志孝,张立,陈耀祖

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(02): 224-228.

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半枝莲经热水提取,除蛋白质,乙醇沉淀,DEAE-纤维素及Sephadex G-150柱层析分离得到一种白色粉状多糖SPS_4。经琼脂糖电泳、玻璃纤维纸电泳及醋酸纤维素薄膜,凝胶柱层析证明SPS_4为均一性多糖。经进行完全酸水解后纸层析及气相层析分析确定糖基的组成及摩尔组成比为鼠李糖:岩藻糖:阿拉伯糖:木糖:甘露糖:葡萄糖:牛乳糖=0.22:0.26:1.0:0.09:0.51:1.82:2.09。平均分子量为10000。体外实验表明,多糖SPS_4对S-180肉瘤细胞及腹水肝癌细胞均有一定的抑制作用。

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不同亚型乙肝病毒Pre-S(2)蛋白二级结构及抗原表位的预测与比较

吳玉章,朱锡华

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(02): 229-233.

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本文采用Chou和Fasman方法预测adw,adr,ayw三种亚型的乙肝病毒Pres(2)蛋白的二级结构;并用双亲性方案和亲水性方案分析了抗原表位。结果显示三者均可能含有较多的β片层和β转折;N-末端30个残基所形成的二级结构较保守,而C-末端顺序的构象在亚型间差别较大;Th细胞识别的表位可能在39—49肽段;B细胞识别的表位可能主要在12—18残基或其附近。

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兔肝谷胱甘肽过氧化物酶的亲和层析纯化

马万超,罗贵民,杨同书

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(02): 234-236.

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<正> 谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX,EC1.11.1.9)与过氧化氢酶、超氧化物歧化酶一起共同构成细胞内抗脂质过氧化作用的酶性保护系统。近年来,随着人们对脂质过氧化作用机理及其对细胞组织损伤和遗传物质变异作用的认识的日趋深入,GSH-PX越来越受到人们的重视。关于GSH-PX的提纯已有大量的文献报导,但利用共价亲和层析来分离提纯此酶的文献报导则较少。本文根据GSH-PX的催化机理及其存在的不同状态,发展了一种独特的共价亲和层析的提纯方法。

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胃癌及癌旁组织中Rb基因缺失和重排的研究

王俊茹,呂有勇,刘为纹,王冰,邓国仁

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(02): 237-239.

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<正> Rb基因即视网膜母细胞瘤敏感基因,被认为是一种抑癌基因。它在正常细胞中存在,而在视网膜母细胞瘤中有缺失。将正常的Rb基因导入有Rb基因缺失的视网膜母细胞瘤和骨肉瘤细胞内,可以抑制上述两种肿瘤细胞的生长。目前已在多种人类肿瘤中如骨肉瘤、纤维肉瘤、小细胞肺癌、乳腺癌等发现有Rb基因的缺失。胃癌组织中Rb基因丢失的研究未见报道。本实验使用Southern杂交方法在胃癌及癌旁组织中进行Rb基因缺失和重排的研究,探索Rb基因在胃癌发生、发展中的作用。

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钙调神经磷酸酶及其二亚基免疫性质和功能的研究

魏群,张广发,王健勇,孟祥兵,刘东远

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(02): 240-243.

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<正> 钙调神经磷酸酶(Calcineurin, CaN)是目前所知唯一活性受钙、钙调素调控的磷蛋白磷酸酶。其含量占脑内蛋白总量的1％,必定有其重要的生理意义,但至今为止,它的生理功能仍很不清楚。本文试图用免疫学方法,对CaN的生理功能进行初步探索。

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表皮生长因子受体基因在中国人部份肿瘤细胞株中的扩增

杨晓燕,章扬培,刘超燕,高亚兵

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(02): 244-246.

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<正> 肿瘤基因扩增是肿瘤基因激活的一种方式。而表皮生长因子受体基因在结构上作为v-erb-B的同源基因;在功能上其产物与src基因家族产物有相同的作用。因此,它的扩增与否与肿瘤的发生发展密切相关。因为肿瘤基因的激活,能导致肿瘤基因产物的异常表达。而表皮生长因子受体基因及表达产物的异常,又可能是细胞恶性增殖、低度分化的重要原因之一。为了比较中国人常见的肿瘤细胞株表皮生长因子受体基因在DNA水平上的扩增状态,本研究选用了九种不同的肿瘤细胞株,用分子杂交的方法进行了研究。

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钙调素依赖性环核苷酸磷酸二酯酶的简易粗提法

鄢佳程

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(02): 247-249.

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<正> 钙调素依赖性环核苷酸磷酸二酯酶(camodulindependent cyclic nucleotide phosphodiesterase, CaM-PDE)是研究环核苷酸和钙调素酶法测定必备的工具。由于其稳定性较差,不能长期保存,需经常提取。传统提取方法采用冷室中线性离子梯度DEAE纤维素柱层析与其它层析并用。本法利用DE_(52)柱层析,阶段离子浓度洗脱。纯化CaM-PDE近20倍。在足够的钙调素(CAM)存在下可激活10倍。

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影响λ噬菌体包装蛋白抽提物效价的因素

罗瑞柏,易清明

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(02): 250-251.

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<正> 以λ噬菌体DNA作载体构建基因文库时,λ噬菌体包装蛋白抽提物是实验成败的关键之一,市场上虽有此商品出售,但由于价格昂贵加上运输和保藏方面的问题,使用时往往不够理想。所以,不少实验室自己制备噬菌体包装蛋白抽提物。任兆韵等报导:快速诱导可以提高包装效价,在这里我们报导包装反应时间等其他因素对λ噬菌体包装蛋白抽提物效价的影响。

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人胚肝核基质的制备及发育过程中组分的动态变化

温博贵,裘峻

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(02): 252-253.

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<正> 核基质(Nucleic matrix,NM)是指细胞核内的不溶性网络状骨架结构。随着细胞分裂与增殖;分化与癌变发生结构与功能的改变。研究表明,核基质与基因的复制、转录、RNA转运、修饰等重要核内过程密切相关;一些类固醇激素的受体亦定位在核基质上。本文以人胚肝为材料制备出核基质,对这一亚核结构作超微结构观察,并对处于发育过程中的人胚肝核基质非组蛋白(NHP)进行动态分析。

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白藜芦醇甙及其衍生物对脂质体膜氧化稳定性研究

张振涛,侯新朴

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(02): 254-256.

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<正> 白藜芦醇甙(Piceid)是蓼科植物虎杖的一种有效成份,其基本结构为二苯乙烯。据文献报导,白藜芦醇甙具有抗菌消炎、抑制肝损伤等作用。本文以白藜芦醇甙及其疏水衍生物为保护剂,通过测定在外源自由基影响下的脂质过氧化程度,研究了保护剂对脂质膜氧化稳定性的作用。为解决脂质体稳定性提供了一些启示。

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