中国生物化学与分子生物学报

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顾文聪,韩志芬,杜国光

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(03): 257-259.

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中药固真方具有补肾益精、延缓衰老等作用。本文主要研究固真方对~3H-TdR参入DNA及碱性磷酸酶活性的影响。实验结果表明,当大鼠成骨肉瘤细胞ROS17/2.8经固真方药处理24h后,其~3H-TdR的参入比对照组增高13.9％至319.2％,而其碱性磷酸酶活性在经固真方药处理2—3天后则增高4.4％至52.8％(平均30.2％),提示固真方药在成骨样细胞中既有增殖作用,也有促分化作用。

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抗胃癌单克隆抗体3H11对应抗原的纯化及鉴定

李振甫,万文徽,张宏,董志伟

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(03): 260-264.

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抗胃癌单克隆抗体3H11的对应抗原主要表达于靶细胞的膜上,不耐热,经蛋白酶消化,抗原失活。过碘酸氧化不影响活性,Schiff′s试剂糖柒色为阴性。SDS-PAGE显示单一区带,分子量为210kD。靶细胞经衣霉素抑制糖基化作用后,对其分子量无明显影响。等电聚焦电泳表明其等电点为8.5,故3H11抗原为一大分子碱性蛋白。

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大鼠肝癌中α_2-巨球蛋白等几种分泌性蛋白基因表达的变化

赵玫,赵清正,张春燕,侯充,王萍,于树玉

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(03): 265-268.

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用Northern blot方法对二乙基亚硝胺所诱发的大鼠肝癌中内源性蛋白酶抑制因子α_2-巨球蛋白(α_2-M)、非特异性免疫抑制剂α_1-酸性糖蛋白(α_1-AGP)及雄性激素正调控的α-2u球蛋白(α-2u)三种分泌性蛋白基因表达情况进行了分析。结果表明在大部分(14/16)肝癌样品中α_2-M RNA水平显著降低;而α_1-AGP RNA水平显著高于正常对照水平;α-2u RNA水平明显下降,但在某些雄性大鼠肝癌样品中该基因却有一定程度的表达。这些结果说明,一些肿瘤宿主血浆中α_2-M水平的显著下降及α_1-AGP水平的明显升高分别是由于基因表达活性的下降及升高所致。α-2u基因表达的异常提示,在癌变过程中机体的内分泌功能发生了某些变化。

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RT-PCR法扩增的人溶菌酶cDNA的克隆及其核苷酸顺序分析

黄秉仁,赵崇,雷小虹,蔡良婉

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(03): 269-273.

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本文以人胎盘全RNA为底物进行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),制备出了人溶菌酶的cDNA片段。在限制性内切酶Sma Ⅰ存在的连接体系内,将此cDNA克隆入载体pUC12的Sma Ⅰ位点。用重组质粒双链DNA的末端终止法测定了其全部的核苷酸顺序,证明其全长为444bp,编码了18个氨基酸的信号肽和130个氨基酸的成熟蛋白组成的溶菌酶的前体蛋白,并证明已成功地在此cDNA的3′末端导入了两个终止密码子及一个限制性内切酶Sal Ⅰ的识别位点。由中国人溶菌酶cDNA推导出的氨基酸顺序与有关报道不同,有5个氨基酸的改变。表达蛋白的研究工作正在进行中。

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稀土离子(La~(3+)、Nd~(3+)、Ho~(3+)、Yb~(3+))对人红细胞膜Na~+/K~+ ATPase作用的初步研究

张金红,魏继中,吳隽平,张遂坡,徐友涵

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(03): 274-277.

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本文以低渗法从新鲜健康人红细胞中制得膜Na~+/K~+ ATPase,用于研究四种鑭系稀土离子(La~(3+)、Nd~(3+)、Ho~(3+)、Yb~(3+))对该酶的影响。结果表明,四种鑭系离子都对红细胞膜Na~+/K~+ ATPase的活性有抑制作用。当反应体系中的稀土离子浓度达50μmol/L时,Na~+/K~+ ATPase的活性所剩不多;低于50μmol/L鑭系离子时,以Nd~(3+)的抑制作用最强;金属离子螯合剂能阻止稀土离子对Na~+/K~+ ATPase的抑制作用。此项研究为稀土的生物效应的理论提供了一些新的证据。

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血管紧张素Ⅱ增加新生鼠脑细胞胞浆Ca~(2+)浓度

路新云,马青平,韩济生

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(03): 278-281.

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本文应用荧光钙测定技术观察了血管紧张素Ⅱ(AⅡ)对新生Wistar鼠脑细胞胞浆Ca~(2+)浓度([Ca~(2+)]_i)的影响。结果表明:血管紧张素Ⅱ在1nmol/L—1μmol/L浓度下可诱导新生鼠脑细胞[Ca~(2+)]_i增加,具量效关系。在无外Ca~(2+)存在对,其增加幅度有所减少。上述效应可被血管紧张素Ⅱ拮抗剂Saralasin所阻断,并呈剂量依赖关系。上述结果提示,血管紧张素Ⅱ可激活血管紧张素AⅡ受体,增加脑细胞[Ca~(2+)]_i,该效应通过细胞内Ca~(2+)释放和细胞外Ca~(2+)内流两条适径实现,前者的作用是主要的。

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质粒RP4CFIts突变体筛选及Kil表型分析

黄爱龙,张永地

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(03): 282-286.

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用羟胺体外诱变质粒RP4后再转化受体菌,我们选择到一抹温度敏感的菌落形成抑制突变体。其表型为在非允许温度时培养,不能由单个菌体繁殖为集落,类似于Kor基因失活引起的Kil表型。生化分析表明:在非允许条件下,突变体的生长逐步受到抑制,大约繁殖两代后即全面抑制,此时宿主菌的DNA、RNA、蛋白质等大分子合成几乎全部下降,但β-半乳糖苷酶的合成却并未停止,只是由于细胞通透性改变而大部分排出胞外,另外噬菌体感染后的产率也明显降低,并且在非允许温度处理20h内,此种状态是完全可逆的,即仍可因放回允许温度培养而形成集落,据此抑制现象的逐步发生性,大分子合成的全面抑制性和完全可逆性判断,很可能和宿主细胞在紧急状态下的整体调节机制——严紧型反应有关。

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巨噬细胞对正常人极低密度脂蛋白亚组分代谢的研究

李巍,冯宗忱,邓耀祖

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(03): 287-292.

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本文研究了小鼠腹腔巨噬细胞对正常人极低密度脂蛋白(N-VLDL)两种亚组分VLDL_1和VLDL_3的代谢。两种亚组分都能以受体方式和非特异性方式被巨噬细胞摄取和降解。在受体途径中以VLDL_1的摄入量居多。对胞内甘油三酯(TG)的堆积作用以VLDL_1较强,对胆固醇酶(CE)的堆积则以VLDL_3较强。表明两者在促进巨噬细胞向泡沫细胞转变中的作用有所不同。

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▽5-人粒系集落刺激因子(▽5-hG-CSF)的cDNA克隆、序列测定与表达

贺福初,邢桂春,瞿成奎,刘福陆,郭学敏,吳祖泽

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(03): 293-298.

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从LPS刺激的正常中国人外周血单核细胞中提取mRNA,经反转录(RT)-PCR扩增出不含信号肽和成熟型N端5氨基酸(V5-hG-CSF)的cDNA片段,酶切后组入大肠杆菌表达载体pJLA602中。序列测定表明,克隆片段与国外报道的高活性hG-CSF cDNA序列一致。重组子经诱导表达、小鼠骨髓细胞体外CFU-G测试表明,表达产物具明显的粒细胞集落刺激活性。

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多等位基因PCR-SSO反相杂交法及其在HLA-DR_4亚型结构分析中的应用

失迺硕,王亚新,陈诗书

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(03): 299-303.

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本文介绍一种适合于多等位基因定型和结构分析的反相顺序特异性寡核苷酸探针杂交方法。将化学合成的多种探针分别经脱氧核苷末端转移酶(TdT)催化,于3′端加上100个以上碱基的Poly(dT)尾,然后将各探针分别以斑点固定于同一张尼龙膜上。用PCR法对该基因位点进行扩增,扩增的同时加入α-~(32)P-dCTP以直接参入放射标记,然后将PCR产物与膜固定探针杂交,以四甲基氯化铵根据探针长度统一洗涤温度。该方法克服了以往对同一份样品进行多个等位基因检测时需要进行多次探针标记和杂交的缺点。我们用该方法对中国人群MHC-Ⅱ类DR4多等位基因进行了研究。

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SLE血清中抗-DNA抗体分离和性质的研究

梁俊峰,杨彦,俞耀庭

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(03): 304-308.

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本文用国产高分子树脂(T)接枝小牛胸腺DNA,通过亲合层析从系统性红斑狼疮SLE患者血清中纯化出抗-ds DNA抗体和抗-ss DNA抗体。酶联免疫吸附分析(ELISA)的研究表明:SLE抗-DNA抗体和DNA结合的差异性很大,是高度非均一性的。抗-ss DNA抗体不仅组成成分比抗-ds DNA抗体复杂,ss DNA/抗-ssDNA亲合能力也明显高于ds DNA/抗-ds DNA。纯化的抗-DNA抗体以IgG类抗体占主导,同时也有其它类型抗体存在(例如IgM等)。抗-ds DNA抗体有较抗-ss DNA抗体高的IgG含量(两者的IgG/IgM分别是7.0和4.0),说明IgG抗-DNA抗体更倾向于同dsDNA结合。

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着床期家兔子宫内膜糖蛋白的动态研究

李宾,朱正美,曹詠清

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(03): 309-313.

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本文以~3H-glucosamine(~3H-GlcNH_2)为前体,观察了着床期家兔子宫内膜糖蛋白的生物合成及分泌功能的变化,并利用Triton X-100提取膜蛋白,采用凝集素亲和电泳技术对三种不同性质糖蛋白进行了动态分析。结果表明,着床期家兔子宫内膜糖蛋白的合成与分泌功能均于妊娠第六天(D_6)明显增强,其中合成糖蛋白的变化以Triton溶解蛋白部分为主;井发现着床期WGA、RCA-Ⅰ、SBA结合蛋白均于着床前(D_6)明显增加,着床后(D_9)WGA结合蛋白略有降低,RCA-Ⅰ、SBA结合蛋白明显降低,接近未孕水平。着床期子宫内膜总体及不同种类糖蛋白的阶段特异性变化表明,在子宫内膜由对胚泡的非接受状态转变为接受态的过程中,阶段特异性糖蛋白可能具有重要作用。

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老化红细胞肌醇磷脂代谢的探讨

许彩民,肖殿模,刘晓冰,卢红,张丽君,周文华,潘华珍,张之南

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(03): 314-318.

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本文用密度梯度离心法,将红细胞分成年轻及老化两部分,分别测定了膜磷脂、甘油二酯及磷酸肌醇的含量,蛋白激酶C在膜内及胞浆内的分布及其对膜蛋白的磷酸化。实验结果表明老化及年轻红细胞磷脂含量,除磷脂酰胆碱明显降低外,其他均无差异。老化红细胞甘油二酯含量低于(P<0.01)年轻者,而磷酸肌醇两者含量相似。老化红细胞膜内蛋白激酶C活性远比年轻者高,而在胞浆内活性则相反。说明老化红细胞膜蛋白激酶C活性增高,可使红细胞膜蛋白4.1、4.2、4.5和4.9进行磷酸化,这些膜蛋白与维持红细胞形态及功能有关,可能它们的磷酸化是老化红细胞变形性降低,脆性增加的因素之一。

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脂肪族类两亲物对肌浆网膜蛋白结构的影响

陈曦,陈兰英

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(03): 319-325.

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本文观察和比较了六种C_(18)脂肪族类两亲物(fatty amphiphile,FA),包括硬脂酸(stearic acid)、硬脂胺(stearyl amine)、硬脂醇(stearyl alcohol)、油酸(oleic acid)、油胺(oleylamine)和油醇(oleyl alcohol),对肌浆网(sarcoplasmic reticulum,SR)钙泵蛋白结构的影响。当FA∶SR(μmol∶mg)的比例为2.67∶1—21.33∶1时,除油醇(oleyl alcohol)外,其余五种FA引起天然兔骨骼肌肌浆网蛋白内源荧光强度降低。随FA∶SR比例升高,降低幅度加大。五种FA的最大降低幅度在10—32％之间。其中带电荷FA比不带电荷FA的作用强,但均未见峰位位移。当FA∶SR的比例为2.67∶1时,除硬脂醇(stearyl alcohol)外,其余五种FA使N-(3-芘)-马来酰胺(N-(3-pyrene)maleimide,N-(3-p)-M)修饰的SR蛋白巯基荧光强度分别上升9％,40％,150％,193％和5％,但也未见峰位位移。ATP可减弱胺类FA引起的SR蛋白内源荧光降低和巯基荧光升高的幅度。油酸、油胺和硬脂胺既抑制SRCa~(2+),Mg~(2+)-ATPase活力和SR钙蓄积,又使SR钙泵蛋白的巯基修饰荧光显著上升。提示C_(18)脂肪族类两亲物使SR功能受损与其引起钙泵蛋白构象的显著变化有关。

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用PCR方法定量检测多药抗性基因的表达

汲言山,沈倍奋,王文香,郭静竹,李锦云

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(03): 326-330.

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肿瘤细胞对化疗药物的抗性是癌症有效化疗的主要障碍。人类细胞中多药抗性基因(MDR1)编码一种p-糖蛋白,后者功能是能量依赖的跨膜药物外输泵,可降低细胞毒药物在胞内的积累。定量分析MDR1表达水平可说明病人抗药能力的高低。本文应用PCR技术建立了灵敏度高、专一性好、可定量检测临床标本中MDR1表达水平的方法。对周血标本的初步检测表明:白血病化疗效果与MDR1表达水平的高低有关。

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人类鼻咽癌细胞株CNE2的转化基因Tx的一个Eco RI片段的核苷酸序列分析

胡维新,曹亚,黎民敬,姚开泰

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(03): 331-336.

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本文运用定点克隆法并结合鸟枪法,对人类鼻咽癌细胞抹CNE2转化基因Tx中一个与转化作用有关的Eco RI片段,进行了核苷酸序列分析。此种克隆方法的运用,大大减少了DNA模板的数量,并加快了测序的进展。将序列分析结果输入美国NCI的CRAY-2型超级电子计算机作进一步分析,以寻找基因库中的同源序列,酶切位点,开放阅读框架(ORF)。在人类DNA基因数据库中没有找到同源序列,从而证实Tx基因是一种新的人类转化基因。计算机的分析还得出了一系列有价值的结论,为进一步深入探讨这个基因在人类鼻咽癌发病学中的作用,提供了重要的资料。这是首次报道的Tx基因核苷酸序列分析结果。

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大肠杆菌表达的人重组IL-3的纯化

冯岚,马大龙,狄春辉,宋泉声,周宝宏,龙振洲

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(03): 337-341.

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本文继大肠杆菌表达含凝血酶切点的人重组IL-3融合蛋白成功的基础上进一步探讨了天然型rhIL-3的纯化。超声破碎细菌细胞得包涵体,经洗涤处理可使包涵体纯度达90％,用8mol/L尿素变性溶解包涵体沉淀后直接稀释复性,再超滤浓缩、凝血酶消化,释放天然型rhIL-3。经DEAE Sepharose Fast Flow和Sepharcyl-100 HR层析得到天然型IL-3,纯度达96％,回收率20％以上,具有刺激正常人骨髓细胞形成集落的活性。本实验为大批量重组IL-3的生产创造了条件。

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高压液相色谱法分离寡糖的对氨基苯甲酸乙脂衍生物

蒋可,陈宇东,钟晋贤

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(03): 342-346.

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寡糖的对氨基苯甲酸乙酯衍生物,以及它的全乙酰化产物具有紫外吸收基团适合HPLC分离,研究了氨基柱和十八烷基柱对寡糖混合物的分离性能及检测灵敏度。从免疫球蛋白M中分离到的寡糖组分,衍生后用HPLC进一步分离提纯出另一些含量较少的糖链。

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北京鸭血清HDL主要载脂蛋白的高效液相层析分离及其理化性质

贺延春,王克勤

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(03): 347-353.

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用高效液相层析(HPLC)对北京鸭血清高密度脂蛋白(HDL)的所有载脂蛋白(apo)分离纯化,得五个主要apo峰,经SDS-PAGE鉴定,均为单一带;并做了IEF、糖基含量分析;对其中含量高的四个apo峰样进行了氨基酸组成测定和N-端部分氨基酸序列分析;从所做理化性质的研究,发现北京鸭血清HDL中的主要apo为:A-Ⅰ、C-Ⅲ_o、apoC-Ⅲ_s(s=1,2)、apoC's及可能的A-Ⅲ,几乎不含E和A-Ⅱ_o北京鸭HDL中apo的上述组成特点明显不同于易患动脉粥样硬化(As)的人及兔等动物,在一定程度上决定了北京鸭HDL的形成与代谢具有其特点,该特点与北京鸭不易形成As密切相关。

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刺猬高重复顺序DNA的分子克隆及核苷酸顺序分析

谢清梅,黄秉仁,蔡良琬,林海玉

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(03): 354-357.

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为了分析比较食虫目高重复顺序的结构特征,我们将食虫目动物刺猬的高重复顺序DNA进行了分离、纯化、分子克隆,并测出了1186bp的核苷酸顺序。经分析发现在碱基组成上它与食虫目另一动物臭鼩有许多相似之处,如:G-C碱基对与A-T碱基对在整个片段中分布很不均衡;片段内部含有许多连续多次重复的短片段等,很可能为食虫目动物所特有。

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溶葡球菌酶的纯化和某些性质

周润琦,马力,张培德,阎栋材,杨瑞蓉,陈石根

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(03): 358-363.

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1.应用本实验室构建的克隆菌株枯草杆菌0044进行了溶葡球菌酶的发酵生产,产量为150—200mg/L; 2.通过DEAE-纤维素,CM-纤维素和Sephadex G-50层析纯化了该酶;并以NaCl盐析方式,首次获得了该酶结晶; 3.测定了溶葡球菌酶的某些性质; 4.观察并讨论了溶葡球菌酶与溶菌酶等在溶菌作用上的相互加强。

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人脑胶质瘤c DNA文库的构建

覃文新,王尧,赵涵芳,左剑玲,杜子威,章有章,陈诗书

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(03): 364-367.

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<正> 本室曾制备得到两株单克隆抗体,分别特异地针对两种胶质瘤相关抗原-47kD和180kD的膜糖蛋白。为了阐明这两种胶质瘤相关抗原的生物化学本质及其在正常胶质细胞向恶性转化过程中可能起的作用,我们构建了一个λgtll表达型的人脑胶质瘤cDNA文库,以便用上述单克隆抗体作为探针,从该文库中筛选出与之对应的胶质瘤相关抗原的cDNA克隆。现将建库工作简述于下。

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家蚕热休克基因的表达

袁均林,梅尚筠,梅星元

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(03): 368-371.

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<正> 近年来证实热休克蛋白(hsp)的诱导现象既具有普遍性而且在进化中较为保守。但是hsps的功能至今仍不清楚,高温处理曾应用于我国蚕业。hsp与耐热性的关系文献报导不一,本文报导了家蚕热休克基因的表达以及hsp与耐热性的相关性。

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用HPLC证实单糖在酸性处理中的变化

冯宇澄,田庚元

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(03): 372-374.

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<正> 在碱性条件下,醛糖与酮糖之间会发生结构互变。然而美国学者Feather M S等经过十多年的研究,发现在酸性条件下,葡萄糖、甘露糖和果糖之间也有分子内的互变,并应用~3H放射标记等技术,提出了互变的反应机理,这一互变的存在给寡糖及多糖的组份分析带来了一个问题,即用酸性条件水解寡糖或多糖后,如何确定其中的葡萄糖、甘露糖或果糖

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中药固真方对老年鼠睾丸间质细胞(Leydig细胞)LH受体的下行调节

韩志芬,顾文聪,杜国光

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(03): 375-376.

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<正> 中药固真方是由首乌、苁蓉等六味中药组成的复方,具有补肾益精、延缓衰老及调整下丘脑-垂体-性腺-胸腺轴的功能,实验还证明它能显著增加老年大鼠大脑皮质和海马组织中的肾上腺素能受体(α_1和β)、多巴胺受体、胆碱能受体和γ-氨基丁酸受体。本文比较了

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我国产肥皂草种子活性成分的研究

郑硕,李格娥,颜松民

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(03): 377-380.

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<正> 肥皂草(Sapdnaria officinalis)石竹科的一种观赏植物,原产欧洲,我国北方庭园有栽培。全草有毒,根和种子毒性较大。家畜大量采食茎叶后出现呕吐、疝痛、下痢等肠胃道症状。根含肥皂草甙(saporubin),有强烈的粘膜刺激和溶血作用。 1983年Stirpe从欧洲产肥皂草的种子分得Saporin,它抑制兔网织细胞裂解液的蛋白

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钙调素对超氧化物歧化酶及乳酸脱氢酶的激活作用

李晓东,张庭芳

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(03): 381-384.

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<正> 钙调素(Calmodulin,CaM)是一种分布最广,功能最重要的钙结合蛋白,对钙离子具有高度的特异性及很高的亲合力。CaM结构保守,生理功能稳定,在细胞内做为钙离子的受体蛋白,调节许多依赖钙离子的生理活动。CaM是一种多功能调节蛋白,现已发现有三十多种重要的酶及生理过程是由CaM调节的。超氧化物歧化酶(SOD)和乳酸脱氢酶

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