中国生物化学与分子生物学报

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彭朝晖,Kazuei Igarashi

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(05): 513-517.

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本实验用纯化的牛肝异亮氨酸tRNA(tRNA~(Ile))和异亮氨酰tRNA合成酶(IleRS),研究了精胺对Ile-tRNA复合物形成及IleRS活性的作用。结果表明:精胺能特异地促使牛肝tRNA~(Ile)氨基酰化反应;对IleRS活性无影响;能明显地增加形成Ile-tRNA复合物反应的Vmax和tRNA~(Ile)的Km值。

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蓖麻毒素A链的基因克隆

王文香,汲言山,沈倍奋

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(05): 518-521.

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作为导向药物蓖麻毒素A(Ricin-A)链在大肠杆菌中表达时不含糖基侧链,在体内半衰期长,可提高共作为导向药物的疗效。我们根据Ricin基因核苷酸序列,设计Ricin-A的上、下游引物,通过PCR(多聚酶链式反应)方法,扩增出Ricin-A链基因。与pUC_(19)载体连接,转化到JM103大肠杆菌中,得到重组克隆。对其进行几种酶切鉴定,证明酶切位点正确,又经序列分析,读出与文献发表的Ricin-A序列只有两个碱基不同,但无氨基酸残基的改变。有关Ricin-A的表达工作正在进行中。

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应用逆转录聚合酶链反应法扩增类胰岛素生长因子Ⅱ基因

高岩,黄秉仁,邓洁英

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(05): 522-528.

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利用酸性异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法从人胚胎组织中提取总RNA,经Oligo(dT)纤维柱分离纯化出mRNA。用逆转录与聚合酶链反应相结合的RT-PCR法,扩增出人类胰岛素生长因子Ⅱ(IGFⅡ)的cDNA片段,在限制性内切酶Sma Ⅰ存在的连接体系中,将扩增出的cDNA片段克隆进PUC12的Sma Ⅰ位点处。经限制性内切酶EcoR Ⅰ、Sal Ⅰ、Eco47Ⅲ酶切鉴定其方向。以重组质粒的双链DNA为模板,用末端终止法测定其全部核苷酸顺序,证实其核苷酸编码的IGFⅡ在氨基酸顺序上与文献报道的相同。

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Ⅰ型人免疫缺陷病毒(HIV-1)逆转录酶在大肠杆菌中的表达及其初步纯化

李满,陈辉,王嘉玺,凌世淦,马贤凯

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(05): 529-533.

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Ⅰ型人免疫缺陷病毒(HIV-1)逆转录酶(RT)在抗病毒感染及AIDS治疗药物的设计中是一个重要的靶分子,并且可作为工具酶应用于逆转录PCR等分子生物学研究中。本研究将HIV-1RT基因经PCR扩增并修饰后克隆入大肠杆菌表达载体pBV220,所获重组子所表达的HIV-1RT蛋白占菌体总蛋白的8％左右,且经[~3H]dTTP掺入法证实该重组HIV-1RT具有RT聚合酶活性。用Q-Sepharose层析柱对重组HIV-1RT蛋白进行了初步纯化,所获纯化样品的RT聚合酶比活性(1.7×10~4U/mg)比纯化前的裂解上清提高612倍。

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疏水吸附性载体上附加基团对天冬氨酸酶性质的影响

马林,阎岗林,高贵,由德林,程玉华

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(05): 534-538.

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6-氨基己酸和四乙烯基五胺通过高碘酸氧化法分别引入到邻甲苯胺基琼脂珠(TA)衍生物上,得到CTA和ATA,天冬氨酸酶在pH5.5,0.1mol/L磷酸缓冲液中,0.5mol/L KCl存在下通过疏水吸附固定化在TA,CTA和ATA上。结果表明三种固定化酶活力回收均达90％以上,同TA-天冬氨酸酶相比,CTA-酶,ATA-酶的最适pH,pH稳定性等均有所改变,其中ATA-酶的热稳定性,使用稳定性增强,CTA-酶的稳定性降低。

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牛肾上腺皮质LDL受体的纯化和抗体的制备

沃兴德,楼丽华,何一中

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(05): 539-543.

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牛肾上腺皮质LDL受体经Triton X-100增溶,DEAE_(32)离子交换柱和LpB Sepharose亲和柱层析,在SDS-PAGE中有三条区带,分别在原点;Mr 160kD;Mr125kD处。进一步用8％SDS-PAGE纯化三个区带的蛋白质分别免疫新西兰大白兔所得的抗体,应用免疫印迹和ECL非同位素标记法可对牛肾上腺皮质和人皮肤纤维细胞膜上的LDL受体进行测定。

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半夏凝集素的分离纯化和在植物中的分布

王克夷,郭锰

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(05): 544-548.

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从半夏(Pinellia ternata)块根中,经95％硫酸铵沉淀和固定化猪甲状腺球蛋白柱亲和层析分离得到一种凝集素,称为半夏凝集素(PTL)。凝胶过滤、SDS-PAGE和免疫双扩散鉴定PTL是均一的样品,分子量约44kD,由四个约12kD的亚基组成。PTL主要存在于半夏的块茎中,茎中也有少量存在。

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亲和层析法分离大鼠脂肪细胞膜上腺苷A_1受体

江黎明,覃燕梅,梁念慈

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(05): 549-553.

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本文采用腺苷亲和层析法从大鼠脂肪细胞膜上分离出了一种亚基分子量为38kD的腺苷结合蛋白质。此蛋白在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳上显示单一带,糖蛋白染色阳性;能与[8-~3H]腺苷特异结合(Kd=0.269nmol/L,Bmax=6.05pmol/mg.Pr);结合抑制实验表明它与腺苷A_1受体激动剂R-PIA、A_2受体激动剂NECA和腺苷的亲和力大小顺序为:R-PIA>腺苷>NECA。这表明所分离出的38kD蛋白是大鼠脂肪细胞膜上的腺苷A_1受体。

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半夏凝集素的糖结合活性研究

郭锰,王克夷

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(05): 554-558.

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半夏凝集素(PTL)可与甘露聚糖结合。本文以PTL与~(125)I标记的甘露聚糖的结合活性为指标,观察了一些金属离子对PTL的糖结合活性的影响,井对PTL的糖结合专一性作了较系统的研究。结果表明常见的金属离子或EDTA对其糖结合活性无显著影响,但K~+可明显增加PTL的糖结合活性。大多数单糖,二糖不抑制PTL与甘露聚糖的结合,但一些疏水配基形成的糖苷可产生显著的抑制效应。PTL专一与高甘露糖型糖链结合。

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人粒细胞集落刺激因子cDNA的克隆、序列鉴定及初步表达

李飞宇,孙宗棠,吴玉瑛,曲平

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(05): 559-563.

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利用多聚酶链反应技术,从人膀胱癌细胞系5637细胞中快速扩增并克隆了人粒细胞集落刺激因子cDNA,序列分析证明,该cDNA包含人粒细胞集落刺激因子的全部编码基因,全长612bp,编码30个氨基酸的信号肽和174个氨基酸的成熟蛋白。其中第43位codon出现一个碱基的突变(CAC→TAC)导至第43位氨基酸的改变(组氨酸→酪氨酸)。经逆转录病毒导入SP2/0细胞并初步表达。结果表明:该基因产物具有G-CSF活性。

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人前列腺特异抗原分离纯化

杨希震,唐瑜菁,肖志坚,蒋伟彬,蒋孟军

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(05): 564-568.

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本文报道了一种从人精液中提纯前列腺特异抗原的方法,本方法仅需Affigel-Blue gel柱和凝胶HPLC二步层析,即可得到均一的PSA纯品。这是一个快速、有效的提纯方法。PSA是前列腺癌的特异肿瘤标志物。

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甲基毒死蜱对红细胞膜乙酰胆碱酯酶的抑制作用及其与膜脂相互关系

朱砂,邹俊,罗运达,刘毓谷

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(05): 569-573.

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以人红细胞膜为材料,研究了甲基毒死蜱与膜上乙酰胆碱酯酶(AChE)的相互作用及其与膜脂的关系。结果显示,甲基毒死蜱对人红细胞膜AChE有明显的抑制作用,与膜温育30min,其半数抑制浓度约为0.10 mmol/L。动力学分析表明,其抑制作用为非竞争性。0.2％Triton X-100并不改变AChE对甲基毒死蜱的敏感性,亦即AChE上甲基毒死蜱的作用部位与其所处的脂质微环境无关。

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乙型肝炎病毒表面抗原preS1在大肠杆菌中的表达与鉴定

刘彦信,郑德先

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(05): 574-580.

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本文报告利用pWR590质粒为载体,构建了含1ac启动子、β-半乳糖苷酶(1—590)基因、Xa因子的四肽识别位点和HBV preS1、preS2编码序列的表达质粒,并成功地在大肠杆菌中获得稳定表达。融合蛋白经Xa因子消化和高效液相层析,得到了preS1(1—91)纯肽。此肽特异性地与人肝细胞质膜结合,从而为肝细胞上存在preS1受体提供了直接的实验依据,也为分离和鉴定肝细胞上preS1受体打下了良好的基础。

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直接酶标——化学发光分子杂交体系的建立

杨晓林,王申五

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(05): 581-585.

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本文通过调整发光剂、氧化剂、发光增强剂的浓度,并加入一组辅助剂,改进了依赖过氧化物酶化学发光液的配方。并通过比较实验证明:该发光液的检测灵敏度高于其它原有的发光液,同时还发现合成后的酶标复合物可经CM-32离子交换柱阶段洗脱纯化,以提高杂交灵敏度。从而建立了一套直接酶标DNA探针——化学发光自显影分子杂交体系。其狭缝杂交灵敏度可达0.03pg。并利用该体系进行了单拷贝基因分析,Western印迹杂交及检测血清HBV DNA等的应用研究。

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括楼素的纯化及其免疫毒素的制备

王润华,郑硕,沈倍奋

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(05): 586-590.

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利用凝胶过滤及离子交换层析从Trichosanthes kirilowii Maximowicz种子中分离出一种核糖体失活蛋白,称之为括楼素(Trichokirin)。这种毒素在无细胞体系中对蛋白质生物合成具有明显的抑制活性而对完整细胞的毒性很低。与单克隆抗体偶联后,括楼素对靶细胞显示了明显的特异性细胞毒作用。

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几种药物对HL-60细胞的诱导分化作用及其过程中蛋白激酶C活力分布的变化

庞玲,颜卉君,吴国利

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(05): 591-596.

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本文就HHT、RA、WB_(852)对HL-60细胞的诱导分化作用及此过程中PKC活力在细胞胞浆部分及膜溶脱部分的变化进行研究。结果表明,在适当的用药浓度下,从细胞生长抑制情况、形态学观察及NBT还原能力测定判断,三种药物对HL-60细胞有明显的诱导分化作用。PKC活力分布变化的研究结果表明,用药组细胞胞浆部分酶活力有不同程度的下降,尤在用药早期(约6h以前)下降显著;而膜部分PKC活力则表现上升、或下降,或活力相差不大的结果。暗示在信息传递过程中起核心作用的PKC对不同的胞外刺激可能采取不同的应答方式。PKC的作用可能主要发生在信息传递的早期。

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血清岩藻糖测定方法学研究

阎有功,解兵

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(05): 597-600.

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本文对血清岩藻糖测定方法进行了系统研究。血清用量由200μL减至50μL,显色反应4h内稳定。吸收峰在396nm。岩藻糖浓度40μg/mL内线性良好,批间CV=2.1％。以Sephadex-G200层析,血清岩藻糖主要存在于分子量为500kD的组分中。以本法测得30例健康人血清岩藻糖浓度为588.1±172.0μmol/L。

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棕色固氮菌铁超氧化物歧化酶的化学修饰——Ⅰ.酶与人白蛋白缀合物的制备

梁涌涛,罗贵民,孙启安,杨同书

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(05): 601-604.

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用化学交联法制备了Fe-SOD与人白蛋白的缀合物,研究该缀合物的理化性质,观察到此修饰酶的热稳定性、抗蛋白酶水解及酸水解的效能以及抗抑制剂作用都有显著提高。

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小量快速RNA,DNA提取研究耐药株中GSTπ及癌基因的表达

刘岳彪,陈亚军,吴德政

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(05): 605-609.

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本文采用一种小量快速RNA制备法(硫氰酸胍-酚,氯仿/耳戊醇-液氮)和DNA-RNA联合提取法(硫氰酸胍-酚,氯仿/异戊醇-液氮法),提取RNA和同一样本中DNA与RNA,同时采用一种快速液相杂交法,通过标记探针与样品DNA或RNA经变性-复性杂交、凝胶电泳、凝胶抽干、放射自显影。经用本法研究P388/ADR耐药株中的GSTπ及三种癌基因表达表明:耐药株中的GSTπ较敏感株增加1.56倍(p<0.05),而c-myc、v-erb-B、N-ras癌基因的扩增分别减少1.33,1.38和1.69倍(P<0.05)。

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引种西洋参叶水溶性多糖的研究——中性多糖PN的分离、纯化与结构分析

苗春艳,梁忠岩,张翼伸

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(05): 610-614.

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从引种西洋参中提取的水溶性多糖,经分离纯化得一分子量较小的中性多糖——PN。PN的分子量为7.4kD,主要成份为葡萄糖。经Sepbadex G-50凝胶柱层析和电泳方法分析为均一级份。经纤维素酶解,部分酸水解,高碘酸盐氧化和smith降解,红外光谱,甲基化,~(13)C-NMR分析表明,其具多分枝结构,分子主链由β-(1-4)连接的葡萄糖构成。分枝点率为25％,分枝点为0—6,其它残基在侧链上,分枝率为47.8％。

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衣霉素对人肝癌细胞表面胰岛素受体的影响

戚维维,陈惠黎

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(05): 615-619.

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衣霉素(Tunicamycin)是一种糖蛋白N-连接型糖链合成的抑制剂。它可抑制人肝癌细胞抹SMMC-7721的生长,其抑制率和剂量及处理时间有相关性。衣霉素处理细胞18h尚可显著抑制~3H-甘露糖和~3H-氨基葡萄糖参入细胞,但仅轻度抑制~3H-亮氨酸的参入。这些标记化合物的参入抑制都有量效关系。0.1gg/mL衣霉素处理18h后,细胞表面胰岛素受体和胰岛素的结合容量下降,而对照细胞和处理细胞的胰岛素竞争结合曲线基本平行。这主要由于衣霉素抑制新合成的胰岛素受体的糖基化所致。我们对糖基化障碍引起细胞膜胰岛素受体结合容量降低的机理作了讨论。

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若干苄基异喹啉类化合物的HPLC保留因子与抑制钙调素活性的关系

黄文龙,彭司勋,陈少林,胡卓逸

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(05): 620-625.

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苄基异喹啉类化合物具有较强的拮抗钙调素(Calmodulin,Cam)的活性,测定这类化合物HPLC参数LogK′作为疏水参数与抑制钙调素的活性进行相关分析,结果表明活性随化合物亲脂性的增大而升高,二者较符合抛物线关系。

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一些抗癌药物对荷瘤小鼠血清中唾液酸含量的影响

卢大用,徐静,胥彬,周爱民

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(05): 626-630.

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测定荷六种小鼠肿瘤S180肉瘤(实体型和腹水型),腹水肝癌(HepA),艾氏腹水瘤(EC),白血病P388和Lewis肺癌的小鼠腹水和血清中唾液酸含量,结果显示血清中唾液酸含量与肿瘤生长、肿瘤类型有关。腹水中唾液酸含量高,推测肿瘤能比正常组织产生更多唾液酸。对四种腹水肿瘤用阴离子交换树脂层析鉴定,发现HepA腹水中葡萄糖代唾液酸(NcuGc)含量明显低于其它三种腹水瘤。还研究了十几种抗癌药物对荷S180和Lewis肺癌小鼠血清中唾液酸含量的影响。发现吗丙嗪(probimane)和顺铂(DDP)能降低荷瘤小鼠血清中唾液酸含量,提示此二药物在肿瘤治疗中更具选择性。

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酵母多肽对几种细胞DNA合成的影响

王新昌,陈钧辉,周峰泉,史民,高翔,王新光

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(05): 631-634.

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<正> 我们用国内的新鲜酵母为材料,从中分离纯化到一种多肽——酵母多肽,其分子量为14kD。在低血清培养体系中能促使人成纤维细胞(HFB)和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的DNA合成。当培养液中酵母多肽的浓度为1μg/mL时能引起最大的刺激作用。但此多肽对胎牛心脏内皮细胞(FBHEC)的DNA合成则无作用。

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丙氨酸氨基转移酶同工酶的研究

马兰,杨振华

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(05): 635-637.

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<正> 丙氨酸氨基转移酶(ALT)(EC.2.6.1.2)是催化L-丙氨酸与α-酮戊二酸反应生成丙酮酸和谷氨酸的可逆反应的酶,在临床上是最常用酶之一。到目前为止,对于ALT同工酶的研究国内外文献报导甚少,国外文献仅限于动物。本文旨在探索人类ALT同工酶的存在及其在细胞内的分布。

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磷酰基对羧酸及酰胺侧链氨基酸结构差异的放大作用

李艳梅,赵玉芬

中国生物化学与分子生物学报. 1993, 9(05): 638-640.

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<正> 众所周知,自然界中二十种天然氨基酸之间的差异并非都是很显著的,从有机化学的角度而言,其化学反应性仅有很小的差异,如天冬氨酸与谷氨酸,缬氨酸与异亮氨酸等。然而,为什么生物体内存在这么多结构相近的氨基酸而且能够精确地辨别其不同并加以放大?

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