中国生物化学与分子生物学报

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云升，王申五，陆道培，刘晓荣

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(02): 131-134.

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本文介绍了与常规生物素或荧光标记引物不同，以及与同位素掺入ＰＣＲ产物不同的反向杂交技术，研究了生物素最佳掺入条件，测出加尾探针联结到尼龙膜上所需紫外光的强度，比较了生物素５＇端标记引物与生物素掺入ＰＣＲ产物的显色灵敏度，并根据实验测得的最佳条件分析了３个标准细胞株ＨＬＡ－ＤＰＢ_１基因型。

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人骨骼肌M蛋白的提取与纯化

屈竹青，卢鼎厚

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(02): 135-139.

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依据Ｔｒｉｎｉｃｋ－Ｅｐｐｅｎｂｅｒｇｅｒ对鸡骨骼肌Ｍ蛋白的提取方法，由人骨骼肌中得到的Ｍ蛋白粗提物除含分子量为１６５０００的Ｍ蛋白外，还含有分子量为１８５０００和１４００００（Ｃ成分）的两组分。由于在粗提物中未发现分子量为９００００的磷酸化酶，我们将最终纯化步骤中的亲和层析改为制备电泳，同样获得了纯化的Ｍ蛋白。

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骨骼肌M蛋白抗血清的制备及正常人骨骼肌M蛋白的免疫电镜定位

屈竹青，卢鼎厚

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(02): 140-145.

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分别制备了兔抗人Ｍ蛋白（Ｂ成分）抗血清和兔抗人Ｃ成分［１］抗血清。用蛋白Ａ－胶体金作标记物，对经ＬｏｗｉｃｒｙｌＫ４Ｍ低温包埋的人骨骼肌超薄切片中Ｍ蛋白和分子量１４００００的Ｃ成分进行免疫电镜定位。发现Ｍ蛋白分布于整个Ｍ线，而Ｃ成分虽然也集中于Ｍ线以内，但主要分布于Ｍ线内的边缘区域。

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三硝基甲苯致晶体氧化损伤的研究

王克维，张弘，张家萍，张昌颖

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(02): 146-149.

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采取大鼠晶体体外培养的方法，动态观察了在三硝基甲苯作用下，晶体中脂类过氧化、维生素Ｃ含量及超氧化物歧化酶活性的改变，并与对照组进行比较。发现随着三硝基甲苯作用时间的增加，晶体中脂类过氧化增高；维生素Ｃ含量呈下降趋势；超氧化物歧化酶活性在第１天升高，第５天下降。

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化学修饰对金顶侧耳多糖抗病毒（CB_5）活性的影响

张丽萍，孙非，张翼伸

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(02): 150-154.

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从金顶侧耳子实体中分离纯化一半乳甘露聚糖ＰＣ－３，其分子量约为６７ｋＤ，一级结构为α（１→６）糖苷键相连的Ｇａｌ构成分子的主链，部份残基Ｃ_２上带有分支，分支结构为α（１－２）Ｍａｎ－α（１－２）Ｍａｎ。按高碘酸氧化、部份酸水解，甲基化、硫酸化程序对ＰＣ－３的结构进行化学修饰；并分别将ＰＣ－３及其衍生物与柯萨奇病毒Ｂ_５进行体外实验，结果表明，ＰＣ－３经硫酸化后，显著地提高了抗病毒活性；而高碘酸氧化，甲基化，部份酸水解产物则降低了抗ＣＢ_５的活性。

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自由基与软骨基质胶原蛋白类型改变

张法浩，程天蓉，常淑云，许善锦，王夔

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(02): 155-158.

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本文利用ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳方法，定量研究了体外培养的软骨细胞和软骨组织基质中Ⅱ型胶原蛋白的含量。结果表明氧自由基（·Ｏ－２和·ＯＨ）和具有自由基性质的物质（黄腐酸，镰刀菌毒素）可使软骨细胞合成，分泌异常的非Ⅱ型的胶原蛋白，同时，硒化合物可明显地抑制此种效应。

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精胺和Mg~（2＋）对tRNA~（Ile）圆二向色谱的影响

彭朝晖，苏成芝

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(02): 159-163.

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由于精胺（ｓｐｅｒｍｉｎｅ）能特异地刺激哺乳动物ｔＲＮＡ~（Ｉｌｅ）的氨基酰化，本文用纯化的牛肝ｔＲＮＡ~（Ｉｌｅ）观察了精胺和Ｍｇ（２＋）对ｔＲＮＡ~（Ｉｌｅ）ＣＤ光谱的影响。结果显示：Ｍｇ（２＋）可使牛肝ｔＲＮＡ~（Ｉｌｅ）ＣＤ光谱峰向短波方向偏移２ｎｍ，波峰为２６３ｎｍ，峰值被增大约１０％，ΔθＭｇ（２＋）＝２．３×１０３ｄｅｇ·ｃｍ２／ｄｍｏｌ；而精胺使牛肝ｔＲＮＡ~（Ｉｌｅ）ＣＤ光谱峰减少４０％，Δθｓｐｅｒｍｉｎｅ＝１×１０（－４）ｄｅｇ·ｃｍ２／ｄｍｏｌ；精胺和Ｍｇ（２＋）对肝ｔＲＮＡ~（Ｉｌｅ）－ＩｌｅＲＳ复合物或ＩｌｅＲＳ的ＣＤ光谱基本无影响。表明Ｍｇ（２＋）和精胺可影响牛肝ｔＲＮＡ~（Ｉｌｅ）的构象。实验同时以酵母ｔＲＮＡ（Ｐｈｅ）和Ｅ·ｃｏｌｉｔＲＮＡ~（Ｉｌｅ）作为对照。

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大肠杆菌表达质粒pSM43及pSM53的构建

陈苏民

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(02): 164-168.

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利用已成功高表达ｅｒａ基因的质粒ｐＣＥ３１翻译起始码上游的序列，去构建大肠杆菌新的外源基因表达载体。先合成特定序列的单链脱氧寡核苷酸，以改进的实验程序插入ｐＪＬ６，其后再加上限制酶多克隆位点。所构建的ｐＳＭ４３和ｐＳＭ５３分别适合於不带翻译起始码（ＡＴＧ）和带起始码的基因插入、表达非融合目的蛋白质之用。并已成功用於人肿瘤坏死因子、人骨形成蛋白、ＨＩＶ蛋白酶、Ｄｕｃｈｅｎｎｅ肌营养不良等ｃＤＮＡ基因的高表达。

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人血红细胞蛋白质酪氨酸磷酸酶（PTPP）的研究Ⅰ·PTPP在红细胞胞浆和膜中的分布及其影响因素

朱茂祥，吴国利

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(02): 169-173.

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通过测定红细胞胞浆及膜中的ＰＴＰＰ活性，发现人正常血红细胞中胞浆ＰＴＰＰ活性约占红细胞ＰＴＰＰ总活性的７０－８０％，膜中只有约２０－３０％的ＰＴＰＰ活性。很多因素诸如：病变、ＰＨ值、温度、离子强度、细胞贮存时间以及药物等，对ＰＴＰＰ在胞浆与膜中的分布有影响。可以推测：膜上的ＰＴＰＰ能通过某种机制解离下来，进入胞浆；相反的过程，胞浆中的ＰＴＰＰ也能通过某种机制与膜结合。这种偶联与去偶联的具体机制及其生理功能还有待进一步探索。

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人血红细胞酪氨酸蛋白磷酸酶（PTPP）的研究Ⅱ·胞浆PTPP的分离纯化及其主要性质

朱茂祥，吴国利

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(02): 174-179.

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人血红细胞胞浆部分经（ＮＨ_４）_２ＳＯ_４沉淀，ＤＥＡＥ－纤维素（ＤＥ５２）柱层析，磷酸纤维素柱层析（Ｐ１１）得到部分纯化的ＰＴＰＰ，产率：５．７％，提纯１０７５倍。以（３２）￣Ｐ－Ｔｙｒ－Ｐｏｌｙ（Ｇ_４：Ｔ）作底物，测得其表征Ｋｍ约为０．５－０．８μｍｏｌ／Ｌ，该酶的最适ｐＨ和最适温度分别为７．０－７．８及３７－４０℃。Ｚｎ￣（２＋）等二价金属离子及Ｎａ_３ＶＯ_４等酸根基团对其活性有明显的抑制作用；ＥＤＴＡ、甘油及ＤＴＴ、巯基乙醇等则对其有强烈激活作用；而氟化物、酒石酸等对ＰＴＰＰ活性基本无影响。此外，某些蛋白质、氨基酸、核苷酸及抗肿瘤药物等对ＰＴＰＰ活性也都有不同程度的影响。特别是一些ＰＫｓ及ＰＰｓ在体外对ＰＴＰＰ活性也具有不同的作用。

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人脑及红细胞膜乙酰胆碱酯酶的芳基酰胺酶活性

朱美财，王荫静，向培德，孙曼霁

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(02): 180-184.

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采用联合亲和层析法从人小脑及红细胞膜中纯化了ＡＣｈＥ，纯化的人脑及红细胞ＡＣｈＥ在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上呈一主带，分子量约为６６０００。人脑ＡＣｈＥ制备酯酶与酰胺酶比活性分别为１２９９与１４３Ｕ／ｍｇ，人红细胞ＡＣｈＥ制备分别为４５８４与７４７Ｕ／ｍｇ。人脑及红细胞ＡＣｈＥ制备的酯酶与酰胺酶活性最适ｐＨ较接近，在ｐＨ７．５－８．０之间，酯酶活性底物ＡＴＣｈ对其芳基酰胺酶活性有抑制作用。ＩＣ_（５０）分别为１０．２×１０~（－３）及３×１０~（－３）ｍｏｌ／Ｌ。梭曼对其酯酶及酰胺酶活性均有明显抑制作用，说明二者均需活性中心丝氨酸参与。

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钙／钙调素依赖性蛋白激酶对17．7kD和6kD胰腺蛋白的磷酸化

李翠凤，凌启阆，王军，尚克进

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(02): 185-190.

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本文报导了胰腺提取物中两种可被钙／钙调素依赖性蛋白激酶磷酸化的热稳定蛋白。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定其表观分子量分别为１７．７ｋＤ和６ｋＤ。经钙／钙调素依赖性蛋白激酶磷酸化后，其最大磷酸参入量为８．８μｍｏｌ／ｇ蛋白。同时磷酸化作用导致１７．７ｋＤ蛋白在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ中迁移率发生变化。本文还进一步分析了各种阳离子对磷酸化的影响，并对此两种蛋白可能具有的生理功能进行了初步探讨。

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肝细胞的异质性：葡萄糖和酮体在大鼠肝脏的代谢

臧宁

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(02): 191-195.

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用大鼠肝脏门静脉或肝静脉周围的肝细胞来研究葡萄糖和酮体生成的区域分布。肝细胞通过毛地黄皂苷－胶原酶灌流技术分离。门静脉周围肝细胞的γ谷氨酰转肽酶的活性比肝静脉周围肝细胞高２．４倍；而谷氨酰胺合成酶的活性则相反，肝静脉周围肝细胞高出５６倍。门静脉周围肝细胞的内源性葡萄糖合成比肝静脉周围肝细胞高１．５７倍。给予刺激葡萄糖异生的底物，门静脉周围肝细胞的葡萄糖合成则增加１．７－２．１倍。肝静脉周围肝细胞的内源性酮体生成比门静脉周围肝细胞高１．３倍。给予能明显刺激酮体生成的辛酸盐，肝静脉周围肝细胞的酮体生成仅略为增加。我们的结果证实，在基础和刺激的条件下，葡萄糖的异生在门静脉周围肝细胞中优先，而酮体生成仅在肝静脉周围肝细胞占微弱的优势。

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超氧阴离子对心肌细胞Ca~（2＋）平衡的影响及硒的保护作用

杨志伟，聂玉生，杨福愉

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(02): 196-201.

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在超氧阴离子（Ｏ~－_２）作用下，心肌细胞内游离钙浓度（［Ｃａ~（２＋）］_ｉ）显著升高；心肌细胞膜通透性明显增强；膜脂流动性下降。一定浓度的硒代蛋氨酸（Ｓｅ－Ｍｅｔ）或亚硒酸钠（Ｎａ_２ＳｅＯ_３）可不同程度地拮抗Ｏ~－_２的影响。前者作用更为显著。这两种硒化合物也能提高谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）的活性。综上所述，硒缺乏，高自由基及心肌细胞Ｃａ~（２＋）平衡失调三者之间存在着相关性。在Ｏ~－_２作用下，心肌细胞内Ｃａ~（２＋）平衡失调比膜通透性的改变更为敏感。

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白茯苓凝集素的研究

刘荣华，曾仲奎，周红

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(02): 202-207.

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以中药白茯苓为材料，采用盐析、离子交换及凝胶过滤可纯化出快速蛋白液相谱（ＦＰＬＣ）纯的白茯苓凝集素（ＳＬＬ）。当其浓度为０．２５μｇ／ｍＬ时就能凝集兔红细胞，对人类Ａ，Ｂ，Ｏ型血细胞无作用。甲状腺球蛋白、卵粘蛋白和胃粘蛋白对ＳＬＬ的凝血活性有强抑制作用，而常见糖类对其无明显抑制作用。ＳＬＬ含中性糖１２．５％，凝胶过滤及ＦＰＬＣ测得分子量为３１０００，亚基分子量为８０００，表明ＳＬＬ可能由四个相同亚基组成。ＳＬＬ对酸、碱、热均有较高的耐受性，并且是一个强促有丝分裂原。

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人淋巴细胞CD2基因5’侧翼序列的克隆和鉴定

刘睿，郑德先，许成素，杨桂珍，刘士廉

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(02): 208-212.

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本文报告以ＣＤ２ｃＤＮＡ５’端的片段作探针，从人Ｔ淋巴细胞基因组文库筛选阳性重组克隆，经限制性内切酶降解和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析，证明其中一个阳性克隆的插入片段中含ＣＤ２基因５’侧翼顺序。经插入片段的亚克隆、限制性内切酶图谱及ＤＮＡ序列分析，鉴定出一含转录起始点及其上游序列的４．０ｋｂ片段。将此片段中含转录起始点和两个ＤＮ（ａｓｅ）Ⅰ高敏感位点的２．５ｋｂ片段定向克隆到以虫萤光素酶为报告基因的表达载体ｐＭＧ３中，并用限制性内切酶对此２．５ｋｂ片段作不同程度缺失，构成一系列突变子。这些重组的表达质粒转染人ＪｕｒｋａｔＴ细胞后，以瞬时表达实验分析各突变子驱动虫萤光素酶基因的表达，结果发现在ＣＤ２基因５’上游具有很弱的启动子活性，初步测定该启动子位于－１．２ｋｂ～－９８ｂｐ域。ＣＤ２基因具有弱启动子、强增强子的特点与Ｔ细胞表面其它抗原分子基因是相似的。

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抗人CD3单抗重、轻链可变区基因的体外扩增、克隆和序列分析

杨安钢，许辉，吉昌华，韩骅，杨立宏，金伯泉，苏成芝

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(02): 213-217.

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根据免疫球蛋白重链和轻链可变区基因５’端序列和Ｊ区序列，化学合成适合于体外扩增抗体重、轻链可变区基因的二对引物。从体外培养的ＯＫＴ３杂交瘤细胞中提取总ＲＮＡ，反转录生成ｃＤＮＡ，以ｃＤＮＡ为模板，分别加入合成的重、轻链可变区引物进行ＰＣＲ，扩增出抗体重、轻链可变区基因片段。将扩增产物分别插入ｐＵＣ１９质粒，筛选出阳性克隆，用链终止法进行ＤＮＡ序列测定。所测重链可变区基因全长３５７ｂｐ，编码１１９个氨基酸，轻链可变区基因全长３２１ｂｐ，编码１０７个氨基酸。

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表皮生长因子对鼠胚成纤维细胞细胞周期的调节作用

蔡家新，童坦君

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(02): 218-222.

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本文观察了表皮生长因子（ＥＧＦ）对小鼠胚胎成纤维细胞Ｃ_３Ｈ／１０Ｔ_１／２ＣＬ_８（简称Ｃ_３Ｈ／１０）细胞周期的影响。结果表明：ＥＧＦ使Ｓ期提前，细胞周期缩短。进一步探讨了ＥＧＦ对细胞周期影响的机制，发现ＥＧＦ可活化在细胞周期调节中起重要作用的Ｐ３４~（ｃｄｃ２）激酶（简称ＣＤ２Ｋ），使ＣＤ２Ｋ在周期中活性高峰出现的时间提前，提示ＥＧＦ对细胞周期的影响可能通过作用于ＣＤ２Ｋ实现的。

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固氮粪产碱菌谷氨酰胺合成酶的分离纯化及其特性

尤崇杓，张良才，宋未

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(02): 223-229.

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联合固氮细菌粪产碱菌（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓｆａｅｃａｌｉｓ）Ａ１５０１菌体经超声破碎后，无细胞粗提液以ＰＥＧ－６０００分级沉淀，丙酮沉淀，再经蓝琼脂糖（ＢｌｕｅＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６８）亲和层析分离、纯化。获得的纯谷氨酰胺合成酶（ＧＳ）在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和４－３０％梯度ＰＡＧＥ上均呈均一的一条带。ＧＳ亚基及整酶分子量分别为５５ｋＤ和６４５ｋＤ，亚基由４５６个氨基酸残基组成。ＧＳ的Ｋｍ值，在以Ｇｌｕ为氮源的介质中培养时分别为２０ｍｍｏｌ／Ｌ（Ｇｌｕ），５０ｍｍｏｌ／Ｌ（ＡＴＰ）和４５ｍｍｏｌ／Ｌ（ＮＨ~＋_４）；在以ＮＨ~＋_４为氮源的介质中培养时则分别为７０ｍｍｏｌ／Ｌ（Ｇｌｕ），４９ｍｍｏｌ／Ｌ（ＡＴＰ）和８０ｍｍｏｌ／Ｌ（ＮＨ~＋_４），表明ＮＨ~＋_４培养下形成高度腺苷化的ＧＳ对Ｇｌｕ及ＮＨ~＋_４的亲和力有所下降。

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固氮粪产碱菌谷氨酰胺合成酶的构象变化及调节作用

宋未，张良才，尤崇杓

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(02): 230-235.

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应用园二色谱测定了粪产碱菌（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓｆａｅｃａｌｉｓ）谷氨酰胺合成酶（ＧＳ）各构象，结果表明在Ｇｌｕ培养下α螺旋为２８％，β折叠为２２％，无规则卷曲占５０％；而在ＮＨ~＋_４培养下，三者相应为２０％，２０％，６０％。荧光光谱及付立叶红外光谱也证明，两种培养条件下ＧＳ的构象存在着差异。不同氮源对粪产碱菌ＧＳ的形成有显著的影响。高浓度ＮＨ~＋_４培养下ＧＳ合成受到阻遇，而Ｇｌｕ或低浓度ＮＨ~＋_４则对ＧＳ合成无明显的影响。ＮＨ~＋_４对固氮酶活性瞬间抑制可以被ＧＳ的抑制剂部分消除，但ＧＳ活性也受抑制。

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一种与受精有关的人精子膜蛋白（BS－17）的分离纯化

魏曙光，王琳芳，缪时英，石心泉，宗书东

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(02): 236-241.

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本文用盐分级分离，ＭｏｎｏＱＦＰＬＣ及ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）等方法从人精子ＣＨＡＰＳ抽提液中分离纯化出一种与不育病人血清中抗精子抗体发生特异反应的ＢＳ－１７人精子膜蛋白。该蛋白为一糖蛋白，分子量为１７．５５±２．１５ｋＤ，等电点为５．６５，中性己糖含量为１６．６７％。在人精子上主要分布于顶体区域，不同于已有报导的人精子膜蛋白。在体外实验中抗ＢＳ－１７多克隆血清可以显著影响人精子的获能（ｐ＜０．０２５）和对去透明带仓鼠卵的穿透（ｐ＜０．００５），但不影响人精子运动性及与去透明酯酸带仓鼠卵的结合。小鼠体内被动免疫实验结果证明抗ＢＳ－１７多抗血清具有明显地抑制受精的功能（ｐ＜０．００１）。

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一种与Calpastatin具有部分同源结构的人精子膜蛋白的发现与研究

魏曙光，缪时英，张梅林，王琳芳，宗书东

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(02): 242-246.

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在以前工作中我们从人精子中分离纯化出一种与生育有关的糖蛋白，命名为ＢＳ－１７。本文用其多克隆抗血清从人睾丸λｇｔ１１ｃＤＮＡ表达库中克隆了编码ＢＳ－１７的ｃＤＮＡ片段。序列分析表明ＢＳ－１７ｃＤＮＡ片段长７９１ｂｐ，开放阅读框架５５８ｂｐ，可编码１８６个氨基酸。经数据库检索，该ｃＤＮＡ片段与人Ｃａｌｐａｓｔａｔｉｎ（Ｃａ￣（２＋）依赖的半胱氨酸蛋白酶ｃａｌｐａｉｎ抑制剂）基因３’端顺序具有９９．７％的同源，与Ｃａｌｐａｓｔａｔｉｎ蛋白质羧基末端同源性为９９．５％。用ｃＲＮＡ进行组织原位杂交结果表明，ＢＳ－１７基因表达于人精子减数分裂后期单倍精细胞阶段。

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三硝基甲苯对大鼠晶状体中可溶性蛋白质、巯基及二硫键含量的影响

王克维，张弘，张家萍，张昌颖

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(02): 247-251.

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我们采用三硝基甲苯（ＴＮＴ）与大鼠晶状体体外培养的方法，动态观察了晶状体中可溶性蛋白质、非蛋白质巯基、蛋白质巯基、蛋白质结合巯基及二硫键含量的变化，发现随着三硝基甲苯作用时间的延长，可溶性蛋白质、非蛋白质巯基及蛋白质巯基均减少，蛋白质结合巯基及二硫键交联的蛋白质含量增加，其中可溶性蛋白质、非蛋白质巯基及二硫键含量的变化皆达到了统计学上显著意义水平（Ｐ＜０．０５）。

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人精子中性鞘糖脂的纯化与分析及其抗体的制备与鉴定

刘建军，崔肇春，朱正美

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(02): 252-255.

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人精子中性鞘糖脂的纯化与分析及其抗体的制备与鉴定刘建军，崔肇春，朱正美（大连医科大学生化教研室，大连１１６０２３）抗精子抗体（ＡｓＡｂ）可导致免疫不孕已被证实［１］。有研究表明鞘糖脂（ＧＳＬ）在精卵识别中可能具有重要作用［２］。已知ＧＳＬ具有抗原性。...

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