中国生物化学与分子生物学报

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潘颖，黄如彬，王泽生，佟大山，吴玉荣

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(04): 387-391.

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神经节苷脂在脊椎动物的神经组织细胞膜上含量丰富，除有受体的功能外，还有许多其它功能。采用离心液相色谱法，以国产硅胶Ｇ－６０为填料，分离纯化神经节苷脂，取得了满意的效果。经分离后产物的脂结合唾液酸（ＬＢＳＡ）含量，由１４．３％提高到２４．１％。以蛋白质含量为代表的含氮化合物由２２．０％降至９．６％。回收率为９０．２５％。特点是操作简便、周期短、成本低、效果好。优于ｌａｔｒｏｂｅａｄｓ柱层析法。

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N42－A对神经生长因子诱导PC12细胞分化的抑制作用

江黎明，李志明，韩宝铭

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(04): 392-396.

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研究表明，缺乏神经生长因子（ＮＧＦ）的营养支持是Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ＇ｓ等神经元退行性疾病发生发展的重要原因，而ＮＧＦ和／或ＮＧＦ受体的过度表达则与一些神经系统肿瘤的发生发展有着十分密切的因果关系。采用（１２５）Ⅰ－ＮＧＦ受体特异结合实验作为ＮＧＦ受体活性物质筛选实验模型从中药牛膝中筛选出了能强烈地抑制（１２５）Ⅰ－ＮＧＦ受体结合的活性成分Ｎ４２－Ａ（ⅠＣ（５０）＝６．１８±３．４３，ｎ＝４）；细胞培养实验表明，Ｎ４２－Ａ对ＮＧＦ诱导大鼠嗜铬神经瘤ＰＣｌ２细胞的分化也具有很强的剂量依赖性抑制作用（对０．１ｎｍｏｌ／Ｌ和０．２ｎｍｏｌ／ＬＮＧＦ诱导的大鼠嗜铬神经病ＰＣ１２细胞轴突生长的半数抑制浓度分别为６μｇ／ｍＬ和２１μｇ／ｍＬ）。这表明，Ｎ４２－Ａ是神经元上介导ＮＧＦ诱导轴突生长的特异受体抑制剂，不仅对ＮＧＦ及其受体过度表达所致的神经系统肿瘤的防治具有潜在的应用价值，而且对Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ＇ｓ等神经元退行性疾病防治药物的开发研究具有十分重要的意义。

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笋瓜籽毒蛋白Maximin──一种新的蛋白质生物合成抑制剂的分离纯化及性质

钟雪梅，高闻达，毛俊浩，许驰捷，曹蕙婷，张祖传

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(04): 397-401.

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笋瓜（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｍａｘｉｍａ）种籽经去壳捣碎，乙醚脱脂，硫酸铵分级沉淀，阳离子交换层析及凝胶过滤等步骤，纯化到一种有蛋白质生物合成抑制活性的碱性蛋白，命名为Ｍａｘｉｍｉｎ，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示单一条带，其分子量约为２８ｋＤ。该蛋白对兔网织红细胞裂解液的蛋白生物合成有较强的抑制，ＩＣ_（５０）为４．０×１０~（－１０）ｍｏｌ／Ｌ，与天花粉蛋白（ＴＣＳ）毒性相似。从这些特性可见，该蛋白似为单链核糖体失活蛋白（ＲＩＰ）家族中的新成员，可望作为免疫毒素的一种新“弹头”。

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缢蛏碱性磷酸酶胍溶液中分子折叠与活力变化研究

颜思旭，刘红兵，陈臻臻，蔡红玉

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(04): 402-406.

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报道了缢蛏碱性磷酸酶（简称ＡＬＰ）经不同浓度盐酸胍处理时酶的分子构象所发生的变化以及酶变化和失活的动力学过程。在胍中酶荧光发射峰强度下降，紫外差光谱在２４６ｎｍ和２８５ｎｍ处出现２个负峰，ＣＤ谱中酶的α螺旋度下降，且随浓度增大，变化程度也加大。动力学研究表明，酶在０．５ｍｏｌ／Ｌ、１．０ｍｏｌ／Ｌ、２．０ｍｏｌ／Ｌ３．０ｍｏｌ／Ｌ、４．０ｍｏｌ／Ｌ盐酸胍中的变性速度常数分别为３．２１×１０~（－４）ｓ~（－１）、６．３８×１０~（－４）ｓ~（－１）、２．１７×１０~（－３）ｓ~（－１）、２．３３×１０~（－３）ｓ~９－１）、５．１７×１０~（－３）ｓ~（－１）；而酶在相应盐酸胍中的失活速度常数分别为２．３３×１０~（－４）ｓ~（－１）、３．５７×１０~（－４）ｓ~（－１）、５．８６×１０~（－４）ｓ~（－１）、１．１４×１０~（－３）ｓ~（－１）、３．４５×１０~（－３）ｓ~（－１）；表现为失活与构象伸展变化基本平行。

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树舌多糖Fb、Fc的结构研究

梁忠岩，谭日红，张翼伸，苗春艳

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(04): 407-412.

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从树舌子实体中分离纯化出另两个级分Ｆｂ、Ｆｃ，经超速离心，电泳，ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－４Ｂ柱层析等确定其均为质点、极性均一级分。经ＧＣ、ＩＯ＿４～－氧化，Ｓｍｉｔｈ降解，部分酸水解，甲基化及其产物ＧＣ，ＧＣ－ｍｓ分析，ＩＲ等分析确定Ｆｂ是由１→３甘露糖基构成主链，分枝点率及分枝率均较大；Ｆｃ由１→６和１→４甘露糖基构成主链，分枝点率及分枝率较少。

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鸭肝脂肪酸合成酶的NADPH底物抑制及作用动力学

田维熙，蒋若帆，吴海斌，史艳红，王一煌

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(04): 413-419.

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己知动物脂肪酸合成酶的底物乙酰辅酶Ａ和丙二酰辅酶Ａ具有竞争性双底物抑制的乒乓机制。实验发现鸭肝脂肪酸合成酶的第三个底物ＮＡＤＰＨ也具有底物抑制，并研究了它的规律及与ＮＡＤＰＨ有关的稳态动力学。发现对于该酶的全反应，增加丙二酰辅酶Ａ浓度，降低环境盐浓度，均使ＮＡＤＰＨ底物抑制减少。但以ＮＡＤＰＨ作底物的酮酰还原和烯酰还原二步单独反应以及包含四步单独反应的乙酰乙酰辅酶Ａ还原反应都无ＮＡＤＰＨ底物抑制现象。ＮＡＤＰＨ底物抑制对丙二酰辅酶Ａ为竞争性，丙二酰辅酶Ａ底物抑制对ＮＡＤＰＨ为非竞争性。在全反应中ＮＡＤＰＨ和丙二酰辅酶Ａ之间发现为乒乓机制，在乙酰乙酰辅酶Ａ还原反应中，两个底物ＮＡＤＰＨ和乙酰乙酰辅酶Ａ之间则表现为序列反应机制。降低环境盐浓度使ＮＡＤＰＨ和丙二酰辅酶Ａ之间的乒乓机制向序列机制转化。在全反应中，ＮＡＤＰ产物抑制相对ＮＡＤＰ为竞争性，对丙二酰辅酶Ａ为非竞争性。

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南方鲇碱性磷酸酶的分离纯化及部分性质的研究

陈定福

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(04): 420-426.

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用正丁醇抽提，硫酸铵分级沉淀，ＤＥＡＥ－纤维素和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００柱层析，从南方鲇（Ｓｉｌｕｒｕｓ　ｍｅｒｉｄｉｏｎａｌｉｓ　Ｃｈｅｎ）肠粘膜中提取出碱性磷酸酶（ＡＫＰ）。提纯倍数为３９．５０倍，比活为６８．３５μ／ｍｇ蛋白，提取酶液经ＰＡＧＥ和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ只呈现一条区带。该酶的分子量为１３２１４０，Ｎ末端氨基酸为门冬氨酸，最适ｐＨ为１０．１０，７．５＞ｐＨ＞１１．５时不稳定，最适温度为４０℃左右，对热不很稳定，以磷酸苯二钠为底物其Ｋ_ｍ值为１．７２×１０~（－３）ｍｏｌ／Ｌ。Ｍｇ~（２＋）、Ｍｎ~（２＋）为该酶的激活剂，ＫＨ_２ＰＯ_４、Ｌ－ＣｙＳ、ＭＥ、ＤＦＰ、ＥＤＴＡ－Ｎａ_２为抑制剂。选用ＫＨ_２ＰＯ_４和ＤＦＰ作抑制类型的判断，结果表明，ＫＨ_２ＰＯ_４属竞争性掏剂，其抑制常数为２．３ｍｍｏｌ／Ｌ；ＤＦＰ为非竞争性抑制剂，抑制常数为１．０５ｍｍｏｌ／Ｌ。

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DNA与蛋白质结合的荧光测定

王志珍

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(04): 427-432.

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构建了插入λ阻抑蛋白（Ｒｅｐ）的操纵基因（ＯＲ）和ＢｇｌⅡ识别位点的ＰＢＲ３２２重组质粒。阻抑蛋白与该质粒的相互作用可用ＢｇｌⅡ对它的水解作用引起的ＥＢ荧光变化来研究。在Ｅ．ｃｏｌｉ中表达的Ｒｅｐ表现了与该重组质粒结合的活力。核苷酸序列具精确二重对称性的ＯＲ（ＯＲｃｏｎｓ）对Ｒｅｐ的亲和力比天然的ＯＲ１小。

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生物膜能量偶联ATP酶的研究牛心线粒体F_1冷盐解离后各部分的亚基分析

丁友真，李小洁，张炜，蔡惠罗

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(04): 433-438.

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纯化的牛心线粒体Ｆ１ＡＴＰ酶（Ｆ_１）在有１ｍｏｌ／ＬＫＣｌ的介质中，０℃保温１ｈ，酶活性降到接近于零，经脱盐并在室温（２０—２５℃）保温，可恢复约６０％的酶活性。电泳结果表明，冷盐处理１ｈ的样品解来成了四个亚部分，这四个部分的亚基组成分别是Ⅰ，α，γ，δ，ε，Ⅱ，β，δ，ε，Ⅲ，β，ε，Ⅳ，β。经冷盐处理１ｈ和５ｈ的Ｆ_１进行ＨＰＬＣ分析的结果有显著的差别。

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疏水载体固定化胆碱酯酶的研究

郭胜清，曹树桂，马林，程玉华

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(04): 439-443.

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首次摸索了带有疏水基团琼脂珠固定化鸭血清胆碱酯酶的最佳条件，固定化酶活力回收为７０一７６％。探讨了不同疏水基团对固定化酶偶联率、稳定性及对有机磷化合物灵敏度的影响。α－萘氨基、Ｐ－甲苯氨基和苄氨基载体固定化酶连续操作半哀期分别为２２．３ｈ，２１．７ｈ，１２．８ｈ，对有机磷化合物Ｖｘ和ＧＢ的灵敏度分别提高了２．２～１２．６倍和２．３～４．９倍，这对于在环境保护、食品检验、军事侦检等领域检测微量有机磷化合物具有重要意义。

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镉诱导威廉环毛蚓（Pheretima　guillelmi）金属硫蛋白的分离纯化及特性研究

李令媛，马宏宝，吕迎春，茹炳根，沈同

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(04): 444-450.

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蚯蚓威廉环毛（ｐｈｅｒｅｔｉｍａ　ｇｕｉｌｌｅｌｍｉ）经皮下注射ＣｄＣｌ２溶液诱导后，整体匀浆，再经热沉淀、乙醇沉淀后，经凝胶过滤Ｓｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ－５０柱层析，得两个镉结合蛋白峰，分子量依次为４３ｋＤ及１９ｋＤ。这两个组份再分别经ＤＥＡＥ　Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ　Ｆａｓｔ　Ｆｌｏｗ柱层析，各得三个镉结合蛋白峰。根据光谱学特征、巯基含量及氨基酸组成等分析，表明凝胶过滤第二峰为金属硫蛋白（ＭＴ），其经ＤＥＡＥ柱层析所得三个峰为ＭＴ三个亚型，Ｎ末端分别为Ｌｙｓ、Ａｌａ、Ａｌａ。

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反义RNA对人胃癌细胞生长抑制及恶性表型的阻断作用

吕有勇，张青云，谢山海，李诤，李文梅，胥薇，徐宁志，崔建涛，李吉友，邓国仁

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(04): 451-456.

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ｒａｓ原癌基因的点突变是人胃癌发生发展的重要机理之一。利用能表达ｃ－Ｈ－ｒａｓ癌基因反义ＲＮＡ的质粒，导入人胃癌细胞系ＢＧＣ－８２３，研究了ｒａｓ癌基因反义ＲＮＡ对人胃癌细胞生长及恶性表型的作用，结果表明，ｃ－Ｈ－ｒａｓ反义ＲＮＡ可引起ＢＧＣ－８２３生长速率及形态的变化，在半固体培养基中细胞集落形成能力减弱，部分地抑制了ＢＧＣ－８２３在裸鼠体内的致瘤性。ｃ－Ｈ－ｒａｓ反义ＲＮＡ对其ＲＮＡ的过量表达呈特异性抑制作用。

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羟自由基对人红细胞氧化囊泡化的作用

冯立明，许彩民，方芳，卢红，刘晓冰，潘华珍

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(04): 457-461.

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红细胞经氧化处理后，发现红细胞膜区带１、２、２．１及３易形成高聚物，同时Ｈｂ亦有氧化变性。氧化过程中磷脂（ＰＳ、ＰＥ）逐渐减少，根据此结果提出氧化产生囊泡化的机制是：首先Ｈｂ氧化变性，膜骨架蛋白聚集，从而网架松散，膜磷脂脱离骨架的束缚，膜脂质与膜整合蛋白形成小囊泡从红细胞上脱落。

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4－氨基二苯醚对体内外肝微粒体混合功能氧化酶催化活性的影响

蒋惠娣，李士敏，董立，刘志强

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(04): 462-465.

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小鼠每天腹腔注射４－氨公－２’，４’－二氯二苯醚（２’，４’－ｄｉｃｌ）及４－氨基－４’－甲基二苯醚（４’－ＣＨ３）４天，于末次给药２４ｈ后实验，发现：（１）以小鼠戊巴比妥睡眠时间作为体内Ｐ４５０活性指标，４’－ＣＨ３组Ｐ４５０活性高于生理盐水组，而２’，４’－ｄｉＣｌ组小鼠体内Ｐ４５０活性低于生理盐水组。（２）两处理组小鼠体外测得肝微粒体Ｐ４５０含量均显著高于生理盐水组（Ｐ＜０．０５），低于苯巴比妥组。（３）２’，４’－ｄｉＣｌ组小鼠由ｚｏｘａｚｏｌａｍｉｎｅ引起的瘫痪时间显著高于生理盐水组（Ｐ＜０．０１），提示该化合物对体内Ｐ４４８活性亦有抑制作用。体外实验也发现，两者对ＢＮＦ诱导的大鼠肝微粒体Ｐ４４８的活性均有不同程度的抑制。

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表皮生长因子对细胞核转录活性的直接作用

彭勇，童坦君，张昌颖

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(04): 466-470.

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表皮生长因子（ＥＧＦ）对纯化的鼠胚成纤维细胞（Ｃ_３Ｈ_１０Ｔ_１／２Ｃ１８）胞核~３Ｈ－ＵＴＰ掺入有明显的促进作用。这一作用在ＥＧＦ与细胞核共同培养９０ｍｉｎ时达到高峰。该作用是ＥＧＦ浓度依赖性的。ＥＧＦ对β射线转化的上述细胞的纯化细胞核，亦同样有促进转录作用。本实验所用的细胞核经光镜，电子显微镜观察，细胞膜、细胞浆标志酶检测及放射性同位素示踪法鉴定，未检出有核外成份的污染。本实验结果为膜受体信号传递途径以外的ＥＧＦ对核直接作用途径的存在提供了证据。

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阵发性睡眠性血红蛋白尿症红细胞乙酰胆碱酯酶的研究

许彩民，卢红，崔毅，潘华珍，张之南

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(04): 471-476.

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用化学方法测定了乙酰胆碱脂酶（ＡｃｈＥ）活性，阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）红细胞远低于正常红细胞。为了进一步研究ＰＮＨＡｃｈＥ（—）的红细胞，采用Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ａ　Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ　６ＭＢ结合ＡｃｈＥ单抗亲和层析法分离出ＰＮＨＡｃｈＥ（—）的红细胞。用间接免疫荧光流式细胞术检测，ＰＮＨ细胞ＡｃｈＥ低于正常，而ＰＮＨＡｃｈＥ（—）红细胞未能检出ＡｃｈＥ。３Ｈ－肌醇标记实验证明，正常红细胞膜区带４．１处有较高的放射活性，而ＰＮＨ红细胞极低，ＰＮＨＡｃｈＥ（—）红细胞完全无放射活性。用ＡｃｈＥ抗体做免疫印渍实验证明了ＡｃｈＥ存在区带４．１部位。ＤＭＰＣ诱导正常和ＰＮＨ红细胞，检测二者囊泡化的程度，发现ＰＮＨ病人红细胞远比正常人红细胞易于囊泡化。

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肽类生长因子对游离细胞核中拓扑异构酶活性的影响

李建义，童坦君

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(04): 477-480.

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将表皮生长因子及神经生长因子分别作用于分离所得的鼠胚成纤维细胞及其转化细胞的细胞核。结果表明表皮生长因子可以提高游离细胞核中ＤＮＡ拓扑异构酶的活性，但神经生长因子无此作用。

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CCK－8和NDAP对大鼠脑和脊髓组织c－fos表达的影响

陈素珍，韩济生

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(04): 481-484.

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为探讨八肽胆囊收缩素（ＣＣｋ－８）和阿片肽相互作用的分子机理，利用抗体免疫沉淀技术研究了ＣＣＫ－８与ＮＤＡＰ（ｋ阿片受体激动剂）对大鼠脑（去皮层和小脑）和脊髓背柱组织Ｆｏｓ蛋白的影响。结果表明，０．１μｍｏｌ／ＬＣＣＫ－８可显著刺激脑和脊髓组织中Ｆｏｓ蛋白增加（分别是对照组的３．８倍和３．６倍）。相同浓度的ＮＤＡＰ对Ｆｏｓ蛋白的生成亦有一定的诱导作用，分别是对照组的２．７倍和２．６倍。ＣＣＫ－８和ＮＤＡＰ共同处理组织，Ｆｏｓ蛋白生成水平相似（脑）或高于（脊髓）ＣＣＫ~－８单独诱导的水平。结果表明，ＣＣＫ－８和ＮＤＡＰ均可直接诱导大鼠脑和脊髓组织ｃ－ｆｏｓ的表达，它们对ｃ－ｆｏｓ表达的相互作用在脑和脊髓中呈现不同的模式。

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神经节苷脂（Gangliosides）对人红细胞膜Ca~（2＋）－Mg~（2＋）ATPase的影响

张金红，陈昉，张遂坡，徐友涵

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(04): 485-489.

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神经节苷脂（Ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅｓ）是红细胞膜Ｃａ~（２＋）－Ｍｇ~（２＋）ＡＴＰａｓｅ的一种激活剂，这种激活作用也是依赖于Ｃａ~（２＋）存在。在２００μｍｏｌ／ＬＣａ~（２＋）存在的反应体系中，１００μｇ／ｍＬＧａｎｇｌｉｏｓｉｄｅｓ对Ｃａ~（２＋）－Ｍｇ~（２＋）ＡＴＰａｓｅ的激活作用最大，为基本酶活性的１５０％以上。实验还发现ＣａＭ拮抗剂三氟拉嗪（ＴＦＰ）、粉防已碱（Ｔｅｔ）等也同样抑制Ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅｓ的这种激活作用。其抑制的ＩＣ_（５０）值为２５μｍｏｌ／Ｌ和３０μｍｏ１／Ｌ；而此浓度下抑制剂存在的反应体系中，对Ｃａ~（２＋）－Ｍｇ~（２＋）ＡＴＰａｓｅ的基本活性影响不大。

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非水介质中辣根过氧化物酶（HRP）荧光活性测定法

孙旭东，马林，刘伟，黄仲立，董爱武，丁忠田，唐玉秋，孙天霄，由德林，程玉华

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(04): 490-495.

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建立了一种分析ＨＲＰ催化活力的新方法。该方法基于单体（底物）、聚合物（产物）的荧光发射光谱不重叠，使用荧光光谱仪，通过测量底物荧光淬灭来检测ＨＲＰ在非水介质中（二氧六环－水、乙醇－水、丙酮－水体系）催化酚类、芳香胺类物质聚合的活力。此方法迅速、简便，结果是定量并可重复的，并能定量地计算底物转化率。

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人脑原发性肿瘤中c－erbB－2和c－sis基因的表达研究

林晞，谭德勇，王国丽，孙芝琳

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(04): 496-499.

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人脑原发性肿瘤中ｃ－ｅｒｂＢ－２和ｃ－ｓｉｓ基因的表达研究林，谭德勇，王国丽，孙芝琳（成都华西医科大学生化教研室，成都６１００４１）脑肿瘤是严重危害人类健康的一类疾病，其病因至今不明。分子生物学的研究进展提示某些癌基因在脑细胞的癌变过程中起着重要作用...

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Fe（Ⅱ）离子所引发的羟自由基对人红细胞膜的作用

薄云红，徐轶珺，王夔

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(04): 500-504.

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Ｆｅ（Ⅱ）离子所引发的羟自由基对人红细胞膜的作用薄云红，徐轶，王夔（北京医科大学药学院，北京１０００８３））在人体内由铁催化产生的·ＯＨ会引发脂质过氧化链式反应，而且在维生素Ｃ（Ｖｃ）存在下其过氧化程度加剧，导致红细胞膜构象改变［１］。血红素是一种富...

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高血糖、蛋白质糖化与脂质过氧化反应

孙贺英，柳洁，高应，王惠云

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(04): 505-508.

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高血糖、蛋白质糖化与脂质过氧化反应孙贺英，柳洁，高应，王惠云（山西职工医学院生化组，太原０３００１２）（山西省人民医院内分泌科）（山西医学院生化组）血糖持续性升高是糖尿病的重要临床特征。近年来报道糖尿病患者体内自由基反应明显增强，脂质过氧化产物增加。...

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cⅠ857基因的体外定位同义突变

陈南春，高辉，陈苏民，杨萍，刘新平

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(04): 509-512.

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ｃⅠ８５７基因的体外定位同义突变陈南春，高辉，陈苏民，杨萍，刘新平（西安第四军医大学分子生物学研究所，西安７１００３２）外源基因要在大肠杆菌中获得高表达，需要合适的ＳＤ序列和可调控的强启动子［１］。ＰＬ启动子在原核启动子中属强启动子，它受ｃⅠ基因产物...

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