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  • 1994年, 10卷, 第05期
    刊出日期:1994-10-20
      

    论文

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    论文
  • 查锡良,李月彬,巨同忠,李季,陈惠黎
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(05): 515-520.
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    分离纯化了人胎盘纤连蛋白(Fn),经SDS-PAGE鉴定为一条带,纯化Fn仍保持其搞原性,得率为38.7%。根据植物凝集素识别专一糖链结构的原理,应用斑点印迹法,亲和层析法和Western转移电泳研究糖链结构,结果证实:1.人胎盘Fn分子中含有复杂型N糖链(包括二天线和大于二天线的结构)以及高甘露糖型和/或杂合型N糖链;复杂型N糖链中含有平分型GlcNAc,糖链末端也可连有唾液酸;2.胰糜蛋白酶水解而获得的明胶结合片段(44kD)含有二天线和多天线复杂型糖链,也可接有平分型GlcNAc;3.肝素结合片段(30kD)以及明胶、肝素均不结合的Fn片段不含有多天线复杂型N糖链。
  • 关国雄,颜子颖,张维钦,林哲甫
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(05): 521-526.
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    报道了弹性蛋白亲和层析分离纯化芳香黄杆菌产胞外弹性蛋白酶。经一步柱层析可获聚丙烯酰胺凝胶电泳均一的酶制品,收率可达50%,并制备了酶的结晶。该酶在SDS-PAGE上测得分子量为21380,IEF-PAGE测得等电点8.9,最适作用温度为50℃,最适作用pH为7.4,在40℃以下热稳定性良好,pH4.5-9.5范围内稳定,重金属离子Fe3+、Zn2+、Cr3+、Co2+、Hg2+、Ni2+、Ag+、Cu2+等严重抑制酶活性,黄杆菌弹性蛋白酶除了特异水解弹性蛋白外,对干酪素、血纤维蛋白、白蛋白、明胶、血红蛋白等多种蛋白质均能水解。
  • 郑远旗,李建吾,贾一平
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(05): 527-532.
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    对猪血浆α2巨球蛋白性质研究表明其大部分理化性质与人α2巨球蛋白十分相似。而且猪α2巨球蛋白也存在有活性的天然的Slow-Form和构象发生变化并不可逆失活的Fast-Form。猪α2巨球蛋白经测定其pI为4.55,5.1。紫外吸收光谱在276mm处有最大吸收,E=9.14。其糖含量为9.3%。氨其酸组成分析表明酸性氨基酸含量较高。圆二色谱分析说明分子中含有较多的β折叠。它还具有连接锌离子的性质。
  • 石成华,曹诚,张京生,马清钧
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(05): 533-538.
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    通过全化学法按大肠杆菌密码偏性合成了乙肝炎病毒(HBV)前S2抗原(PreS2)抗原决定簇基因,与霍乱毒素B亚基基因的3’端融合。重组质粒转化大肠杆菌后融合基因得到高效表达,表达量达30μg/mL,表达产物95%以上分泌到胞外。表达的融合蛋白能与神经节苷脂GM1结合,说明融合蛋白保持了霍乱毒素B亚基(CTB)的基本高级结构和生物学功能;酶联免疫吸附实验证明融合蛋白具有CTB和HBVPreS2的抗原性;应用亲和层析纯化后得到了电泳纯融合蛋白制品,为研究融合蛋白免疫原性并进一步构建基因工程肽苗奠定了基础。
  • 王转花,张政,林汝法,周明德
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(05): 539-543.
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    从荞麦生化遗传以及器官衰老机理的研究目的出发,以苦荞叶片为材料,制备出活力较高的铜锌趋氧化物歧化酶。对其理化性质分析表明:该酶在259nm处有一特征吸收峰,分子量约为31kD,含有308个氨基酸残基,同工酶电泳结果显示三条活性带。
  • 周洁,黄大有,邱学才
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(05): 544-548.
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    应用钙离子荧光指示剂fura-2,对糖皮质激素(Glucocorticoid,GC)是否影响肝细胞内游离钙(Intracellular free calcium,[Ca2+]i作了初步探讨。结果发现,GC在短期内能升高肝细胞[Ca2+]i,水平,并具有明显的量效关系。以1.0μmol/L的Cortisol和10.0μmol/L的Dexamethasone效果最好。加入1.0μmol/L的Cortisol0.25min即可引起肝细胞[Ca2+]i的明显升高,到10分钟时效应达高峰。此时与静息状态的肝细胞[Ca2+]i水平相比,胞浆内游离钙升高了近3倍;与相应对照组比较,胞浆内游离钙升高具有明显的统计学意义,P<0.01。RU486为一种人工合成的糖皮质激素受体(Glucocorticoid receptor,GR)的拮抗剂,它可以取消GC升高肝细胞[Ca2+]i的效应,提示GC升高肝细胞内[Ca2+]i可能与GR介导有一定关系。鉴于GC升高[Ca2+]i时间较短,推测与肝细胞膜GR的非基因快速调节作用影响钙离子通道有关。
  • 崔文,刘银坤,顾伯俊,陈锐群
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(05): 549-552.
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    外源性GM3(10nmol/mL)、GD3(1nmol/mL)可使SMMC-7721人肝癌培养细胞内钙浓度呈快速的短暂升高,其到达峰值时间为45秒,一次作用后,内钙水平于2-3min内恢复至对照水平。在一定时间间隔中连续几次加入GM3或GD3后内钙水平的变化表明,GM3所引起的[Ca2+]i的增加依赖于内质网钙贮的释放和细胞外钙的流入;而GD3增加[Ca2+]i与此二系统无关。进一步研究表明,在细胞内钙达峰值时,10nmol/mLGM3可使IP3(1,4,5)浓度增加9.3倍,cAMP浓度增加82%;1nmol/mLGD3反使Ip3浓度增加1.2倍,提示GM3、GD3升高内钙的不同机制。
  • 胡绪英,朱堂胜,陈钢进,郝韵琴,王秀洁,周永洽
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(05): 553-556.
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    人或牛血清白蛋白溶液调至pH10并在4℃左右放置30h,诱导出重复性良好的极谱峰。然后把试样溶液调至适当pH并记录极谱电流。在浓度低于1.0×10-5mol/L时,峰电流对浓度作图是直线,试样浓度可从图上直接读出。对影响白蛋白测定的诸因素作了详细研究和讨论。结果对富含硫的蛋白质的极谱研究有参考价值。
  • 费仁仁,戴文平,戴巾,陈晖,朱斌,邓锦松
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(05): 557-560.
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    用大鼠睾丸制备长形精子细胞核及用附睾制备的附睾精子核,用盐酸胍法提取总碱性蛋白(Total basic protein,TBP)。通过Sephadex G-100分子筛层析,其第三峰用5%TCA沉淀,得到纯大鼠精核蛋白(Rat protamine,RP)。RP也可用TBP通过HPLC反相柱得到纯化,RP位于26%-28%乙腈梯度。
  • 戴文平,左晓春,陈晖,费仁仁
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(05): 561-564.
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    用大鼠精核蛋白(Rat Protamine,RP)-核糖核酸(RNA)复合物(RP-RNA Complexes)免疫大鼠,得到了特异的抗RP抗血清,并用Immunodotting和Immunoblotting方法验证了其特异性。该抗血清和RP有特异的反应,并和哺乳动物小鼠和羊的精核蛋白有一定程度交叉反应,而与体细胞类型核蛋白(H1,H2a,H2b,H3,H4)无交叉反应。并对制备该抗血清的意义予以讨论。
  • 陈钧辉,许向阳,王新昌
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(05): 565-569.
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    琥珀酰-CCK_7为新合成的CCK8的一种类似物[1]。当琥珀酰-CCK7的浓度为1×10(-11)mol/L-1×10[-7]mol/L时,能促使大鼠胰腺离体腺泡细胞分泌α淀粉酶和蛋白酶,其最有效浓度为1×10-9mol/L。在相同摩尔条件下,琥珀酰-CCK7的促分泌效应明显大于CCK8,且这种效应在3小时内随着作用时间的延长而增加。这为开发高活性CCK8的类似物提供了依据。
  • 毛泽斌,张宗玉,吴跃南,程之华
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(05): 570-574.
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    用MspⅠ/HpaⅡ酶解电泳法和高效液相色谱(HPLC)两种方法进行比较,研究了不同年龄大鼠的肝、脑细胞基因组DNA的甲基化程度。从酶解电泳图谱可观察到,肝、脑细胞基因组DNA甲基化在青年鼠和老年鼠之间没有差异。但用具有高分辨率的高效液相色谱测量DNA中5-mC的含量时发现,老年鼠脑细胞DNA甲基化程度较大年鼠的下降62%,而肝细胞DNA甲基化程度在老年鼠与青年鼠之间并没有显著差异。这些结果提示:(1)用常规的酶解电泳法所分析的DNA甲基化结果并不能反映整个基因组DNA甲基化的水平。(2)衰老过程中,不同组织DNA甲基化的改变存在差异,引起这种差异的原因可能与组织的增殖和分化程度有关。进一步分析脑细胞原癌基因c-Ha-ras的甲基化水平,无论MspⅠ酶切图谱,还是HpaⅡ酶切图谱均可观察到分子大小为19kb、7.5kb、1.3kb、0.9kb的四条阳性带,说明该基因未发生甲基化,且与年龄无关。
  • 段光明,周小梅
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(05): 575-578.
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    马铃薯糖苷生物碱是一类有异味有毒性的含氨甾族化合物,其致毒机理与有机磷杀虫剂相似,表现出对人体内胆碱酯酶活性的抑制,使胆碱能神经兴奋增强,引起一系列中毒症状。从块茎萌发芽中提取的总糖苷生物碱的毒性较高,对人血胆碱酯酶的体外抑制率为63.08%,单个糖苷生物碱(α茄碱和α卡茄碱)的毒性较低,抑制率分别为52.08%和41.15%,总糖苷生物碱的水解产物糖苷配基基本无毒性,抑制率仅为11.36%。
  • 曹诚,石成华,张京生,马清钧
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(05): 579-583.
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    霍乱毒素B亚基(CTB)是良好的免疫佐剂和载体蛋白。本研究通过定点突变,在CTB基因(ctxB)3′端终止密码前引入了限制性内切酶EcoRI,构建了质粒pMC05。pMC05中CTB与下游lacZ′基因阅读框架相同,转化大肠杆菌后能够表达CTB与β-半乳糖苷酶α肽的融合蛋白;所表达的融合蛋白能与GM1结合,说明融合蛋白保持CTB的基本高级结构和生物学活性;融合蛋白能与抗-CTB抗体结合,说明融合蛋白具有CTB的抗原性。以上结果表明:通过将外源抗原决定簇基因融合至ctxB的3′端,在大肠杆菌中表达融合蛋白,构建基因工程肽苗是可行的。还探索了转录终止序列对融合基因蛋白表达水平的影响,构建了高效表达融合蛋白的载体-宿主系统。
  • 杜健,李生广,林治焕
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(05): 584-590.
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    消炎痛作为一种可引起胃粘膜急性病变的药物,用分离提纯的猪胃H+/K+-ATPase证明,它可以显著的抑制此酶的活力,0.1mg/mL时即可抑制酶活力27%,0.5mg/mL时可抑制全部活力,其K(0.5)为0.18mg/mL。消炎痛对H+/K+-ATPase的抑制随30℃时预保温时间的延长而加剧,10min预保温可抑制总活力的50%。消炎痛并不影响H+/K+-TAPase的转换温度(39℃)以及最适pH(约pH7.5),但酸性条件下消炎痛对H+/K+-ATPase抑制比碱性条件下强烈。在我们的实验条件下,消炎痛对H+/K+-ATPase的抑制与H+/K+-ATPase量成正比,它不影响酶的Km值(0.11mmol/L),而是显著降低Vmax,因而它是此酶的可逆性非竞争性抑制剂,其Ki为0.32mmol/L。
  • 刘永学,王鲁明,邢成,单京瑞
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(05): 591-595.
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    利用比色法、竞争性蛋白结合技术及放射性免疫分析法,分析热环境中负重行军战士血液乳酸含量、cAMP、cGMP及皮质醇含量,以探讨热应激过程中机体的生化变化特点,并观察阿的平对这些变化的影响。结果表明:行军后战士血液乳酸浓度、皮质醇含量(2.08±0.18mmol/L、16.25±1.05μg/100mL)较行军前(1.62±0.16mmol/L、14.98±0.9μg/100mL)明显升高,而行军后血浆cAMP浓度(18.8±3.9pmol/mL)则较行军前(32.9±6.0pmol/mL)显著降低,cGMP在行军前后无明显变化;行军前预服阿的平,具有减弱或逆转上述变化的作用。
  • 梁涌涛,刘卫华,孙启安,罗贵民,杨同书
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(05): 596-599.
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    在氰基硼氢化钠存在下用乙醛酸修饰含铁超氧化物歧化酶(Fe-SOD)的氨基可使酶的热稳定性显著提高,酶在80℃时的半寿期增加一倍。
  • 赵玉芬,张保忠,章广韬
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(05): 600-604.
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    在合成磷酰蛋白的模型化合物体N-(O,O-二烷基)磷酰化氨基酸(1)的基础上,首次合成了有机磷生命化学的模型化合物──核蛋白基本单元N-(O-烷基,O-核苷)磷酰化氨基酸(2),并对上述物质进行了分离、鉴定、比较了两种模型的合成方法。这对在小分子水平上,深入研究磷酰基的参与作用和蛋白质与核酸之间的互相作用机理提供了较好的模型化合物。
  • 刘堰,李清漪
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(05): 605-610.
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    采用硫酸铵分级沉淀和柱层析的方法,从赤子爱胜蚓整体细胞抽提液内分离得到纯的铜锌超氧化物岐化酶(Cu,Zn-SOD)。每100g蚯蚓得到的SOD制品,总活力为11150U,比活力为5138U/mg蛋白,回收率为20%。铜锌超氧化物岐化酶呈淡蓝绿色,最大紫外吸收波长为270nm。测得该酶分子量为33000,亚基分子量为16500。该酶亚基由156个氨基酸残基组成,不含酪氨酸。
  • 陈健,刘启福,魏琦,吴祥褆,王宇
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(05): 611-615.
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    采用核酸分子杂交Southern印迹法,以32P标记的HBVDNA为探针,检测HBsAg阳性母亲引产的40例胎儿的肝、肾组织。结果有2例胎肝和1例胎肾细胞DNA出现大于3.2kb的杂交带,表明HBVDNA已处于整合状态。胎肾细胞基因组中查出HBVDNA整合为首次报道。
  • 刘农乐,蒋滋慧,柳川,赵强,陈艾,李美佳,王会信,周廷冲
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(05): 616-620.
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    介绍了一种灵敏的神经生长因子化学发光免疫测定方法。小鼠神经生长因子(mNGF)的抗体IgG用亲和层析纯化并用吖啶酯标记。该法可用于大鼠组织中NGF含量的测定。方法的灵敏度为10pg/mLNGF;批内批间变异系数分别为8.7%及13.2%;回收率平均为103%。mNGF抗体对人的NGF也有极强的交叉反应,故本方法也可能用于病人血清或脑脊液中NGF含量的测定。
  • 赵翀,王玲,谢蜀生,龙振洲
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(05): 621-625.
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    以F3GA(Cibacron Blue F3GA)为配基建立了一种可用于免疫毒素(IT)分离纯化的亲和层析方法。实验中用三种不同来源的核糖体灭活蛋白(RIP),即蓖麻毒素A链(RTA),苦瓜毒素(momordin,MT)和Saporin,以探讨RIP与F3GA的相互作用。分析显示三种RIP均能引起F3GA吸收光诸明显红移,提示RIP均可与F3GA发生特异结合。将F3GA与Sephadex交联可获得Bluedex。Bluedex亲和层析是一种经济有效,简单易行,便于在各类实验室中使用的蛋白质亲和层析技术。结果表明:在低盐溶液中RTA和MT均可迅速地与Bluedex结合,而在高盐溶液中(0.65mol/LNaCl)又极易被洗脱回收。这一技术用于免疫毒素的研究可有效地去除游离抗体,而不影响其杀伤活性。
  • 李江红,张宗玉,童坦君
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(05): 626-629.
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    观察了肽类生长因子对2BS细胞中抗癌基因表达的影响。结果表明,EGF或FGF均可明显诱导2BS细胞中Rb基因的表达,其幅度分别为305%、243%;EGF也可诱导2BS细胞中TGFβ1基因表达增加30-50%,但FGF对TGFβ1的表达无明显影响;EGF或FGF对p53基因的表达均无明显诱导作用。上述结果为生长因子作用机制研究及生长因子与抗癌基因的关系提供了新的线索。
  • 周慧,鲁治斌,齐杰,李惟
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(05): 630-632.
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    蛋白水解酶活力测定新方法周慧,鲁治斌,齐杰,李惟(吉林大学分子生学系.长春130023)G.F.Bickerstaff(Dept.ofBiology,PaisleyUniv,Scotland,U.K)本文研究了一种测定蛋白水解酶(Proteinase...
  • 张丽萍,张翼伸
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(05): 633-635.
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    金顶侧耳多糖及其化学修饰产物水溶液构象的圆二色谱测定张丽萍,张翼伸(东北师范大学生物系,长春130024)我们曾对金顶侧耳多糖PC-3的分离纯化、糖链结构确定、PC-3及其化学修饰产物有无抗病毒活性进行过研究[1,2]。本文将简要报导PC-3及其衍生...
  • 陈兴,赵立超,贺永怀,沈倍奋
    中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(05): 636-638.
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    两种纯化蓖麻毒素方法的比较陈兴,赵立超,贺永怀,沈倍奋(军事医学科学院基础医学研究所,北京100850)高纯度的蓖麻毒素(ricin)对于免疫毒素的制备至关重要,直接影响到免疫毒素的应用效果。总结本实验室纯化ricin的经验,我们发现蓖麻粗提物依次通...