中国生物化学与分子生物学报

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任力强，吴旻

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(06): 643-646.

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在所有研究过的人体肿瘤组织或细胞中，ｐ５３似乎是突变频率最高的一个基因，研究和检测ｐ５３基因及其编码产物的变化将具有重要的意义。我们将野生型ｐ５３基因编码区３’端７０３ｂｐ的ｃＤ－ＮＡ片段插入到大肠杆菌表达载体ｐＢＶ２２０中，得到了一个重组体表达质粒ｐＲＲ３３，经热诱导表达，用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法证实ｐ５３蛋白多肽在大肠杆菌中得到了表达，它不仅可用于抗ｐ５３蛋白抗体的制备，而且也可用于对ｐ５３蛋白羧基端多肽功能的研究。

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层粘连蛋白受体单克隆抗体抗原性质的鉴定

苏玲，周柔丽

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(06): 647-650.

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层粘连蛋白受体（ＬＮ－Ｒ）在癌细胞转移中具有重要作用。ＬＮ－Ｒ的单克隆抗体对于癌转移的基础研究及诊治应用都具有重要意义。本文旨在确定来自人肺巨细胞癌（ＰＧ）细胞ＬＮ－Ｒ的一种单克隆抗体（ＭｃＢ１）的抗原性质。经纯化的ＭｃＢ１能与完整细胞表面、细胞质膜提取物及纯化的ＬＮ－Ｒ制品特异性结合。实验证明经亲和层析纯化的ＬＮ－Ｒ制品中含有膜糖脂，用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及转移电泳将其所复合的膜脂去除后，仍具有与ＭｃＢ１结合的活性，表明此ＭｃＢ１所针对的抗原与其复合的膜糖脂无关。将含ＬＮ－Ｒ的细胞膜提取物经ＰｒｏｎａｓｅＥ消化后，用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ５０分离出的糖肽具有与ＭｃＢ１结合的活性，而不含糖的肽则无此活性。含ＬＮ－Ｒ的细胞膜提取物经高碘酸氧化不同时间，其与ＭｃＢ１结合的活性随氧化时间的延长而逐渐减弱乃至完全丧失；而经还原性烷基化反应的ＬＮ－Ｒ仍保持了与ＭｃＢ１结合的活性。用衣霉素（ＴＭ）处理细胞，细胞则丧失了与ＭｃＢ１结合的能力。以上几方面的结果一致证明此ＭｃＢ１的抗原表位确为ＬＮ－Ｒ的糖链部分。

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蜂毒肽片段的合成及其与钙调蛋白的相互作用

刘利平，阎虎生，倪爱国，程晓辉，何炳林

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(06): 651-656.

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采用固相法设计合成了４个蜂毒肽片段：Ｍｅｌ１２、Ｍｅ１１３、Ｍｅｌ１４、Ｍｅｌ１５。应用电泳技术，抑制钙依赖性的磷酸二酯酶酶活方法和荧光技术研究了这些多肽与钙调蛋白的相互作用。结果表明这些多肽与钙调蛋白均形成１：１复合物，抑制钙依赖性的磷酸二酯酶的活性，其中Ｍｅｌ１４和Ｍｅｌ１５对钙调蛋白的结合活性与完整的蜂毒肽比较接近。

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促髓细胞分化的锌指基因单向PCR扩增直接测序的研究

穆莹，惠培

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(06): 657-661.

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锌指基因是一种造血调节基因，编码锌指结构蛋白，主要在髓细胞中表达，促进髓细胞分化，在急性早幼粒白血病维甲酸治疗中，促使病情缓解。本文报道了我们从基因分子上研究锌指基因作用中，探索并建立了单向聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增特定单链ＤＮＡ，直接测序的新方法。它能产生质和量均佳的单链ＤＮＡ，无需纯化即可直接用于测序，使复杂的测序研究简便易行，可在２，３天内完成。这种单向ＰＣＲ扩增特定单链ＤＮＡ直接测序的方法，经对锌指基因的ｃＤＮＡ测序，得到验证。此法不仅适用于疾病研究中的ＤＮＡ测序，还可制各单链ＤＮＡ探针，更利于基因结构组成的研究。

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单斜Al－（L－丙氨酸）胰岛素初步晶体学研究

万柱礼，杨晓，常文瑞，梁栋材

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(06): 662-664.

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用微量气相扩散方法在含酚的柠檬酸缓冲体系中，得到了可供Ｘ射线晶体学分析用的Ａｌ－（Ｌ－丙氨酸）胰岛素晶体，晶体衍射能力为２．５Ａ。经Ｘ射线衍射分析确定，该晶体属于单斜晶系，空间群为Ｐ２_１，晶胞参数：ａ＝６１．５Ａ，ｂ＝６２．２Ａ，ｃ＝４８．３Ａ，α＝γ＝９０．０°，β＝１１０．９°。晶胞中每个结晶学不对称单位含有一个Ａｌ－（Ｌ－丙氨酸）胰岛素六聚体。

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胰岛素B链N端的修饰及其生物活性变化

唐建国，张洪涛，孙怀宇，戴勇，胡美浩

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(06): 665-669.

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通过对在大肠杆菌体系中表达及部分加工的粗产物的反相快速蛋白液相色谱的分离，我们得到了Ｌ－Ｍｅｔ~（ＢＯ）－人胰岛素原、Ｌ－Ｍｅｔ~（Ｂ－１）－Ｌ－Ｌｙｓ~（ＢＯ）－人胰岛素原，氨基酸组成分析结果与设想的完全一致。两者的胰岛素受体活性分别为人胰岛素原的６６％及５４％，而胰岛素的放射免疫活性分别降为人胰岛素原的２２％及９％。表明胰岛素Ｂ链的Ｎ端对胰岛囊分子与其受体的结合有一定的重要性，而更重要的是它非常可能参与组成胰岛素分子的抗原决定簇。

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桂枝汤对胃H，K－ATP酶活力的影响及对消炎痛引起胃H，K－ATP酶抑制作用的保护

李生广，林治焕，张清苓，贲长恩，刘渡舟

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(06): 670-675.

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中药桂枝汤在整体水平上能极其显著的激活胃Ｈ，Ｋ－ＡＴＰ酶的活力，而离体水平上对该酶呈现明显抑制效应。消炎痛在整体和离体水平上均对胃Ｈ，Ｋ－ＡＴＰ酶呈现抑制作用。桂枝汤在整体水平上对消炎痛引起胃Ｈ，Ｋ－ＡＴＰ酶的抑制作用有保护效应。这些结果提示桂枝汤可能通过机体整体调节实现其提高胃Ｈ，Ｋ－ＡＴＰ酶活力作用的，从而在Ｈ，Ｋ－ＡＴＰ酶水平上初步阐述了中药桂枝汤调整胃功能的可能作用机理。而且也为扩充桂枝汤的应用范围提供了可能性。

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红花菜豆凝集素的荧光光谱学研究

阮康成，施炜星，郑乐，孙册

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(06): 676-681.

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利用荧光光谱方法研究了红花菜豆凝集素（Ｐｈａｓｅｏｌｕｓｃｏｃｃｉｎｅｕｓｖａｒ．ｒｕｂｒｏｎａｎｕｓｌｅｃｔｉｎ，简称ＰＣＬ），结果表明ＰＣＬ分子各亚基中的两个色氨酸（Ｔｒｐ）残基分别位于ＰＣＬ分子表面和分子内。标记了ＤＮＳ的ＰＣＬ荧光偏振研究指出，致使ＰＣＬ在１０ｍｍｏｌ／ＬＳＤＳ条件下失活的主要原因可能是亚基解离。荧光偏振研究还表明，甲状腺球蛋白、甘露聚糖、海参多糖硫酸酯可与ＰＣＬ结合。荧光探针ｂｉｓ－ＡＮＳ与ＰＣＬ的结合可引起明显的荧光增强和发射谱蓝移，表明ＰＣＬ分子中存有疏水区域。结合了的ｂｉｓ－ＡＮＳ还可和ＰＣＬ中的Ｔｒｐ发生能量传递。

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丙二醛和Cu~（2＋）对低密度脂蛋白修饰的比较研究

丁振华，陈瑗，周玫，方允中

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(06): 682-686.

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实验比较了丙二醛修饰的低密度脂蛋白（ＭＤＡ－ＬＤＬ）和氧化修饰的低密度脂蛋白（ｏ－ＬＤＬ）的某些理化性质；用放射性受体分析法，从标记配体的可饱和性、可逆性、高亲和力和立体选择性等几方面，证实在小鼠腹腔巨噬细胞（ＭＰＭ）表面存在有特异的ＭＤＡ－ＬＤＬ受体，获得了一系列能反应受体特征的参数；同时，还将ＭＤＡ－ＬＤＬ受体的特征和ｏ－ＬＤＬ的受体特征进行了比较。这些结果将有助于进一步研究ＭＰＭ清道夫受体的多态性及其与动脉粥样硬化的发病原理和防治的关系。

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人心肌酸性铁蛋白的分离纯化及临床应用

王博诚，金坚，张满达

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(06): 687-691.

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人心肌匀浆经热变性、酸化、硫酸铵盐析、超离心、ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－４Ｂ柱层析和制备等电聚焦分离，得到酸性铁蛋白。经鉴定，所得酸性铁蛋白ｐＩ为５．０，Ｈ亚基分子量为２１ｋＤ，Ｌ亚基为１９ｋＤ，ＰＡＧＥ分析呈单一区带。制备了兔抗人酸性铁蛋白抗血清，用该抗血清建立的人酸性铁蛋白放射免疫分析可检测出８０％甲胎蛋白阴性肝癌病人。

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化学修饰对胰激肽释放酶稳定性及其性质的影响

朱振齐，罗贵民，苟仕金，张德安，沈家骢

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(06): 692-696.

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以自制高活性ＰＰＫ为材料，在氰基硼氢化钠存在下经水溶性乙醛酸修饰其表面氨基，使其抗不可逆热失活稳定性有显著提高。结果表明，修饰ＰＰＫ在等电点等基本性质方面都有变化。修饰ＰＰＫ的ＢＡＥＥ活性为天然酶的８２％，氨基修饰度为５８％，抗蛋白酶水解，贮藏和冻干稳定性都有加强。

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胞外青霉素酰化酶的纯化及部分理化性质

口如琴，褚西宁，袁静明

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(06): 697-701.

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巨大芽孢杆菌产胞外青霉素酰化酶发酵液经硫酸铵分级抽提及ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００、羟基磷灰石、ＤＥＡＥ纤维素ＤＥ５２等层析步骤，提纯了青霉素酰化酶，得到电泳均一的酶制剂。纯酶比活力约为２５Ｕ／ｍｇ蛋白，纯化４９倍，活力回收５８％，经ＰＡＧＥ及ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测知该酶不含亚基，其分子量约为１４０ｋＤ。该酶最适ｐＨ为９．０，最适温度４７℃，用底物ＮＩＰＡＢ测活，其Ｋｍ值为６．２×１０~（－４）ｍｏｌ／Ｌ，Ｖｍ值为１．２４×１０４ｍｏｌ／Ｌ。此外还探讨了部分金属离子对该酶的影响。

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先天性与后天性大鼠白内障晶体中游离氨基酸含量变化的研究

李根林，陈翠真

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(06): 702-706.

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用药物诱发大鼠先天性白内障动物模型，检测了晶体中１８种游离氨基酸（ＦＡＡ）含量，并与大鼠硒性和半乳糖性白内障晶体中ＦＦＡ含量进行了比较，发现：仔一代和仔二代先天性白内障晶体中各ＦＡＡ含量接近；先天性白内障晶体内，酪氨酸和羟脯氨酸含量明显高于正常对照组（Ｐ＜０．０５）；谷氨酸，甘氨酸等９种ＦＡＡ明显低于硒性白内障（Ｐ＜０．０５）；而酪氨酸高于半乳糖性白内障组，半胱氨酸等５种ＦＡＡ含量均低于半乳糖性白内障组。同时还发现：硒性和半乳糖性白内障晶体内一些ＦＡＡ变化与以往报道不同，这些现象提示先天性与后天性白内障病变过程可能不同。

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毛喉萜对大鼠成骨样细胞内Ca~（2＋）释出的影响

杨非易，鲁朋，杜国光

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(06): 707-711.

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毛喉萜是一种二萜类化合物，为细胞中腺苷酸环化酶的激活剂。用毛喉萜处理大鼠成骨样细胞，发现它可即时激发细胞内Ｃａ~（２＋）水平的增高。当细胞经毛喉萜长期处理（１－２天）后，其对ＰＴＨ激发细胞内Ｃａ~（２＋）释出的效应也呈增高反应。但毛喉萜的即刻反应与其长期效应的作用机理可能并不相同。鉴于毛喉萜具有抑制增殖的作用，其对细胞内Ｃａ~（２＋）水平的调节作用或与其对细胞的抑增殖促分化有关。

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亲和素结合蛋白性质的研究

彭民，顾天爵

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(06): 712-716.

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前曾发现在日本血吸虫虫卵中，存在一种新的能与亲和素专一性结合的蛋白质，称为亲和素结合蛋白（ＡＢＰ）。在分离纯化ＡＢＰ的基础上，用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０分别测定了ＡＢＰ的分子量，并做了糖蛋白染色及等电，大测定。实验结果表明ＡＢＰ是一个分子量为６５ｋＤ的碱性糖蛋白，由数个相同的分子量为１２．７ｋＤ的亚单位组成。ＳＤＳ、β－巯基乙醇处理的ＡＢＰ仍能与亲和素结合，提示ＡＢＰ的亚单位能与亲和素结合。氨基酸修饰剂ＮＡＩ、ＤＴＮＢ、ＮＥＭ及ＮＢＳ对ＡＢＰ与亲和素的结合有不同程度的影响，而ＨＮＢＢ、ＴＮＢＳ及ＩＡＡ对ＡＢＰ与亲和素的结合无影响，提示ＡＢＰ分子中氨基酸残基Ｔｙｒ、Ｃｙｒ是ＡＢＰ与亲和素结合所必需的，可能参与结合位点的形成。另外，测得ＡＢＰ与亲和素结合的结合常数为１．４×１０~（－７）ｍｏｌ／Ｌ。

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缺血与正常小鼠脑内蛋白磷酸化脱磷酸化的比较研究

孟祥兵，魏群

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(06): 717-721.

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以小鼠断头脑缺血为模型，研究缺血小鼠脑内蛋白磷酸化脱磷酸化的改变。对缺血１ｍｉｎ、５ｍｉｎ、１５ｍｉｎ和３０ｍｉｎ及对照小鼠脑内蛋白磷酸化脱磷酸化的研究表明，有些磷蛋白如１４５ｋＤ、８４ｋＤ、５９ｋＤ和５０ｋＤ的磷酸化随缺血时间延长而减弱，还有些磷蛋白如１１９ｋＤ、１０５ｋＤ、７８ｋＤ和５５ｋＤ的磷酸化随缺血时间延长而增加。对磷酸化程度变化显著的缺血１５ｍｉｎ小鼠脑内胞浆及膜上ＰＫＡ、ＰＫＣ、Ｃａ~（２＋）／ＣａＭＰＫ底物的磷酸化进行了研究，发现胞浆组分中与钙相关的ＰＫＣ、Ｃａ~（２＋）／ＣａＭＰＫ底物磷酸化在缺血鼠脑中明显减弱。同时研究了脑内唯一依赖于Ｃａ~（２＋）／ＣａＭ的钙调神经磷酸酶（Ｃａｌｃｉｎｅｕｒｉｎ，ＣａＮ）底物的变化，发现缺血小鼠脑内ＣａＮ的某些底物磷酸化降低。

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化学诱发大鼠肝癌的亚细胞组分中两类丝氨酸蛋白激酶的动态变化

汤华，陈惠黎

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(06): 722-726.

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用二乙基亚硝胺（ＤＥＮ）诱发大鼠肝癌，隔周测定肝脏胞液、膜性和胞核中的蛋白激酶Ａ（ＰＫＡ）和蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）的活力。发现胞液ＰＫＡ在诱癌过程中活力改变不大，胞液ＰＫＣ则逐步增高，在第１３周和２０周形成两个活力高峰。膜性ＰＫＡ和ＰＫＣ都呈双相变化，即在癌前期（１０－１４周）增加，癌形成期（１７－２０周）反而降至正常以下，胞核ＰＫＡ和ＰＫＣ也都在癌前期升至高峰，而癌形成期则低于癌前期，但仍高于正常（ＰＫＡ）或接近正常（ＰＫＣ）。因只有膜性ＰＫＣ在大鼠老化时降低，故这些变化不是鼠龄变化的结果，而是ＤＥＮ诱癌所引起，其变化机理可能与下降调节、细胞内转位或两型同工酶相反的升降变化有关。

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天花粉中三个同工凝集素的分离纯化及其生物学性质研究

孙建忠，王克夷

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(06): 727-732.

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运用阴离子交换层析从亲和纯的天花粉凝集囊中分离得到三个同工形式的凝集素，它们都具有结合半乳糖的能力，都能与天花粉凝集大的抗血清形成免疫沉淀线，并且其它各方面的性质如疏水结合能力也相仿。对它们生物学性质的检测，发现它们都能杀伤黑色素瘤细胞，但缺乏抑制无细胞蛋白质生物合成的能力。另外，对植物中同工形式凝集大的存在进行了讨论。

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降血脂药物（DEHP）对酰基CoA氧化酶基因反式作用因子的影响

温进坤，胡静，魏素珍，贾根深

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(06): 733-736.

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从对照和用ＤＥＨＰ处理的大鼠肝脏提取核蛋白，以含酰基ＣｏＡ氧化酶（ＡＯＸ）基因表达调控部位的ＤＮＡ片段和该基因的不同蛋白结合位点的ＤＮＡ片段作为核蛋白结合反应的探针，通过凝胶电泳迁移率改变实验和Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析检查了ＤＥＨＰ对ＡＯＸ基因反式作用因子的影响。结果表明，降血脂药物ＤＥＨＰ可显著增加ＡＯＸ基因反式作用因子的含量和（或）与基因的结合活性，在转录水平上促进基因的表达。

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PCR法在未知cDNA克隆与序列测定中的应用研究

邢桂春，贺福初，杨晓明，吴祖泽

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(06): 737-739.

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ＰＣＲ法在未知ｃＤＮＡ克隆与序列测定中的应用研究邢桂春，贺福初，杨晓明，吴祖泽（北京军事医学科学院放射医学研究所，北京１００８５０）目前，新型蛋白质克隆的最有效途径乃先构建ｃＤＮＡ文库，然后筛选、分离其ｃＤＮＡ再行亚克隆、测序。为克隆人新型肝细胞生长...

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简便快速分离天花粉毒蛋白的一种方法

孙建忠，季瑞华，王克夷

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(06): 740-742.

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简便快速分离天花粉毒蛋白的一种方法孙建忠，季瑞华，王克夷（中国科学院上海生物化学研究所，上海２０００３１）天花粉是由多年生草质藤本植物栝楼（ＴｒｉｃｈｏｓａｎｔｈｅｓｋｉｒｉｌｏｗｉｉＭａｘｉｍ，Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｅａｅ）的块茎制成，天花粉毒蛋白是...

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四甲基乙二胺、过硫酸铵体系产生的活性氧对固氮酶（钼铁蛋白）损伤初步研究

赵云峰，杨峰，林永齐，杨俊森，林海

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(06): 743-746.

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四甲基乙二胺、过硫酸铵体系产生的活性氧对固氮酶（钼铁蛋白）损伤初步研究赵云峰，杨峰，林永齐（吉林大学，长春１３００２３）杨俊森（中国科学院沈阳应用生态研究所，沈阳１１００１５）林海（中国科学院长春物理所激发态物理开放实验室，长春１３００２２）生物固氮...

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SRS－淋巴瘤细胞染色质超敏位点相关蛋白的研究

钟叔平，何开玲，温博贵

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(06): 747-749.

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ＳＲＳ－淋巴瘤细胞染色质超敏位点相关蛋白的研究钟叔平，何开玲，温博贵（汕头大学医学院生化教研室，汕头５１５０３１）自１９７６Ｗｅｉｎｔｒａｕｂ首先报道脱氧核糖核酸酶Ｉ（ＤＮａｓｅＩ）优先消化鸡红细胞核活性基因以来。有关ＤＮａｓｅＩ优先水解超敏位点（Ｄ...

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pH降低和短杆菌肽D诱发的PE脂质体融合

王卓智，聂松青，林克椿

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(06): 750-753.

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ｐＨ降低和短杆菌肽Ｄ诱发的ＰＥ脂质体融合王卓智，聂松青，林克椿（北京医科大学生物物理教研室，北京１０００８３）生物膜的融合是其在执行生理功能时的一种重要现象，如精子与卵子的融合，吞噬细胞形成吞噬体，出胞和入胞，以及病毒感染细胞等，都经历膜融合过程，此...

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H_2O_2与UV对DNA的损伤及DNA抗原性的影响

梁俊峰，杨彦，俞耀庭

中国生物化学与分子生物学报. 1994, 10(06): 754-757.

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Ｈ_２Ｏ_２与ＵＶ对ＤＮＡ的损伤及ＤＮＡ抗原性的影响梁俊峰（清华大学生物科学与技术系，北京１０００８４）杨彦，俞耀庭（南开大学分子生物学研究所，天津３０００７１）已经证明，系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）患者血浆中高中滴度的抗双链ＤＮＡ（抗－ｄｓＤＮＡ）抗体同...

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