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  • 1995年, 11卷, 第03期
    刊出日期:1995-06-20
      

    论文

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    论文
  • 瞿成奎,贺福初,徐黎,魏汉东,吴祖泽
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(03): 243-246.
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    利用人粒细胞集落刺激因子(hG-CSF)cDNA3′端非翻译区(3′-UTR)中存在的DraⅠ酶切位点,通过部分酶切与完全酶切,删除3′-UTR不同长度,构建了四种hG-CSFcDNA瞬时重组表达质粒。转染COS-7细胞后,生物活性测定结果提示,hG-CSFcDNA3′-UTR对其表达起负调控作用,其关键性序列位于紧接终止密码子TGA下游的65bp范围内,3′-UTR对hG-CSFcDNA表达的影响与转录水平的差别有一定关系。
  • 曹晓风,王荣臣,阎隆飞
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(03): 247-252.
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    用改进的异硫氰酸胍-苯酚-氯仿抽提法提取了豌豆卷须总RNA并纯化了mRNA,合成双链cDNA后加上人工接头,Sepharose2B柱层析去掉小片段,最后连入载体λ-ZAPⅡ并用噬菌体包装蛋白进行体外包装,经稀释测定出含有重组子的文库大小为9.2×10~5.原位杂交筛选出了肌动蛋白阳性克隆。
  • 黄熙泰,李赫冬,蒋玫,刘桂琴,王树荣
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(03): 253-258.
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    对超螺旋DNA(DNAⅠ)的碱处理产物进行了琼脂糖凝胶电泳,氯化铯-溴化乙锭密度梯度超离心分析,紫外吸收光谱分析和电镜观察。实验结果表明超螺旋DNA在碱性环境中的结构改变发生在很窄的pH范围内(pH12.88─13.00).超过pH临界点的超螺旋DNA碱变构产物紫外吸收高于同浓度天然DNA紫外吸收的29%。变构产物在CsCl-EB密度梯度超离心中的高密度区形成稳定的区带.用透射电镜的观察表明碱变构的超螺旋pBR322DNA具有高电子密度并呈中空颗粒状,以上事实表明,DNA在高pH下可产生一种结构有序的相对稳定的产物.这些结果意味着在碱处理过程中,超螺旋DNA在构象上发生了改变,使其分子由扭曲线形变成球形颗粒状。根据实验事实本文对超螺旋DNA的碱变构产物(DNAⅣ)提出一个新的结构模型──压缩模型。这个模型能更合理地解释一些实验现象。
  • 吴显荣,刘箭,徐晓玲
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(03): 259-263.
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    以菜豆为实验材料,研究了蛋白质分子和生物膜在体外热稳定性的变化和原因。实验结果表明:热锻炼可增加细胞的耐热性,并赋予SOD、膜ATP酶和生物膜质子泵在体外的热稳定性;通过对可溶性蛋白热变性后的浊度分析和用ANS荧光探针探测蛋白质的结构变化,发现蛋白热变性的原因是疏水区的暴露和分子相互团聚,~(35)S-Met标记分析和二维电泳谱揭示,热锻炼诱导合成的热激蛋白具有阻止蛋白质热变性和生物膜热破坏的功能。
  • 黄开勋,徐辉碧,王君健
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(03): 264-269.
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    采用梯度离心和放射性同位素等方法从鼠脑中分离得到髓磷脂、突触囊、轻突触体、重突触体、线粒体6个亚细胞组分。分别测定了各亚细胞中硒-75、谷胱甘肽过氧化物酶和不饱和脂肪酸的含量,结果表明这些成分在鼠脑亚细胞中的分布呈现明显的相关性,同时首次在突触囊、线粒体和微粒体中检测到三种不同的谷胱甘肽过氧化物酶的活性峰,其中之一可能是红细胞谷胱甘肽过氧化物酶(EC1.11.1.9).还就机体的自我保护机制和硒在脑组织中的重要作用进行了讨论。
  • 王文忠,潘克桢
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(03): 270-275.
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    研究了植物凤凰木种子中的蛋白质成分,试图分离出新的核糖体失活蛋白凤凰木种子经磷酸盐缓冲液抽提,硫酸铵分级盐析,分子筛和阴离子交换剂等多次柱层析,分离出三种组分DrⅠ、DrⅡ和DrⅢ.SDS-PAGE和IEF实验表明这三种蛋白质均达到单一纯,而HPLC实验则表明它们的纯度不低于90%。它们的分子量据SDS-PAGE和HPLC实验分别约23500、26000、28500.IEF实验测得三者的等电点均为5.2左右。测定了组分DrⅠ的蛙卵泡裂解活性,其毒性约为天花粉蛋白的1/40.分析了它们的氨基酸组成。估算了三种蛋白质的二级结构含量,结果表明三者均富含β折叠结构。已有的实验事实表明这三种蛋白质的生化行为明显异于核糖体失活蛋白,因而很可能不属于这一蛋白质家族。
  • 李平卫,徐长法,王楠,李根培
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(03): 276-280.
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    等电聚焦表明,北京鸭红细胞铜锌超氧化物歧化酶由等电点分别为5.0,5.3,5.9,6.1和6.5的五个主要的活性组分(电荷异构体)构成,利用分析型聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳进行电荷异构体的制备级分离,采用三氯乙酸沉淀法快速确定蛋白条带的位置,电渗洗脱法回收蛋白,获得其中两个电荷异构体,对比研究结果表明电荷异构体的活性,氨基酸组成,二级结构等性质无明显差异。
  • 李新民,倪嘉缵,王平原,陈建文,黄芬
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(03): 281-285.
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    研究了镧、轧、镱及四种配合物对Ca~(2+)-ATP酶活性的影响.结果表明,低浓度的La~(3+),Gd~(3+)和Yb~(3+)对肌质网Ca~(2+)-ATP酶有激活作用;随着其浓度的增加,它们对酶活性的抑制程度增大;而La~(3+),Gd~(3+)和Yb~(3+)对纯化的Ca2~(+)-ATP酶则只有抑制作用;Gd─N─乙酰─缬氨酸和Yb─丙氨酰代丙氨酸配合物对肌质网膜和纯化的Ca~(2+)-ATP酶活性的影响与Gd~(3+)及Yb~(3+)类似,但其激活程度和抑制程度比Gd~(3+)及Yb~(3+)小;Gd─DTPA和Yb-DTPA对Ca2~(+)-ATP酶活性基本无影响。
  • 凌俊,刘望夷,王德宝
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(03): 286-291.
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    樟树种子中存在着cinnamomin与camphorin两种新的核糖体失活蛋白,电泳分析与Western杂交结果表明cinnamomin在9、10、11月份种子中的含量分别是8.9%,26.8%和11.5%,以10月份种子的含量为最高。camphorin的含量则分别为1.7%,2.5%与4.6%,随着种子的成熟而不断增加。8月份的幼嫩种子中检测不出cinnmamomin与camphorin.这表明樟树核糖体失活蛋白的表达受到了发育进程的时态调控.樟树叶片中可能不存在cinnamomin与camphorin,即两者的合成似乎具有一定的组织特异性.cinnamomin与camphorin均为糖蛋白。
  • 焦选茂,周同庆,刘树森,缪明永,冯伟华,陈克明
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(03): 292-296.
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    利用大鼠肝脏线粒体为材料,以琥珀酸为底物,研究了不同浓度的丹参酮Ⅱ-A磺酸钠对线粒体态4、态3呼吸及呼吸控制率,线粒体跨膜电位,线粒体呼吸链复合体(Ⅱ+Ⅲ)电子传递及质子转移活性的影响。结果证明丹参酮ⅡA-磺酸钠是线粒体呼吸链复合体(Ⅱ+Ⅲ)的有效抑制剂。文中对丹参酮ⅡA-磺酸钠在心肌缺血再灌注过程中的保护作用的分子机理进行了讨论。
  • 王晋清,范慕贞
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(03): 297-303.
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    抗多胺代谢剂──二氟甲基鸟氨酸(DFMO)作用于经含点突变的Ha-ras基因片段转染的转化细胞(HR-1细胞)引起细胞生长的抑制,其抑制率随DFMO浓度的增加而增大,此时细胞多停滞于G_1期;多胺合成的关键酶鸟氨酸脱羧酶(ODC)活性显著下降;Ha-ras癌基因mRNA及rasP~(21)蛋白的表达受到抑制;而外源性腐胺与DFMO的同时加入可防止上述一系列改变的发生,说明DFMO使HR-1细胞某些表型向亲本细胞逆转的作用是与细胞多胺生物合成的抑制直接相关。
  • 汪浩川,刘秉文,付明德
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(03): 304-310.
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    动脉平滑肌细胞(SMC)是动脉粥样硬化(AS)斑块中的主要细胞,它的增殖在AS形成过程中极其重要。脂蛋白和氧化修饰型脂蛋白对SMC增殖的影响以及SMC增殖与原癌基因异常表达的关系是当前AS发病机制研究的热点之一。我们在建立人主动脉SMC体外培养方法的基础上,观察了LDL,VLDL及HDL和相应的氧化修饰型脂蛋白对培养人SMCfos,myc,erb-B原癌基因转录表达的影响。结果表明:①HDL对SMCfos,myc基因表达无影响;②LDL和VLDL有使这些基因表达增加的趋势,但与对照比较差异不显著(P>0.05);③OX-VLDL,OX-VLDL和OX-HDL有使SMCfos,myc基因表达显著增强的作用(P<0.01),且其作用较相应的天然脂蛋白大(P<0.01).上述结果说明:LDL,VLDL,OX-LDL,OX-VLDL和0X-HDL的致AS作用可能与刺激SMCfos和myc癌基因表达增加有关。
  • 张青云,吕有勇,李诤,李文梅,崔建涛,谢山海,邓国仁
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(03): 311-315.
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    p53抑癌基因由于点突变,缺失或易位等方式而丧失活性是多种肿瘤发生发展的重要机理之一。本文应用聚合酶链式反应─—单链构象多态性分析(PCR-SSCP)方法,对四种人胃癌细胞系MGC803,BGC823,GC7901和PAMC-82中p53基因的第5、6、7、8四个外显子进行检测,结果发现,PAMC-82的第5和第8外显子,GC7901的第6外显子存在突变。PCR-直接测序证明,它们分别在174位、280位、204位密码子发生缺失G,GC→CG,AT→CG转变,因而可使其编码的p53蛋白分别发生移码突变,Arg→Thr,Glu→Ala,而丧失肿瘤抑制功能。实验结果表明,p53基因在胃癌发生发展过程中,尤其是较晚阶段具有重要作用。
  • 管考梅,柳惠图,谭薇琦
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(03): 316-320.
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    以人胃癌细胞BGC-823为模型,研究了毛喉萜(forskolin)对胃癌细胞中蛋白激酶C活性及其亚类基因表达的作用,同时也观察了毛喉萜对癌基因c-jun及抑癌基因p53表达的影响.结果表明,2×10~(-5)mol/L毛喉萜处理BGC-823细胞72h,细胞质、膜和细胞核PKC活性下降,PKC亚类β,γ基因表达被抑制,癌基因c-jun的表达也明显降低,而抑癌基因p53表达升高,上述变化可能是毛喉萜抑制胃癌细胞增殖等生理效应的重要分子事件。
  • 王朝晖,鹿峪峰,韩玉珉
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(03): 321-327.
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    重组水蛭素HV2是凝血酶的特异性抑制剂,是一种非常稳定的蛋白质。温度的升高(100℃水浴)和pH(1─13)的改变不影响其活力,在某些变性剂(8mol/L尿素、1%SDS和6mol/L盐酸胍)存在的条件下也非常稳定,0.1mol/L的DTT在70℃时使其部分失活,只有pH和温度同时升高其活力才开始下降,pH13、80℃处理15min即完全失活,氨基酸组成和活性分析发现失活样品的Cys和Lys被破坏。重组水蛭素HV2含有一个结构紧密的N端核心区和一个无序的C端尾部。其N端的3个Lys-Xaa键均不被胰蛋白酶水解;胃蛋白酶及糜蛋白酶消化后,分离所得片段,氨基酸组成分析发现N端核心区依然保持很高的抗凝血酶活性,继续消化24h,核心区不被进一步降解。
  • 白玉明,褚西宁,口如琴,黄登宇,袁静明
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(03): 328-332.
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    利用KCN、H_2O2和SDS的选择性反应引起的SOD同工酶谱带变化即可鉴别粗抽提液中的SOD同工酶类型;用这种方法对五株不同种根霉的鉴别实验表明,它们均不同程度地含有Cu,Zn型和Mn型两种SOD,前者约占80%左右,后者只占20%左右。用邻苯三酚自氧化法对样品中SOD活性测定结果与在同工酶谱上的鉴别结果基本一致。
  • 白龙川,颜卉君,吴国利
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(03): 333-337.
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    对RA、HHT和WP_(852)诱导HL-60细胞分化过程中胞浆和膜溶脱部分中的TPK和PTPP活力变化进行了研究.结果表明,在诱导早期,TPK的活力就有明显的波动变化;随着诱导时间的延长,胞浆部分TPK活力下降,膜溶脱部分的TPK活力则升高.诱导后,胞浆部分和膜溶脱部分的PTPP活力均明显升高。与TPK活力变化相比较,PTPP变化幅度比TPK的大。
  • 朱振齐,罗贵民,丁兰,孙启安,杨同书,沈家骢
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(03): 338-342.
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    开发一种制备硒代谷胱甘肽(GseH)的新方法。以合成的谷氨酰-γ-丝氨酰-甘氨酸(Glu-Ser-Gly)三肽为原料,经苯甲基磺酰氟(PMSF)活化,用H_2Se突变Ser成硒代半脱氨酸(SeCys)制成GSeH。用元素分析及氨基酸分析确定此三肽的组成并推导出此三肽的结构。研究了GSeH的性质.结果表明,此三肽具有谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)的活性,其活力比其它一些小分子有机模拟物高,在性质上也有优于它们的一些特点,其动力学行为与天然GPX类似。
  • 张俊武,赵艳君,吴冠芸,程再玉
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(03): 343-347.
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    研究了野生型Aγ珠蛋白基因、中国型胎儿血红蛋白持续存在综合症(HPFH)Aγ基因(启动子区─196C→T突变)及希腊型HPFHAγ基因(─117G→A突变)在鼠红白血病(MEL)GM979细胞中的表达。比较每个整合的Aγ基因表达的mRNA量,─196C→T突变Aγ基因未显示比野生型Aγ基因明显增加的表达水平,而─117G→A突变Aγ基因在未分化的及HMBA或丁酸钠诱导分化的MELGM979细胞中的表达水平增加到野生型Aγ基因相应水平的2.3倍至3.1倍。此结果提供了又一个实验证据,说明启动子─117G→A突变是希腊型HPFH中胎儿Aγ基因在成人中持续活跃表达的原因,这也为β地中海贫血和镰刀性贫血的基因治疗提供了新途径,即可以考虑用转移─117G→A突变Aγ基因的方法改善患者的贫血症状。
  • 张兆山
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(03): 348-353.
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    将λDNA的nutR序列置于Lac启动子的下游,在nutR和β-半乳糖苷酶基因(galK)之间插入λ噬茵体依赖rho的终止子tR1,使galK的表达取决于N蛋白介导的转录抗终止作用。为研究nutR对抗终止的影响,系统地进行了该序列中每个碱基的点突变(A→C,G→T,C→A及T→G).结果表明boxA中有两个碱基(位置2和5)的突变对抗终止作用是至关重要的,使抗终止效率降低了10倍;而其他位置的改变影响甚微。boxA的缺失在nus ̄+宿主中使抗终止数率降低了40%,但在nusB宿主中却恢复到野生型水平。boxB茎环结构中,茎部顶端的碱基对及环中邻近茎部的两个碱基的突变对抗终止作用影响很大,被认为是N蛋白的识别序列.boxA和boxB之间的间隔序列中有两个碱基的突变几乎使抗终止作用丧失。
  • 张洪涛,陈劲秋,胡美浩
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(03): 354-358.
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    通过DNA定点突变法将人胰岛素B22Arg改造成B22Asn,去除其一级结构中碱性蛋白酶位点,以期提高胰岛素在体内的稳定性。突变体基因克隆到表达载体pBV220中,在E.coliDH5α中进行表达。分离纯化后的表达产物经胰蛋白酶和羧肽酶B联合作用获得重组B22Asn-人胰岛素.该突变胰岛素具有抗胰蛋白酶水解能力,但是其与受体的结合能力只有标准猪胰岛素的12.4%.胰岛素结构中B22Arg可能在胰岛素与其受体结合过程中起重要作用。
  • 曹蕾,郑仲承,孙兰英,刘新垣,蒋芝华,周长福,赵迎春,陈生弟
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(03): 359-362.
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    用电穿孔法将大鼠酪氨酸羟化酶(Tyrosinehydroxylase,TH)基因转染大鼠L-6TG成肌细胞株,经PCR检测、免疫组织化学和荧光组织化学检测证明,TH基因能在细胞内稳定整合和表达,并在辅因子存在时将酪氨酸转化为多巴.移植于大鼠纹状体后可成活并表达TH。
  • 李清漪,曾和期
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(03): 363-365.
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    大瓶螺碱性磷酸酶的分离纯化及部分性质研究李清漪,曾和期(西南师范大学生物系,重庆630715)碱性磷酸酶(EC3.1.3.1,简称AKP)是广泛存在于动物组织中的水解酶。对软体动物中AKP的研究仅有少数报道[1,2],对属于单壳贝类的水生食用螺──大...
  • 丁树哲,王文信,连克杰,许豪文
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(03): 366-367.
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    力竭游泳对大鼠心肌线粒体钙运输的影响丁树哲,王文信,连克杰,许豪文(华东师范大学体育系运动生化实验室,上海200062)线粒体钙运输在细胞功能调节方面有重要作用.线粒体通过摄取与释放钙,对其跨膜质子、不依赖底物及产物抑制的ATP合成、磷酸化偶联等均有...
  • 段光明,冯育林,叶荩
    中国生物化学与分子生物学报. 1995, 11(03): 368-369.
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    马铃薯糖苷生物碱的薄层层析及扫描测定段光明,冯育林,叶荩(山西大学生物学系,太原0300061,山西大学测试中心,太原030006)马铃薯糖苷生物碱(glycoalkaloids)是一类含氮甾族化合物,有明显的剧毒性和潜在的慢毒性[1],其测定方法的...