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  • 1996年, 12卷, 第01期
    刊出日期:1996-02-20
      

    论文

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    论文
  • 赵永同,惠宏襄,刘爱平,王刚,王成济
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(01): 1-5.
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    通过微机对bcl-2RNA二级结构的分析,设计针对bcl-2片段5'CGCGACCCGGUCGCCAGGACCUCG3'的“锤头状”(Hammerhead)核酶(Ribozyme,RD)基因,平端连接于pGEM-3Zf(-)HincⅡ位点,克隆后经测序表明序列正确,bcl-2和Ribozyme基因经体外转录,50℃作用2h,从1656-1657(C-G)位之间切断bcl-2RNA片段.
  • 王海林,金冬雁,颜子颖,周园,白植生,侯云德
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(01): 6-10.
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    依据丙型肝炎病毒(HCV)多蛋白核心区N端氨基酸序列和密码子简并性,人为设计并采用半化学半酶促的方法合成了一个DNA片段。经核酸杂交检测以及DNA序列分析证实,该片段的核苷酸序列与设计完全一致。将合成的DNA片段插入融合表达载体pGEX-2T中,表达产物经亲和层析纯化后进行Western免疫印迹实验和间接ELISA分析,结果表明,融合蛋白具有HCV核心区抗原的免疫反应性,可望用于HCV抗体的检测.此外,编码HCV优势抗原表位的化学合成基因有可能为HCV嵌合抗原的研究提供一条捷径。
  • 施水良,陆军,朱德煦
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(01): 11-16.
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    利用PCR技术,从正常人胎肝染色体DNA中克隆到长度为1572bp的人促红细胞生成素(EPO)基因组基因片段,它包含除第一个外显子和第一个内含子外所有外显子及内含子。再人工合成13bp外显子1的编码区,并与1572bp片段拼接,从而得到除第一个内含子的人促红细胞生成素基因组基因。将克隆得到的EPO基因插入载体pSV2-dhfr得到pSV2-EPO表达载体,转染COS-7细胞后获得高效表达。利用自行研制的小鼠抗人EPO单抗及兔抗人EPO多抗,对表达产物进行ELISA定量测定,细胞分泌EPO量高达251±7U/ml.Krystal法测得体外生物活性241.5±6.5U/ml.用EPO单抗免疫沉淀结合SDS-PAGE对转染细胞的表达产物做了进一步鉴定,清晰地看到了EPO条带。从高效表达EPO的转染细胞中分离纯化mRNA,用RT-PCR方法扩增并克隆到EPO的cDNA,这为EPO在其它系统中的表达及EPO的功能与结构的研究打下了基础。
  • 易明,顾继杰,黄秉仁,蔡良琬
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(01): 17-21.
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    利用酸性异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法从人胎儿基底前脑中提取总RNA,用逆转录与聚合酶链反应相结合的RT-PCR法,扩增出人神经生长因子低亲和力受体p~(75)NGFR基因cDNA,在限制性内切酶SmaⅠ存在下的连接体系中,将扩增出的cDNA片段克隆入pUC12的SmaⅠ位或,经限制性内切酶EcoRⅠ和PstⅠ酶切鉴定是否插入以及HindⅢ酶切鉴定方向。将重组质粒中的p~(75)NGFR的cDNA再次亚克隆至pUC12载体中后,以其双链DNA为模板,用末端终止法测出其全部核苷酸顺序,证实其核苷酸编码的p~(75)NGFR除两个碱基突变外,其余与文献完全一致。完整的p~(75)NGFR的cDNA分两步克隆到逆转录病毒表达载体pXT-1,经PA317包装细胞株体外包装后、收集病毒上清转染条件不死性大鼠小脑神经细胞系R2.初步结果表明转染了p~(75)NGFR的R2细胞株去除NGF培养时出现程序化死亡的典型特征梯型DNA带。
  • 曾明,黄秉仁,蔡良琬,潘国宗
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(01): 22-26.
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    以HBV-NClDNA为材料研究了其中的X基因,首先确定了此X基因的顺序,即用ABI自动萤光测序议测序证明了此X基因的385位核苷酸后缺失19个核苷酸,从而引起移码突变,使此X基因共有519个核苷酸,编码172个氨基酸,比另一种adr型X蛋白多18个氨基酸。在其第五位氨基酸上有一ATG起始密码,也与另一X基因不同。经重组后获得在大肠杆菌中的热诱导表达,用Westernblot方法证明确为X蛋白,并有多态性。
  • 曾明,黄秉仁,蔡良琬,潘国宗
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(01): 27-30.
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    报道了HBV-NC1株的X基因进入真核细胞表达载体pXT1质粒的TK启动子之后,转染细胞及表达X基因成功。即发现包装病毒感染NIH/3T3细胞后有X基因表达,用斑点杂交又证明此X基因已整合到细胞的基因组中,当与有pMSH报告基因的质粒共同感染真核细胞后确有激活转录调控现象出现。应用反义的XRNA表达载体感染肝癌细胞发现有接触抑制作用出现。
  • 高基民,林来兴妹,黄洪莲,王小宁,徐羚飞,郑仲承,刘新垣
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(01): 31-35.
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    对PAK株的绿脓杆菌外毒素结构基因进行全长核苷酸顺序测定时发现:来源于PA103株和PAK株的PE基因一级结构间存在差异,其中Thr~(179)(ACC)→Ala~(179)(GCC)、Ser~(515)(AGC)→Gly~(515)(GGC),并有11个同义突变,但变异并不影响白细胞介素2-绿脓杆菌外毒素融合蛋白的ADP-核糖基化活性及其细胞毒活性。
  • 陈德风,刘强,赵西林,董元舒,李青
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(01): 36-41.
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    构建了重组质粒pSV2gpt-SV40ori-antisense-ras(简称P1),利用这一重组体进一步证实了识别序列外DNA甲基化对限制性核酸内切酶PvuⅡ切割活性的抑制作用,并对这一抑制作用进行了定量研究。结果表明:邻近PvuⅡ识别位,点的DNA甲基化可降低PvuⅡ对该位点酶切活性的70%左右。
  • 何洛文,赵敏,刘美生,张慧影
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(01): 42-46.
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    建立了测定人乳腺癌胞浆cAMP结合蛋白(cAMPb.p.)方法。综合研究了其温度、保温时间、配体浓度、稳定性等条件。cAMPb.p.的K_D值为2.90×10~(-8)mol/L.并测定了60例雌激素受体(ER)Fu性乳腺癌标本的cAMPb.p.含量。此组病人术后均接受系统的内分泌治疗,ER/cAMPbp,比值范围为7.7~362×10~(-3),ER/cAMPb.p.比值≥40×10~(-3)的五年生存率明显高于比值<40×10~(-3)组,(p<0.005).表明测定ER/cAMPb.p.比值对预测患者内分泌治疗疗效,优于单独测定ER.
  • 巨同忠,陈惠黎
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(01): 47-52.
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    报道了一个不需同位素和HPLC的α-1,6-岩藻糖转移酶(α1,6FuT,又称核心岩藻糖转移酶)的测定法,包括从正常人血浆提纯运铁蛋白,消化成带有天冬酰胺(Asn)的二天线N-糖链,去除外端唾液酸和半乳糖后,用生物素酰胺乙酰基团标记其Asn,并以此生物素衍生物标记的Asn-七糖的N-糖链为受体底物,GDP-L-岩藻糖为供体底物,用LCA柱吸附法分离岩藻糖化后的产物,再用HRp-Avidin交联物与柱上带有生物素的产物结合,此HRP-Avidin-生物素。岩藻糖化产物从柱上洗脱后测定HRP活力可代表α1,6FuT活力。此法在较宽的范围内,产物量与酶量和反应时间成正比.人肝细胞癌、亚硝胺诱发大鼠肝癌后期或用佛波酯(PMA)处理人肝癌细胞后,α1,6FuT增高,而用视黄酸或db-cAMP处理人肝癌细胞后,则该酶活力降低。
  • 孙洪业,刘群,姚光庆,王夔
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(01): 53-58.
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    用Aedans标记肌动蛋白单体G-Actin上Cys374残基作为探针,研究了稀土离子Ce~(3+)与G-Actin的结合及引起的微构象变化。Ce~(3+)在低浓度(Ce~(3+)/Actin摩尔比<1)和Ca~(2+)竞争G-Actin上二价离子的高亲合位点。Ce~(3+)取代Ca~(2+)引起Aedans荧光强度增强与Mg~(2+)取代Ca~(2+)的结果相同。Ce~(3+)/Actin>l则导致Aedans荧光强度下降。说明Ce~(3+)在高低两种浓度条件下结合的位点及对Cvs374的微构象的影响不同。时间分辩测得的Aedans荧光寿命也支持这一结论。CD谱结果表明Ce~(3+)/Actin<0.4,Actin的二级结构增加,大于0.4又导致其失去。Ce~(3+)-Actin在有/无游离ATP时用聚合液诱导的聚合结果表明,无游离ATP时,极低浓度Ce~(3+)促进聚合,高浓度虽有促进但有所减弱;有游离ATP时,Ce~(3+)/Actin在实验范围内促进聚合。
  • 焦越坎,林克椿
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(01): 59-63.
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    用扫描隧道显微镜观察了兔S抗原及其与鼠抗兔S抗原抗体相互作用所形成的复合物,结果表明,S抗原单体呈椭球状。其二维尺寸为7.5nm×5.3nm,且常以二聚体形式存在。抗原分别结合于抗体的二个Fab段,既可以单体结合,也可以二聚体形式结合。
  • 邹国林,胡萍,李鹏
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(01): 64-67.
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    报道了一种修饰SOD的方法。所得硬脂酸修饰SOD比活力为每毫克蛋白10000单位,经鉴定已达均一程度。测得其分子量为35000.修饰SOD和天然SOD在紫外光区的最大吸收均在265nm。修饰SOD对温度、pH、蛋白酶水解的稳定性比天然SOD增强,且免疫原性消除。在低浓度的某些有机介质中活性比在水中高。
  • 任建卫,杨彦
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(01): 68-72.
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    猪C1q由猪血清通过PEG沉淀优球蛋白、低离子强度透析沉淀、IgG-Sepharose48亲和层析、SephadexG-200凝胶层析等步骤分离纯化,每300ml血清可制得9.8mgC1q,产率为46.7%。纯化的猪C1q在SDS-PAGE上显示出三条染色带,分别在29、26、22kD处,薄层扫描结果表明纯度达91%;纯化的C1q保持了较高活性,终浓度为4μg/ml时仍可使致敏的绵羊红细胞出现明显的凝集现象。猪C1q-ELISA结果表明,动物C1q代替人C1q应用于临床检测是可行的。
  • 唐微,常远,邱雪贞,郑仲承,刘新垣
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(01): 73-77.
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    PEG化蛋白质的分离纯化比较困难,本工作发现PEG化蛋白质仍能被硫酸铵盐析,据此可以简单地将IL-2及PEG化IL-2沉淀出来,而将有毒的活化PEG等副产物留在溶液中。此方法效果理想而又十分简便。文献中未见报道。此外,实验还发现,在PEG-IL-2与IL-2的混和液中加入一定量的PEG后,二者之间溶解度差别增大,当用SephacryⅠS-200柱分离时,先用含10%PEG,0.25mol/LNaCl的缓冲液平衡洗脱PEG-IL-2,再降低盐浓度洗下IL-2,即可使二者完全分开。过去要将IL-2与PEG-IL-2分离开非常困难,本工作解决了这个问题,这点亦未见文献报道。
  • 帖建科,李令媛,茹炳根,慈云祥
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(01): 78-82.
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    通过荧光探针、酶的活力测定及对金属硫蛋白(MT)分子中金属与巯基配位键的特征吸收检测,比较研究了锌诱导兔肾不同亚型ZnMT使脱金属碳酸酐酶(ApoCA)复活的能力大小。结果表明,不同亚型ZnMT对ApoCA具有不同的反应活性,MT1比MT_2对于AnoCA的复活具有更强的反应活性,此结论与我们在研究不同亚型MT清除自由基时的结果相一致。这两种亚型MT在反应活性上的差异,很可能与其在生物体内功能上的分化密切相关。
  • 戴燕,李燕,刘洁,王宏,陈慰峰
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(01): 83-87.
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    应用疏水层析对大肠杆菌表达的人重组白细胞介素-4(rhIL-4)进行了纯化,含有rhIL-4的包涵体,经洗涤、变性、复性后,以Butyl-Sepharose层析,得到了高纯度的rhIL-4.纯度达97%;回收率为32%;比活性为2×10~7U/mg,讨论了rhIL-4疏水层析的条件,并对不同的方法纯化白细胞介素-4进行了比较.
  • 陈捷平,高秀琴,张夏英
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(01): 88-92.
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    在试管式、微孔式和斑点式的酶免测定法测定人绒毛膜促性腺激素(HCG)的基础上,发展了应用双单克隆抗体的免疫层析一步法测定HCG。此法用胶体金标记抗βHCG单克隆抗体,将抗αHCG单克隆抗体包被在硝酸纤维素膜上。无需分离步骤,特别是在进行测定时除加入样品外无需再加任何试剂,此方法特别迅速、简便,2~5min即可得结果。凡HCG浓度>25IU/L的样品可得到阳性结果。在人体血或尿中可能出现的高浓度的干扰物质,如抗坏血酸、乙酰水杨酸、雌二醇、蛋白质、胆红素、甘油三酯等对本测定均无干扰作用,在促黄体激素(LH)浓度高达500IU/L时仍与HCG没有交叉反应。能进行测定的最高值大于300IU/ml,这表示,当HCG浓度达到妊娠期的最高值时仍不会有假阴性结果。
  • 聂玉生,李生广,杨志伟,邢菁如,林治焕,杨福愉
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(01): 93-98.
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    以低Se克山病病区粮喂养大白鼠为动物模型,在细胞及亚细胞水平上进行了低Se与Ca转运关系的研究,同时测定了线粒体的能量转换功能。结果显示,低Se病区粮组动物心肌线粒体Ca转运呈现明显异常,但线粒体能量转换功能尚未发生明显改变。提示线粒体Ca转运功能损伤先于线粒体能量转换功能损伤之前发生。心肌线粒体Ca转运功能可作为更灵敏的指标用于克山病发病机理的研究。上述结果进一步表明克山病是一种“心肌线粒体病”。
  • 张孝山
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(01): 99-103.
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    FCCP作为质子传递型氧化磷酸化解偶联剂,是一种强力的ATP合成抑制剂。80μmol/L的FCCP可在数分钟内使细胞内的ATP耗竭。半胱氨酸可使FCCP引起的ATP,氧消耗量和乳酸脱氢酶逸出率等改变恢复正常。半胱氨酸对FCCP的解毒作用是特异的和与剂量有关,而其他含巯基剂如:还原型谷胱甘肽和二硫苏糖醇(DTT)则不能干扰FCCP对细胞线粒体功能的影响。
  • 周岚,杨小平,陈惠黎
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(01): 104-108.
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    二乙基亚硝胺(DEN)诱发大鼠肝癌过程中,可使肝中增殖指标γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT),谷胱甘肽S-转移酶(GST),胞液和膜性酪氨酸蛋白激酶(c-TPK,m-TPK)有不同程度的逐步升高,直至16周(除c-TPK在第12周活力最高外),而分化指标精氨酸酶(AGN)则明显降低,如在诱癌开始的同时给予全反式维甲酸(RA)连续16周则可延缓γ-GT、GST和两种TPK的升高和AGN的降低,这种作用并非RA本身对酶活力的影响,而是RA阻断肝癌发展的结果。
  • 陈松林,邓文涛,陈细华,夏盛芹
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(01): 109-111.
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    草鱼垂体催乳素的分离、纯化与鉴定的研究陈松林,邓文涛,陈细华,夏盛芹(中国水产科学研究院长江水产研究所淡水鱼类种质资源与生物技术国家重点实验室,沙市434000)催乳素(PRL)是由动物脑垂体合成与分泌的一种多肽激素,其在鱼类的主要功能是调节鱼体渗透...
  • 陈平,梁宋平
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(01): 112-115.
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    毛细管水解及反相高效液相色谱分析蛋白质的氨基酸组成陈平,梁宋平(湖南师范大学生物研究所,长沙410006)氨基酸组成的分析是阐明蛋白质和多肽化学特性的基础,在蛋白质与多肽的氨基酸组成分析中,常采用对水解管反复充氮并抽真空的方法使蛋白质和多肽在隔绝氧气...
  • 姚明忠,顾文聪,丁卫,韩志芬,杜国光
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(01): 116-117.
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    中药固真方对一些与细胞增殖有关基因表达的影响姚明忠,顾文聪,丁卫,韩志芬,杜国光(上海中医药大学生物化学教研室,上海200032)(北京医科大学生物化学与分子生物学系,北京100083)中药固真方(VRF)具有补肾益精、延缓衰老的作用[1].能提高成...
  • 何贤辉,柯一保,孙汛,聂慧玲
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(01): 118-120.
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    天花粉蛋白与CibacronBlueF_3GA结合特性的研究何贤辉,柯一保,孙汛,聂慧玲(中国科学院上海细胞生物学研究所,上海200031)天花粉蛋白(Trichosanthin,简称TC8)是从葫芦科植物栝楼(Tbehosantheskirilow?..
  • 刘智,朱定尔,谢慎思,朱小湘,肖广惠,陈汉春
    中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(01): 121-124.
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    K562细胞中锌指蛋白cDNA基因片段的克隆刘智,朱定尔,谢慎思,朱小湘,肖广惠,陈汉春(湖南医科大学分子生物学研究室,长沙410078)1985年,Miller等[1]等分离并测定了非洲爪蟾卵母细胞转录因子ⅢA(TFⅢA)的cDNA序列,推出蛋白质...