中国生物化学与分子生物学报

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毛积芳

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(06): 633-636.

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利用谷胱甘肽Ｓ－转移酶（Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ　Ｓ－ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＧＳＴ）融合基因表达系统，大鼠２０α羟类固醇脱氢酶（２０αＨｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄＤｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ，２０αＨＳＤ）在大肠杆菌中得以成功地表达。亲和层析和Ｔｈｒｏｍｂｉｎ消化，可从融合蛋白中回收和纯化重组２０αＨＳＤＳＤＳ－ＰＡＧＥ、Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法和酶活性测定显示，重组２０αＨＳＤ具有天然蛋白质相同分子量、相似的抗原性和酶催化活性，其对ＮＡＤＰ的Ｋ＿ｍ值和Ｖ＿（ｍａｘ）分别为９．５μｍｏｌ／Ｌ、３３４ｎｍｏ１／（ｍｉｎ·ｍｇ），对底物２０α羟孕酮（２０αＨｙｄｒｏｘｙｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ，２０αＯＨＰ）的Ｋ＿ｍ值和Ｖ＿（ｍａｘ）分别为５．９μｍｏｌ／Ｌ和３４７ｎｍｏｌ／（ｍｉｎ·ｍｇ），利用该表达系统大量制备大鼠重组２０αＨＳＤ，为深入研究２０αＨＳＤ的生理活性和功能创造条件。

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大鼠实验性帕金森病的基因治疗

曹蕾，蒋琼，郑仲承，孙兰英，刘新垣

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(06): 637-640.

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将稳定转染了大鼠酪氨酶羟化酶（Ｔｙｒｏｓｉｎｅｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ，ＴＨ）基因的大鼠成肌细胞移植于帕金森病大鼠模型的纹状体，进行基因治疗研究。ＲＴ－ＰＣＲ和免疫组织化学检测都证明转基因细胞可在纹状体内存活并表达ＴＨ，动物的不对称旋转行为明显改善，而且疗效可维持半年以上。

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小鼠cAMP依赖的蛋白激酶催化亚基α的重组表达研究

陈长征，范均，许正平，夏其昌，李伯良，王应睐

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(06): 641-647.

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将小鼠ｃＡＭＰ依赖的蛋白激酶（ｃＡＰＫ）催化亚基α（ｍＣα）分别以成熟、麦芽糖结合蛋白（ＭＢＰ）融合以及Ｎ端连续六个组氨酸（Ｈｉｓ_６）融合的形式在大肠杆菌中得到了高效表达，且成熟及融合的重组ｍＣα均有明显的蛋白激酶活性，表明蛋白激酶催化核心结构具有相对的独立性。其中Ｈｉｓ_６－ｍＣα可利用金属离子（Ｎｉ￣（２＋））配体亲和层析（Ⅰ－ＭＡＣ）一步纯化，所得融合蛋白可通过Ｈｉｓ_６亲合手臂（Ｔａｇ）固相化于金属离子（Ｎｉ￣（２＋））配体亲和树脂上，为进一步利用ＰｈａｇｅＤｉｓｐｌａｙ多肽库筛选ｃＡＰＫ识别的底物序列和专一性抑制剂打下了基础。

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抗人AFP抗体噬菌体呈现文库的构建筛选及基因序列测定

邓健蓓，韩骅，苏成芝，陈常庆

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(06): 648-653.

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从人ＡＦＰ免疫小鼠脾细胞ｍＲＮＡ中扩增出全套抗体Ｖ区基因并随机拼接为ＳｃＦｖ基因，构建全套ＳｃＦｖ基因噬菌体呈现文库，经两轮ｐａｎｎｉｎｇ筛选富集，一次从９４个单个重组噬菌体克隆中筛选到１４个具有ＡＦＰ结合活性的克隆，测定两个阳性克隆中ＳｃＦｖ基因的核苷酸序列，获得一个Ｖ＿Ｈ基因和两个Ｖ＿Ｋ基因，其基因序列分别与鼠ＩｇＶ＿ＨＪ５５８、Ｖ＿ｋ－ＯＸ１和Ｖ＿ｋ４／５家族同源性最高；推导出的氨基酸序列中均含有抗体Ｖ区特征性的两个恒定的半胱氨酸残基、具有明确的三个ＣＤＲ和四个ＦＲ序列，表明这三个基因均系新发现的功能性鼠抗体Ｖ区基因序列。

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高表达钙调素NRK细胞模型的建立及其对细胞生长失调的影响

刘桂中，柳惠图，张伟，胡江

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(06): 654-658.

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钙调素作为Ｃａ￣（２＋）信号的主要胞内受体，在细胞增殖调节中起着重要作用。实验中运用ＤＮＡ体外重组技术构建了高表达钙调素的真核载体，并将其转染到大鼠正常肾细胞（ＮＲＫ）中得到钙调素高表达的稳定细胞株。分析表明，高表达钙调素加速细胞生长，促进细胞从Ｇ＿１期向Ｓ期及Ｇ＿２期向Ｍ期的进程，并且使细胞血清依赖性降低，在单层培养中出现接触抑制丧失的岛状生长的现象。基因表达分析表明，原癌基因ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｍｙｃ随钙调素增高而表达加强，这可能是钙调素作用的分子机理之一。

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急性粒细胞白血病珠蛋白基因表达失衡的研究

徐学明，傅敏庄，王葆春，朱定尔

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(06): 659-663.

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应用竞争性逆转录聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）测定了１０例急性粒细胞白血病Ｍ＿２型（ＡＭＬ）患者外周血网织红细胞中α／β珠蛋白ｍＲＮＡ的相对含量，其中８例表现不同程度增高，２例正常，均值为１．５１３±０．１８２（±ｓ），与正常对照组（１．２４±０．０８３）进行ｔ检验比较，有非常显著差异（Ｐ＜０．０１）．此外，ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析显示ＡＭＬ患者β珠蛋白基因启动子区序列（５＇端－１３５至＋１２２位核苷酸）无明显异常。说明ＡＭＬ患者珠蛋白基因表达失衡系由于转录异常，很可能系ＡＭＬ的发生对α／β珠蛋白基因的平衡表达产生了某种影响，从而表现为获得性β地中海贫血特征。实验结果为进一步探讨白血病的发病机理及其α／β珠蛋白基因表达失衡的机制奠定了基础。

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非放射性反相杂交法在HLA－DQA1位点基因分型中的应用

李国选，王申五

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(06): 664-667.

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将遴选的经适当接尾的１２个ＨＬＡ－ＤＱＡ１序列特异性寡核苷酸固定在一张滤膜上，用生物素标记的ＤＱＡ１特异性扩增产物与滤膜上的序列特异性寡核苷酸在四甲基氯化铵杂交体系中杂交，然后经洗膜封膜，杂交信号用非放射性的碱性磷酸酶显色法检测，根据杂交斑点的显示结果分析标本的基因型。采用这种方法初步确定了ＨＬＡ－ＤＱＡ１位点８种单倍型等位基因：ＤＱＡ１０１０１、０１０２、０１０３、０２０１、０３０１１、０４０１、０５０１和０６０１．非放射性反相杂交法可对各种来源的杂合性标本进行ＨＬＡ－Ⅱ类基因快速分型，并适合在临床器官移植的组织分型配型、疾病易感性研究和法医鉴定等领城中应用。

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噬菌体短肽库的构建及其随机短肽的多样性

李全喜，王琰，王雅明，徐建军，董志伟

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(06): 668-673.

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噬菌体短肽库是将随机合成的寡核苷酸序列通过与单链噬菌体外壳蛋白基因融合，从而将随机短肽表达于噬菌体的表面。将体外随机化学合成的寡聚核苷酸序列重组到单价噬菌体表达载体，构建了噬菌体短肽库，证明其库容为２×１０￣７集落形成单位（ｃｆｕ），重组率为９３％。同时将１１个随机克隆进行序列测定，证实其寡聚核苷酸序列和氨基酸的分布几乎是完全随机的，其多样性可以满足特异性短肽筛选的要求。

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HLA－DRB1基因位点多态性的PCR－RFLP分析

黄啸宇，王亚新，王福庆，陈诗书

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(06): 674-680.

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设计并建立一套适合国内应用的改良ＰＣＲ－ＲＦＬＲ方法，分５组特异性扩增ＤＮＡ样品，随后进行酶切定型分析，准确检测了编码ＤＲ抗原特异性的ＨＬＡ－ＤＲＢ１基因位点的多态性，该法采用分组扩增，不发生与其它ＤＲＢ位点等位基因的交叉扩增，不仅适合纯合子的区分而且可以清楚准确地检测杂合子样品，已报道过的ＤＲＢ１位点编码的特异性组合都可以通过这个方法得到准确分析。所使用的Ⅱ类限制性内切酶均价格便宜、易购。

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鲤鱼mtDNA酶切图谱的构建

戴建华，殷文莉，杨代淑，熊全沫

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(06): 681-685.

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采用密度梯度离心法及ＲＮａｓｅ消化法制备并纯化了鲤（ＧｙｐｒｉｎｕｓｃａｒｐｉｏＬｉｎｎａｅｕｓ）肝脏线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ），用１０种限制性内切酶对ｍｔＤＮＡ进行了分析，鲤鱼ｍｔＤＮＡ分子量约１０．１２×１０￣６，约１６．４９ｋｂ．ＳａｌⅠ、ＰｓｔⅠ、ＢａｍＨⅠ、ＸｂａⅠ、ＢｇｌⅠ、ＰｖｕⅡ、ＸｈｏⅠ、ＥｃｏＲⅠ、ＤｒａⅠ和ＨｉｎｄⅢ分别为１、１、３、３、３、４、１、４、４、和６个切点。根据单酶解及双酶解结果，构建了鲤ｍｔＤＮＡ１０种具酶３０个切点的限制性酶切图谱。

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伴刀豆蛋白A及其衍生物对培养软骨细胞蛋白多糖代谢的影响

颜炜群，申呜，杨同书，侯立中，铃木不二男，加藤幸夫

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(06): 686-692.

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观察了ＣｏｎＡ对培养软骨细胞ＰＧ合成代谢的影响。证实ＣｏｎＡ能够使培养的软骨细胞高分子硫酸化ＰＧ的合成增加３～４倍，其分子量、硫酸化部位和硫酸化程度与对照组相比无明显差异，是具有正常结构的软骨型ＰＧ。ＣｏｎＡ对低分子型ＰＧ的合成未见明显的影响。ＣｏｎＡ促进ＰＧ合成的作用可由ＭｅＭａｎ完全解除，比具有同样效应的激素、生长因子都强，并有明显的凝集素特异性。推测ＣｏｎＡ的作用可能与软骨细胞膜或细胞内的分化诱导因子的受体或软骨中存在的ＣｏｎＡ软骨细胞分化因子有关。

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猪骨胶原蛋白酶解物中血管紧张素转换酶抑制剂的提纯

任维栋，李耀辉，耿秀芳，王守训，郭健

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(06): 693-697.

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将猪骨胶原蛋白粗提物用胰蛋白酶水解，经阳离子交换树脂层析，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５柱凝胶过滤，以及数次反相高效液相层析，最终获得一具有抑制血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）活性的单一峰值的多肽。其氨基酸组成为Ｉｌｅ，Ｈｉｓ，Ｓｅｒ，Ｇｌｙ，Ａｌａ，Ｐｒｏ，Ｔｙｒ，Ｌｅｕ，Ａｓｐ．以Ｈｉｐ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ为底物，在ｐＨ为７．１的条件下，此肽对猪肺ＡＣＥ的Ｉ＿（５０）值为２６μｍｏｌ／Ｌ。

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木糖异构酶突变体的研究──替代氨基酸对分子表面环柔性的影响

赵武玲，阎隆飞

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(06): 698-702.

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天然球蛋白分子表面暴露的和柔性的环是对蛋白质水解作用最敏感的部位，可用蛋白质部分水解来确定木糖异构酶突变体上的这些部位。枯草杆菌蛋白酶对Ｗ１３６Ｅ单体的水解在一级反应图上呈折线，对Ｔ８９Ｓ和Ｖ１３４Ｉ单体的部分水解为直线。对镁－酶（ＭｇＥ）的水解速度低于对脱辅基酶（ＡｐｏＥ）的水解速度。枯草杆菌蛋白酶对Ｗ１３６Ｅ的第一个水解位点在Ａｌａ２８与Ｔｈｒ２９之间，第二个水解位点在肽链的Ｃ端。

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水稻巯基蛋白酶抑制剂的纯化及其性质研究

曾仲奎，谢文胜，鲍锦库，周红

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(06): 703-708.

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水稻的糠皮和胚经生理盐水浸取、离心后的上清液加热至８０℃处理１０ｍｉｎ，离心获得的上清液调ｐＨ至８．０，得到沉淀。沉淀溶解于０．０１ｍｏｌ／ＬＨＣｌ，经透析冷冻干燥得水稻巯基蛋白酶抑制剂（ＣＰＩ）粗品；粗品再经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ柱线性离子梯度洗脱和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００柱分子筛层析，即可获得在ＰＡＧＥ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＨＰＬＣ上均为单一蛋白带的ＣＰＩ样品。经上述步骤，ＣＰＩ可被纯化５８倍。经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定其分子量均为１２０００，Ｎ末端氨基酸为Ｐｒｏ，等电点５．６．水稻ＣＰＩ经１００℃处理１０ｍｉｎ后，其抑制活性无任何变化，在ｐＨ２．０～９．０之间，活性也不发生改变，但ｐＨ在９．０以上，其活性逐渐下降，水稻ＣＰＩ对木瓜蛋白酶是一种高亲和性的抑制剂，它对木瓜蛋白酶和无花果蛋白酶有强抑制作用，对菠萝蛋白酶仅有弱抑制作用，但对胰蛋白酶则全无抑制作用；其抑制类型属竞争性抑制剂类型，Ｋ＿ｉ值约３．５×１０￣（－８）ｍｏｌ／Ｌ对木瓜蛋白酶的抑制摩尔比约为１：１。

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水稻巯基蛋白酶抑制剂的分子修饰与其对稻瘟病菌的抑制作用

曾仲奎，鲍锦库，周红，谢文胜

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(06): 709-714.

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水稻巯基蛋白酶抑制剂（ＣＰＩ）经用二硫苏糖醇，对氯汞苯甲酸和碘乙酸修饰后，对木瓜蛋白酶的抑制活性并无改变；用Ｎ－乙基顺丁烯二酰亚胺与ＣＰＩ反应，可以测出ＣＰＩ分子内有１９个巯基被修饰，被修饰后，抑制活性仍无改变，表明水稻ＣＰＩ的抑制活性不需要巯基参与；应用Ｎ－溴代丁二酰亚胺与ＣＰＩ反应，可测出ＣＰＩ分子内有２个Ｔｒｐ被修饰，修饰后，抑制活性全部丧失，表明Ｔｒｐ是保持抑制活性所必需的基团。水稻巯基蛋白酶抑制剂和丝氨酸蛋白酶抑制剂对稻瘟病菌丝体的生长均有抑制作用，但后者的抑制作用比前者更强，若将两种抑制剂混合使用，则对稻瘟病菌丝体的抑制作用非常强烈；当抑制剂加入量达７２μｇ时，即可产生明显的抑制作用。

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人主动脉壁硫酸乙酰肝素蛋白聚糖对培养的人主动脉平滑机细胞合成蛋白聚糖的影响

张春玲，丛祥凤，张英珊

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(06): 715-719.

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从人正常胸主动脉分离硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（ＨＳＰＧ），观察其对体外培养的人主动脉平滑肌细胞（ＨＡＳＭＣ）合成ＰＧ的影响。ＨＡＳＭＣ在不加（对照）或加ＨＳＰＧ（１９μｇ醛酸／ｍｌ）的￣（３５）Ｓ－硫酸钠培养液中培养，以标记ＰＧ。继之，培养液及细胞层的４ｍｏｌ／Ｌ盐酸胍提取液中的ＰＧｓ经离子交换及凝胶过滤柱层析分离，发现加ＨＳＰＧ后，培养液中的ＨＳＰＧ，硫酸软骨素ＰＧ（ＣＳＰＧ）及硫酸皮肤素－硫酸软骨素ＰＧ（ＤＳＣＳＰＧ）均明显增高，而细胞层中仅ＨＳＰＧ和ＣＳＰＧ增高，且加ＨＳＰＧ后细胞层的ＤＳＣＳＰＧ分子大小有所不同，进一步分析ＤＳＣＳＰＧ中ＤＳ及ＣＳ含量发现加ＨＳＰＧ组ＨＡＳＭＣ细胞层中的ＤＳ％含量略低于对照组。结果提示ＨＳＰＧ可刺激ＨＡＳＭＣ的ＰＧ合成，其可能与血管壁修复及动脉壁脂质沉积有关。

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伤寒沙门氏菌SOD的提取及抗原性研究

徐军发，凌天翼，唐俊杰

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(06): 720-724.

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经硫酸铵分级沉淀，ＤＥＡＥ纤维素柱层析提取了伤寒沙门氏菌ＳＯＤ。提取后酶的比活性为３２７０Ｕ／ｍｇ，经聚丙烯酰胺凝胶电泳，蛋白质染色及酶活性染色显示提取的ＳＯＤ达到了电泳纯。酶活性染色法和原子吸收分光光度法测定结果表明提取的ＳＯＤ为Ｆｅ－ＳＯＤ。双向琼脂扩散试验结果显示抗伤寒沙门氏菌Ｆｅ－ＳＯＤ血清与牛红细胞ＳＯＤ不形成沉淀线，提示伤寒沙门氏菌Ｆｅ－ＳＯＤ与牛红细胞ＳＯＤ无交叉反应，抗体对酶活性抑制试验结果显示抗Ｆｅ－ＳＯＤ血清可抑制伤寒沙门氏菌及鼠伤寒沙门氏菌的Ｆｅ－ＳＯＤ和Ｆｅ／Ｍｎ－ＳＯＤ活性，对Ｍｎ－ＳＯＤ活性无抑制作用，说明伤寒沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌的ＳＯＤ之间有共同抗原，也提示ＳＯＤ的辅基似乎决定了其抗原特异性。

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酰化人红细胞超氧化物歧化酶稳定性的研究

王转花，张政

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(06): 725-728.

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用月桂酸对人红细胞超氧化物歧化酶（ｈ－ＳＯＤ）进行化学修饰得到酰化ｈ－ＳＯＤ（Ａｃ－ｈＳＯＤ），并对Ａｃ－ｈＳＯＤ和ｈ－ＳＯＤ的稳定性进行了比较。结果表明：Ａｃ－ｈＳＯＤ活力为ｈ－ＳＯＤ的７２％。比活力为４０００Ｕ／ｍｇ，Ａｃ－ｈＳＯＤ的热稳定性、酸碱稳定性及抗蛋白酶水解能力均比天然酶提高。

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大肠杆菌表达的重组人PAI－1的纯化

贺平，何诚，张华，宋后燕，朱运松

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(06): 729-734.

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纯化了工程细菌表达的可溶态和包含体形式的ｒｈＰＡＩ－１，纯度均达９８％，其ｒｈＰＡＩ－１蛋白质得率分别为１５％和１９％，比活性分别为３３５００ＩＵ／ｍｇ和２７７０００ＩＵ／ｍｇ。Ｎ端氨基酸序列分析显示，ｒｈＰＡＩ－１Ｎ端１５个氨基酸与天然ＰＡＩ－１完全一致；包含体复性研究表明，包含体的复性与复性蛋白的浓度及复性液中助溶剂的浓度密切相关。纯化的ｒｈＰＡＩ－１为分析ＰＡＩ－１结构与功能及探讨其临床应用提供了材料。

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鼠肝DNA甲基化酶的纯化及物理化学性质的研究

白坚石，何忠效，顾郁

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(06): 735-739.

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以Ｗｉｓｔａｒ大鼠肝为材料，确立了一个简便的纯化鼠肝ＤＮＡ甲基化酶的程序，包括：细胞的超声破碎、去内源核酸、硫酸铵盐析、磷酸纤维素亲和层析、ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０柱层析及ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０凝胶过滤。用不同浓度聚丙烯酰胺凝胶电泳和孔梯度凝胶电泳检测，纯化后的酶已达电泳均一，且酶的比活力提高１１２倍。以聚丙烯酰胺孔梯度凝胶电泳测得其天然酶的分子量为３６５ｋＤ，以ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳测得该酶有两种亚基，大亚基为９５ｋＤ，小亚基为８５ｋＤ，推测该酶由两个大亚基和两个小亚基组成。

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红栓菌多糖的分离纯化与分析

沈萍萍，付庭治，曹幼琴

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(06): 740-743.

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液体发酵得到的红栓菌（Ｐｙｃｎｏｐｏｒｕｓｃｉｎｎａｂａｒｉｕｓ）菌丝经沸水抽提，胰匀浆处理和Ｓｅｖａｇｅ法除蛋白，ＤＥＡＥＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５与ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０柱层析，乙醇沉淀得到二种多糖组分（简称ＰＣ＿１、ＰＣ＿２）。经聚丙烯酰胺电泳，冻融分析鉴定为均一体。ＰＣ＿１和ＰＣ＿２的，总糖含量分别为８１．５％和７７．３％，分子量分别为２３０００和１３０００．两者的红处光谱具多糖特征吸收峰，在紫外区无明显吸收现象，基本不含氮。ＰＣ＿１单糖组成为Ｄ－葡萄糖、Ｄ－半乳糖及Ｄ－甘露糖，ＰＣ＿２为Ｄ－半乳糖、Ｄ－甘露糖。

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葡聚糖磁性毫微粒固定化L－天冬酰胺酶的研究

徐慧显，李民勤，潘再群，马建标，何炳林

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(06): 744-746.

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葡聚糖磁性毫微粒固定化Ｌ－天冬酰胺酶的研究徐慧显，李民勤，潘再群，马建标，何炳林（南开大学高分子化学研究所，天津３０００７１）大肠杆菌天冬酰胺酶对急性淋巴白血病有明显疗效［１］，注射入体内以后，可迅速清除血清中的天冬酰胺──敏感性肿瘤细胞的必需营养成...

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黄精凝集素Ⅱ分子稳定性与生物学活性研究

鲍锦库，曾仲奎，周红

中国生物化学与分子生物学报. 1996, 12(06): 747-749.

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黄精凝集素Ⅱ分子稳定性与生物学活性研究鲍锦库，曾仲奎，周红（四川大学生物系，成都，６１００６４）本文在黄精凝集素Ⅱ纯化及性质研究的基础上，应用多种变性条件，研究其分子特性，同时对分子的巯基和色氨酸进行修饰，研究该凝集素分子保持其生物学活性与这些基团的...

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