中国生物化学与分子生物学报

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廖洪军,邓义斌,陈香美,叶一舟

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(03): 249-253.

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为了探讨人肥胖（obesity，OB）基因的生理和病理意义，利用逆转录-聚合酶链式．反应（RT-PCR）方法，从中国汉族成人腹膜后脂肪组织总RNA中扩增出肥胖基因编码区序列（cDNA）．定向亚克隆pUC19质粒，克隆的OBcDNA不含信号肽序列并加入了新的起始密码子ATG，序列分析表明，与日本报道的人OBcDNA相比，多出一个谷氨酸密码子CAG．将OBcDNA定向克隆至原核表达载体pBV220，构建了重组OB基因表达质粒pBV220-OB．SDS-PAGE证实pBV220-OB在大肠杆菌中可表达分子量为16.7KD的特异蛋白带．

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疟原虫抗原B表位NKND在鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白中的表达

袁建刚,屠郑,徐菁,刘宇梁,刘尔翔,强伯勤

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(03): 254-258.

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疟原虫抗原B表位NKND是由本课题组首先报道的一个新的疟疾抗原表位．它是存在于多种不同疟原虫分离株中的保守序列．以减毒沙门氏菌为载体制备口服活疫苗，方法简单，使用方便，其鞭毛蛋白有较强的免疫原性，有利于激发人体的细胞和体液免疫．人工合成8肽的实验中[2]发现NKNDD可增强NKND对相应抗体的亲和力．将人工合成的NKNDD寡核苷酸片段插入鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白表达体系中，经Western杂交鉴定，表达出具有多拷贝NKNDD表位的重组鞭毛蛋白．

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抑瘤素McDNA的克隆及表达研究

段海清,张兆山,董自正,曹勇,黄翠芬

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(03): 259-263.

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抑瘤素M（onecostatinM，OSM）是一种多功能的细胞生长调节因子．从PMA刺激后的U937细胞系提取总RNA，采用逆转录-PCR方法分离到了抑瘤素M的cDNA；将抑瘤素M的cDNA克隆到质粒pUC19中，筛选三个阳性克隆进行序列分析，与国外报导序列完全一致；将抑癌素M的cDNA克隆到质粒pBV220后再转化DH5a进行模拟表达，SDS-PAGE分析表明有OSM表达，表达量约占细菌总蛋白5％，经过初步纯化的OSM能明显抑制A375细胞的生长．

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在大肠杆菌中表达人防御素-1

张满朝,郑国,许政凯,洪盂民

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(03): 264-269.

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构建了一组HNP-1原核表达载体，其中有几个含SD或序列的载体，在表达产物中检测到了HNP-1的存在，说明宿主菌是否在任何情况下都降解外源小分子多肽是一个值得考虑的问题．另外从表达载体在大肠杆菌JM109和JM109（DE3）中蛋白表达量的差异也可推测HNP-1发生了低水平的表达，HNP-1对细菌的作用与HNP-1浓度和细菌本身的生理状况密切相关.

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转TK基因的人结肠癌细胞对多种原药敏感性的研究

蒋琼,戈凯,许德华,郑仲承,刘新垣

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(03): 270-275.

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构建了含有单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（HSV-TK）的重组逆转录病毒载体LTKSN．经PA317细胞包装后，感染人结肠癌细胞株LoVo．用G418筛选到稳定表达HSV-TK基因的细胞克隆LoVo／LTKSN．LoVo／LTKSN与野生型LoVo细胞相比，生长曲线无明显差异，细胞形态亦无改变．细胞毒试验证明LoVo／LTKSN对GCV的敏感性很高，半杀伤浓度IC50为0.5μmol/L，比野生型细胞提高了4000倍以上．三种不同的原药GCV，ACV和BVDU对LoLo／LTKSN具有效果不等的杀伤作用．BVDU和GCV联合作用效果更好．旁杀伤效果十分明显，低浓度GCV就可以将合10%LoVo／LTKSN的混合细胞中的大部分肿瘤细胞杀死．

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大肠杆菌脂蛋白与CTB-pres2抗原基因的融合及表达

林旭,石成华,曹诚,李平,包幼迪,马清钧

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(03): 276-281.

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首次采用基因融合方式，在乱毒素B亚基-乙型肝炎病毒Pres2抗原融合基因（ctxB-Pres2）的5’端了引入编码大肠杆菌脂蛋白信号肽及N端九个氨基酸的核苷酸序列，分别置于ctb及lpp／lac启动子下在大肠杆菌中获得分泌性表达．表达的融合蛋白均定位于膜上，并且可以和GM1、抗-CTB抗体及抗HBVPreS2单克隆抗体结合，说明该融合蛋白保留了CTB的基本高级结构及CTB、PreS2抗原的抗原性．3H-棕榈酸标记实验证实该融合蛋白发生脂肪化，为免疫原性研究奠定了基础．此外，还研究了不同信号肽和宿主菌对该蛋白表达的影响．

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大鼠肝tRNA~(Ⅱe)基因在大肠杆菌中的表达及分离纯化

张潞,钟雄霖,彭朝晖,徐钤

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(03): 282-286.

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利用T7RNA聚合酶／启动子表达系统在大肠杆菌JM109（DE3）中表达化学合成的大鼠肝tRNAⅡe基因．经酚抽提、DEAE-52离子交换柱层析及HPLC层析，分离纯化大鼠肝tRNAⅡe．变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和Northern-blot鉴定表明，大鼠肝tRNAⅡe基因成功地获得表达．氨酸化活性检测表明：纯化后，每1A260单位（40μg）的tRNAⅡe可负载约650pmol的Ⅱe，纯度为54．2％．说明从大肠杆菌中分离纯化出具有一定生物学活性，一定纯度的合成基因表达产物．

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谷胱甘肽的抗线粒体脂质过氧化作用

高姝娟,刘锡锰,高贵,杨同书

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(03): 287-291.

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谷胱甘肽是细胞内重要的抗氧化损伤物质之一．以NADH诱导的牛心肌线粒体脂质过氧化体系为模型，研究了谷胱甘肽的抗氧化作用．结果表明，一定浓度的谷胱甘肽能够部分抑制该体系中线粒体的脂质过氧化．保护组的丙二醛含量为损伤组72．5％；线粒体的膨胀度较损伤组降低；细胞色素C氧化酶及ATP酶活力分别较损伤组提高了1．5及2．2倍．

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蚯蚓纤溶酶的分离纯化及部分序列的测定

熊　,杨四成,刘晓英,李令媛,茹炳根

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(03): 292-296.

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以新鲜蚯蚓为原料，经过保温抽提、乙醇沉淀、DEAE-SepharoseFastFlow离子交换层析、Lysine-Sepharose4B亲和层析以及SDS-PAGE制备电泳等纯化步聚，得到一种纯度达95％以上的蚯蚓纤溶酶．该酶具有强烈的溶解纤维蛋白的作用及蛋白酶活性，平板法测得其比活性为90OUK单位／毫克蛋白，TAME法测得其比活性为2500O单位／毫克蛋白．酶学性质研究表明其最适反应温度为65℃，最适反应PH值为8．5．该酶的分子量为33kD，等电点为pH3．5．还对该酶进行了氨基酸组成分析，并测定了其N端部分序列．

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维甲酸与星状孢子素联合分化诱导HL-60细胞过程中酪氨酸蛋白质磷酸化系统的变化

徐艳明,吴会云,颜卉君,吴国利

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(03): 297-301.

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以人早幼粒白血病细胞株（HL-60）为材料，对维甲酸与星状孢子素联合诱导HL-60细胞过程中胞浆和膜部分的蛋白质酪氨酸磷酸化水平变化进行了研究．结果表明，诱导后2～24h范围内，TPK活力出现波动，随时间延长（24～27h），胞浆部分TPK活力下降，膜溶脱部分TPK活力上升；PTPP活力明显升高且上升幅度比TPK大得多．利用抗P-tyr-BSA抗体分析底物含量变化的结果与相应时相的TPK和PTPP活力变化趋势一致．

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拟康氏木霉中内切葡聚糖苷水解酶的化学修饰

阎伯旭,高培基

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(03): 302-307.

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动力学研究揭示两个pK值为4.4和5.8的氨基酸残基可能对内切酶活性起重要作用，化学修饰研究结果表明一个羧基氨基酸对内切葡聚糖苷水解酶活力为必需的，且可能位于或接近酶的催化位点．

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油桐尺蠖核型多角体病毒多角体蛋白的理化性质及二级结构预测

陈华,陈东,龚为民,滕脉坤,朱学勇,牛立文

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(03): 308-312.

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由SDS及梯度胶电泳测得油桐尺蠖核型多角体病毒（BsNPV）多角体蛋白天然状态及亚基分子量分别为363kD与31.5kD，从而推断此蛋白为十二聚体，亚基间无二硫键作用．BsNPV多角体蛋白的远紫外圆二色谱显示，它的二级结构含有31．7％的α螺旋，23．8％的β折叠及44．5％的无规卷曲，与二级结构预测结果相符．通过荧光光谱实验推知，BsNPV多角体蛋白的表面疏水性弱，其色氨酸残基位于蛋白疏水核内部．

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外源性神经节苷脂GM_3影响人肝癌细胞生长的可能机制的初步研究

康小伟,刘银坤

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(03): 313-317.

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通过苔酚蓝染色细胞发现，外源性GM3（10μg/ml）能明显抑制人肝癌细胞株SMMC-7721细胞生长，在GM3处理3d时，出现明显差异．通过NorthernBlot分析发现，外源性GM3可明显影响人肝癌细胞株SMMC-7721细胞中c-fos、c-jun、c-myc和N-ras这四种癌基因的mRAN表达．未经GM3处理的细胞中没有检测到c-fosmRNA，但c-jun微量表达，并有c-myc和N-rasmRNA的高水平表达而GM3可在短时间内快速大量地诱导c-fos、c-junmRNA的生成．GM3处理的细胞，c-myc和N-rasmRNA的表达均明显减少．GM3处理45min时，c-myc基因表达只为对照组的39．55％；GM3处理24h时，N-ras基因表达为对照组的30.48％．以上结果提示：GM3抑制SMMC-7721细胞生长很可能是通过改变癌基因表达来实现的．

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DNA去甲基化对细胞衰老的影响

毛泽斌,张宗玉,童坦君

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(03): 318-321.

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5-氮杂胞嘧啶（5aZaC）为DNA甲基化转移酶的抑制剂，用它处理细胞，使基因组DNA去甲基化．结果发现，经5aZaC处理后的细胞衰老进程明显加快，这从另一侧面反映了DNA甲基化与细胞衰老的关系．

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猪脑抗吗啡镇痛肽的分离纯化及其抗血清对吗啡耐受影响的初步研究

杨树长,陈雅蕙,王镜岩,陈玉珍,许世清

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(03): 322-326.

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猪脑组织提取液经SephadexG-50分子筛层析，S-SepharoseFastFlow阳离子交换柱层析及两次HPLC分离得到一分子量为12000，等电点pI7．1的多肽，并测定了其氨基酸组成和N末端部分序列：N-phe-Lys-Gly-Phe-Pro-Asp-Asp／（Lys）-Lys／（Asp）-Asp-Tyr．给昆明小鼠脑室注射或尾静脉注射该肽均能抑制吗啡引起的镇痛作用，其作用随着注射剂量的增大而增强．用BALB／C小鼠制备了该肽的抗血清，脑室注射此抗血清能明显逆转昆明小鼠对吗啡的耐受．因为这种来自猪脑的具有抗阿片镇痛作用的肽有99个氨基酸，所以简称此肽为AOP-99a（anti-oPioidpeptide）．

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人血红素加氧酶同工酶的分离纯化初报

夏振炜,俞善昌,李云珠,申庆祥,奚正德

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(03): 327-331.

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首次报道了人肝脏血红素加氧酶（hemeoxggenase，HO）的同工酶的分离纯化，并初步探讨了它们的性质．采用DEAE-SephadexA-25和羟基磷灰石柱层析法从人肝脏分离纯化H0的同工酶，酶活性检测、SDS-PAGE分析结果显示，人肝脏微粒体含HO的同工酶，按洗脱先后顺序分别得到分子量为30000和36000的HO-1和HO-2．酶促反应中需相同辅酶参与，其中酶活性HO-1明显高于HO-2，两者之比为2.4:1，从分子量和酶的催化活性分析发现，HO-1属诱导型的传统HO.HO-2为新发现的非诱导型HO的同工酶．

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付里埃变换红外测定有不同阴离子结合和通过时膜带Ⅲ蛋白的构象变化

段耀奎,董晓敏,苏雅娴,林克椿,姜厚理

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(03): 332-336.

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用付里埃变换红外（FTIR）技术研究了不同阴离子结合和通过时，脂蛋白体膜带血蛋白二级结构的变化．发现：有Cl-、NO3、SO42-结合和通过时，膜带血蛋白α螺旋均为升高趋势，其中Cl-结合和通过时，带Ⅲ蛋白α螺旋增加较少；NO3-、SO4-结合和通过时，带Ⅲ蛋白α螺旋增加较多．阴离子结合和通过时，带Ⅲ蛋白α螺旋的增加可能与带Ⅲ所形成的阴离子通道扩张有关，扩张程度的大小主要取决于阴离子的体积，基本不受其所带电荷量的影响．

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甲基单胞菌Methylomonas sp.GYJ3中甲烷单加氧酶羟基化酶组分的纯化和性质

沈润南,尉迟力,马清泉,李树本,华绍峰

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(03): 337-343.

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Methylomonassp．GYJ3菌株中经DEAE-SepharoseCL-6B阴离子交换层析和SephacrylS300凝胶层析分离纯化出甲烷加氧酶羟基化酶组分．经HPLC分析，纯度大于90％，分子量为240kD，纯化倍数为3．9，比活为225nmol环氧丙烷每分钟毫克蛋白．SDS-PAGE表明，羟基化酶由三个亚基组成，亚基分子量为56、43、27kD．ICPAES测定羟基化酶的Fe含量为2.1molFe每摩尔蛋白．HPLC法用于甲烷单加氧酶羟基化酶组分的纯化，纯化的羟基化酶组分比活为541nmol（环氧丙烷）每分钟毫克蛋白，是两步LC法纯化的羟基化酶的两倍，Fe含量为3．78molFe每摩尔蛋白．催化性质研究表明羟基化酶能够被化学还原剂还原为还原态羟基化酶，还原态的羟基化酶单独存在时表现出MMO活性，说明它是MMO活性中心，天然态的羟基化酶单独存在时无MMO活性，加入粗酶液中MMO活性明显增加，说明GYJ3菌中MMO是一个复合酶系．

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高分子量和低分子量尿激酶的分离纯化及动力学性质研究

孙天霄,王红梅,徐长法

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(03): 344-349.

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人尿激酶粗品经苯甲脒亲和柱纯化和Protein-PahSP柱分离后，得到两种分子量的尿激酶（UK），即高分子量尿激酶（HUK）和低分子量尿激酶（LUK）．采用考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度，纤维蛋白平板法测定活力，测得HUK比活为2.9×105IU／mg蛋白，LUK为3.5×105IU／mg蛋白，活力回收为70％以上．经SDS-PAGE鉴定，HUK和LUK均是单一条带，分子量分别为54kD和33kD．HUK和LUK水解显色底物S2444的动力学常数，分别测得HUK的Km为64μmol/L,Kcat为15s-1,LUK的Km为49μmol／L，kcat为13s-1，LUK的催化效率（Kcat／Km）稍高于HUK．

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牛脑皮层G_i的纯化及其与AC的偶联

罗柏,杨小毅,罗志勇,范高峰,黄有国

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(03): 350-355.

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用1％胆酸钠和20％饱和度的硫酸铵抽提牛脑皮层细胞膜得到含G蛋白和腺苷酸环化酶（AC）的制剂，通过Sepharose6B柱将两者分开，再将含G蛋白的级分用庚胺-Sepharose4B疏水柱、羟基磷灰石柱将其它亚型的G蛋白（主要是Gs和Go）从抑制型G蛋白（Gi）中除去，获得纯化的高活力的Gi，其GTP结合活力为17．6nmol／mg，比细胞膜Gi活力提高50倍；并具有较高的产率，从1g膜蛋白中可获得0．66mg的Gi，同时可获得无G蛋白污染的AC和少量的Gs蛋白．SDS-PAGE显示分子量为41000和36000的两条蛋白带，证实是Gi的α基和β亚基．进一步用重建脂酶体的方法检测Gi对AC的抑制作用，结果显示Gi对AC活力的抑制达40％左右，表明CAMP信息跨膜转导通路中Gi与AC之间具有较好偶联功能．

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甲状旁腺高血压因子和甲状旁腺素对细胞钙通道的不同作用

赵睿珊,王辅才,朱文萍,胡晓东

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(03): 356-358.

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人动脉平滑肌细胞HDL受体酶联测定法

朱红,刘秉文,傅明德

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(03): 359-361.

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外切葡聚糖纤维二糖水解酶的分离纯化和部分性质研究

阎伯旭,高培基

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(03): 362-364.

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Endo-PG诱导培养小麦细胞PGIP产生的研究

周立,李建吾,郑远旗,余露

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(03): 365-367.

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NB901的细胞毒作用及对拓扑异构酶Ⅱ活性的影响

战洪生,李润沼,臧传兵,王纳

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(03): 368-370.

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