中国生物化学与分子生物学报

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叶棋浓,张述,张毅,苏国富

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(05): 493-498.

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用反转录ＰＣＲ从正常人胚胎肺细胞中获得了ｐ２１基因ｃＤＮＡ，将其插入真核表达载体ｐＭＳＣＶｎｅｏ，构建成重组质粒，ｐＭＳ２１，并将其转染至肺癌细胞株Ａ５４９．通过集落形成观察到ｐ２１对肺癌细胞具有明显的抑制作用，经ＲＮＡ狭缝杂交、Ｗｅｓｔ－ｅｒｎｂｌｏｔ分析和免疫细胞化学实验证实这是ｐ２１表达的结果．荷瘤裸鼠实验也进一步证实了ｐ２１对肺癌细胞具有明显的抑制作用．为ｐ２１的深入研究提供了基础．

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粪产碱菌nifH启动子与LacZ的融合基因构建及其表达调控

张海予,林敏,萧凤回,朱玉贤

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(05): 499-504.

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在ｐＲＫ２９０载体上将粪产碱菌固氮酶基因ｎｉｆＨ的启动子与报告基因ＬａｃＺ相融合，获得表达载体ｐＳＫ６，并转导到粪产碱菌Ａ１５０１菌株中，探讨了铵和氧对该启动子的表达调控．结果表明，粪产碱菌ｎｉｆＨ启动子仍受到铵和氧的调节．当铵浓度大于３ｍｍｏｌ／Ｌ时，其表达水平大幅度下降，但铵浓度高达４０ｍｍｏｌ／Ｌ，仍有很低水平表达．而且，带有巴西固氮螺菌ｎｉｆＨ∶ｌａｃＺ的粪产碱菌接合子在高铵条件下（４０ｍｍｏｌ／Ｌ）也有低水平表达．此外，氧对粪产碱菌的ｎｉｆＨ启动子有抑制作用，这在无铵条件下表现最为明显．

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PCR介导的cDNA文库矩阵排列筛选方法

杨晓明,谢玲,胡志远,邱兆华,吴祖泽,贺福初

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(05): 505-508.

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描述了一种快速、有效的ｃＤＮＡ文库筛选策略。其主要过程是将ｃＤＮＡ文库重组子进行矩阵排列，进而用特异引物进行ＰＣＲ逐级筛选以分离目的基因．

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豌豆5SrRNA的cDNA克隆、全序列及结构特征分析

朱新生,彭瑾,朱玉贤

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(05): 509-512.

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以赤霉素（ＧＡ）处理后的Ｇ２豌豆为材料，构建了一个２．０×１０６的ｃＤＮＡ文库，用随机筛选法从该ｃＤＮＡ文库中得到一个完整的ｃＤＮＡ．其中１１１５ｂｐ全序列分析表明，它编码了豌豆５Ｓ核糖体ＲＮＡ（５ＳｒｉｂｏｓｏｍａｌＲＮＡ，５ＳｒＲＮＡ），基因内部存在着与核糖体蛋白Ｌ５及５ＳｒＲＮＡ结合蛋白（５ＳｒＲＮＡＢｉｎｄｉｎｇＰｒｏｔｅｉｎ）同源的区段，这些同源区段是蛋白与ＲＮＡ结合的位点．基因内部还存在着大量的重复序列．

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重组人骨形成蛋白-3羧基端肽在大肠杆菌中表达及其诱骨活性

崔有宏,陈苏民,刘新平,陈南春,薛泳涛

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(05): 513-519.

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以双顺反子表达载体，在大肠杆菌中经ＩＰＴＧ诱导表达了人骨形成蛋白－３羧基端肽段（ｈＢＭＰ－３Ｃ），表达量占菌体总蛋白量的１８．５％．目的蛋白为２５ｋＤ、含ｈＢＭＰ－３Ｃ端２１５个氨基酸残基组成的肽段，包括ｈＢＭＰ－３成熟肽和一部分前肽．表达产物以包涵体的形式存在，用含ＴｒｉｔｏｎＸ－１００的洗涤液和５ｍｏｌ／Ｌ以下脲溶液连续洗涤，可获得较高纯度的重组人骨形成蛋白－３Ｃ端肽．经复性处理成可溶性蛋白，植入小鼠肌肉内，第１４ｄ组织切片显示有软骨细胞和软骨基质形成，第２１ｄ可见成骨细胞和骨基质形成．将ｒｈＢＭＰ－３Ｃ与脱矿去免疫原性异种骨粒复合后作小鼠肌肉植入试验，２１ｄ组织切片上可见硬质骨形成．结果表明：大肠杆菌表达的ｈＢＭＰ－３Ｃ经复性后具有诱骨活性，糖基化并非ＢＭＰ－３活性所必需．

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鸡肌球蛋白轻链激酶表达载体的构建

汪渊,桂淑玉

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(05): 520-524.

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鸡肌球蛋白轻链激酶（ＭＬＣＫ）在调节平滑肌细胞收缩中具有重要作用．用ＰＣＲ产生构建所需的限制性内切酶ＳａｌⅠ位点，将鸡ＭＬＣＫｃＤＮＡ插入质粒ｐＢＫｒｓｖ中，构建成ｐＢＫｒｓｖ－ＭＬＣＫ，并通过酶切图谱、ＳａｌⅠ位点序列分析得到证实．重组质粒在大肠杆菌中获得表达．

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大鼠诱导型一氧化氮合酶基因转录调控区的克隆与鉴定

韩梅,温进坤

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(05): 525-530.

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采用单特异引物ＰＣＲ克隆法，得到大鼠诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）基因转录调控区ＤＮＡ片段．核酸序列分析证实，大鼠ｉＮＯＳ基因的５′－侧翼区含有ＩＦＮ－γ和ＴＮＦ－α应答元件及ＮＦ－κＢ结合位点的保守序列．这些保守序列的位置及排列显著区别于人和小鼠的ｉＮＯＳ基因．电泳迁移率改变分析（ＥＭＳＡ）表明，ＶＳＭＣ受ＩＬ－１和ＩＦＮ－γ刺激后，细胞核内产生某种可与ｉＮＯＳ基因５′－侧翼区特异结合的核蛋白因子．

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鲑鱼降钙素基因在大肠杆菌中的克隆与表达

杜清友,赵明,王会信,丁红梅

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(05): 531-536.

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以鲑鱼基因组ＤＮＡ为模板，采用ＰＣＲ获得ｓＣＴ基因，并为ＤＮＡ序列分析所证实．以ｐＧＥＸ－３Ｘ为表达载体，利用体外定点突变技术成功地构建了融合蛋白ＧＳＴ－ｓＣＴ的重组表达质粒ｐＧＥＸ－３Ｘ－ｓＣＴ，在大肠杆菌中得到高效表达，其表达量约为菌体总蛋白的３０％；利用亲合层析法对融合蛋白ＧＳＴ－ｓＣＴ进行纯化，再经Ｆａｃ－ｔｏｒΧａ酶切后获得了重组ｓＣＴ，并对其进行活性检测．初步实验证明，重组ｓＣＴ具有较强的生物活性

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化学发光杂交进行菌落克隆的原位筛选

陈德喜,王申五,张宝春

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(05): 537-539.

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用化学发光杂交试剂代替３２Ｐ进行菌落原位筛选重组Ｐ５３阳性克隆，可减少同位素的放射性损害和污染及半衰期短等缺点．本方法实验周期短、特异性可和同位素相当，可用于重组目的基因的原位杂交筛选．

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猪生长激素基因表达质粒的构建及其转基因动物研究

陈清轩,曹颉,宋德秀,陈永福,魏庆信

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(05): 540-545.

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将猪生长激素基因（ＰＧＨ）克隆到质粒ｐＵＣ１９上，经酶切分析，确定其酶切图谱．把ＰＧＨ转录起始位点以前的序列切掉，换上羊ＭＴ－１ａ基因的启动子，构建成可以调控的表达载体ｐＳＭＴＰＧＨ，用于转基因动物的研究．采用微注射法将线状ｐＳＭＴＰＧＨ导入猪、鼠和金鱼的受精卵中，得到了相应的转基因动物．对这些动物鉴定分析表明，外源基因整合率因动物不同而异，但该基因在这３种动物中的整合率均在９％以上，其生长速度都高于对照组．

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野花生豆凝集素的化学修饰与荧光光谱研究

周红,曾仲奎,刘嘉,鲍锦库

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(05): 546-551.

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野花生豆凝集素（ＣＭＬ）经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００测得分子量为１０３．ＯｋＤ．用对二甲基氨基苯甲醛（ＤＡＢ）为显色剂，测得每个ＣＭＬ分子含有５．９个色氨酸残基．在ｐＨ５．１，含８ｍｏｌ／Ｌ脲的醋酸缓冲液中，Ｎ－溴代丁二酰亚胺（ＮＢＳ）可修饰ＣＭＬ分子中的５．６个色氨酸（Ｔｒｐ）残基，同时使ＣＭＬ的凝血活性完全丧失．用焦碳酸二乙酯（ＤＥＰＣ）和Ｎ－乙酰顺丁烯酰胺（ＮＥＭ）分别修饰ＣＭＬ的组氨酸残基和半胱氨酸巯基后，ＣＭＬ的活性均无变化．ＣＭＬ在天然状态下荧光发射峰位于３３６ｎｍ处，用ＣＭＬ的专一性抑制糖Ｎ－乙酰半乳糖胺研究色氨酸的微环境，发现Ｎ－乙酰半乳糖胺可以淬灭ＣＭＬ中８８％的色氨酸残基萤光，Ｓｔｅｒｎ－Ｖｏｌｍｅｒ常数Ｋ＝１．７３Ｌ／ｍｏｌ．同时发现Ｎ－乙酰半乳糖胺能够保护ＣＭＬ，避免ＮＢＳ对ＣＭＬ的修饰作用，表明色氨酸可能是ＣＭＬ维待活性所必需，并直接参与和专一性抑制糖的结合，其微环境较为疏水．

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Tb(Ⅲ)与Ⅱ型胶原的相互作用

郭媛,许善锦,周德建,王夔

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(05): 552-555.

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提取并分离纯化了Ⅱ型胶原，研究了Ｔｂ（Ⅲ）与Ⅱ型胶原的相互作用，结果表明Ⅱ型胶原对Ｔｂ（Ⅲ）有配位作用，并能极大地增强其荧光强度．用荧光滴定法和Ｓｃａｔｃｈａｒｄ作图法确定了Ⅱ型胶原与Ｔｂ（Ⅲ）的结合常数和结合部位数，结果表明Ⅱ型胶原与Ｔｂ（Ⅲ）有两类结合部位．其结合部位数和结合常数分别为０．７；３．１×１０５和１．３；１．０×１０５．

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扇贝肌钙蛋白及其对肌球蛋白超沉淀的影响

陈明

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(05): 556-560.

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分离了扇贝闭壳肌肌钙蛋白，其分子量为４６（ＩｎＩ），４０（ＴｎＴ），和２２（ＴｎＣ）ｋＤ．肌球蛋白Ｂ含有主要的收缩蛋白质与调节蛋白质，在有Ｃａ２＋和ＡＴＰ存在时，它会发生超沉淀作用．经低离子强度溶液反复沉淀处理，即失去Ｃａ２＋－敏感性，成为去敏肌球蛋白Ｂ．在Ｃａ２＋和ＡＴＰ作用下，它仍可发生超沉淀作用，但仅及最大活性的５０％．若加入肌钙蛋白，则反应活性可完全恢复．兔骨骼肌肌钙蛋白可替代扇贝闭壳肌肌钙蛋白．这表明扇贝闭壳肌兼有肌动蛋白相关调节和肌球蛋白相关调节．

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磷酸酪氨酸蛋白专一抗体的制备和纯化

朱曙东,赵文君,张光毅

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(05): 561-565.

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以偶联磷酸化酪氨酸的牛血清白蛋白（ＢＳＡ）作为免疫原免疫兔获得抗血清．自抗血清中分离获得抗体．自酪胺合成磷酸酪胺，并偶联到溴化氰活化的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ上．抗体经磷酸酪胺－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和柱纯化，所得抗体专一性强，Ｄｏｔｂｌｏｔ显示：抗体仅对酪氨酸磷酸化的蛋白质包括酪氨酸磷酸化的血清白蛋白，溶菌酶，卵清蛋白起抗原抗体反应，而不识别非酪氨酸磷酸化的溶菌酶，卵清蛋白，也不识别作为免疫原的骨架成分ＢＳＡ，也不识别丝氨酸磷酸化的卵清蛋白和苏氨酸磷酸化的卵清蛋白．

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江浙蝮蛇毒溶血毒素晶体培养及初步晶体学研究

赵克浩,宋时英,孟五一,林政炯,周元聪

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(05): 566-569.

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从江浙蝮蛇中分离纯化的碱性磷脂酶Ａ２在ｐＨ９．５，０．０５ｍｍｏｌ／ＬＣＨＥＳ缓冲液中，用汽相悬滴扩散的方法，获得了适用于高分辨率Ｘ射线结构分析的单晶．经Ｘ２００Ｂ面探测器分析，表明该晶体属于正交晶系，Ｐ２Ｉ２Ｉ２Ｉ空间群，晶胞参数为ａ＝９７．１３，ｂ＝１０３．６９，ｃ＝２３．２７．并收集了一套衍射数据，独立衍射点数１２００１个，数据完整度为８６．２％，Ｒｍｅｒｇｅ为０．０４５９．最高分辨率达２．０，根据分子量与晶胞体积估算，一个不对称单位含两个分子．

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微孔比色法在猪胰腺PLA_2制备中的应用

刘猛六,胡卓逸,徐龙川

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(05): 570-575.

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微孔比色法采用合成的磷脂类似物２－硫代十六酰乙基磷酸胆碱作底物，在多孔聚苯乙烯板的小孔中反应，并用酶联免疫检测器连续测定和记录吸收值．同时应用此法及滴定法检测酶活力，从猪胰腺中制备了一种分子量低（１４．３ｋＤ），对热、酸稳定，活性依赖Ｃａ２＋的ＰＬＡ２．两种方法检测结果具有可比性，而微孔比色法同时可测多个样品，有节约样品，灵敏度较高等优点．微孔比色法特别适用于大量的样品测定，如拮抗剂筛选、临床样品及制备酶时层析级分的检测等．

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直接用噬菌体肽进行功能性分析的研究

齐杰,方锐,周慧,李惟

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(05): 576-579.

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通过对胰蛋白酶抑制剂的筛选发现，噬菌体肽库不仅可以用于亲和性筛选，而且噬菌体肽（ｐｈａｇｅｐｅｐｔｉｄｅ——ｐｅｐｔｉｄｅｄｉｓｐｌａｙｉｎｇｏｎｐｈａｇｅ）可以直接用于对亲和筛选得到的克隆进行胰蛋白酶抑制实验，即所谓的功能性筛选．功能性筛选前后的测序结果表明用噬菌体肽直接进行功能性筛选确实能够筛去大部分的非抑制剂克隆．

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内切葡聚糖苷水解酶的分离纯化和内源荧光性质

阎伯旭,高培基

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(05): 580-585.

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利用离子交换和分子筛层析技术从拟康氏木霉Ｓ－３８固态发酵液中提纯了两个内切葡聚糖苷酶组分．测定了一个组分的内源荧光性质，结果表明：该酶分子的内源荧光几乎都来自色氨酸．Ｎ－溴代琥珀酰亚胺（ＮＢＳ）修饰导致了酶活力的完全丧失，但是酶荧光残留了２５％，抑制剂纤维二糖与酶结合可使部分酶荧光得到保护，同时这种结合也可以保护一定的色氨酸荧光不被外来淬灭剂淬灭．

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蜈蚣碱性蛋白SSmp-d的分离纯化及其部分理化性质的鉴定

许鸣镝,柳雪枚

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(05): 586-591.

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少棘巨蜈蚣（ＳｃｏｌｏｐｅｎｄｒａｓｕｂｓｐｉｎｉｐｅｓｍｕｔｉｌａｎｓＬ．Ｋｏｃｈ）经９５％乙醇脱脂后，再经４℃水冷渗，水提液低温旋转浓缩，冻干，得到的冻干粉先后经过ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５柱，等电聚焦制备电泳，再经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０柱，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００柱，最后经ＨＰＬＣ制备得到一个纯的碱性蛋白，命名为ＳＳｍｐ－ｄ．该蛋白经ＨＰＬＣ、超薄等电聚焦电泳检验是均一的．采用ＨＰＬＣ和Ｐｒｏｔｅｉｎ－ＰａｋＴＭ１２５柱测定其分子量为２４．６４ｋＤ．ＩＥＦ－ＨＰＣＥ显示其等电点为９．２７．氨基酸分析表明ＳＳｍｐ－ｄ含较多的Ａｒｇ、Ｌｙｓ等碱性氨基酸，另外还含有较多的Ａｌａ、Ｌｅｕ．使用蛋白质自动序列分析仪测定了ＳＳｍｐ－ｄＮ端的１１个氨基酸，序列为ＮＨ３＋－Ａｓｐ－Ｖａｌ－Ａｓｎ－Ｐｈｅ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ａｌａ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ．

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耐热醋酸棱状芽孢杆菌中具有高的二硫键还原活性组分的提取和特性研究

郭养浩,Ｈ．Ｇüｎｔｈｅｒ,Ｈ．Ｓｉｍｏｎ

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(05): 592-597.

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用ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ层析柱从Ｃ．ｔｈｅｒｍｏａｃｅｔｉｃｕｍ细胞提取物中分离出的两个具有相近分子量（７００）的活性组分，在ＭＶ＋存在下，对二硫键具有高的催化还原活性．这两组分参与的催化还原反应不以ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ为电子供体．在实验条件下，对二硫键的催化还原活性顺序为：ＧＳＳＧ＞硫辛酰胺＞胱氨酸＞硫辛酸．活性组分具有较高的反应稳定性和热稳定性．两组分在２６０、３５４和５０５（４６５）ｎｍ处具有特征吸收峰．

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超氧化物歧化酶全酶和脱辅基酶胍变性时失活与去折叠的比较研究

杨婉身,苟琳,安定,于迟力

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(05): 598-601.

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利用紫外差吸收光谱和荧光发射光谱等监测手段研究天然铜锌ＳＯＤ（ｈｏｌｏ－ＳＯＤ）和脱铜锌ＳＯＤ（ａｐｏ－ＳＯＤ）在不同浓度胍溶液中的去折叠及活力变化．结果表明ｈｏｌｏ－ＳＯＤ和ａｐｏ－ＳＯＤ分别在４．０和２．０ｍｏｌ／Ｌ胍溶液中去折叠，而分别在２．０和０．５ｍｏｌ／Ｌ胍溶液中其构象尚未发生明显改变时活性几乎完全丧失．提示金属离子对维持酶的整体及活性部位构象具有重要作用，脱去金属离子的酶分子的构象特别是活性部位的构象更易受到变性剂的破坏．

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λgtlSfi-Not作载体构建兔输卵管上皮细胞表达型cDNA文库

刘传聚,沈虹,顾正,吕吉宁,左嘉客

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(05): 602-604.

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λｇｔｌＳｆｉ┐Ｎｏｔ作载体构建兔输卵管上皮细胞表达型ｃＤＮＡ文库刘传聚沈虹顾正吕吉宁左嘉客（中国科学院上海细胞生物学研究所，上海２０００３１）兔输卵管上皮细胞合成并分泌的某些蛋白组份具克服小鼠早胚发育阻断的功能〔１，２〕．利用“功能缺失”分析从...

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中国人外周血白细胞端区DNA长度随增龄缩短

张宗玉,范新青,童坦君

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(05): 605-607.

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中国人外周血白细胞端区ＤＮＡ长度随增龄缩短张宗玉范新青童坦君（北京医科大学生物化学与分子生物学系，北京１０００８３）一个细胞的端区ＤＮＡ长度取决于端区ＤＮＡ的延长与缩短的平衡，染色体ＤＮＡ半保留复制导致端区ＤＮＡ的缩短．端聚酶是自带ＲＮＡ引物的逆转录...

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槲皮素对完整HL-60细胞中肌醇磷脂转换的抑制作用

康铁邦,梁念慈

中国生物化学与分子生物学报. 1997, 13(05): 608-610.

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槲皮素对完整ＨＬ┐６０细胞中肌醇磷脂转换的抑制作用康铁邦梁念慈（广东医学院医用生化研究所，湛江５２４０２３）肌醇磷脂信使系统在生物信号的跨膜传递方面起重要作用，并与细胞增殖及肿瘤形成有密切联系［１～５］，有报道：肿瘤细胞或组织中磷脂酰肌醇４－激酶（Ｐ...

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